Hieff Trans®通用型转染试剂

发表于2024年3月20日由上海金畔生物科技有限公司

Hieff Trans®通用型转染试剂

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

Hieff Trans^®通用型转染试剂是基于最新的纳米技术研发的一款多用途、便捷高效的脂质体转染试剂，适用于DNA、RNA和寡核苷酸的转染，对难转染细胞也具有较高的转染效率。其独特的配方使其可直接加入培养基中，血清的存在不会影响转染效率，这样可以减少去除血清对细胞的损伤。转染后不需要除去核酸–转染试剂复合物或更换新鲜培养基，也可根据细胞营养状态在4-6小时后更换新鲜培养基。

产品组分

组分编号	组分名称	规格/货号
组分编号	组分名称	40808ES02	40808ES03	40808ES03
40808-A	Universal-A溶液	0.5 mL	1 mL	5×1 mL
40808-B	Universal-B溶液	0.5 mL	1 mL	5×1 mL

运输与保存方法

冰袋（wet ice）运输。产品2-8ºC保存，一年有效。不可冷冻！

注意事项

1) 转染操作时，以细胞融合度达70%-90%为佳，具体铺板密度根据细胞情况酌情而定。

2) 制备转染复合物时要求用无血清培养基稀释DNA和转染试剂。

3) 转染的时候培养基中不能添加抗生素。

4) 使用高纯度的DNA或RNA有助于获得较高的转染效率，质粒中的内毒素是转染的大敌。

5) 2-8ºC保存，要注意避免多次反复长时间开盖。

6) 初次使用应优化核酸浓度和试剂量以得到最高的转染效率。

7) 本产品仅作科研用途！

操作流程

1. DNA转染

注：转染试剂使用量受细胞类型及其他实验条件影响，建议初次使用时设置梯度进行优化最佳使用量。

1) 细胞铺板，至转染操作时，以细胞融合度达70%-90%为佳。

2) 按照下表使用Opti-MEM培养基稀释Universal-B溶液，轻轻混匀。

3) 使用Opti-MEM培养基稀释DNA，得到DNA预混液，然后添加Universal-A溶液，轻轻混匀，得到稀释的DNA。

4) 将稀释的DNA加入已稀释的Universal-B溶液中(1:1比例)。

5) 室温孵育5分钟。

6) 将DNA-脂质体复合物逐滴加到细胞中，轻轻混匀。

7) 37℃，5% CO₂培养箱培养48-96 h，直至进行基因表达分析。

2. siRNA转染

转染siRNA操作与DNA的转染操作流程一样，但在稀释siRNA时则不需要加入Universal-A溶液(第3步)。

不同细胞培养容器转染用量（仅供参考）：

培养皿		96-well	24-well	6-well
贴壁细胞		1-4×10⁴	0.5-2×10⁵	0.25-1×10⁶
使用Opti-MEM培养基稀释Universal-B溶液，轻轻混匀。	Opti-MEM培养基	5 μL	25 μL	125 μL
使用Opti-MEM培养基稀释Universal-B溶液，轻轻混匀。	Universal-B溶液	0.2 μL	1 μL	5 μL
使用Opti-MEM培养基稀释DNA，得到DNA预混液，然后添加Universal-A溶液，轻轻混匀，得到稀释的DNA。	Opti-MEM培养基	5 μL	25 μL	125 μL
	DNA (0.5–5 μg/μL)	0.1 μg	0.5 μg	2.5 μg
	Universal-A溶液(2 μL/μg DNA)	0.2 μL	1 μL	5 μL
将稀释的DNA加入已稀释的Universal-B溶液中(1:1比例)。	稀释的DNA	5 μL	25 μL	125 μL
将稀释的DNA加入已稀释的Universal-B溶液中(1:1比例)。	稀释的Universal-B溶液	5 μL	25 μL	125 μL
室温孵育5分钟
DNA-脂质体复合物形成	复合物成分（每孔）	96-well	24-well	6-well
	Opti-MEM培养基	10 μL	50 μL	250 μL
	DNA(0.5–5 μg/μL)	0.1 μg	0.5 μg	2.5 μg
	Universal-B溶液	0.2 μL	1 μL	5 μL
	Universal-A溶液	0.2 μL	1 μL	5 μL
将DNA-脂质体复合物逐滴加到细胞中，轻轻混匀。	DNA-脂质体复合物	10 μL	50 μL	250 μL

【注】该表使用量仅供参考，DNA与Universal-B溶液具体使用量还需根据细胞类型及其他实验条件进行优化。建议使用时比值保持在1:0.5-1:5之间。

相关产品

名称	货号	规格
Hieff Trans® Liposomal Transfection Reagent 脂质体核酸转染试剂	40802ES02	0.5 mL
	40802ES03	1.0 mL
	40802ES08	5×1mL
Calcium Phosphate Cell Transfection Kit 磷酸钙法细胞转染试剂	40803ES70	200 T
Polybrene (hexadimethrine bromide) 聚凝胺（10 mg/ml）	40804ES76	500 μL
Polybrene (hexadimethrine bromide) 聚凝胺（10 mg/ml）	40804ES86	5×500 μL
Hieff Trans^® Suspension Cell-Free Liposomal Transfection Reagent 悬浮细胞专用脂质体核酸转染试剂	40805ES02	0.5 mL
	40805ES03	1.0 mL
	40805ES08	5×1 mL
Hieff Trans^® in vitro siRNA/miRNA Transfection Reagent siRNA/miRNA体外转染试剂	40806ES02	0.5 mL
	40806ES03	1.0 mL
Polyethylenimine Linear(PEI) MW25000 线性PEI转染试剂MW25000	40815ES03	1 g
Polyethylenimine Linear(PEI) MW25000 线性PEI转染试剂MW25000	40815ES08	5×1 g
Polyethylenimine Linear(PEI) MW40000（rapid lysis）线性PEI转染试剂（速溶型）MW40000	40816ES02	100 mg
	40816ES03	1 g

HB220930

产品组分

组分编号	组分名称	规格/货号
组分编号	组分名称	40808ES02	40808ES03	40808ES03
40808-A	Universal-A溶液	0.5 mL	1 mL	5×1 mL
40808-B	Universal-B溶液	0.5 mL	1 mL	5×1 mL

运输与保存方法

冰袋（wet ice）运输。产品2-8ºC保存，一年有效。不可冷冻！

注意事项

1) 转染操作时，以细胞融合度达70%-90%为佳，具体铺板密度根据细胞情况酌情而定。

2) 制备转染复合物时要求用无血清培养基稀释DNA和转染试剂。

3) 转染的时候培养基中不能添加抗生素。

4) 使用高纯度的DNA或RNA有助于获得较高的转染效率，质粒中的内毒素是转染的大敌。

5) 2-8ºC保存，要注意避免多次反复长时间开盖。

6) 初次使用应优化核酸浓度和试剂量以得到最高的转染效率。

7) 本产品仅作科研用途！

操作流程

1. DNA转染

注：转染试剂使用量受细胞类型及其他实验条件影响，建议初次使用时设置梯度进行优化最佳使用量。

1) 细胞铺板，至转染操作时，以细胞融合度达70%-90%为佳。

2) 按照下表使用Opti-MEM培养基稀释Universal-B溶液，轻轻混匀。

3) 使用Opti-MEM培养基稀释DNA，得到DNA预混液，然后添加Universal-A溶液，轻轻混匀，得到稀释的DNA。

4) 将稀释的DNA加入已稀释的Universal-B溶液中(1:1比例)。

5) 室温孵育5分钟。

6) 将DNA-脂质体复合物逐滴加到细胞中，轻轻混匀。

7) 37℃，5% CO₂培养箱培养48-96 h，直至进行基因表达分析。

2. siRNA转染

转染siRNA操作与DNA的转染操作流程一样，但在稀释siRNA时则不需要加入Universal-A溶液(第3步)。

不同细胞培养容器转染用量（仅供参考）：

培养皿		96-well	24-well	6-well
贴壁细胞		1-4×10⁴	0.5-2×10⁵	0.25-1×10⁶
使用Opti-MEM培养基稀释Universal-B溶液，轻轻混匀。	Opti-MEM培养基	5 μL	25 μL	125 μL
使用Opti-MEM培养基稀释Universal-B溶液，轻轻混匀。	Universal-B溶液	0.2 μL	1 μL	5 μL
使用Opti-MEM培养基稀释DNA，得到DNA预混液，然后添加Universal-A溶液，轻轻混匀，得到稀释的DNA。	Opti-MEM培养基	5 μL	25 μL	125 μL
	DNA (0.5–5 μg/μL)	0.1 μg	0.5 μg	2.5 μg
	Universal-A溶液(2 μL/μg DNA)	0.2 μL	1 μL	5 μL
将稀释的DNA加入已稀释的Universal-B溶液中(1:1比例)。	稀释的DNA	5 μL	25 μL	125 μL
将稀释的DNA加入已稀释的Universal-B溶液中(1:1比例)。	稀释的Universal-B溶液	5 μL	25 μL	125 μL
室温孵育5分钟
DNA-脂质体复合物形成	复合物成分（每孔）	96-well	24-well	6-well
	Opti-MEM培养基	10 μL	50 μL	250 μL
	DNA(0.5–5 μg/μL)	0.1 μg	0.5 μg	2.5 μg
	Universal-B溶液	0.2 μL	1 μL	5 μL
	Universal-A溶液	0.2 μL	1 μL	5 μL
将DNA-脂质体复合物逐滴加到细胞中，轻轻混匀。	DNA-脂质体复合物	10 μL	50 μL	250 μL

【注】该表使用量仅供参考，DNA与Universal-B溶液具体使用量还需根据细胞类型及其他实验条件进行优化。建议使用时比值保持在1:0.5-1:5之间。

相关产品

名称	货号	规格
Hieff Trans® Liposomal Transfection Reagent 脂质体核酸转染试剂	40802ES02	0.5 mL
	40802ES03	1.0 mL
	40802ES08	5×1mL
Calcium Phosphate Cell Transfection Kit 磷酸钙法细胞转染试剂	40803ES70	200 T
Polybrene (hexadimethrine bromide) 聚凝胺（10 mg/ml）	40804ES76	500 μL
Polybrene (hexadimethrine bromide) 聚凝胺（10 mg/ml）	40804ES86	5×500 μL
Hieff Trans^® Suspension Cell-Free Liposomal Transfection Reagent 悬浮细胞专用脂质体核酸转染试剂	40805ES02	0.5 mL
	40805ES03	1.0 mL
	40805ES08	5×1 mL
Hieff Trans^® in vitro siRNA/miRNA Transfection Reagent siRNA/miRNA体外转染试剂	40806ES02	0.5 mL
	40806ES03	1.0 mL
Polyethylenimine Linear(PEI) MW25000 线性PEI转染试剂MW25000	40815ES03	1 g
Polyethylenimine Linear(PEI) MW25000 线性PEI转染试剂MW25000	40815ES08	5×1 g
Polyethylenimine Linear(PEI) MW40000（rapid lysis）线性PEI转染试剂（速溶型）MW40000	40816ES02	100 mg
	40816ES03	1 g

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[1] Xie F, Su P, Pan T, et al. Engineering Extracellular Vesicles Enriched with Palmitoylated ACE2 as COVID-19 Therapy. Adv Mater. 2021;33(49):e2103471. doi:10.1002/adma.202103471(IF:30.849)
[2] Su WQ, Yu XJ, Zhou CM. SARS-CoV-2 ORF3a Induces Incomplete Autophagy via the Unfolded Protein Response. Viruses. 2021;13(12):2467. Published 2021 Dec 9. doi:10.3390/v13122467(IF:5.048)
[3] Zu S, Xue Q, He Z, et al. Duck PIAS2 Promotes H5N1 Avian Influenza Virus Replication Through Its SUMO E3 Ligase Activity. Front Microbiol. 2020;11:1246. Published 2020 Jun 11. doi:10.3389/fmicb.2020.01246(IF:4.236)

siRNA/miRNA体外转染试剂|Hieff Trans® in vitro siRNA/miRNA Transfection Reagent

发表于2024年3月20日由上海金畔生物科技有限公司

siRNA/miRNA体外转染试剂|Hieff Trans® in vitro siRNA/miRNA Transfection Reagent

产品说明书

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COA

已发表文献

产品描述
Hieff Trans^®siRNA/miRNA体外转染试剂是一种非脂质体PEI阳离子、两性分子转染试剂，为siRNA转染到哺乳动物细胞中而开发。适用于siRNA和miRNA的转染。这种转染试剂包裹siRNA或miRNA形成阳离子复合物，该复合物与细胞表面带负电的蛋白聚糖相互作用吸附在细胞表面，通过内吞进入细胞，形成内含体。该转染试剂具有质子海绵的作用，能够吸收溶酶体中的H⁺，质子的不断流入，导致复合体肿胀破裂，从而使外源siRNA或miRNA释放到细胞质中。

该产品可在广泛的细胞系中，实现1 nM的siRNA超过90%的表达效率，避免了脱靶效应。适用于多种细胞转染，包括Hela、MCF-7、HepG2、CHO等贴壁细胞；以及难以转染的悬浮细胞系，如K562或THP-1细胞，可达到80%的沉默效率；同时还包括一些原代细胞，原代人成纤维细胞和原代人肝细胞等，可达到80%的沉默效率。

运输与保存方法

冰袋（wet ice）运输。产品2-8 ℃保存，一年有效。不可冷冻！

注意事项

1）整个实验过程使用无RNA酶和无热原性的材料，如离心管、枪头、缓冲液。

2）转染前，确保siRNA是经过PAGE纯化和脱盐处理过的，高纯度的siRNA或者miRNA有助于获得较高的转染效率。

3）PEI阳离子转染试剂应该在2-8 ℃保存，要注意避免多次反复长时间开盖，否则可能会导致PEI挥发，降低转染效率。

4）转染前一天，确保接种贴壁细胞密度在30%-50%左右，对于一些小细胞和生长缓慢的细胞，接种密度可适当扩大2倍。

5）转染前，确保siRNA/miRNA基因沉默表达不会影响细胞活力。

6）该产品只适合体外转染，不能用于体内转染。

7）本产品仅作科研用途！

操作流程

一．贴壁细胞转染（以24孔板和转染1 nM siRNA为例，其他培养板加样体积请参考表1）
接种贴壁细胞

1.为了提高转染效率，建议在转染前一天接种细胞，接种细胞密度建议30%-50%左右，建议初次使用时设置梯度进行优化最佳使用量。

2.按照以下体系配制siRNA-PEI或miRNAPEI子核酸转染试剂阳离复合物：

1）对于每孔细胞，使用100 μL无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释8.4 ng siRNA (0.6 pmoles)，混匀。

2）立刻向100 μL的siRNA中加入2 μL的转染试剂，旋涡10秒，充分混匀。

3）在室温下孵育10 min，使得形成siRNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物。
【注】：孵育时间不要超过30min

4）在形成复合物过程中，移除细胞生长培养基，每孔中加入500 μL新鲜预热的完全培养基。

5）直接将100 µL siRNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物加入细胞中，摇动培养板，轻轻混匀。最终体积为600 µL ，siRNA终浓度为1 nM。

6）37 ℃，5% CO₂培养箱培养，直至目的基因表达。建议一般mRNA表达水平通常在24–72 h，蛋白表达水平在48-96 h。

siRNA/miRNA体外转染试剂|Hieff Trans® in vitro siRNA/miRNA Transfection Reagent

图1 转染贴壁细胞操作流程

【注】：由于靶基因、细胞类型、siRNA效价、靶mRNA的半衰期和靶蛋白的周转率等因素，均会影响siRNA的转染效率。建议选取siRNA浓度在1 nM到10 nM之间。转染试剂的体积应根据siRNA浓度和培养皿的大小进行调整，请参见下表1。

表1 siRNA终浓度为1 nM时，转染试剂、培养基的用量参考值

培养皿	siRNA物质的量(pmoles)	每孔siRNA的含量（ng）	siRNA转染试剂体积（µL）	形成PEI-siRNA复合物的体积（µL）	完全培养基的体积（含血清+双抗）	加入复合物后，细胞培养基总体积
96孔板	0.17	2.4	0.7-0.8	50	125 µL	175 µL
24孔板	0.6	8.6	1-3	100	500 µL	600 µL
12孔板	1.2	17	2-6	200	1 mL	1.2 mL
6孔板	2.2	31	4-12	200	2 mL	2.2 mL
25cm²培养瓶	4.4	62	10-20	400	4 mL	4.4 mL
75cm²培养瓶	10.5	147	30-50	500	10 mL	10.5 mL

表2 siRNA终浓度为10 – 50 nM时，转染试剂、培养基的用量参考值

培养皿	siRNA转染试剂体积（µL）	形成复合物的体积（无血清培养基）（µL）	完全培养基的体积（含血清+双抗）	加入复合物后，细胞总体积
96孔板	0.5-1.5	50	125 µL	175 µL
24孔板	2-4	100	500 µL	600 µL
12孔板	4-8	200	1 mL	1.2 mL
6孔板	8-16	200	2 mL	2.2 mL
25cm²培养瓶	15-25	400	4 mL	4.4 mL

二．悬浮细胞转染（以24孔板和转染5 nM siRNA为例，其他培养板加样体积请参考表4）
接种细胞

1.为了优化悬浮细胞转染条件，与贴壁细胞相比，需要降低悬浮细胞培养基的体积。根据培养皿大小和完整培养基的体积，推荐接种悬浮细胞的数量如下表3所示。

表3 转染当天，根据培养皿的大小，接种悬浮细胞数量参考值

培养皿	底面积(cm²)	每孔接种细胞悬浮液体积（μL）	转染当天接种细胞数
384孔板	0.1	25	5 ×10³~1×10⁴
96孔板	0.32	50	1×10⁴~ ×10⁴
24孔板	2	200	1×10⁵ ~ 2×10⁵
12孔板	4.5	500	2×10⁵ ~ 4×10⁵
6孔板	9.6	1000	5×10⁵ ~ 2×10⁶
25cm²培养瓶	25-28	2000	2×10⁶~ 5×10⁶

2.按照以下体系配制siRNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物：

1）对于每孔细胞，使用100 μL无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释21 ng siRNA (1.5 pmols)，混匀。

2）向100 μL的siRNA中加入4 μL的转染试剂，立刻旋涡10秒，充分混匀。

3）在室温孵育15 min，使得形成siRNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物。
【注】：孵育时间不要超过30 min

4）在每孔200 μL细胞悬浮液中，加入100 μL的siRNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物，轻轻混匀。最终体积为300 µL，siRNA终浓度为5 nM。

5）37 ℃，5% CO₂培养箱培养4-6 h后，再加入700 µL完全培养基，轻轻摇动培养板使其混匀。

6）继续放入培养箱中孵育，直至目的基因表达。建议一般mRNA表达水平通常在24–72 h，蛋白表达水平在48-96 h。

【注】：为了优化内源性基因沉默，建议选取siRNA浓度在5 nM到20 nM之间。转染试剂的体积应根据siRNA浓度和培养皿的大小进行调整，请参见下表4。

表4 siRNA浓度为5 nM时，在悬浮细胞中的参考值

培养皿	siRNA的浓度(pmoles)	每孔siRNA的含量（ng）	转染试剂体积（µL）	形成复合物培养基体积（µL）	悬浮细胞的体积	转染4-6h后另加入培养基的体积
384孔板	0.25	3.75	1 ± 0.5	25	25 µL	0 µL
96孔板	0.5	7.5	2 ± 1	50	50 µL	100 µL
24孔板	1.5	21	3 ± 2	100	200 µL	700 µL
12孔板	3.5	49	6 ± 4	200	500 µL	1 mL
6孔板	6	84	10 ± 8	200	1 mL	2 mL
25cm²培养瓶	12	168	15 ±10	400	2 mL	4 mL

表5 悬浮细胞中siRNA浓度、转染试剂的用量参考值

培养皿	siRNA的终浓度/孔（nM）	转染试剂的体积/孔（µL）
96孔板	1 ~ 20	1 ± 0.5
24孔板		2 ± 1
12孔板		3 ± 2
6孔板		10 ± 8
96孔板	20 ~ 50	1.5 ± 0.5
24孔板		3 ± 1
12孔板		5 ± 2
6孔板		15 ± 8

三．miRNA转染操作流程
该转染试剂也适合转染miRNA，转染贴壁细胞和悬浮细胞的具体操作请参考siRNA的操作流程。

HB220930

运输与保存方法

冰袋（wet ice）运输。产品2-8 ℃保存，一年有效。不可冷冻！

注意事项

1）整个实验过程使用无RNA酶和无热原性的材料，如离心管、枪头、缓冲液。

2）转染前，确保siRNA是经过PAGE纯化和脱盐处理过的，高纯度的siRNA或者miRNA有助于获得较高的转染效率。

3）PEI阳离子转染试剂应该在2-8 ℃保存，要注意避免多次反复长时间开盖，否则可能会导致PEI挥发，降低转染效率。

4）转染前一天，确保接种贴壁细胞密度在30%-50%左右，对于一些小细胞和生长缓慢的细胞，接种密度可适当扩大2倍。

5）转染前，确保siRNA/miRNA基因沉默表达不会影响细胞活力。

6）该产品只适合体外转染，不能用于体内转染。

7）本产品仅作科研用途！

操作流程

一．贴壁细胞转染（以24孔板和转染1 nM siRNA为例，其他培养板加样体积请参考表1）
接种贴壁细胞

1.为了提高转染效率，建议在转染前一天接种细胞，接种细胞密度建议30%-50%左右，建议初次使用时设置梯度进行优化最佳使用量。

2.按照以下体系配制siRNA-PEI或miRNAPEI子核酸转染试剂阳离复合物：

1）对于每孔细胞，使用100 μL无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释8.4 ng siRNA (0.6 pmoles)，混匀。

2）立刻向100 μL的siRNA中加入2 μL的转染试剂，旋涡10秒，充分混匀。

3）在室温下孵育10 min，使得形成siRNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物。
【注】：孵育时间不要超过30min

4）在形成复合物过程中，移除细胞生长培养基，每孔中加入500 μL新鲜预热的完全培养基。

5）直接将100 µL siRNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物加入细胞中，摇动培养板，轻轻混匀。最终体积为600 µL ，siRNA终浓度为1 nM。

6）37 ℃，5% CO₂培养箱培养，直至目的基因表达。建议一般mRNA表达水平通常在24–72 h，蛋白表达水平在48-96 h。

siRNA/miRNA体外转染试剂|Hieff Trans® in vitro siRNA/miRNA Transfection Reagent

图1 转染贴壁细胞操作流程

表1 siRNA终浓度为1 nM时，转染试剂、培养基的用量参考值

培养皿	siRNA物质的量(pmoles)	每孔siRNA的含量（ng）	siRNA转染试剂体积（µL）	形成PEI-siRNA复合物的体积（µL）	完全培养基的体积（含血清+双抗）	加入复合物后，细胞培养基总体积
96孔板	0.17	2.4	0.7-0.8	50	125 µL	175 µL
24孔板	0.6	8.6	1-3	100	500 µL	600 µL
12孔板	1.2	17	2-6	200	1 mL	1.2 mL
6孔板	2.2	31	4-12	200	2 mL	2.2 mL
25cm²培养瓶	4.4	62	10-20	400	4 mL	4.4 mL
75cm²培养瓶	10.5	147	30-50	500	10 mL	10.5 mL

表2 siRNA终浓度为10 – 50 nM时，转染试剂、培养基的用量参考值

培养皿	siRNA转染试剂体积（µL）	形成复合物的体积（无血清培养基）（µL）	完全培养基的体积（含血清+双抗）	加入复合物后，细胞总体积
96孔板	0.5-1.5	50	125 µL	175 µL
24孔板	2-4	100	500 µL	600 µL
12孔板	4-8	200	1 mL	1.2 mL
6孔板	8-16	200	2 mL	2.2 mL
25cm²培养瓶	15-25	400	4 mL	4.4 mL

二．悬浮细胞转染（以24孔板和转染5 nM siRNA为例，其他培养板加样体积请参考表4）
接种细胞

表3 转染当天，根据培养皿的大小，接种悬浮细胞数量参考值

培养皿	底面积(cm²)	每孔接种细胞悬浮液体积（μL）	转染当天接种细胞数
384孔板	0.1	25	5 ×10³~1×10⁴
96孔板	0.32	50	1×10⁴~ ×10⁴
24孔板	2	200	1×10⁵ ~ 2×10⁵
12孔板	4.5	500	2×10⁵ ~ 4×10⁵
6孔板	9.6	1000	5×10⁵ ~ 2×10⁶
25cm²培养瓶	25-28	2000	2×10⁶~ 5×10⁶

2.按照以下体系配制siRNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物：

1）对于每孔细胞，使用100 μL无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释21 ng siRNA (1.5 pmols)，混匀。

2）向100 μL的siRNA中加入4 μL的转染试剂，立刻旋涡10秒，充分混匀。

3）在室温孵育15 min，使得形成siRNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物。
【注】：孵育时间不要超过30 min

4）在每孔200 μL细胞悬浮液中，加入100 μL的siRNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物，轻轻混匀。最终体积为300 µL，siRNA终浓度为5 nM。

5）37 ℃，5% CO₂培养箱培养4-6 h后，再加入700 µL完全培养基，轻轻摇动培养板使其混匀。

6）继续放入培养箱中孵育，直至目的基因表达。建议一般mRNA表达水平通常在24–72 h，蛋白表达水平在48-96 h。

【注】：为了优化内源性基因沉默，建议选取siRNA浓度在5 nM到20 nM之间。转染试剂的体积应根据siRNA浓度和培养皿的大小进行调整，请参见下表4。

表4 siRNA浓度为5 nM时，在悬浮细胞中的参考值

培养皿	siRNA的浓度(pmoles)	每孔siRNA的含量（ng）	转染试剂体积（µL）	形成复合物培养基体积（µL）	悬浮细胞的体积	转染4-6h后另加入培养基的体积
384孔板	0.25	3.75	1 ± 0.5	25	25 µL	0 µL
96孔板	0.5	7.5	2 ± 1	50	50 µL	100 µL
24孔板	1.5	21	3 ± 2	100	200 µL	700 µL
12孔板	3.5	49	6 ± 4	200	500 µL	1 mL
6孔板	6	84	10 ± 8	200	1 mL	2 mL
25cm²培养瓶	12	168	15 ±10	400	2 mL	4 mL

表5 悬浮细胞中siRNA浓度、转染试剂的用量参考值

培养皿	siRNA的终浓度/孔（nM）	转染试剂的体积/孔（µL）
96孔板	1 ~ 20	1 ± 0.5
24孔板		2 ± 1
12孔板		3 ± 2
6孔板		10 ± 8
96孔板	20 ~ 50	1.5 ± 0.5
24孔板		3 ± 1
12孔板		5 ± 2
6孔板		15 ± 8

三．miRNA转染操作流程
该转染试剂也适合转染miRNA，转染贴壁细胞和悬浮细胞的具体操作请参考siRNA的操作流程。

HB220930

Q：绿光标记的siRNA，转染5h后观察，只有一些杂点，没有细胞形态什么原因？

A：转染进去的整个细胞是绿色的，可以清晰的看到细胞形态，没有转染进去的就是绿色的杂点儿。

Q：转染后可以换液吗？

A：可以换液，转然后8h换液，建议不换液，转染试剂毒性很小，不换液转染效率可以提高。

[1] Zhang Y, Hu R, Xi B, Nie D, Xu H, Liu A. Mechanisms of Senescence-Related NKG2D Ligands Release and Immune Escape Induced by Chemotherapy in Neuroblastoma Cells. Front Cell Dev Biol. 2022;10:829404. Published 2022 Mar 2. doi:10.3389/fcell.2022.829404(IF:6.684)
[2] Cui B, Wang Y, Jin J, et al. Resveratrol Treats UVB-Induced Photoaging by Anti-MMP Expression, through Anti-Inflammatory, Antioxidant, and Antiapoptotic Properties, and Treats Photoaging by Upregulating VEGF-B Expression. Oxid Med Cell Longev. 2022;2022:6037303. Published 2022 Jan 4. doi:10.1155/2022/6037303(IF:6.543)
[3] Liu Y, Zeng Y, Si HB, Tang L, Xie HQ, Shen B. Exosomes Derived From Human Urine-Derived Stem Cells Overexpressing miR-140-5p Alleviate Knee Osteoarthritis Through Downregulation of VEGFA in a Rat Model. Am J Sports Med. 2022;50(4):1088-1105. doi:10.1177/03635465221073991(IF:6.203)
[4] Zhang ZD, Wen B, Li DJ, et al. AKT serine/threonine kinase 2-mediated phosphorylation of fascin threonine 403 regulates esophageal cancer progression. Int J Biochem Cell Biol. 2022;145:106188. doi:10.1016/j.biocel.2022.106188(IF:5.085)
[5] Tan S, Zhou Y, Zhao H, et al. Comprehensive transcriptome analysis of hypothalamus reveals genes associated with disorders of sex development in pigs. J Steroid Biochem Mol Biol. 2021;210:105875. doi:10.1016/j.jsbmb.2021.105875(IF:4.294)
[6] Niu M, Yi M, Dong B, Luo S, Wu K. Upregulation of STAT1-CCL5 axis is a biomarker of colon cancer and promotes the proliferation of colon cancer cells. Ann Transl Med. 2020;8(15):951. doi:10.21037/atm-20-4428(IF:3.297)

Hieff Trans® 悬浮细胞专用脂质体核酸转染试剂脂质体转染试剂

发表于2024年3月20日由上海金畔生物科技有限公司

Hieff Trans® 悬浮细胞专用脂质体核酸转染试剂脂质体转染试剂

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产品描述
Hieff Trans^®悬浮细胞专用脂质体核酸转染试剂是一种阳离子脂质体转染试剂，经优化专门用于悬浮细胞的转染，且适用于DNA、RNA和寡核苷酸的转染，对大多数真核细胞具有很高的转染效率。
Hieff Trans^®悬浮细胞专用脂质体核酸转染试剂以无菌的液体形式提供。

运输与保存方法

冰袋（wet ice）运输。产品2-8ºC保存，一年有效。不可冷冻！

注意事项
1. 为得到最优的转染效率，请先用无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释Hieff Trans^®Suspension Cell-Free Liposomal Transfection Reagent（以下简称Hieff Trans^®），之后与DNA或RNA做混合。
2. 使用高质量的DNA或RNA有助于获得较高的转染效率，务必确保质粒的高纯度和无菌状态，彻底去除质粒提取过程中可能残留的苯酚和高盐，因为上述酚类会对细胞造成损失，而高盐分会干扰“Hieff Trans^®–复合物”的形成。质粒中的内毒素也是转染的大敌，务必去除。

3. 转染时培养基中不能添加抗生素。

4. 阳离子脂质体应该在2-8℃保存，要注意避免多次反复长时间开盖，因为可能会导致脂质体氧化而影响转染效率。

5. 需优化DNA浓度和阳离子脂质体试剂量以得到最大的转染效率。DNA和Hieff Trans^®的比例，通常推荐是1:2 或1:3

推荐转染条件（以293悬浮培养细胞，质粒DNA转染为例）

最终转染体积：30 mL

转染细胞数目：3×10⁷ cell（最终细胞密度：1×10⁶cell/mL），转染之前需要确保细胞健康，细胞活力>90%。

质粒DNA量：20–40 μg (typically use 30 μg)

转染试剂量：40–80 μL (typically use 60 μL). Use 2 μL Hieff Trans^® per 1 μg of plasmid DNA transfected.

操作步骤（293悬浮细胞）

使用以下步骤在30 mL总体系内转染293细胞，转染过程中生长培养基内不要添加抗生素，否则会降低转染效率。转染过程请同时设置阳性对照组和阴性对照组（无DNA，无Hieff Trans^®）。

【注】对于其他的培养总体系，按比例放大或者缩小各组分用量。
1. 转染当天，在配制复合物之前，准备转染需要的细胞量【见上推荐转染条件，即28 mL 生长培养基内加入3×10⁷ cell，台盼蓝排斥法确定细胞活力和小量细胞成团量。剧烈漩涡混匀45 s以打破细胞团，并用计数器测定总细胞量。细胞活力需>90%。】【注】：为了达到最优效率，确保单细胞悬液。

2. 按照以下方法配制Hieff Trans^®-DNA复合物，
a, 用无血清培养基（如OPTI-MEM I）稀释30 μg质粒DNA，使其终体积为1 mL；
b, 用无血清培养基（如OPTI-MEM I）稀释60 μL Hieff Trans^®，使其终体积为1 mL；轻轻混匀，于室温孵育5 min；【注意】：过长时间孵育会降低效率。
c, 孵育5 min之后，将稀释的质粒DNA加入稀释的Hieff Trans^®，使其总体积为2 mL。轻轻混匀。
d, 室温孵育20-30 min，使得DNA-Hieff Trans^®复合物形成。此时溶液可能会混浊，但不会影响转染。
【注意】：DNA-脂质体复合物室温至少稳定保存5 h。
3. 孵育完全后，将2 mL DNA-Hieff Trans^®复合物加入28mL 含293悬浮细胞的生长培养基内，使得细胞最终的密度约为1×10⁶cell/mL。对于阴性对照，用2 mL无血清培养基（如OPTI-MEM I）替换。
4. 37℃，5% CO₂轨道摇床培养，转速125 rpm，直至进行转基因表达分析，无需去掉复合物或更换培养基。然而，可能有必要在4-6 h后更换生长培养基，不会降低转染活性。

HB230503

运输与保存方法

冰袋（wet ice）运输。产品2-8ºC保存，一年有效。不可冷冻！

3. 转染时培养基中不能添加抗生素。

4. 阳离子脂质体应该在2-8℃保存，要注意避免多次反复长时间开盖，因为可能会导致脂质体氧化而影响转染效率。

5. 需优化DNA浓度和阳离子脂质体试剂量以得到最大的转染效率。DNA和Hieff Trans^®的比例，通常推荐是1:2 或1:3

推荐转染条件（以293悬浮培养细胞，质粒DNA转染为例）

最终转染体积：30 mL

转染细胞数目：3×10⁷ cell（最终细胞密度：1×10⁶cell/mL），转染之前需要确保细胞健康，细胞活力>90%。

质粒DNA量：20–40 μg (typically use 30 μg)

转染试剂量：40–80 μL (typically use 60 μL). Use 2 μL Hieff Trans^® per 1 μg of plasmid DNA transfected.

操作步骤（293悬浮细胞）

HB230503

Q:我们转染试剂转染后需要换液吗？

A:对于换液可以区分两种情况；1、转染之前如果没有换液应在转染 6 小时左右后换液，以保证细胞生长所需营养，2、如果转染之前如果有换液，可以按照平时等到培养基出现营养不足时换液。

Q:转染试剂转单个质粒和多质粒共转的效率如何？

A:单转效率对于验证过的细胞效率都是很好，可以参考 FAQ-验证过的细胞系，对于共转由于要涉及到质粒的混合比例和质粒与转染试剂的添加比例问题，因此具体的效率需要客户做相应的验证方可。

Q:转染试剂可以冻存吗？

A:不可以冻存，因为转染试剂是一种脂质体阳离子转染试剂，由于脂质体是不能在低温下冻存，因此转染试剂最好是 4 度储存，保持最好的转染效能。

[1] Cheng Y, Liu Y, Shi S, et al. Functional Characterization of Duck STING in IFN-β Induction and Anti-H9N2 Avian Influenza Viruses Infections. Front Immunol. 2019;10:2224. Published 2019 Sep 18. doi:10.3389/fimmu.2019.02224(IF:4.716)
[2] Li J, Peng S, Zhong L, et al. Identification and validation of a regulatory mutation upstream of the BMP2 gene associated with carcass length in pigs. Genet Sel Evol. 2021;53(1):94. Published 2021 Dec 14. doi:10.1186/s12711-021-00689-0(IF:4.297)

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