蛋白A/G琼脂糖纯化树脂 蛋白A/G纯化树脂|rProtein A/G Agarose Resin

蛋白A/G琼脂糖纯化树脂 蛋白A/G纯化树脂|rProtein A/G Agarose Resin

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品简介

天然蛋白A(Protein A)是一种发现于金黄色葡萄球菌的细胞壁表面蛋白,天然蛋白G(Protein G)是一种分离自G型或C型链球菌属的细胞表面蛋白,二者功能相似,主要通过与免疫球蛋白(Ig)的Fc区相互作用,可结合大多数哺乳动物的IgG。然而两者结合特异性上有所不同(详细见附录1,蛋白A,G对不同物种Ig的结合能力总表)。蛋白A,蛋白G常共价偶联在固体载体如琼脂糖珠或丙烯酸树脂小珠上,直接用以做免疫沉淀(IP)或者免疫共沉淀(Co-IP)来进行蛋白功能相关研究,或者直接装在层析柱上来纯化单克隆或者多克隆抗体。

本品使用的是基因改造后的蛋白A和蛋白G,不仅维持其本身的Ig亲和特性,同时也去除了天然蛋白本身的非主要结合域以降低非特异性结合。本品同时将蛋白A和蛋白G共价偶联到琼脂糖凝胶微球表面,比单独的蛋白A或者蛋白G都有更广的结合范围,适合于所有蛋白A琼脂糖珠和蛋白G琼脂糖珠单独可以结合的Ig,实用性更高。

 

产品信息

货号

36403ES03 / 36403ES05/36403ES08/36403ES25/36403ES60

规格

1 mL /2 mL/5 mL/25 mL/100 mL

 

产品性质

基质(Matrix)

高度交联的4%琼脂糖微球

配体(Ligand)

重组蛋白A/G

径(Bead size)

45-165 µm

最大流速(Flowmax

0.3 MPa, 3 bar

储存缓冲液(Buffer)

20%乙醇的1×PBS

载量(Capacity)

10-15 mg Rabbit IgG/mL 基质

pH范围(pH range)

3-10

 

储存条件

2~8℃保存,有效期2年。

 

附录1. 蛋白A,G对不同物种Ig的结合能力总表

免疫球蛋白亚型

Protein A

Protein G  

免疫球蛋白亚型

Protein A

Protein G  

Human IgG

++++

++++

Mouse IgG

++++

++++

Human IgG1

++++

++++

Mouse IgG1

+

++++

Human IgG2

++++

++++

Mouse IgG2a

++++

++++

Human IgG3

+

++++

Mouse IgG2b

+++

+++

Human IgG4

++++

++++

Mouse IgG3

++

+++

Human IgM

Use anti-Human IgM

Mouse IgM

Use anti-Mouse IgM

Human IgE

NR

NR

Chicken IgG (IgY)

NR

NR

Human IgA

+

NR

Cow IgG

++

++++

Human IgA1

+

NR

Goat IgG

+

++++

Human IgA2

+

NR

Goat IgG1

+

++++

Human IgD

Use anti-Human IgD

Goat IgG2

++++

++++

Rat IgG

+

++

Goat IgM

NR

NR

Rat IgG1

NR

+

Guinea Pig IgG

++++

++

Rat IgG2a

NR

NR

Guinea Pig IgG1

++++

++

Rat IgG2b

NR

+

Guinea Pig IgG2

++++

++

Rat IgG3

+

++

Hamster IgG

+

++

Sheep IgG

+

++

Horse IgG

+

++++

Sheep IgG1

+

++

Rabbit IgG

++++

+++

Sheep IgG2

+

++

Rabbit IgM

NR

NR

Sheep IgM

NR

NR

Rabbit All isotypes

+++

++

Pig IgG

+++

+++

Monkey IgG

++++

++++

Cat IgG

++++

+

Donkey IgG

++

++++

Dog IgG

++++

+

 

 

 

+)= weak binding;(++)= moderate binding;(++++)= strong binding;NR= not recommended; (-)= not tested;

 

Ver.CN20230824

Q:为什么柱子反压过高?

A:可能是填料被堵塞;裂解液中含有微笑的固体颗粒,建议上柱前使用 0.22 µm/0.45

µm 滤膜过滤。

Q:为什么洗脱组分中没有目的蛋白?

A:可能是抗体被降解;建议适当的提高洗脱pH。

Q:该产品可以直接使用吗?

AProtein A 琼脂糖珠最好在使用前充分颠倒若干次,使琼脂糖珠混合均匀。

Q:该产品可以贮存在20℃吗?

A:不可以,不可冷冻该产品。应置于 4°贮存。

Q:说明书中COIP实验操作中取适量填料是要加多少量的填料

A一般填料的量是根据自己要做的样品的量决定。最小的常COIP体系为:20ul填料+5ug抗体与总体积500ul 总蛋白浓度1mg/ml的裂解液混合孵育。

[1] Chen LJ, Zhang NN, Zhou CX, et al. Gm364 coordinates MIB2/DLL3/Notch2 to regulate female fertility through AKT activation. Cell Death Differ. 2022;29(2):366-380. doi:10.1038/s41418-021-00861-5(IF:15.828)
[2] Zhang K, Chen S, Yang Q, et al. The Oligodendrocyte Transcription Factor 2 OLIG2 regulates transcriptional repression during myelinogenesis in rodents [published correction appears in Nat Commun. 2022 Jun 1;13(1):3164]. Nat Commun. 2022;13(1):1423. Published 2022 Mar 17. doi:10.1038/s41467-022-29068-z(IF:14.919)
[3] Zhu D, Chen C, Liu X, et al. Osteosarcoma cell proliferation suppression via SHP-2-mediated inactivation of the JAK/STAT3 pathway by tubocapsenolide A. J Adv Res. 2021;34:79-91. Published 2021 Jun 11. doi:10.1016/j.jare.2021.06.004(IF:10.479)
[4] Zheng J, Yao L, Zhou Y, et al. A novel function of NLRP3 independent of inflammasome as a key transcription factor of IL-33 in epithelial cells of atopic dermatitis. Cell Death Dis. 2021;12(10):871. Published 2021 Sep 24. doi:10.1038/s41419-021-04159-9(IF:8.469)
[5] Wang J, Zhao D, Ding CZ, et al. MicroRNA-194: a novel regulator of glucagon-like peptide-1 synthesis in intestinal L cells. Cell Death Dis. 2021;12(1):113. Published 2021 Jan 21. doi:10.1038/s41419-020-03366-0(IF:8.469)
[6] Zhu H, Guo Y, Huang A, et al. HDAC3-Regulated PGE2 Production by Microglia Induces Phobic Anxiety Susceptibility After Stroke and Pointedly Exploiting a Signal-Targeted Gamma Visual Stimulation New Therapy. Front Immunol. 2022;13:845678. Published 2022 Feb 18. doi:10.3389/fimmu.2022.845678(IF:7.561)
[7] Wang Z, Xu J, Feng J, et al. Structural and Functional Analyses of Type I IFNa Shed Light Into Its Interaction With Multiple Receptors in Fish. Front Immunol. 2022;13:862764. Published 2022 Mar 22. doi:10.3389/fimmu.2022.862764(IF:7.561)
[8] Ni H, Qin H, Sun C, et al. MiR-375 reduces the stemness of gastric cancer cells through triggering ferroptosis. Stem Cell Res Ther. 2021;12(1):325. Published 2021 Jun 5. doi:10.1186/s13287-021-02394-7(IF:6.832)
[9] Gao L, Guo Q, Li X, et al. MiR-873/PD-L1 axis regulates the stemness of breast cancer cells [published correction appears in EBioMedicine. 2019 Nov;49:389-390]. EBioMedicine. 2019;41:395-407. doi:10.1016/j.ebiom.2019.02.034(IF:6.680)
[10] Yang X, Li X, Zhong C, et al. Circular RNA circPHKA2 Relieves OGD-Induced Human Brain Microvascular Endothelial Cell Injuries through Competitively Binding miR-574-5p to Modulate SOD2. Oxid Med Cell Longev. 2021;2021:3823122. Published 2021 Nov 8. doi:10.1155/2021/3823122(IF:6.543)
[11] Xie Y, Peng J, Pang J, et al. Biglycan regulates neuroinflammation by promoting M1 microglial activation in early brain injury after experimental subarachnoid hemorrhage. J Neurochem. 2020;152(3):368-380. doi:10.1111/jnc.14926(IF:4.870)
[12] Sun Z, Zhang L, Li L, et al. Galectin-3 mediates cardiac remodeling caused by impaired glucose and lipid metabolism through inhibiting two pathways of activating Akt. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2021;320(1):H364-H380. doi:10.1152/ajpheart.00523.2020(IF:4.733)
[13] Zhao X, Huang W, Guo J, et al. PLAAT1 promotes p53 degradation via autophagy-lysosome pathway in zebrafish. Fish Shellfish Immunol. 2022;125:48-53. doi:10.1016/j.fsi.2022.05.001(IF:4.581)
[14] Gu H, Duan Z. Silencing of circDPP4 suppresses cell progression of human prostate cancer and enhances docetaxel cytotoxicity through regulating the miR-564/ZIC2 axis. J Gene Med. 2022;24(3):e3403. doi:10.1002/jgm.3403(IF:4.565)
[15] Zheng L, Zhang Z, Zhang S, et al. RNA Binding Protein RNPC1 Inhibits Breast Cancer Cell Metastasis via Activating STARD13-Correlated ceRNA Network. Mol Pharm. 2018;15(6):2123-2132. doi:10.1021/acs.molpharmaceut.7b01123(IF:4.556)
[16] Guo X, Xiang C, Zhang Z, Zhang F, Xi T, Zheng L. Displacement of Bax by BMF Mediates STARD13 3'UTR-Induced Breast Cancer Cells Apoptosis in an miRNA-Depedent Manner. Mol Pharm. 2018;15(1):63-71. doi:10.1021/acs.molpharmaceut.7b00727(IF:4.440)
[17] Meng P, Zhang YF, Zhang W, et al. Identification of the atypical cadherin FAT1 as a novel glypican-3 interacting protein in liver cancer cells. Sci Rep. 2021;11(1):40. Published 2021 Jan 8. doi:10.1038/s41598-020-79524-3(IF:4.380)
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[19] Li H, Hu X, Cheng C, et al. Ribosome production factor 2 homolog promotes migration and invasion of colorectal cancer cells by inducing epithelial-mesenchymal transition via AKT/Gsk-3β signaling pathway [published online ahead of print, 2022 Jan 28]. Biochem Biophys Res Commun. 2022;597:52-57. doi:10.1016/j.bbrc.2022.01.090(IF:3.575)
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[21] Zhao Q, Liu Y, Wang T, et al. MiR-375 inhibits the stemness of breast cancer cells by blocking the JAK2/STAT3 signaling. Eur J Pharmacol. 2020;884:173359. doi:10.1016/j.ejphar.2020.173359(IF:3.263)
[22] Sun Z, Wang Z, Li L, et al. RAGE/galectin-3 yields intraplaque calcification transformation via sortilin. Acta Diabetol. 2019;56(4):457-472. doi:10.1007/s00592-018-1273-1(IF:2.996)
[23] Zhang D, Chen X, Zheng D. A Novel MIR503HG/miR-497-5p/CCL19 Axis Regulates High Glucose-Induced Cell Apoptosis, Inflammation, and Fibrosis in Human HK-2 Cells. Appl Biochem Biotechnol. 2022;194(5):2061-2076. doi:10.1007/s12010-021-03776-6(IF:2.926)
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[25] Pan T, Qian Y, Li T, et al. Acetyl l-carnitine protects adipose-derived stem cells against serum-starvation: regulation on the network composed of reactive oxygen species, autophagy, apoptosis and senescence. Cytotechnology. 2022;74(1):105-121. doi:10.1007/s10616-021-00514-y(IF:2.058)
[26] Li X, Zhang N, Zhang Y, et al. E3 ligase Fbw7 participates in oxidative stress‑induced myocardial cell injury via interacting with Mcl‑1. Mol Med Rep. 2019;20(2):1561-1568. doi:10.3892/mmr.2019.10394(IF:1.851)

产品简介

天然蛋白A(Protein A)是一种发现于金黄色葡萄球菌的细胞壁表面蛋白,天然蛋白G(Protein G)是一种分离自G型或C型链球菌属的细胞表面蛋白,二者功能相似,主要通过与免疫球蛋白(Ig)的Fc区相互作用,可结合大多数哺乳动物的IgG。然而两者结合特异性上有所不同(详细见附录1,蛋白A,G对不同物种Ig的结合能力总表)。蛋白A,蛋白G常共价偶联在固体载体如琼脂糖珠或丙烯酸树脂小珠上,直接用以做免疫沉淀(IP)或者免疫共沉淀(Co-IP)来进行蛋白功能相关研究,或者直接装在层析柱上来纯化单克隆或者多克隆抗体。

本品使用的是基因改造后的蛋白A和蛋白G,不仅维持其本身的Ig亲和特性,同时也去除了天然蛋白本身的非主要结合域以降低非特异性结合。本品同时将蛋白A和蛋白G共价偶联到琼脂糖凝胶微球表面,比单独的蛋白A或者蛋白G都有更广的结合范围,适合于所有蛋白A琼脂糖珠和蛋白G琼脂糖珠单独可以结合的Ig,实用性更高。

 

产品信息

货号

36403ES03 / 36403ES05/36403ES08/36403ES25/36403ES60

规格

1 mL /2 mL/5 mL/25 mL/100 mL

 

产品性质

基质(Matrix)

高度交联的4%琼脂糖微球

配体(Ligand)

重组蛋白A/G

径(Bead size)

45-165 µm

最大流速(Flowmax

0.3 MPa, 3 bar

储存缓冲液(Buffer)

20%乙醇的1×PBS

载量(Capacity)

10-15 mg Rabbit IgG/mL 基质

pH范围(pH range)

3-10

 

储存条件

2~8℃保存,有效期2年。

 

附录1. 蛋白A,G对不同物种Ig的结合能力总表

免疫球蛋白亚型

Protein A

Protein G  

免疫球蛋白亚型

Protein A

Protein G  

Human IgG

++++

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Mouse IgG

++++

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Human IgG1

++++

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Mouse IgG1

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Human IgG2

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Mouse IgG2a

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Human IgG3

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Mouse IgG2b

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Human IgG4

++++

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Mouse IgG3

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Human IgM

Use anti-Human IgM

Mouse IgM

Use anti-Mouse IgM

Human IgE

NR

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Chicken IgG (IgY)

NR

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Human IgA

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Cow IgG

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Human IgA1

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NR

Goat IgG

+

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Human IgA2

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Goat IgG1

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Human IgD

Use anti-Human IgD

Goat IgG2

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Rat IgG

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Goat IgM

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Rat IgG1

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Guinea Pig IgG

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Rat IgG2a

NR

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Guinea Pig IgG1

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Rat IgG2b

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Guinea Pig IgG2

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Rat IgG3

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Hamster IgG

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Sheep IgG

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Horse IgG

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Sheep IgG1

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Rabbit IgG

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Sheep IgG2

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Rabbit IgM

NR

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Sheep IgM

NR

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Rabbit All isotypes

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Pig IgG

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Monkey IgG

++++

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Cat IgG

++++

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Donkey IgG

++

++++

Dog IgG

++++

+

 

 

 

+)= weak binding;(++)= moderate binding;(++++)= strong binding;NR= not recommended; (-)= not tested;

 

Ver.CN20230824

Q:为什么柱子反压过高?

A:可能是填料被堵塞;裂解液中含有微笑的固体颗粒,建议上柱前使用 0.22 µm/0.45

µm 滤膜过滤。

Q:为什么洗脱组分中没有目的蛋白?

A:可能是抗体被降解;建议适当的提高洗脱pH。

Q:该产品可以直接使用吗?

AProtein A 琼脂糖珠最好在使用前充分颠倒若干次,使琼脂糖珠混合均匀。

Q:该产品可以贮存在20℃吗?

A:不可以,不可冷冻该产品。应置于 4°贮存。

Q:说明书中COIP实验操作中取适量填料是要加多少量的填料

A一般填料的量是根据自己要做的样品的量决定。最小的常COIP体系为:20ul填料+5ug抗体与总体积500ul 总蛋白浓度1mg/ml的裂解液混合孵育。

[1] Chen LJ, Zhang NN, Zhou CX, et al. Gm364 coordinates MIB2/DLL3/Notch2 to regulate female fertility through AKT activation. Cell Death Differ. 2022;29(2):366-380. doi:10.1038/s41418-021-00861-5(IF:15.828)
[2] Zhang K, Chen S, Yang Q, et al. The Oligodendrocyte Transcription Factor 2 OLIG2 regulates transcriptional repression during myelinogenesis in rodents [published correction appears in Nat Commun. 2022 Jun 1;13(1):3164]. Nat Commun. 2022;13(1):1423. Published 2022 Mar 17. doi:10.1038/s41467-022-29068-z(IF:14.919)
[3] Zhu D, Chen C, Liu X, et al. Osteosarcoma cell proliferation suppression via SHP-2-mediated inactivation of the JAK/STAT3 pathway by tubocapsenolide A. J Adv Res. 2021;34:79-91. Published 2021 Jun 11. doi:10.1016/j.jare.2021.06.004(IF:10.479)
[4] Zheng J, Yao L, Zhou Y, et al. A novel function of NLRP3 independent of inflammasome as a key transcription factor of IL-33 in epithelial cells of atopic dermatitis. Cell Death Dis. 2021;12(10):871. Published 2021 Sep 24. doi:10.1038/s41419-021-04159-9(IF:8.469)
[5] Wang J, Zhao D, Ding CZ, et al. MicroRNA-194: a novel regulator of glucagon-like peptide-1 synthesis in intestinal L cells. Cell Death Dis. 2021;12(1):113. Published 2021 Jan 21. doi:10.1038/s41419-020-03366-0(IF:8.469)
[6] Zhu H, Guo Y, Huang A, et al. HDAC3-Regulated PGE2 Production by Microglia Induces Phobic Anxiety Susceptibility After Stroke and Pointedly Exploiting a Signal-Targeted Gamma Visual Stimulation New Therapy. Front Immunol. 2022;13:845678. Published 2022 Feb 18. doi:10.3389/fimmu.2022.845678(IF:7.561)
[7] Wang Z, Xu J, Feng J, et al. Structural and Functional Analyses of Type I IFNa Shed Light Into Its Interaction With Multiple Receptors in Fish. Front Immunol. 2022;13:862764. Published 2022 Mar 22. doi:10.3389/fimmu.2022.862764(IF:7.561)
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[9] Gao L, Guo Q, Li X, et al. MiR-873/PD-L1 axis regulates the stemness of breast cancer cells [published correction appears in EBioMedicine. 2019 Nov;49:389-390]. EBioMedicine. 2019;41:395-407. doi:10.1016/j.ebiom.2019.02.034(IF:6.680)
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[11] Xie Y, Peng J, Pang J, et al. Biglycan regulates neuroinflammation by promoting M1 microglial activation in early brain injury after experimental subarachnoid hemorrhage. J Neurochem. 2020;152(3):368-380. doi:10.1111/jnc.14926(IF:4.870)
[12] Sun Z, Zhang L, Li L, et al. Galectin-3 mediates cardiac remodeling caused by impaired glucose and lipid metabolism through inhibiting two pathways of activating Akt. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2021;320(1):H364-H380. doi:10.1152/ajpheart.00523.2020(IF:4.733)
[13] Zhao X, Huang W, Guo J, et al. PLAAT1 promotes p53 degradation via autophagy-lysosome pathway in zebrafish. Fish Shellfish Immunol. 2022;125:48-53. doi:10.1016/j.fsi.2022.05.001(IF:4.581)
[14] Gu H, Duan Z. Silencing of circDPP4 suppresses cell progression of human prostate cancer and enhances docetaxel cytotoxicity through regulating the miR-564/ZIC2 axis. J Gene Med. 2022;24(3):e3403. doi:10.1002/jgm.3403(IF:4.565)
[15] Zheng L, Zhang Z, Zhang S, et al. RNA Binding Protein RNPC1 Inhibits Breast Cancer Cell Metastasis via Activating STARD13-Correlated ceRNA Network. Mol Pharm. 2018;15(6):2123-2132. doi:10.1021/acs.molpharmaceut.7b01123(IF:4.556)
[16] Guo X, Xiang C, Zhang Z, Zhang F, Xi T, Zheng L. Displacement of Bax by BMF Mediates STARD13 3'UTR-Induced Breast Cancer Cells Apoptosis in an miRNA-Depedent Manner. Mol Pharm. 2018;15(1):63-71. doi:10.1021/acs.molpharmaceut.7b00727(IF:4.440)
[17] Meng P, Zhang YF, Zhang W, et al. Identification of the atypical cadherin FAT1 as a novel glypican-3 interacting protein in liver cancer cells. Sci Rep. 2021;11(1):40. Published 2021 Jan 8. doi:10.1038/s41598-020-79524-3(IF:4.380)
[18] Li J, Ye W, Xu W, et al. Activation of autophagy inhibits epithelial to mesenchymal transition process of human lens epithelial cells induced by high glucose conditions. Cell Signal. 2020;75:109768. doi:10.1016/j.cellsig.2020.109768(IF:3.968)
[19] Li H, Hu X, Cheng C, et al. Ribosome production factor 2 homolog promotes migration and invasion of colorectal cancer cells by inducing epithelial-mesenchymal transition via AKT/Gsk-3β signaling pathway [published online ahead of print, 2022 Jan 28]. Biochem Biophys Res Commun. 2022;597:52-57. doi:10.1016/j.bbrc.2022.01.090(IF:3.575)
[20] Zhang H, Lu Y, Wu B, Xia F. Semaphorin 3A mitigates lipopolysaccharide-induced chondrocyte inflammation, apoptosis and extracellular matrix degradation by binding to Neuropilin-1. Bioengineered. 2021;12(2):9641-9654. doi:10.1080/21655979.2021.1974806(IF:3.269)
[21] Zhao Q, Liu Y, Wang T, et al. MiR-375 inhibits the stemness of breast cancer cells by blocking the JAK2/STAT3 signaling. Eur J Pharmacol. 2020;884:173359. doi:10.1016/j.ejphar.2020.173359(IF:3.263)
[22] Sun Z, Wang Z, Li L, et al. RAGE/galectin-3 yields intraplaque calcification transformation via sortilin. Acta Diabetol. 2019;56(4):457-472. doi:10.1007/s00592-018-1273-1(IF:2.996)
[23] Zhang D, Chen X, Zheng D. A Novel MIR503HG/miR-497-5p/CCL19 Axis Regulates High Glucose-Induced Cell Apoptosis, Inflammation, and Fibrosis in Human HK-2 Cells. Appl Biochem Biotechnol. 2022;194(5):2061-2076. doi:10.1007/s12010-021-03776-6(IF:2.926)
[24] Zhang F, Ni H, Li X, Liu H, Xi T, Zheng L. LncRNA FENDRR attenuates adriamycin resistance via suppressing MDR1 expression through sponging HuR and miR-184 in chronic myelogenous leukaemia cells. FEBS Lett. 2019;593(15):1993-2007. doi:10.1002/1873-3468.13480(IF:2.675)
[25] Pan T, Qian Y, Li T, et al. Acetyl l-carnitine protects adipose-derived stem cells against serum-starvation: regulation on the network composed of reactive oxygen species, autophagy, apoptosis and senescence. Cytotechnology. 2022;74(1):105-121. doi:10.1007/s10616-021-00514-y(IF:2.058)
[26] Li X, Zhang N, Zhang Y, et al. E3 ligase Fbw7 participates in oxidative stress‑induced myocardial cell injury via interacting with Mcl‑1. Mol Med Rep. 2019;20(2):1561-1568. doi:10.3892/mmr.2019.10394(IF:1.851)

蛋白L纯化预装柱1mL 蛋白纯化预装柱|Protein L 4FF Chromatography Column

蛋白L纯化预装柱1mL 蛋白纯化预装柱|Protein L 4FF Chromatography Column

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品简介

 

天然蛋白L(Protein L)是从马格努斯消化链球菌分离出来的能和免疫球蛋白特异性结合的蛋白质,分子量为36 KD。本产品使用的是基因改造后的蛋白L ,既保留了与抗体k链结合的特性,同时也不会影响抗体的抗原结合位点。与 protein A 和 Protein G 相比,Protein L 更能广泛地结合各种来源及亚类的抗体,包括人、小鼠、大鼠、兔和鸡,但不结合牛、山羊或绵羊来源的免疫球蛋白。

rProtein L Agarose Resin 4FF是用于分离和纯化单克隆抗体的通用性亲和层析介质,产品以高度交联的琼脂糖凝胶为基质,重组Protein L为配基,具有很高的物理化学稳定性,可以在相对较高的流速下进行抗体的纯化,适用于工业客户。利用本产品经过一步亲和层析,可从腹水、血清和培养液等样品中得到高纯度的抗体,使用方便,应用广泛。

本品rProtein L 4FF Chromatography Column,1 mL是一种装填了rProtein L Agarose Resin 4FF的中压预装柱,规格1 mL,预装柱具有标准接口,可以适配商品化的各类中压色谱系统,如ÄKTA 等,方便客户操作。

 

产品信息

 

货号

36415ES03 / 36415ES08

规格

1 mL /5×1 mL

 

产品性质

 

基质(Matrix)

高度交联的4%琼脂糖微球

配体(Ligand)

重组蛋白L

孔径(Bead size)

45-165 µm

最大流速(Flowmax)

0.3 MPa, 3 bar

储存缓冲液(Buffer)

20%乙醇的1×PBS

载量(Capacity)

15 mg Mouse IgG/mL基质

pH范围(pH range)

3-10

 

储存条件

 

2~8℃保存,有效期2年。

 

需准备试剂

 

所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤除菌。

平衡/洗杂缓冲液:0.15 M NaCl,20 mM Na2HPO4pH 7.0

洗脱缓冲液:0.1 M甘氨酸,pH 3.0

中和液:1 M Tris-HCl,pH 8.5

 

使用说明

 

注】上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH值,可以用平衡/洗缓冲液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释,或者样品用平衡/洗缓冲液透析。样品在上样前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤,减少杂质以防阻塞柱子

  1. 样品纯化(以Akta为例)

1)准备:将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子,将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口,将预装柱下端口接到色谱系统中,并旋紧。

2)清洗:3-5倍柱体积去离子水冲洗层析柱中储存液。

3)平衡:5倍柱体积的平衡Buffer平衡层析柱,使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下,起到保护蛋白的作用。

4)上样将样品加到平衡好的层析柱中,推荐流速1-5 mL/min,保证目的蛋白与树脂充分接触,提高目的蛋白的回收率,收集流出液,待检测。

【注】样品的粘度增加使得即使上样体积很少,也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压,使得进样器更难使用。

5)洗杂10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗,直到紫外吸收达到一个稳定的基线,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液,待检测。

6)洗脱用洗脱Buffer 采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中,通常5倍柱体积洗脱液足够将目的蛋白洗脱下来。也可以用一个小的梯度,例如20倍柱体积或更多,来分离不同结合强度的蛋白质。

7)清洗及保存依次使用3倍柱体积的平衡Buffer5倍柱体积的去离子水平衡填料,最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡,然后保存在等体积的20%的乙醇中,置于4℃保存,防止填料被细菌污染。

2. SDS-PAGE检测

将纯化过程中得到的样品(包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等)利用SDS-PAGE进行检测,判定其纯化效果。

3. 填料清洗

rProtein L 4FF Chromatography Column可以重复使用而无需再生,随着一些变性物质的沉淀和蛋白的聚集,往往造成流速和结合载量下降,影响柱子的性能,这时需对柱子进行清洗:

1)去除沉淀或变性物质

2倍柱体积的6 M 盐酸胍溶液进行清洗然后立即5倍柱体积的PBS,pH 7.4 清洗。

2)去除由于疏水性吸附造成的非特异吸附物质

3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积的1% Triton™ X-100清洗然后立即5倍柱体积的PBS,pH 7.4 清洗。

 

注意事项

 

1. 请勿冷冻保存本产品。

2. 所有操作过程中,样本需要在4℃或冰上操作。

3. 本产品仅作科研用途

4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

Q:购买了该产品,还需要额外再购买相应填料吗?

A:不需要了,本品含有填料。

Q:为什么洗脱组分中没有目的蛋白?

A:可能是样品与Protein G 结合力低;换用 Protein A 或 Protein A/G 树脂纯化。

Q:为什么样品纯化过程中曲线不稳?

A:可能是样品或 buffer 中有气泡;建议样品和buffer 进行脱气。

Q:为什么柱子反压过高?

A:可能是填料被堵塞;裂解液中含有微笑的固体颗粒,建议上柱前使用 0.22 µm/0.45µm 滤膜过滤。

[1] Fu F, Liu H, Gao R, et al. Protein adduct binding properties of tabun-subtype nerve agents after exposure in vitro and in vivo. Toxicol Lett. 2020;321:1-11. doi:10.1016/j.toxlet.2019.12.014(IF:3.499)

产品简介

 

天然蛋白L(Protein L)是从马格努斯消化链球菌分离出来的能和免疫球蛋白特异性结合的蛋白质,分子量为36 KD。本产品使用的是基因改造后的蛋白L ,既保留了与抗体k链结合的特性,同时也不会影响抗体的抗原结合位点。与 protein A 和 Protein G 相比,Protein L 更能广泛地结合各种来源及亚类的抗体,包括人、小鼠、大鼠、兔和鸡,但不结合牛、山羊或绵羊来源的免疫球蛋白。

rProtein L Agarose Resin 4FF是用于分离和纯化单克隆抗体的通用性亲和层析介质,产品以高度交联的琼脂糖凝胶为基质,重组Protein L为配基,具有很高的物理化学稳定性,可以在相对较高的流速下进行抗体的纯化,适用于工业客户。利用本产品经过一步亲和层析,可从腹水、血清和培养液等样品中得到高纯度的抗体,使用方便,应用广泛。

本品rProtein L 4FF Chromatography Column,1 mL是一种装填了rProtein L Agarose Resin 4FF的中压预装柱,规格1 mL,预装柱具有标准接口,可以适配商品化的各类中压色谱系统,如ÄKTA 等,方便客户操作。

 

产品信息

 

货号

36415ES03 / 36415ES08

规格

1 mL /5×1 mL

 

产品性质

 

基质(Matrix)

高度交联的4%琼脂糖微球

配体(Ligand)

重组蛋白L

孔径(Bead size)

45-165 µm

最大流速(Flowmax)

0.3 MPa, 3 bar

储存缓冲液(Buffer)

20%乙醇的1×PBS

载量(Capacity)

15 mg Mouse IgG/mL基质

pH范围(pH range)

3-10

 

储存条件

 

2~8℃保存,有效期2年。

 

需准备试剂

 

所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤除菌。

平衡/洗杂缓冲液:0.15 M NaCl,20 mM Na2HPO4pH 7.0

洗脱缓冲液:0.1 M甘氨酸,pH 3.0

中和液:1 M Tris-HCl,pH 8.5

 

使用说明

 

注】上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH值,可以用平衡/洗缓冲液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释,或者样品用平衡/洗缓冲液透析。样品在上样前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤,减少杂质以防阻塞柱子

  1. 样品纯化(以Akta为例)

1)准备:将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子,将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口,将预装柱下端口接到色谱系统中,并旋紧。

2)清洗:3-5倍柱体积去离子水冲洗层析柱中储存液。

3)平衡:5倍柱体积的平衡Buffer平衡层析柱,使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下,起到保护蛋白的作用。

4)上样将样品加到平衡好的层析柱中,推荐流速1-5 mL/min,保证目的蛋白与树脂充分接触,提高目的蛋白的回收率,收集流出液,待检测。

【注】样品的粘度增加使得即使上样体积很少,也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压,使得进样器更难使用。

5)洗杂10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗,直到紫外吸收达到一个稳定的基线,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液,待检测。

6)洗脱用洗脱Buffer 采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中,通常5倍柱体积洗脱液足够将目的蛋白洗脱下来。也可以用一个小的梯度,例如20倍柱体积或更多,来分离不同结合强度的蛋白质。

7)清洗及保存依次使用3倍柱体积的平衡Buffer5倍柱体积的去离子水平衡填料,最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡,然后保存在等体积的20%的乙醇中,置于4℃保存,防止填料被细菌污染。

2. SDS-PAGE检测

将纯化过程中得到的样品(包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等)利用SDS-PAGE进行检测,判定其纯化效果。

3. 填料清洗

rProtein L 4FF Chromatography Column可以重复使用而无需再生,随着一些变性物质的沉淀和蛋白的聚集,往往造成流速和结合载量下降,影响柱子的性能,这时需对柱子进行清洗:

1)去除沉淀或变性物质

2倍柱体积的6 M 盐酸胍溶液进行清洗然后立即5倍柱体积的PBS,pH 7.4 清洗。

2)去除由于疏水性吸附造成的非特异吸附物质

3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积的1% Triton™ X-100清洗然后立即5倍柱体积的PBS,pH 7.4 清洗。

 

注意事项

 

1. 请勿冷冻保存本产品。

2. 所有操作过程中,样本需要在4℃或冰上操作。

3. 本产品仅作科研用途

4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

Q:购买了该产品,还需要额外再购买相应填料吗?

A:不需要了,本品含有填料。

Q:为什么洗脱组分中没有目的蛋白?

A:可能是样品与Protein G 结合力低;换用 Protein A 或 Protein A/G 树脂纯化。

Q:为什么样品纯化过程中曲线不稳?

A:可能是样品或 buffer 中有气泡;建议样品和buffer 进行脱气。

Q:为什么柱子反压过高?

A:可能是填料被堵塞;裂解液中含有微笑的固体颗粒,建议上柱前使用 0.22 µm/0.45µm 滤膜过滤。

[1] Fu F, Liu H, Gao R, et al. Protein adduct binding properties of tabun-subtype nerve agents after exposure in vitro and in vivo. Toxicol Lett. 2020;321:1-11. doi:10.1016/j.toxlet.2019.12.014(IF:3.499)

蛋白L纯化预装柱5mL 蛋白纯化预装柱|Protein L 4FF Chromatography Column

蛋白L纯化预装柱5mL 蛋白纯化预装柱|Protein L 4FF Chromatography Column

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品简介

 

天然蛋白L(Protein L)是从马格努斯消化链球菌分离出来的能和免疫球蛋白特异性结合的蛋白质,分子量为36 KD。本产品使用的是基因改造后的蛋白L ,既保留了与抗体k链结合的特性,同时也不会影响抗体的抗原结合位点。与 protein A 和 Protein G 相比,Protein L 更能广泛地结合各种来源及亚类的抗体,包括人、小鼠、大鼠、兔和鸡,但不结合牛、山羊或绵羊来源的免疫球蛋白。

rProtein L Agarose Resin 4FF是用于分离和纯化单克隆抗体的通用性亲和层析介质,产品以高度交联的琼脂糖凝胶为基质,重组Protein L为配基,具有很高的物理化学稳定性,可以在相对较高的流速下进行抗体的纯化,适用于工业客户。利用本产品经过一步亲和层析,可从腹水、血清和培养液等样品中得到高纯度的抗体,使用方便,应用广泛。

本品rProtein L 4FF Chromatography Column,5 mL是一种装填了rProtein L Agarose Resin 4FF的中压预装柱,规格5 mL,预装柱具有标准接口,可以适配商品化的各类中压色谱系统,如ÄKTA 等,方便客户操作。

 

产品信息

 

货号

36416ES08 / 36416ES25

规格

5 mL /5 mL

 

产品性质

 

基质(Matrix)

高度交联的4%琼脂糖微球

配体(Ligand)

重组蛋白L

孔径(Bead size)

45-165 µm

最大流速(Flowmax)

0.3 MPa, 3 bar

储存缓冲液(Buffer)

20%乙醇的1×PBS

载量(Capacity)

15 mg Mouse IgG/mL基质

pH范围(pH range)

3-10

 

储存条件

 

2~8℃保存,有效期2年。

 

需准备试剂

 

所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤除菌。

平衡/洗杂缓冲液:0.15 M NaCl,20 mM Na2HPO4pH 7.0

洗脱缓冲液:0.1 M甘氨酸,pH 3.0

中和液:1 M Tris-HCl,pH 8.5

 

使用说明

 

注】上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH值,可以用平衡/洗缓冲液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释,或者样品用平衡/洗缓冲液透析。样品在上样前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤,减少杂质以防阻塞柱子

  1. 样品纯化(以Akta为例)

1)准备:将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子,将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口,将预装柱下端口接到色谱系统中,并旋紧。

2)清洗:3-5倍柱体积去离子水冲洗层析柱中储存液。

3)平衡:5倍柱体积的平衡Buffer平衡层析柱,使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下,起到保护蛋白的作用。

4)上样将样品加到平衡好的层析柱中,推荐流速1-5 mL/min,保证目的蛋白与树脂充分接触,提高目的蛋白的回收率,收集流出液,待检测。

【注】样品的粘度增加使得即使上样体积很少,也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压,使得进样器更难使用。

5)洗杂10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗,直到紫外吸收达到一个稳定的基线,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液,待检测。

6)洗脱用洗脱Buffer 采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中,通常5倍柱体积洗脱液足够将目的蛋白洗脱下来。也可以用一个小的梯度,例如20倍柱体积或更多,来分离不同结合强度的蛋白质。

7)清洗及保存依次使用3倍柱体积的平衡Buffer5倍柱体积的去离子水平衡填料,最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡,然后保存在等体积的20%的乙醇中,置于4℃保存,防止填料被细菌污染。

2. SDS-PAGE检测

将纯化过程中得到的样品(包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等)利用SDS-PAGE进行检测,判定其纯化效果。

3. 填料清洗

rProtein L 4FF Chromatography Column可以重复使用而无需再生,随着一些变性物质的沉淀和蛋白的聚集,往往造成流速和结合载量下降,影响柱子的性能,这时需对柱子进行清洗:

1)去除沉淀或变性物质

2倍柱体积的6 M 盐酸胍溶液进行清洗然后立即5倍柱体积的PBS,pH 7.4 清洗。

2)去除由于疏水性吸附造成的非特异吸附物质

3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积的1% Triton™ X-100清洗然后立即5倍柱体积的PBS,pH 7.4 清洗。

 

注意事项

 

1. 请勿冷冻保存本产品。

2. 所有操作过程中,样本需要在4℃或冰上操作。

3. 本产品仅作科研用途

4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

Ver.CN20230412

Q:购买了该产品,还需要额外再购买相应填料吗?

A:不需要了,本品含有填料。

Q:为什么洗脱组分中没有目的蛋白?

A:可能是样品与Protein G 结合力低;换用 Protein A 或 Protein A/G 树脂纯化。

Q:为什么样品纯化过程中曲线不稳?

A:可能是样品或 buffer 中有气泡;建议样品和buffer 进行脱气。

Q:为什么柱子反压过高?

A:可能是填料被堵塞;裂解液中含有微笑的固体颗粒,建议上柱前使用 0.22 µm/0.45µm 滤膜过滤

蛋白L纯化预装柱5mL 蛋白纯化预装柱|Protein L 4FF Chromatography Column

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产品简介

 

天然蛋白L(Protein L)是从马格努斯消化链球菌分离出来的能和免疫球蛋白特异性结合的蛋白质,分子量为36 KD。本产品使用的是基因改造后的蛋白L ,既保留了与抗体k链结合的特性,同时也不会影响抗体的抗原结合位点。与 protein A 和 Protein G 相比,Protein L 更能广泛地结合各种来源及亚类的抗体,包括人、小鼠、大鼠、兔和鸡,但不结合牛、山羊或绵羊来源的免疫球蛋白。

rProtein L Agarose Resin 4FF是用于分离和纯化单克隆抗体的通用性亲和层析介质,产品以高度交联的琼脂糖凝胶为基质,重组Protein L为配基,具有很高的物理化学稳定性,可以在相对较高的流速下进行抗体的纯化,适用于工业客户。利用本产品经过一步亲和层析,可从腹水、血清和培养液等样品中得到高纯度的抗体,使用方便,应用广泛。

本品rProtein L 4FF Chromatography Column,5 mL是一种装填了rProtein L Agarose Resin 4FF的中压预装柱,规格5 mL,预装柱具有标准接口,可以适配商品化的各类中压色谱系统,如ÄKTA 等,方便客户操作。

 

产品信息

 

货号

36416ES08 / 36416ES25

规格

5 mL /5 mL

 

产品性质

 

基质(Matrix)

高度交联的4%琼脂糖微球

配体(Ligand)

重组蛋白L

孔径(Bead size)

45-165 µm

最大流速(Flowmax)

0.3 MPa, 3 bar

储存缓冲液(Buffer)

20%乙醇的1×PBS

载量(Capacity)

15 mg Mouse IgG/mL基质

pH范围(pH range)

3-10

 

储存条件

 

2~8℃保存,有效期2年。

 

需准备试剂

 

所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤除菌。

平衡/洗杂缓冲液:0.15 M NaCl,20 mM Na2HPO4pH 7.0

洗脱缓冲液:0.1 M甘氨酸,pH 3.0

中和液:1 M Tris-HCl,pH 8.5

 

使用说明

 

注】上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH值,可以用平衡/洗缓冲液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释,或者样品用平衡/洗缓冲液透析。样品在上样前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤,减少杂质以防阻塞柱子

  1. 样品纯化(以Akta为例)

1)准备:将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子,将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口,将预装柱下端口接到色谱系统中,并旋紧。

2)清洗:3-5倍柱体积去离子水冲洗层析柱中储存液。

3)平衡:5倍柱体积的平衡Buffer平衡层析柱,使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下,起到保护蛋白的作用。

4)上样将样品加到平衡好的层析柱中,推荐流速1-5 mL/min,保证目的蛋白与树脂充分接触,提高目的蛋白的回收率,收集流出液,待检测。

【注】样品的粘度增加使得即使上样体积很少,也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压,使得进样器更难使用。

5)洗杂10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗,直到紫外吸收达到一个稳定的基线,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液,待检测。

6)洗脱用洗脱Buffer 采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中,通常5倍柱体积洗脱液足够将目的蛋白洗脱下来。也可以用一个小的梯度,例如20倍柱体积或更多,来分离不同结合强度的蛋白质。

7)清洗及保存依次使用3倍柱体积的平衡Buffer5倍柱体积的去离子水平衡填料,最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡,然后保存在等体积的20%的乙醇中,置于4℃保存,防止填料被细菌污染。

2. SDS-PAGE检测

将纯化过程中得到的样品(包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等)利用SDS-PAGE进行检测,判定其纯化效果。

3. 填料清洗

rProtein L 4FF Chromatography Column可以重复使用而无需再生,随着一些变性物质的沉淀和蛋白的聚集,往往造成流速和结合载量下降,影响柱子的性能,这时需对柱子进行清洗:

1)去除沉淀或变性物质

2倍柱体积的6 M 盐酸胍溶液进行清洗然后立即5倍柱体积的PBS,pH 7.4 清洗。

2)去除由于疏水性吸附造成的非特异吸附物质

3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积的1% Triton™ X-100清洗然后立即5倍柱体积的PBS,pH 7.4 清洗。

 

注意事项

 

1. 请勿冷冻保存本产品。

2. 所有操作过程中,样本需要在4℃或冰上操作。

3. 本产品仅作科研用途

4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

Ver.CN20230412

Q:购买了该产品,还需要额外再购买相应填料吗?

A:不需要了,本品含有填料。

Q:为什么洗脱组分中没有目的蛋白?

A:可能是样品与Protein G 结合力低;换用 Protein A 或 Protein A/G 树脂纯化。

Q:为什么样品纯化过程中曲线不稳?

A:可能是样品或 buffer 中有气泡;建议样品和buffer 进行脱气。

Q:为什么柱子反压过高?

A:可能是填料被堵塞;裂解液中含有微笑的固体颗粒,建议上柱前使用 0.22 µm/0.45µm 滤膜过滤

蛋白L纯化预装柱5mL 蛋白纯化预装柱|Protein L 4FF Chromatography Column

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蛋白G琼脂糖纯化树脂 蛋白G纯化树脂|​Protein G Agarose Resin

蛋白G琼脂糖纯化树脂 蛋白G纯化树脂|​Protein G Agarose Resin

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产品描述

天然蛋白G(Protein G)是一种分离自G型或C型链球菌属的细胞表面蛋白,与发现于金黄色葡萄球菌的细胞壁表面的蛋白A类似,主要通过与免疫球蛋白(Ig)的Fc区相互作用,结合大多数哺乳动物的IgG,可用于多种抗体(单抗和多抗)的分离纯化。在与不用的免疫球蛋白亚类的结合特性上,ProteinA 和Protein G结合性能不太一样,相比ProteinA,   ProteinG 对牛、羊、马等多克隆抗体有更强的结合力,它还可以结合不能与ProteinA很好结合的大鼠lgG、人lgG3和小鼠lgG1(详见附录1)。

本品使用的是基因改造后的蛋白G,不仅维持其本身的Ig亲和特性,同时也去除了天然蛋白本身的非主要结合域以降低非特异性结合,rProtein G Agarose Resin以琼脂糖凝胶为基质,重组Protein G为配基,具有很高的物理化学稳定性。利用本品经过一步亲和层析,即可从腹水、血清和培养液等样品中得到高纯度的抗体,使用方便,应用广泛。

 

产品性质

基质(Matrix)

高度交联的4%琼脂糖微球

配体(Ligand)

重组蛋白G

孔径(Bead size)

45-165µm

最大流速(Flowmax

0.3 MPa, 3 bar

储存缓冲液(Buffer)

20%乙醇的1×PBS

载量(Capacity)

30mg human IgG/ml 基质

pH范围(pH range)

3-10

 

保存方法

2~8℃保存,有效2年

 

需准备试剂

【注】建议以下缓冲液在使用前用0.22μm或0.45μm滤膜过滤。

结合/洗杂缓冲液:0.15M NaCl, 20mM Na2HPO4, pH7.0

洗脱缓冲液:0.1M甘氨酸,pH 3.0

中和液:1M Tris-HCl,pH 8.5

 

使用方法

【注】上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH值,可以用结合/洗涤缓冲液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释,或者样品用结合/洗涤缓冲液透析。

1 rProtein G Agarose Resin的装填

rProtein G Agarose Resin装入合适的层析柱中,注意避免产生气泡。

2 样品纯化

1)平衡:5倍柱体积的结合Buffer平衡层析柱,使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下,起到保护蛋白的作用。

2)上样:将样品加到平衡好的rProtein G Agarose Resin中,保证目的蛋白与树脂充分接触,提高目的蛋白的回收率,收集流出液,待检测。

3)洗杂: 10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液。

4)洗脱: 使用 5-10 倍柱体积的洗脱Buffer,收集洗脱液,即目的蛋白组分。

5)清洗及保存:依次使用3倍柱体积的结合Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料,最后再用5倍柱体积的 20%的乙醇平衡,然后保存在等体积的20%的乙醇中,置于4度保存,防止填料被细菌污染。

3 SDS-PAGE检测

将纯化过程中得到的样品(包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等)利用SDS-PAGE进行检测,判定其纯化效果。

4 树脂清洗

随着一些变性物质的沉淀和蛋白的聚集,往往造成流速和结合载量下降,影响柱子的性能,这时需对柱子进行清洗:

1)去除沉淀或变性物质

 2倍柱体积的6M 盐酸胍溶液进行清洗;

 5倍柱体积的PBS,pH 7.4 清洗。

2)去除由于疏水性吸附造成的非特异吸附物质

 3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积的1% Triton™X-100清洗;

 5倍柱体积的PBS, pH 7.4 清洗。

 

注意事项

  1. 请勿冷冻保存本产品。
  2. Protein G琼脂糖珠使用前一定要充分颠倒若干次,使琼脂糖珠混合均匀。
  3. 所有操作过程中,样本需要在4℃或冰上操作。
  4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
  5. 本产品仅作科研用途!

 

附录1. 蛋白A,G对不同物种Ig的结合能力总表

免疫球蛋白亚型

Protein A

Protein G  

免疫球蛋白亚型

Protein A

Protein G  

Human IgG

++++

++++

Mouse IgG

++++

++++

Human IgG1

++++

++++

Mouse IgG1

+

++++

Human IgG2

++++

++++

Mouse IgG2a

++++

++++

Human IgG3

+

++++

Mouse IgG2b

+++

+++

Human IgG4

++++

++++

Mouse IgG3

++

+++

Human IgM

Use anti-Human IgM

Mouse IgM

Use anti-Mouse IgM

Human IgE

NR

NR

Chicken IgG (IgY)

NR

NR

Human IgA

+

NR

Cow IgG

++

++++

Human IgA1

+

NR

Goat IgG

+

++++

Human IgA2

+

NR

Goat IgG1

+

++++

Human IgD

Use anti-Human IgD

Goat IgG2

++++

++++

Rat IgG

+

++

Goat IgM

NR

NR

Rat IgG1

NR

+

Guinea Pig IgG

++++

++

Rat IgG2a

NR

++++

Guinea Pig IgG1

++++

++

Rat IgG2b

NR

+

Guinea Pig IgG2

++++

++

Rat IgG3

+

++

Hamster IgG

+

++

Sheep IgG

+

++

Horse IgG

+

++++

Sheep IgG1

+

++

Rabbit IgG

++++

+++

Sheep IgG2

+

++

Rabbit IgM

NR

NR

Sheep IgM

NR

NR

Rabbit All isotypes

+++

++

Pig IgG

+++

+++

Monkey IgG

++++

++++

Cat IgG

++++

+

Donkey IgG

++

++++

Dog IgG

++++

+

 

 

 

(+)= weak binding; (++)= moderate binding; (++++)= strong binding; NR= not recommended; (-)= not tested;

 

附录2 常见问题与解答

问题

可能原因

推荐解决方法

柱子反压过高

筛板被堵塞

清洗或更换筛板

填料被堵塞

清洗填料

裂解液中含有微笑的固体颗粒,建议上柱前使用0.22µm/0.45µm滤膜过滤。

样品纯化过程中曲线不稳

样品或 buffer 中有气泡

赶出气泡

样品和buffer进行脱气

洗脱组分中没有目的蛋白

样品中抗体浓度太低

使用其抗原做配体的介质

抗体被降解

适当的提高洗脱pH

样品与Protein G结合力低

换用Protein A或Protein A/G树脂纯化

回收率逐渐减低

上样量太多

减少上样量

柱子太脏,载量降低

清洗树脂

 

HB230309

Q:为什么柱子反压过高?

A:可能是填料被堵塞;裂解液中含有微笑的固体颗粒,建议上柱前使用 0.22 µm/0.45µm 滤膜过滤。

Q:为什么洗脱组分中没有目的蛋白?

A:可能是抗体被降解;建议适当的提高洗脱pH。

Q:该产品可以直接使用吗?

AProtein A 琼脂糖珠最好在使用前充分颠倒若干次,使琼脂糖珠混合均匀。

Q:该产品可以贮存在20℃吗?

A:不可以,不可冷冻该产品。应置于 4°贮存。

[1] Yang L, Gu W, Cheung KH, et al. InsP3R-SEC5 interaction on phagosomes modulates innate immunity to Candida albicans by promoting cytosolic Ca2+ elevation and TBK1 activity [published correction appears in BMC Biol. 2020 Nov 2;18(1):158]. BMC Biol. 2018;16(1):46. Published 2018 Apr 27. doi:10.1186/s12915-018-0507-6(IF:5.770)

产品描述

天然蛋白G(Protein G)是一种分离自G型或C型链球菌属的细胞表面蛋白,与发现于金黄色葡萄球菌的细胞壁表面的蛋白A类似,主要通过与免疫球蛋白(Ig)的Fc区相互作用,结合大多数哺乳动物的IgG,可用于多种抗体(单抗和多抗)的分离纯化。在与不用的免疫球蛋白亚类的结合特性上,ProteinA 和Protein G结合性能不太一样,相比ProteinA,   ProteinG 对牛、羊、马等多克隆抗体有更强的结合力,它还可以结合不能与ProteinA很好结合的大鼠lgG、人lgG3和小鼠lgG1(详见附录1)。

本品使用的是基因改造后的蛋白G,不仅维持其本身的Ig亲和特性,同时也去除了天然蛋白本身的非主要结合域以降低非特异性结合,rProtein G Agarose Resin以琼脂糖凝胶为基质,重组Protein G为配基,具有很高的物理化学稳定性。利用本品经过一步亲和层析,即可从腹水、血清和培养液等样品中得到高纯度的抗体,使用方便,应用广泛。

 

产品性质

基质(Matrix)

高度交联的4%琼脂糖微球

配体(Ligand)

重组蛋白G

孔径(Bead size)

45-165µm

最大流速(Flowmax

0.3 MPa, 3 bar

储存缓冲液(Buffer)

20%乙醇的1×PBS

载量(Capacity)

30mg human IgG/ml 基质

pH范围(pH range)

3-10

 

保存方法

2~8℃保存,有效2年

 

需准备试剂

【注】建议以下缓冲液在使用前用0.22μm或0.45μm滤膜过滤。

结合/洗杂缓冲液:0.15M NaCl, 20mM Na2HPO4, pH7.0

洗脱缓冲液:0.1M甘氨酸,pH 3.0

中和液:1M Tris-HCl,pH 8.5

 

使用方法

【注】上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH值,可以用结合/洗涤缓冲液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释,或者样品用结合/洗涤缓冲液透析。

1 rProtein G Agarose Resin的装填

rProtein G Agarose Resin装入合适的层析柱中,注意避免产生气泡。

2 样品纯化

1)平衡:5倍柱体积的结合Buffer平衡层析柱,使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下,起到保护蛋白的作用。

2)上样:将样品加到平衡好的rProtein G Agarose Resin中,保证目的蛋白与树脂充分接触,提高目的蛋白的回收率,收集流出液,待检测。

3)洗杂: 10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液。

4)洗脱: 使用 5-10 倍柱体积的洗脱Buffer,收集洗脱液,即目的蛋白组分。

5)清洗及保存:依次使用3倍柱体积的结合Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料,最后再用5倍柱体积的 20%的乙醇平衡,然后保存在等体积的20%的乙醇中,置于4度保存,防止填料被细菌污染。

3 SDS-PAGE检测

将纯化过程中得到的样品(包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等)利用SDS-PAGE进行检测,判定其纯化效果。

4 树脂清洗

随着一些变性物质的沉淀和蛋白的聚集,往往造成流速和结合载量下降,影响柱子的性能,这时需对柱子进行清洗:

1)去除沉淀或变性物质

 2倍柱体积的6M 盐酸胍溶液进行清洗;

 5倍柱体积的PBS,pH 7.4 清洗。

2)去除由于疏水性吸附造成的非特异吸附物质

 3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积的1% Triton™X-100清洗;

 5倍柱体积的PBS, pH 7.4 清洗。

 

注意事项

  1. 请勿冷冻保存本产品。
  2. Protein G琼脂糖珠使用前一定要充分颠倒若干次,使琼脂糖珠混合均匀。
  3. 所有操作过程中,样本需要在4℃或冰上操作。
  4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
  5. 本产品仅作科研用途!

 

附录1. 蛋白A,G对不同物种Ig的结合能力总表

免疫球蛋白亚型

Protein A

Protein G  

免疫球蛋白亚型

Protein A

Protein G  

Human IgG

++++

++++

Mouse IgG

++++

++++

Human IgG1

++++

++++

Mouse IgG1

+

++++

Human IgG2

++++

++++

Mouse IgG2a

++++

++++

Human IgG3

+

++++

Mouse IgG2b

+++

+++

Human IgG4

++++

++++

Mouse IgG3

++

+++

Human IgM

Use anti-Human IgM

Mouse IgM

Use anti-Mouse IgM

Human IgE

NR

NR

Chicken IgG (IgY)

NR

NR

Human IgA

+

NR

Cow IgG

++

++++

Human IgA1

+

NR

Goat IgG

+

++++

Human IgA2

+

NR

Goat IgG1

+

++++

Human IgD

Use anti-Human IgD

Goat IgG2

++++

++++

Rat IgG

+

++

Goat IgM

NR

NR

Rat IgG1

NR

+

Guinea Pig IgG

++++

++

Rat IgG2a

NR

++++

Guinea Pig IgG1

++++

++

Rat IgG2b

NR

+

Guinea Pig IgG2

++++

++

Rat IgG3

+

++

Hamster IgG

+

++

Sheep IgG

+

++

Horse IgG

+

++++

Sheep IgG1

+

++

Rabbit IgG

++++

+++

Sheep IgG2

+

++

Rabbit IgM

NR

NR

Sheep IgM

NR

NR

Rabbit All isotypes

+++

++

Pig IgG

+++

+++

Monkey IgG

++++

++++

Cat IgG

++++

+

Donkey IgG

++

++++

Dog IgG

++++

+

 

 

 

(+)= weak binding; (++)= moderate binding; (++++)= strong binding; NR= not recommended; (-)= not tested;

 

附录2 常见问题与解答

问题

可能原因

推荐解决方法

柱子反压过高

筛板被堵塞

清洗或更换筛板

填料被堵塞

清洗填料

裂解液中含有微笑的固体颗粒,建议上柱前使用0.22µm/0.45µm滤膜过滤。

样品纯化过程中曲线不稳

样品或 buffer 中有气泡

赶出气泡

样品和buffer进行脱气

洗脱组分中没有目的蛋白

样品中抗体浓度太低

使用其抗原做配体的介质

抗体被降解

适当的提高洗脱pH

样品与Protein G结合力低

换用Protein A或Protein A/G树脂纯化

回收率逐渐减低

上样量太多

减少上样量

柱子太脏,载量降低

清洗树脂

 

HB230309

Q:为什么柱子反压过高?

A:可能是填料被堵塞;裂解液中含有微笑的固体颗粒,建议上柱前使用 0.22 µm/0.45µm 滤膜过滤。

Q:为什么洗脱组分中没有目的蛋白?

A:可能是抗体被降解;建议适当的提高洗脱pH。

Q:该产品可以直接使用吗?

AProtein A 琼脂糖珠最好在使用前充分颠倒若干次,使琼脂糖珠混合均匀。

Q:该产品可以贮存在20℃吗?

A:不可以,不可冷冻该产品。应置于 4°贮存。

[1] Yang L, Gu W, Cheung KH, et al. InsP3R-SEC5 interaction on phagosomes modulates innate immunity to Candida albicans by promoting cytosolic Ca2+ elevation and TBK1 activity [published correction appears in BMC Biol. 2020 Nov 2;18(1):158]. BMC Biol. 2018;16(1):46. Published 2018 Apr 27. doi:10.1186/s12915-018-0507-6(IF:5.770)

蛋白A纯化预装柱1ml 蛋白纯化预装柱|Protein A 4FF Chromatography Column

蛋白A纯化预装柱1ml 蛋白纯化预装柱|Protein A 4FF Chromatography Column

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品描述

天然蛋白A(Protein A)是一种发现于金黄色葡萄球菌的细胞壁表面蛋白,与分离自G型或C型链球菌属的蛋白G类似,主要通过与免疫球蛋白(Ig)的Fc区相互作用,结合大多数哺乳动物的IgG,可用于多种抗体(单抗和多抗)的分离纯化。在与不用的免疫球蛋白亚类的结合特性上,ProteinA 和Protein G结合性能不太一样(详见附录1)。

本品使用的是基因改造后的蛋白A,不仅维持其本身的Ig亲和特性,同时也去除了天然蛋白本身的非主要结合域以降低非特异性结合,rProtein A Agarose Resin 4FF以高度交联的琼脂糖凝胶为基质,重组Protein A为配基,具有很高的物理化学稳定性,可以在相对较高的流速下进行抗体的纯化,适用于工业客户。利用本品经过一步亲和层析,即可从腹水、血清和培养液等样品中得到高纯度的抗体,使用方便,应用广泛。

本品rProtein A 4FF Chromatography Column,1 mL是一种装填了rProtein A Agarose Resin 4FF的中压预装柱,规格1 mL,预装柱具有标准接口,可以适配商品化的各类中压色谱系统,如ÄKTA 等,方便客户操作。

 

产品性质

基质(Matrix)

高度交联的4%琼脂糖微球

配体(Ligand)

重组蛋白A

孔径(Bead size)

45-165 µm

最大流速(Flowmax

0.3MPa,3bar

储存缓冲液(Buffer)

20%乙醇的1×PBS

载量(Capacity)

40 mg Rabbit IgG/ mL 基质

pH范围(pH range)

3-12

 

运输与保存方法

冰袋运输。2~8℃保存,有效2年

 

需准备试剂

【注】建议以下缓冲液在使用前用0.22 μm或0.45 μm滤膜过滤。

结合/洗杂缓冲液:0.15 M NaCl, 20 mM Na2HPO4, pH7.0

洗脱缓冲液:0.1 M甘氨酸,pH 3.0

中和液:1 M Tris-HCl,pH 8.5

 

使用方法

【注】上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH值,可以用结合/洗涤缓冲液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释,或者样品用结合/洗涤缓冲液透析。

1样品纯化(以Akta系统为例)

1)准备:将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子,将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口,将预装柱接到色谱系统中,并旋紧。

2)清洗3-5倍柱体积去离子水冲洗层析柱中储存液。

3)平衡:5倍柱体积的结合Buffer平衡层析柱,使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下,起到保护蛋白的作用。

4)上样:将样品加到平衡好的层析柱中,推荐流速1 mL /min,保证目的蛋白与树脂充分接触,提高目的蛋白的回收率,收集流出液,待检测。

【注】样品的粘度增加使得即使上样体积很少,也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压,使得进样器更难使用。

5)洗杂:10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗,直到紫外吸收达到一个稳定的基线,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液。

6)洗脱:用洗脱Buffer 采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中,通常5倍柱体积洗脱液足够将目的蛋白洗脱下来。也可以用一个小的梯度,例如20倍柱体积或更多,来分离不同结合强度的蛋白质。

7)清洗及保存:依次使用3倍柱体积的结合Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料,最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡,然后保存在等体积的20%的乙醇中,置于4度保存,防止填料被细菌污染。

2 SDS-PAGE检测

将纯化过程中得到的样品(包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等)利用SDS-PAGE进行检测,判定其纯化效果。

3 树脂清洗

随着一些变性物质的沉淀和蛋白的聚集,往往造成流速和结合载量下降,影响柱子的性能,这时需对柱子进行清洗:

1)去除沉淀或变性物质

 2倍柱体积的6 M 盐酸胍溶液进行清洗;

 5倍柱体积的PBS,pH 7.4 清洗。

2)去除由于疏水性吸附造成的非特异吸附物质

 3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积的1% Triton™ X-100清洗;

 5倍柱体积的PBS, pH 7.4 清洗。

 

注意事项

1)请勿冷冻保存本产品。

2)所有操作过程中,样本需要在4℃或冰上操作。

3)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

4本产品仅作科研用途!

 

附录1. 蛋白A,G对不同物种Ig的结合能力总表

免疫球蛋白亚型

Protein A

Protein G  

免疫球蛋白亚型

Protein A

Protein G  

Human IgG

++++

++++

Mouse IgG

++++

++++

Human IgG1

++++

++++

Mouse IgG1

+

++++

Human IgG2

++++

++++

Mouse IgG2a

++++

++++

Human IgG3

+

++++

Mouse IgG2b

+++

+++

Human IgG4

++++

++++

Mouse IgG3

++

+++

Human IgM

Use anti-Human IgM

Mouse IgM

Use anti-Mouse IgM

Human IgE

NR

NR

Chicken IgG (IgY)

NR

NR

Human IgA

+

NR

Cow IgG

++

++++

Human IgA1

+

NR

Goat IgG

+

++++

Human IgA2

+

NR

Goat IgG1

+

++++

Human IgD

Use anti-Human IgD

Goat IgG2

++++

++++

Rat IgG

+

++

Goat IgM

NR

NR

Rat IgG1

NR

+

Guinea Pig IgG

++++

++

Rat IgG2a

NR

++++

Guinea Pig IgG1

++++

++

Rat IgG2b

NR

+

Guinea Pig IgG2

++++

++

Rat IgG3

+

++

Hamster IgG

+

++

Sheep IgG

+

++

Horse IgG

+

++++

Sheep IgG1

+

++

Rabbit IgG

++++

+++

Sheep IgG2

+

++

Rabbit IgM

NR

NR

Sheep IgM

NR

NR

Rabbit All isotypes

+++

++

Pig IgG

+++

+++

Monkey IgG

++++

++++

Cat IgG

++++

+

Donkey IgG

++

++++

Dog IgG

++++

+

 

 

 

(+)= weak binding; (++)= moderate binding; (++++)= strong binding; NR= not recommended; (-)= not tested;

 

附录2 常见问题与解答

问题

可能原因

推荐解决方法

柱子反压过高

填料被堵塞

清洗填料

裂解液中含有微笑的固体颗粒,建议上柱前使用0.22 µm/0.45 µm滤膜过滤。

样品纯化过程中曲线不稳

样品或 buffer 中有气泡

赶出气泡

样品和buffer进行脱气

洗脱组分中没有目的蛋白

样品中抗体浓度太低

使用其抗原做配体的介质

抗体被降解

适当的提高洗脱pH

样品与Protein A结合力低

换用Protein G或Protein A/G树脂纯化

回收率逐渐减低

上样量太多

减少上样量

柱子太脏,载量降低

清洗树脂

 

HB230227

Q:购买了该产品,还需要额外再购买相应填料吗?

A:不需要了,本品含有填料。

Q:为什么柱子反压过高?

A:可能是填料被堵塞;裂解液中含有微笑的固体颗粒,建议上柱前使用 0.22 µm/0.45µm 滤膜过滤。

Q:为什么洗脱组分中没有目的蛋白?

A:可能是抗体被降解;建议适当的提高洗脱pH。

Q:为什么样品纯化过程中曲线不稳?

A:可能是样品或 buffer 中有气泡;建议样品和buffer 进行脱气。

蛋白A纯化预装柱1ml 蛋白纯化预装柱|Protein A 4FF Chromatography Column

暂无内容

产品描述

天然蛋白A(Protein A)是一种发现于金黄色葡萄球菌的细胞壁表面蛋白,与分离自G型或C型链球菌属的蛋白G类似,主要通过与免疫球蛋白(Ig)的Fc区相互作用,结合大多数哺乳动物的IgG,可用于多种抗体(单抗和多抗)的分离纯化。在与不用的免疫球蛋白亚类的结合特性上,ProteinA 和Protein G结合性能不太一样(详见附录1)。

本品使用的是基因改造后的蛋白A,不仅维持其本身的Ig亲和特性,同时也去除了天然蛋白本身的非主要结合域以降低非特异性结合,rProtein A Agarose Resin 4FF以高度交联的琼脂糖凝胶为基质,重组Protein A为配基,具有很高的物理化学稳定性,可以在相对较高的流速下进行抗体的纯化,适用于工业客户。利用本品经过一步亲和层析,即可从腹水、血清和培养液等样品中得到高纯度的抗体,使用方便,应用广泛。

本品rProtein A 4FF Chromatography Column,1 mL是一种装填了rProtein A Agarose Resin 4FF的中压预装柱,规格1 mL,预装柱具有标准接口,可以适配商品化的各类中压色谱系统,如ÄKTA 等,方便客户操作。

 

产品性质

基质(Matrix)

高度交联的4%琼脂糖微球

配体(Ligand)

重组蛋白A

孔径(Bead size)

45-165 µm

最大流速(Flowmax

0.3MPa,3bar

储存缓冲液(Buffer)

20%乙醇的1×PBS

载量(Capacity)

40 mg Rabbit IgG/ mL 基质

pH范围(pH range)

3-12

 

运输与保存方法

冰袋运输。2~8℃保存,有效2年

 

需准备试剂

【注】建议以下缓冲液在使用前用0.22 μm或0.45 μm滤膜过滤。

结合/洗杂缓冲液:0.15 M NaCl, 20 mM Na2HPO4, pH7.0

洗脱缓冲液:0.1 M甘氨酸,pH 3.0

中和液:1 M Tris-HCl,pH 8.5

 

使用方法

【注】上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH值,可以用结合/洗涤缓冲液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释,或者样品用结合/洗涤缓冲液透析。

1样品纯化(以Akta系统为例)

1)准备:将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子,将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口,将预装柱接到色谱系统中,并旋紧。

2)清洗3-5倍柱体积去离子水冲洗层析柱中储存液。

3)平衡:5倍柱体积的结合Buffer平衡层析柱,使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下,起到保护蛋白的作用。

4)上样:将样品加到平衡好的层析柱中,推荐流速1 mL /min,保证目的蛋白与树脂充分接触,提高目的蛋白的回收率,收集流出液,待检测。

【注】样品的粘度增加使得即使上样体积很少,也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压,使得进样器更难使用。

5)洗杂:10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗,直到紫外吸收达到一个稳定的基线,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液。

6)洗脱:用洗脱Buffer 采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中,通常5倍柱体积洗脱液足够将目的蛋白洗脱下来。也可以用一个小的梯度,例如20倍柱体积或更多,来分离不同结合强度的蛋白质。

7)清洗及保存:依次使用3倍柱体积的结合Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料,最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡,然后保存在等体积的20%的乙醇中,置于4度保存,防止填料被细菌污染。

2 SDS-PAGE检测

将纯化过程中得到的样品(包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等)利用SDS-PAGE进行检测,判定其纯化效果。

3 树脂清洗

随着一些变性物质的沉淀和蛋白的聚集,往往造成流速和结合载量下降,影响柱子的性能,这时需对柱子进行清洗:

1)去除沉淀或变性物质

 2倍柱体积的6 M 盐酸胍溶液进行清洗;

 5倍柱体积的PBS,pH 7.4 清洗。

2)去除由于疏水性吸附造成的非特异吸附物质

 3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积的1% Triton™ X-100清洗;

 5倍柱体积的PBS, pH 7.4 清洗。

 

注意事项

1)请勿冷冻保存本产品。

2)所有操作过程中,样本需要在4℃或冰上操作。

3)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

4本产品仅作科研用途!

 

附录1. 蛋白A,G对不同物种Ig的结合能力总表

免疫球蛋白亚型

Protein A

Protein G  

免疫球蛋白亚型

Protein A

Protein G  

Human IgG

++++

++++

Mouse IgG

++++

++++

Human IgG1

++++

++++

Mouse IgG1

+

++++

Human IgG2

++++

++++

Mouse IgG2a

++++

++++

Human IgG3

+

++++

Mouse IgG2b

+++

+++

Human IgG4

++++

++++

Mouse IgG3

++

+++

Human IgM

Use anti-Human IgM

Mouse IgM

Use anti-Mouse IgM

Human IgE

NR

NR

Chicken IgG (IgY)

NR

NR

Human IgA

+

NR

Cow IgG

++