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多功能DNA/siRNA 转染试剂说明书

发表于由

 

polyplus-transfection 多功能 DNA/siRNA 转染试剂说明书

jetPRIME ®

  •  高DNA转染效率
  •  核酸含量低
  •  细胞活力
  •  一种用于 DNA 和/或 siRNA 转染的试剂
  •  性价比高
  •  

规格

试剂

jetPRIME ®
分子交付

DNA, siRNA, DNA & siRNA
应用

质粒转染
基因组编辑
病毒生产
siRNA 转染
不同核酸的共同递送
细胞类型

在血清存在下生长的贴壁细胞系
转染次数

1.5 ml jetPRIME ®转染试剂足以在 24 孔板中进行多达 1500 次转染或在 6 孔板中进行 375 次转染
贮存

5°C ± 3°C，适当储存可稳定至少一年
提供

jetPRIME 缓冲区

概括

 

jetPRIME® 是一种功能强大且用途广泛的 DNA 和 siRNA 转染试剂，适用于日常实验，可产生高效可靠的科学结果。jetPRIME® 可确保在各种贴壁细胞中实现高 DNA转染效率和出色的基因沉默。jetPRIME ® 也是DNA/siRNA 共转染或多种质粒共递送的理想选择。此外，我们的 jetPRIME® 试剂对细胞非常温和，因为它在转染过程中需要少量的试剂和核酸。

订购信息

参考编号 试剂量 缓冲量
114-01 0.1毫升 5毫升
114-07 0.75 毫升 60毫升
114-15 1.5 毫升 2 x 60 毫升
114-75 5 x 1.5 毫升 10 x 60 毫升
712-60 X 60毫升

 

1.5 ml 足以在 6 孔板中进行约 375 次转染

 

描述

转染效率

jetPRIME ®是一种适用于日常实验的强大转染试剂。它导致各种来源的转染贴壁细胞系以及原代细胞的比例异常高。

 与竞争对手的试剂相比，使用 jetPRIME ®试剂获得了 70% 至 90% 的转染效率（图 1 和图 2）。

图 1：jetPRIME 与其主要竞争对手的转染效率比较。在 24 孔板中转染后 24 小时，通过 FACS 分析在各种细胞系中评估转染效率。根据制造商对 Lipofectamine ® 2000 和 jetPRIME ®的推荐使用条件。

图 2：jetPRIME ®与 Lipofectamine ® 3000 的转染效率比较。在 96 孔板或 24 孔板中转染后 24 小时，通过 FACS 分析在各种细胞系中评估转染效率。根据制造商对 lipofectamine ® 3000 和 jetPRIME ®的推荐使用条件。

成本效益：更少的 DNA 和更少的试剂

jetPRIME ® 是一种强大的体外转染试剂，需要少量试剂和质粒 DNA，因此使用起来非常经济高效 （表 1）。

表 1：推荐使用条件。根据制造商的建议，用于转染的 6 孔板中每孔 DNA 和试剂（jetPRIME ®和竞争对手）的数量。

除了降低成本之外，使用更少的 DNA 还可以最大限度地减少转染引发的不利细胞毒性作用。因此，jetPRIME ® 是实现高转染效率和出色细胞活力的试剂。

更好的细胞活力

jetPRIME ® 在转染过程中对细胞极其温和，从而提高细胞活力并改善转染结果。用 jetPRIME ®转染的细胞 是健康的，而竞争者则观察到主要的细胞毒性（图 3）。

图 3：转染后 24 小时的细胞活力。根据制造商对每种试剂的建议，在转染后 24 小时对 HeLa 细胞进行相差显微镜检查。

易于使用的协议

jetPRIME ® 是一种易于使用的转染试剂（图 4）：

  • 快速且轻松地扩大和缩小规模
  • 与血清和抗生素兼容

图 4：jetPRIME ®协议。方便的 DNA、siRNA 和 DNA 和 siRNA 共转染方案。

在我们的博客部分查看我们的 专家提示，以加快 DNA 转染。

 

 

应用

质粒转染

jetPRIME ®导致各种来源的转染贴壁细胞系以及原代细胞的比例非常高（表 1）。

表 1：使用 jetPRIME ®的各种细胞类型的转染效率。转染后 24 小时通过 FACS 分析确定 GFP 阳性细胞的百分比。

质粒是在细菌中常见的环状 DNA 小分子。质粒与染色体 DNA 分开存在和复制，并且在细菌中它们通常携带有利于细菌生存的基因。质粒可被有意引入所需细胞并用于在特定细胞系中过表达感兴趣的基因。此过程称为 DNA 转染，是研究基因功能或目标蛋白质的常用方法。

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基因组编辑

CRISPR/Cas9 系统在哺乳动物细胞中的使用最近成为一种在特定位点修改细胞基因组的非常方便的方法。它涉及将 (a) 一个或多个编码 Cas9、特定 gRNA 和最终插入序列的质粒瞬时转染到哺乳动物细胞中，或 (b) 一个或两个质粒和一个 RNA 分子（gRNA）的混合物.

可用应用说明： 使用 jetPRIME ® 进行CRISPR/Cas9 介导的基因破坏。

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siRNA转染

jetPRIME ® 导致多种细胞系中内源基因表达的抑制率超过 90%。例如，jetPRIME ®介导的HeLa 细胞转染与10 nM siRNA 双链体靶向HeLa 细胞中的内源性核纤层蛋白A/C 显着降低了核纤层蛋白A/C 基因的表达水平（图1）。

图 1：使用 jetPRIME ® 的内源性 lamin A/C 静音。用 10 nM 的 21-mer 核纤层蛋白 A/C siRNA 转染 HeLa 细胞。48 小时后，使用抗 lamin A/C 抗体通过免疫荧光显微镜评估 lamin A/C 沉默。

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不同核酸的共转染

jetPRIME ® 非常适用于 DNA 和 siRNA/miRNA共转染实验或多种 DNA 质粒的共递送。

我们使用 jetPRIME ®进行了 DNA 和 siRNA 递送，并在各种细胞系中观察到高效的基因沉默且毒性极低。使用 10 nM siRNA 在贴壁细胞中实现了超过 90% 的沉默（图 2）。

图 2：使用 jetPRIME ® 共转染 DNA 和 siRNA 后，几种细胞系中的外源荧光素酶沉默。在 6 孔板中，每孔使用 400 ng p4CMV-Luc 和 10 nM 荧光素酶 siRNA 进行实验。

 

 

质量

每批 jetPRIME ®试剂都通过用表达 GFP 的质粒对 HeLa 细胞进行 DNA 转染进行内部测试，并且每瓶试剂都提供分析证书。

siRNA/miRNA体外转染试剂|Hieff Trans<sup>®</sup> in vitro siRNA/miRNA Transfection Reagent

发表于由

siRNA/miRNA体外转染试剂|Hieff Trans<sup>®</sup> in vitro siRNA/miRNA Transfection Reagent

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品描述
 Hieff Trans® siRNA/miRNA体外转染试剂是一种非脂质体PEI阳离子、两性分子转染试剂，为siRNA转染到哺乳动物细胞中而开发。适用于siRNA和miRNA的转染。这种转染试剂包裹siRNA或miRNA形成阳离子复合物，该复合物与细胞表面带负电的蛋白聚糖相互作用吸附在细胞表面，通过内吞进入细胞，形成内含体。该转染试剂具有质子海绵的作用，能够吸收溶酶体中的H+，质子的不断流入，导致复合体肿胀破裂，从而使外源siRNA或miRNA释放到细胞质中。

该产品可在广泛的细胞系中，实现1 nM的siRNA超过90%的表达效率，避免了脱靶效应。适用于多种细胞转染，包括Hela、MCF-7、HepG2、CHO等贴壁细胞；以及难以转染的悬浮细胞系，如K562或THP-1细胞，可达到80%的沉默效率；同时还包括一些原代细胞，原代人成纤维细胞和原代人肝细胞等，可达到80%的沉默效率。

运输与保存方法

冰袋（wet ice）运输。产品2-8 ℃保存，一年有效。不可冷冻！

注意事项

1）整个实验过程使用无RNA酶和无热原性的材料，如离心管、枪头、缓冲液。

2）转染前，确保siRNA是经过PAGE纯化和脱盐处理过的，高纯度的siRNA或者miRNA有助于获得较高的转染效率。

3）PEI阳离子转染试剂应该在2-8 ℃保存，要注意避免多次反复长时间开盖，否则可能会导致PEI挥发，降低转染效率。

4）转染前一天，确保接种贴壁细胞密度在30%-50%左右，对于一些小细胞和生长缓慢的细胞，接种密度可适当扩大2倍。

5）转染前，确保siRNA/miRNA基因沉默表达不会影响细胞活力。

6）该产品只适合体外转染，不能用于体内转染。

7）本产品仅作科研用途！

操作流程
 

一．贴壁细胞转染（以24孔板和转染1 nM siRNA为例，其他培养板加样体积请参考表1）
接种贴壁细胞

1.为了提高转染效率，建议在转染前一天接种细胞，接种细胞密度建议30%-50%左右，建议初次使用时设置梯度进行优化最佳使用量。

2.按照以下体系配制siRNA-PEI或miRNAPEI子核酸转染试剂阳离复合物： 

1）对于每孔细胞，使用100 μL无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释8.4 ng siRNA (0.6 pmoles)，混匀。

2）立刻向100 μL的siRNA中加入2 μL的转染试剂，旋涡10秒，充分混匀。

3）在室温下孵育10 min，使得形成siRNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物。
【注】：孵育时间不要超过30min

4）在形成复合物过程中，移除细胞生长培养基，每孔中加入500 μL新鲜预热的完全培养基。

5）直接将100 µL siRNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物加入细胞中，摇动培养板，轻轻混匀。最终体积为600 µL ，siRNA终浓度为1 nM。

6）37 ℃，5% CO2培养箱培养，直至目的基因表达。建议一般mRNA表达水平通常在24–72 h，蛋白表达水平在48-96 h。

siRNA/miRNA体外转染试剂|Hieff Trans&lt;sup&gt;®&lt;/sup&gt; in vitro siRNA/miRNA Transfection Reagent 

图1 转染贴壁细胞操作流程

【注】：由于靶基因、细胞类型、siRNA效价、靶mRNA的半衰期和靶蛋白的周转率等因素，均会影响siRNA的转染效率。建议选取siRNA浓度在1 nM到10 nM之间。转染试剂的体积应根据siRNA浓度和培养皿的大小进行调整，请参见下表1。

表1 siRNA终浓度为1 nM时，转染试剂、培养基的用量参考值

培养皿

siRNA物质的量(pmoles)

每孔siRNA的含量（ng）

siRNA转染试剂体积（µL）

形成PEI-siRNA复合物的体积（µL）

完全培养基的体积（含血清+双抗）

加入复合物后，细胞培养基总体积

96孔板

0.17

2.4

0.7-0.8

50

125 µL

175 µL

24孔板

0.6

8.6

1-3

100

500 µL

600 µL

12孔板

1.2

17

2-6

200

1 mL

1.2 mL

6孔板

2.2

31

4-12

200

2 mL

2.2 mL

25cm2培养瓶 

4.4

62

10-20

400

4 mL

4.4 mL

75cm2培养瓶 

10.5

147

30-50

500

10 mL

10.5 mL

表2 siRNA终浓度为10 – 50 nM时，转染试剂、培养基的用量参考值

培养皿

siRNA转染试剂体积（µL）

形成复合物的体积（无血清培养基）（µL）

完全培养基的体积（含血清+双抗）

加入复合物后，细胞总体积

96孔板

0.5-1.5

50

125 µL

175 µL

24孔板

2-4

100

500 µL

600 µL

12孔板

4-8

200

1 mL

1.2 mL

6孔板

8-16

200

2 mL

2.2 mL

25cm2培养瓶 

15-25

400

4 mL

4.4 mL

二．悬浮细胞转染（以24孔板和转染5 nM siRNA为例，其他培养板加样体积请参考表4）
接种细胞

1.为了优化悬浮细胞转染条件，与贴壁细胞相比，需要降低悬浮细胞培养基的体积。根据培养皿大小和完整培养基的体积，推荐接种悬浮细胞的数量如下表3所示。

表3 转染当天，根据培养皿的大小，接种悬浮细胞数量参考值

 

培养皿

底面积(cm2)

每孔接种细胞悬浮液体积（μL）

转染当天接种细胞数

384孔板

0.1

25

5 ×103~1×104

96孔板

0.32

50

1×104~ ×104

24孔板

2

200

1×105 ~ 2×105

12孔板

4.5

500

2×105 ~ 4×105

6孔板

9.6

1000

5×105 ~ 2×106

25cm2培养瓶 

25-28

2000

2×106~ 5×106

2.按照以下体系配制siRNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物： 

1）对于每孔细胞，使用100 μL无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释21 ng siRNA (1.5 pmols)，混匀。

2）向100 μL的siRNA中加入4 μL的转染试剂，立刻旋涡10秒，充分混匀。

3）在室温孵育15 min，使得形成siRNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物。
【注】：孵育时间不要超过30 min

4）在每孔200 μL细胞悬浮液中，加入100 μL的siRNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物，轻轻混匀。最终体积为300 µL，siRNA终浓度为5 nM。

5）37 ℃，5% CO2培养箱培养4-6 h后，再加入700 µL完全培养基，轻轻摇动培养板使其混匀。

6）继续放入培养箱中孵育，直至目的基因表达。建议一般mRNA表达水平通常在24–72 h，蛋白表达水平在48-96 h。

【注】：为了优化内源性基因沉默，建议选取siRNA浓度在5 nM到20 nM之间。转染试剂的体积应根据siRNA浓度和培养皿的大小进行调整，请参见下表4。

表4 siRNA浓度为5 nM时，在悬浮细胞中的参考值

培养皿

siRNA的浓度(pmoles)

每孔siRNA的含量（ng）

转染试剂体积（µL）

形成复合物培养基体积（µL）

悬浮细胞的体积

转染4-6h后另加入培养基的体积

384孔板

0.25

3.75

1 ± 0.5  

25

25 µL

0 µL

96孔板

0.5

7.5

2 ± 1

50

50 µL

100 µL

24孔板

1.5

21

3 ± 2  

100

200 µL

700 µL

12孔板

3.5

49

6 ± 4

200

500 µL

1 mL

6孔板

6

84

10 ± 8

200

1 mL

2 mL

25cm2培养瓶 

12

168

15 ±10

400

2 mL

4 mL

表5 悬浮细胞中siRNA浓度、转染试剂的用量参考值

培养皿

siRNA的终浓度/孔（nM）

转染试剂的体积/孔（µL）

96孔板

1 ~ 20

1 ± 0.5

24孔板

2 ± 1

12孔板

3 ± 2

6孔板

10 ± 8

96孔板

20 ~ 50

1.5 ± 0.5  

24孔板

3 ± 1

12孔板

5 ± 2

6孔板

15 ± 8

三．miRNA转染操作流程
该转染试剂也适合转染miRNA，转染贴壁细胞和悬浮细胞的具体操作请参考siRNA的操作流程。

HB220930

 

Q：绿光标记的siRNA，转染5h后观察，只有一些杂点，没有细胞形态什么原因？

A：转染进去的 整个细胞是绿色的，可以清晰的看到细胞形态，没有转染进去的就是绿色的杂点儿。

Q：转染后可以换液吗？

A：可以换液，转然后8h换液，建议不换液，转染试剂毒性很小，不换液转染效率可以提高。

[1] Zhang Y, Hu R, Xi B, Nie D, Xu H, Liu A. Mechanisms of Senescence-Related NKG2D Ligands Release and Immune Escape Induced by Chemotherapy in Neuroblastoma Cells. Front Cell Dev Biol. 2022;10:829404. Published 2022 Mar 2. doi:10.3389/fcell.2022.829404(IF:6.684)
[2] Cui B, Wang Y, Jin J, et al. Resveratrol Treats UVB-Induced Photoaging by Anti-MMP Expression, through Anti-Inflammatory, Antioxidant, and Antiapoptotic Properties, and Treats Photoaging by Upregulating VEGF-B Expression. Oxid Med Cell Longev. 2022;2022:6037303. Published 2022 Jan 4. doi:10.1155/2022/6037303(IF:6.543)
[3] Liu Y, Zeng Y, Si HB, Tang L, Xie HQ, Shen B. Exosomes Derived From Human Urine-Derived Stem Cells Overexpressing miR-140-5p Alleviate Knee Osteoarthritis Through Downregulation of VEGFA in a Rat Model. Am J Sports Med. 2022;50(4):1088-1105. doi:10.1177/03635465221073991(IF:6.203)
[4] Zhang ZD, Wen B, Li DJ, et al. AKT serine/threonine kinase 2-mediated phosphorylation of fascin threonine 403 regulates esophageal cancer progression. Int J Biochem Cell Biol. 2022;145:106188. doi:10.1016/j.biocel.2022.106188(IF:5.085)
[5] Tan S, Zhou Y, Zhao H, et al. Comprehensive transcriptome analysis of hypothalamus reveals genes associated with disorders of sex development in pigs. J Steroid Biochem Mol Biol. 2021;210:105875. doi:10.1016/j.jsbmb.2021.105875(IF:4.294)
[6] Niu M, Yi M, Dong B, Luo S, Wu K. Upregulation of STAT1-CCL5 axis is a biomarker of colon cancer and promotes the proliferation of colon cancer cells. Ann Transl Med. 2020;8(15):951. doi:10.21037/atm-20-4428(IF:3.297)

产品描述
 Hieff Trans® siRNA/miRNA体外转染试剂是一种非脂质体PEI阳离子、两性分子转染试剂，为siRNA转染到哺乳动物细胞中而开发。适用于siRNA和miRNA的转染。这种转染试剂包裹siRNA或miRNA形成阳离子复合物，该复合物与细胞表面带负电的蛋白聚糖相互作用吸附在细胞表面，通过内吞进入细胞，形成内含体。该转染试剂具有质子海绵的作用，能够吸收溶酶体中的H+，质子的不断流入，导致复合体肿胀破裂，从而使外源siRNA或miRNA释放到细胞质中。

该产品可在广泛的细胞系中，实现1 nM的siRNA超过90%的表达效率，避免了脱靶效应。适用于多种细胞转染，包括Hela、MCF-7、HepG2、CHO等贴壁细胞；以及难以转染的悬浮细胞系，如K562或THP-1细胞，可达到80%的沉默效率；同时还包括一些原代细胞，原代人成纤维细胞和原代人肝细胞等，可达到80%的沉默效率。

运输与保存方法

冰袋（wet ice）运输。产品2-8 ℃保存，一年有效。不可冷冻！

注意事项

1）整个实验过程使用无RNA酶和无热原性的材料，如离心管、枪头、缓冲液。

2）转染前，确保siRNA是经过PAGE纯化和脱盐处理过的，高纯度的siRNA或者miRNA有助于获得较高的转染效率。

3）PEI阳离子转染试剂应该在2-8 ℃保存，要注意避免多次反复长时间开盖，否则可能会导致PEI挥发，降低转染效率。

4）转染前一天，确保接种贴壁细胞密度在30%-50%左右，对于一些小细胞和生长缓慢的细胞，接种密度可适当扩大2倍。

5）转染前，确保siRNA/miRNA基因沉默表达不会影响细胞活力。

6）该产品只适合体外转染，不能用于体内转染。

7）本产品仅作科研用途！

操作流程
 

一．贴壁细胞转染（以24孔板和转染1 nM siRNA为例，其他培养板加样体积请参考表1）
接种贴壁细胞

1.为了提高转染效率，建议在转染前一天接种细胞，接种细胞密度建议30%-50%左右，建议初次使用时设置梯度进行优化最佳使用量。

2.按照以下体系配制siRNA-PEI或miRNAPEI子核酸转染试剂阳离复合物： 

1）对于每孔细胞，使用100 μL无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释8.4 ng siRNA (0.6 pmoles)，混匀。

2）立刻向100 μL的siRNA中加入2 μL的转染试剂，旋涡10秒，充分混匀。

3）在室温下孵育10 min，使得形成siRNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物。
【注】：孵育时间不要超过30min

4）在形成复合物过程中，移除细胞生长培养基，每孔中加入500 μL新鲜预热的完全培养基。

5）直接将100 µL siRNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物加入细胞中，摇动培养板，轻轻混匀。最终体积为600 µL ，siRNA终浓度为1 nM。

6）37 ℃，5% CO2培养箱培养，直至目的基因表达。建议一般mRNA表达水平通常在24–72 h，蛋白表达水平在48-96 h。

siRNA/miRNA体外转染试剂|Hieff Trans&lt;sup&gt;®&lt;/sup&gt; in vitro siRNA/miRNA Transfection Reagent 

图1 转染贴壁细胞操作流程

【注】：由于靶基因、细胞类型、siRNA效价、靶mRNA的半衰期和靶蛋白的周转率等因素，均会影响siRNA的转染效率。建议选取siRNA浓度在1 nM到10 nM之间。转染试剂的体积应根据siRNA浓度和培养皿的大小进行调整，请参见下表1。

表1 siRNA终浓度为1 nM时，转染试剂、培养基的用量参考值

培养皿

siRNA物质的量(pmoles)

每孔siRNA的含量（ng）

siRNA转染试剂体积（µL）

形成PEI-siRNA复合物的体积（µL）

完全培养基的体积（含血清+双抗）

加入复合物后，细胞培养基总体积

96孔板

0.17

2.4

0.7-0.8

50

125 µL

175 µL

24孔板

0.6

8.6

1-3

100

500 µL

600 µL

12孔板

1.2

17

2-6

200

1 mL

1.2 mL

6孔板

2.2

31

4-12

200

2 mL

2.2 mL

25cm2培养瓶 

4.4

62

10-20

400

4 mL

4.4 mL

75cm2培养瓶 

10.5

147

30-50

500

10 mL

10.5 mL

表2 siRNA终浓度为10 – 50 nM时，转染试剂、培养基的用量参考值

培养皿

siRNA转染试剂体积（µL）

形成复合物的体积（无血清培养基）（µL）

完全培养基的体积（含血清+双抗）

加入复合物后，细胞总体积

96孔板

0.5-1.5

50

125 µL

175 µL

24孔板

2-4

100

500 µL

600 µL

12孔板

4-8

200

1 mL

1.2 mL

6孔板

8-16

200

2 mL

2.2 mL

25cm2培养瓶 

15-25

400

4 mL

4.4 mL

二．悬浮细胞转染（以24孔板和转染5 nM siRNA为例，其他培养板加样体积请参考表4）
接种细胞

1.为了优化悬浮细胞转染条件，与贴壁细胞相比，需要降低悬浮细胞培养基的体积。根据培养皿大小和完整培养基的体积，推荐接种悬浮细胞的数量如下表3所示。

表3 转染当天，根据培养皿的大小，接种悬浮细胞数量参考值

 

培养皿

底面积(cm2)

每孔接种细胞悬浮液体积（μL）

转染当天接种细胞数

384孔板

0.1

25

5 ×103~1×104

96孔板

0.32

50

1×104~ ×104

24孔板

2

200

1×105 ~ 2×105

12孔板

4.5

500

2×105 ~ 4×105

6孔板

9.6

1000

5×105 ~ 2×106

25cm2培养瓶 

25-28

2000

2×106~ 5×106

2.按照以下体系配制siRNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物： 

1）对于每孔细胞，使用100 μL无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释21 ng siRNA (1.5 pmols)，混匀。

2）向100 μL的siRNA中加入4 μL的转染试剂，立刻旋涡10秒，充分混匀。

3）在室温孵育15 min，使得形成siRNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物。
【注】：孵育时间不要超过30 min

4）在每孔200 μL细胞悬浮液中，加入100 μL的siRNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物，轻轻混匀。最终体积为300 µL，siRNA终浓度为5 nM。

5）37 ℃，5% CO2培养箱培养4-6 h后，再加入700 µL完全培养基，轻轻摇动培养板使其混匀。

6）继续放入培养箱中孵育，直至目的基因表达。建议一般mRNA表达水平通常在24–72 h，蛋白表达水平在48-96 h。

【注】：为了优化内源性基因沉默，建议选取siRNA浓度在5 nM到20 nM之间。转染试剂的体积应根据siRNA浓度和培养皿的大小进行调整，请参见下表4。

表4 siRNA浓度为5 nM时，在悬浮细胞中的参考值

培养皿

siRNA的浓度(pmoles)

每孔siRNA的含量（ng）

转染试剂体积（µL）

形成复合物培养基体积（µL）

悬浮细胞的体积

转染4-6h后另加入培养基的体积

384孔板

0.25

3.75

1 ± 0.5  

25

25 µL

0 µL

96孔板

0.5

7.5

2 ± 1

50

50 µL

100 µL

24孔板

1.5

21

3 ± 2  

100

200 µL

700 µL

12孔板

3.5

49

6 ± 4

200

500 µL

1 mL

6孔板

6

84

10 ± 8

200

1 mL

2 mL

25cm2培养瓶 

12

168

15 ±10

400

2 mL

4 mL

表5 悬浮细胞中siRNA浓度、转染试剂的用量参考值

培养皿

siRNA的终浓度/孔（nM）

转染试剂的体积/孔（µL）

96孔板

1 ~ 20

1 ± 0.5

24孔板

2 ± 1

12孔板

3 ± 2

6孔板

10 ± 8

96孔板

20 ~ 50

1.5 ± 0.5  

24孔板

3 ± 1

12孔板

5 ± 2

6孔板

15 ± 8

三．miRNA转染操作流程
该转染试剂也适合转染miRNA，转染贴壁细胞和悬浮细胞的具体操作请参考siRNA的操作流程。

HB220930

 

Q：绿光标记的siRNA，转染5h后观察，只有一些杂点，没有细胞形态什么原因？

A：转染进去的 整个细胞是绿色的，可以清晰的看到细胞形态，没有转染进去的就是绿色的杂点儿。

Q：转染后可以换液吗？

A：可以换液，转然后8h换液，建议不换液，转染试剂毒性很小，不换液转染效率可以提高。

[1] Zhang Y, Hu R, Xi B, Nie D, Xu H, Liu A. Mechanisms of Senescence-Related NKG2D Ligands Release and Immune Escape Induced by Chemotherapy in Neuroblastoma Cells. Front Cell Dev Biol. 2022;10:829404. Published 2022 Mar 2. doi:10.3389/fcell.2022.829404(IF:6.684)
[2] Cui B, Wang Y, Jin J, et al. Resveratrol Treats UVB-Induced Photoaging by Anti-MMP Expression, through Anti-Inflammatory, Antioxidant, and Antiapoptotic Properties, and Treats Photoaging by Upregulating VEGF-B Expression. Oxid Med Cell Longev. 2022;2022:6037303. Published 2022 Jan 4. doi:10.1155/2022/6037303(IF:6.543)
[3] Liu Y, Zeng Y, Si HB, Tang L, Xie HQ, Shen B. Exosomes Derived From Human Urine-Derived Stem Cells Overexpressing miR-140-5p Alleviate Knee Osteoarthritis Through Downregulation of VEGFA in a Rat Model. Am J Sports Med. 2022;50(4):1088-1105. doi:10.1177/03635465221073991(IF:6.203)
[4] Zhang ZD, Wen B, Li DJ, et al. AKT serine/threonine kinase 2-mediated phosphorylation of fascin threonine 403 regulates esophageal cancer progression. Int J Biochem Cell Biol. 2022;145:106188. doi:10.1016/j.biocel.2022.106188(IF:5.085)
[5] Tan S, Zhou Y, Zhao H, et al. Comprehensive transcriptome analysis of hypothalamus reveals genes associated with disorders of sex development in pigs. J Steroid Biochem Mol Biol. 2021;210:105875. doi:10.1016/j.jsbmb.2021.105875(IF:4.294)
[6] Niu M, Yi M, Dong B, Luo S, Wu K. Upregulation of STAT1-CCL5 axis is a biomarker of colon cancer and promotes the proliferation of colon cancer cells. Ann Transl Med. 2020;8(15):951. doi:10.21037/atm-20-4428(IF:3.297)

riboxx siRNA产品

发表于由

riboxx的专业知识是设计，工程和制造RNA（核糖核酸）。

此专业知识可分为两个业务领域：

  • riboxx生命科学，开发，生产和销售科学家在研发中使用的新型试剂

  • riboxx制药公司，根据cGMP准则生产用于治疗性疫苗（抗癌）和预防性疫苗（抗感染）的新型免疫调节剂

riboxx生命科学：研究与开发的试剂

riboxx生命科学公司开发了定制的和量身定制的分子工具，用于通过RNA干扰在体内外进行基因敲低：小干扰RNA（siRNA）和microRNA（miRNA）。RNA干扰是一种广泛用于生命科学的新技术。借助RNA干扰，可以进行基因型与表型的相关性研究以及鉴定基因表达模式。

riboxx生命科学开发了创新的分子工具用于基因沉默的体内，如IVORI ®的siRNA，该CONTRAmir ®和CONmir ®。riboxx的技术强大，易于使用且可靠。

Additionnally，riboxx生命科学市场新颖Toll样受体配体3（即RIBOXXOL ®）科学家对免疫细胞进行研究，如树突状细胞的成熟研究或预防性或治疗性疫苗的体内发育。

 

riboxx siRNA产品

 

iBONi siRNA box

€397.00

SKU

D-00102

基因敲低的多合一解决方案
3 x预先设计的iBONi siRNA 
1 x iBONi siRNA阴性对照
1 x riboxxFECT转染试剂

siRNA量：每种2或5 nmol 
纯化： RP / SEC 
质量控制： PAGE 
输送：干燥的
转染试剂： 250 µl

为了使基因敲除实验更容易，更有效，Riboxx提供了iBONi siRNA盒。iBONi siRNA盒是一种功能强大的多合一解决方案，提供一整套完美匹配的工具，可用于基因敲除实验的每个步骤。它包括针对一个基因的3个预先设计的iBONi siRNA，1个iBONi siRNA阴性对照和riboxxFECT转染试剂。

iBONi siRNA展示了RNAi-cap，这是Riboxx发明的一项新技术。RNAi-cap技术具有以下优点：

  • 方向调节RISC的siRNA双链解链，增强了RISC复合体的引导链负载。结果，有效的基因沉默所需的siRNA少得多，从而减少了脱靶效应[1]。
  • 改善了siRNA双链体的稳定性，并随后改善了其在体液中的半衰期。

参考文献
[1] Nolte A，Ott K，Rohayem J，Walker T，Schlensak C，Wendel HP。修饰小分子干扰RNA，以防止有义链产生脱靶效应。N生物技术。2013一月25; 30（2）：159-65。

 

 

 

iBONi siRNA阴性对照-N1

€98.00

SKU

K-00501

 

1 x非靶向siRNA可控制基因敲低特异性

数量： 2或5 nmol 
纯化： RP-HPLC 
质量控制： PAGE 
输送：干燥

 

iBONi siRNA对照被设计用作阳性，阴性或转染对照，用于验证基因沉默实验。iBONi siRNA对照来源于已发表的实验数据，并已经由独立科学家成功地在人，小鼠和大鼠细胞中进行了测试（请参考我们客户的引文）。
所有iBONi siRNA对照都包含RNAi帽。RNAi帽位于种子区的相反位置。

RNAi-cap技术具有以下优点：

  • 方向调节RISC的siRNA双链解链，增强了RISC复合体的引导链负载。结果，有效的基因沉默所需的siRNA少得多，从而减少了脱靶效应[1]。
  • 改善了siRNA双链体的稳定性，并随后改善了其在体液中的半衰期。

参考文献
[1] Nolte A，Ott K，Rohayem J，Walker T，Schlensak C，Wendel HP。修饰小分子干扰RNA，以防止有义链产生脱靶效应。N生物技术。2013一月25; 30（2）：159-65。

 

 

iBONi siRNA阴性对照-N2

€98.00

SKU

K-00601

1 x非靶向siRNA，用于控制基因敲低特异性

量： 2或5 nmol 
纯化： RP-HPLC 
质量控制： PAGE 
输送：干燥

iBONi siRNA对照被设计用作阳性，阴性或转染对照，用于验证基因沉默实验。iBONi siRNA对照来源于已发表的实验数据，并已经由独立科学家成功地在人，小鼠和大鼠细胞中进行了测试（请参考我们客户的引文）。
所有iBONi siRNA对照都包含RNAi帽。RNAi帽位于种子区的相反位置。

RNAi-cap技术具有以下优点：
•RISC的定向调节使siRNA双链解绕，从而增强了RISC复合体的引导链负载。结果，有效的基因沉默所需的siRNA少得多，从而减少了脱靶效应[1]。
•改善siRNA双链体的稳定性，并随后改善体液的半衰期。

参考文献
[1] Nolte A，Ott K，Rohayem J，Walker T，Schlensak C，Wendel HP。修饰小分子干扰RNA，以防止有义链产生脱靶效应。N生物技术。2013一月25; 30（2）：159-65。

 

 

iBONi siRNA阴性对照-N2

€98.00

SKU

K-00601

1 x非靶向siRNA，用于控制基因敲低特异性

量： 2或5 nmol 
纯化： RP-HPLC 
质量控制： PAGE 
输送：干燥

iBONi siRNA对照被设计用作阳性，阴性或转染对照，用于验证基因沉默实验。iBONi siRNA对照来源于已发表的实验数据，并已经由独立科学家成功地在人，小鼠和大鼠细胞中进行了测试（请参考我们客户的引文）。
所有iBONi siRNA对照都包含RNAi帽。RNAi帽位于种子区的相反位置。

RNAi-cap技术具有以下优点：
•RISC的定向调节使siRNA双链解绕，从而增强了RISC复合体的引导链负载。结果，有效的基因沉默所需的siRNA少得多，从而减少了脱靶效应[1]。
•改善siRNA双链体的稳定性，并随后改善体液的半衰期。

参考文献
[1] Nolte A，Ott K，Rohayem J，Walker T，Schlensak C，Wendel HP。修饰小分子干扰RNA，以防止有义链产生脱靶效应。N生物技术。2013一月25; 30（2）：159-65。

 

iBONi siRNA阴性对照-N3

€98.00

SKU

K-00701

1 x非靶向siRNA，用于控制基因敲低特异性

量： 2或5 nmol 
纯化： RP-HPLC 
质量控制： PAGE 
输送：干燥

iBONi siRNA对照被设计用作阳性，阴性或转染对照，用于验证基因沉默实验。iBONi siRNA对照来源于已发表的实验数据，并已经由独立科学家成功地在人，小鼠和大鼠细胞中进行了测试（请参考我们客户的引文）。
所有iBONi siRNA对照都包含RNAi帽。RNAi帽位于种子区的相反位置。

RNAi-cap技术具有以下优点：
•RISC的定向调节使siRNA双链解绕，从而增强了RISC复合体的引导链负载。结果，有效的基因沉默所需的siRNA少得多，从而减少了脱靶效应[1]。
•改善siRNA双链体的稳定性，并随后改善体液的半衰期。

参考文献
[1] Nolte A，Ott K，Rohayem J，Walker T，Schlensak C，Wendel HP。修饰小分子干扰RNA，以防止有义链产生脱靶效应。N生物技术。2013一月25; 30（2）：159-65。

 

iBONi siRNA阴性对照-N4

€98.00

SKU

K-00801

1 x非靶向siRNA，用于控制基因敲低特异性

量： 2或5 nmol 
纯化： RP-HPLC 
质量控制： PAGE 
输送：干燥

iBONi siRNA对照被设计用作阳性，阴性或转染对照，用于验证基因沉默实验。iBONi siRNA对照来源于已发表的实验数据，并已经由独立科学家成功地在人，小鼠和大鼠细胞中进行了测试（请参考我们客户的引文）。
所有iBONi siRNA对照都包含RNAi帽。RNAi帽位于种子区的相反位置。

RNAi-cap技术具有以下优点：
•RISC的定向调节使siRNA双链解绕，从而增强了RISC复合体的引导链负载。结果，有效的基因沉默所需的siRNA少得多，从而减少了脱靶效应[1]。
•改善siRNA双链体的稳定性，并随后改善体液的半衰期。

参考文献
[1] Nolte A，Ott K，Rohayem J，Walker T，Schlensak C，Wendel HP。修饰小分子干扰RNA，以防止有义链产生脱靶效应。N生物技术。2013一月25; 30（2）：159-65。

 

iBONi siRNA阴性对照-N5

€98.00

SKU

K-00901

1 x非靶向siRNA，用于控制基因敲低特异性

量： 2或5 nmol 
纯化： RP-HPLC 
质量控制： PAGE 
输送：干燥

iBONi siRNA对照被设计用作阳性，阴性或转染对照，用于验证基因沉默实验。iBONi siRNA对照来源于已发表的实验数据，并已经由独立科学家成功地在人，小鼠和大鼠细胞中进行了测试（请参考我们客户的引文）。
所有iBONi siRNA对照都包含RNAi帽。RNAi帽位于种子区的相反位置。

RNAi-cap技术具有以下优点：
•RISC的定向调节使siRNA双链解绕，从而增强了RISC复合体的引导链负载。结果，有效的基因沉默所需的siRNA少得多，从而减少了脱靶效应[1]。
•改善siRNA双链体的稳定性，并随后改善体液的半衰期。

参考文献
[1] Nolte A，Ott K，Rohayem J，Walker T，Schlensak C，Wendel HP。修饰小分子干扰RNA，以防止有义链产生脱靶效应。N生物技术。2013一月25; 30（2）：159-65。

 

 

iBONi siRNA 1

€124.00

SKU

D-00104

1个用于基因敲除的定制iBONi siRNA

规模：每个2、5或10 nmol 
纯化： RP / SEC 
质量控制： PAGE 
交付：干燥

 

 

iBONi siRNA展示了RNAi-cap，这是Riboxx发明的一项新技术。RNAi-cap技术具有以下优点：

  • 方向调节RISC的siRNA双链解链，增强了RISC复合体的引导链负载。结果，有效的基因沉默所需的siRNA少得多，从而减少了脱靶效应[1]。
  • 改善了siRNA双链体的稳定性，并随后改善了其在体液中的半衰期。

参考文献
[1] Nolte A，Ott K，Rohayem J，Walker T，Schlensak C，Wendel HP。修饰小分子干扰RNA，以防止有义链产生脱靶效应。N生物技术。2013一月25; 30（2）：159-65。

 

iBONi siRNA加

€221.00

SKU

D-00105

2组用于基因敲
除的siRNA 
•1 x 定制iBONi siRNA •1 x iBONi siRNA阴性对照

数量：每种2或5 nmol 
纯化： RP / SEC 
质量控制： PAGE 
交货：干燥

iBONi siRNA展示了Riiboxx发明的新技术，即RNAi-cap。
RNAi-cap技术具有以下优点：

  • 方向调节RISC的siRNA双链解链，增强了RISC复合体的引导链负载。结果，有效的基因沉默所需的siRNA少得多，从而减少了脱靶效应[1]。
  • 改善了siRNA双链体的稳定性，并随后改善了其在体液中的半衰期。

参考文献
[1] Nolte A，Ott K，Rohayem J，Walker T，Schlensak C，Wendel HP。修饰小分子干扰RNA，以防止有义链产生脱靶效应。N生物技术。2013一月25; 30（2）：159-65。

 

 

iBONi siRNA pool

€288.00

SKU

D-00101

 

用于基因敲除的3 x预先设计的siRNA的混合物

siRNA总量： 5或10 nmol 
纯化： RP / SEC 
质量控制： PAGE 
交货：干燥

 

iBONi siRNA库是针对相同基因的3个预先设计的siRNA的混合物。IBONi siRNA库提供了一种简单且经济高效的方式来执行高效且特异性的基因沉默。通过iBONi siRNA库，Riboxx将提供siRNA的序列信息。

iBONi siRNA展示了RNAi-cap，这是Riboxx发明的一项新技术。RNAi-cap技术具有以下优点：

  • 方向调节RISC的siRNA双链解链，增强了RISC复合体的引导链负载。结果，有效的基因沉默所需的siRNA少得多，从而减少了脱靶效应[1]。
  • 改善了siRNA双链体的稳定性，并随后改善了其在体液中的半衰期。

参考文献
[1] Nolte A，Ott K，Rohayem J，Walker T，Schlensak C，Wendel HP。修饰小分子干扰RNA，以防止有义链产生脱靶效应。N生物技术。2013一月25; 30（2）：159-65。