zyagen 绵羊基因组 DNA GS-190F说明书

zyagen 绵羊基因组 DNA GS-190F说明书

绵羊基因组 DNA,雌性

Sheep Genomic DNA, Female

GS-190F

 

Sheep Genomic DNA, Female

0.1mg

产品描述

绵羊、雌性对照基因组 DNA 是一种高纯度完整的高分子量 DNA。它是从单个供体的单个组织中提取的,并用无 DNase 的 RNase 处理以去除污染的 RNA。基因组 DNA 由 Nanodrop(一种分光光度计技术)精确测量并储存在 -80oC

应用:
PCR 扩增、Southern 印迹分析、基因组 DNA 甲基化、单核苷酸多态性 (SNP) 分析、基因表达分析研究和 DNA 文库构建

质量控制:
通过琼脂糖凝胶电泳和分光光度计检测基因组DNA的完整性和纯度,A260/280比值>1.8,β-肌动蛋白PCR扩增成功,EcoR1和/或Hind III酶消化DNA成功。

包装/运输:
基因组 DNA 通常以 0.5mg/ml 或 1mg/ml 的浓度在 TE 缓冲液中提供,并以蓝色运输过夜。

 

topogen2024年价格表

topogen2024年价格表-上海金畔生物

TopoGEN是一家研究诊断公司,为从事DNA拓扑异构酶和DNA修复的研究人员提供创新的产品和服务。从事基于机制的抗癌、抗病毒和抗菌药物发现的科学家会发现其产品在研发中特别有用。他们的药物筛选试剂盒可用于明确鉴定拓扑异构酶靶向分子,用于癌症化疗和抗菌应用。TopoGEN还销售检测和定量原核(DNA Gyrase,拓扑异构酶IV)和真核拓扑异构酶(拓扑异构酶I,IIa,IIb,III)的检测试剂盒。TopoGEN还提供全系列的 DNA 底物和 DNA 切割靶标、拓扑异构酶抑制剂、拓扑异构酶抗体和试剂盒补充试剂。DNA修复的相关系列产品也是他们产品的关键部分。

特别告知:为保证产品质量与良好性能,所以在购买相应产品的同时我司会收取一定量的运输费用!!!本次报价有效时间为2024年1月1日—2024年12月31日。

货号 品名 规格 价格 品牌 货期 价格来源
DR3000 HRHeLa-Sce-NonProfit HR based Kit in HeLa Requiring I-Sce1 Transfection (50ug DNA) 50ug 31600 topogen 4-6周 上海金畔生物
DR3000 HRHeLa-Sce-ForProfit HR based Kit in HeLa Requiring I-Sce1 Transfection (50ug DNA) 50ug 72640 topogen 4-6周 上海金畔生物
DR3000 HRHeLa-Sce2-NonProfit HR based Kit in HeLa Requiring I-Sce1 Transfection (100ug DNA) 100ug 35920 topogen 4-6周 上海金畔生物
DR3000 HRHeLa-Sce2-ForProfit HR based Kit in HeLa Requiring I-Sce1 Transfection (100ug DNA) 100ug 77280 topogen 4-6周 上海金畔生物
DR3000 HRHeLa-Sce3-NonProfit HR based Kit in HeLa Requiring I-Sce1 Transfection (250ug DNA) 250ug 44720 topogen 4-6周 上海金畔生物
DR3000 HRHeLa-Sce3-ForProfit HR based Kit in HeLa Requiring I-Sce1 Transfection (250ug DNA) 250ug 86480 topogen 4-6周 上海金畔生物
DR3000 HRHeLa-CPR-NonProfit HR based Kit in HeLa Requiring CRISPR Transfection (50ug DNA) 50ug 33360 topogen 4-6周 上海金畔生物
DR3000 HRHeLa-CPR-ForProfit HR based Kit in HeLa Requiring CRISPR Transfection (50ug DNA) 50ug 76720 topogen 4-6周 上海金畔生物
DR3000 HRHeLa-CPR2-NonProfit HR based Kit in HeLa Requiring CRISPR Transfection (100ug DNA) 100ug 37680 topogen 4-6周 上海金畔生物
DR3000 HRHeLa-CPR2-ForProfit HR based Kit in HeLa Requiring CRISPR Transfection (100ug DNA) 100ug 81360 topogen 4-6周 上海金畔生物

关键词:topogen、DNA Gyrase、拓扑异构酶IV、真核拓扑异构酶、DNA 底物

PureBind 血液基因组 DNA 分离试剂盒说明书

 

 

oceannanotech PureBind 血液基因组 DNA 分离试剂盒说明书

PureBind Blood gDNA Isolation Kit 专门设计用于从全血中以高产量和纯度分离基因组 DNA。特殊包被的磁珠可实现高 DNA 结合能力并将来自各种样品的污染降至该试剂盒具有适用于不同检测形式(试管、96 孔形式、自动化)以及各种血样体积(10 μL-10 mL)的灵活性。从全血中获得的 DNA 纯度高(A260/280 ≥ 1.8,A260/230 ≥ 1.4),适用于各种下游应用。该套件与各种商业血液稳定剂管和抗凝剂兼容。

 

oceannanotech B0711

 
 

高分子量基因组 DNA:使用 Ocean NanoTech 的 Blood gDNA 试剂盒从全血中分离出高分子量的高分子量基因组 DNA。3 x 350 µL 全血/供体通过 Ocean NanoTech 试剂盒进行处理,并以 100 µL 洗脱。500 纳克纯化的 DNA 在 1% 琼脂糖凝胶/TAE 上与 GeneRuler™1kb Plus 阶梯(Thermo Scientific)一起电泳;最上面的 DNA 梯带是 20,000 bp。

来自全血的高纯度基因组 DNA,不含 RNase:使用 Ocean NanoTech 的 Blood gDNA 试剂盒从全血中分离的高纯度基因组 DNA。3 x 350 µL 全血/供体通过 Ocean NanoTech 试剂盒进行处理,并以 100 µL 洗脱。通过分光光度法分析洗脱的DNA以确定纯度比和DNA浓度。

来自全血的无抑制剂基因组 DNA:分离的基因组 DNA 的 SPUD 分析表明不存在共纯化的抑制剂。3 x 350 µL 全血/供体通过 Ocean NanoTech 试剂盒进行处理,并以 100 µL 洗脱。如 Analytical Biochemistry, 2006 Apr 15;351(2):308-10 中详述的,对 100 ng 洗脱的 DNA 进行了抑制 SPUD 扩增子扩增的能力分析。观察到的 Cq 与分离的 DNA 模板相对于 SPUD 阳性对照的均匀性表明分离的 DNA 不含 PCR/qPCR 抑制剂。

 

基因组靶标的成功qPCR扩增:对分离的基因组DNA的qPCR分析表明,基因组靶标的成功扩增和检测。3 x 350 µL 全血/供体通过 Ocean NanoTech 试剂盒进行处理,并以 100 µL 洗脱。使用 ABI TaqMan™ β-肌动蛋白 qPCR 测定法测定标称 20 ng 洗脱的 DNA(基于 Nanodrop 分析)。标准曲线跨越了 100 – 0.032 ng(27,600 – 8.8 个基因组当量)的人类 DNA。测定效率计算为 102%。

分离的基因组 DNA 的酶促修饰:使用 Ocean NanoTech 的 Blood gDNA 试剂盒对从全血中分离的基因组 DNA 进行限制性消化。3 x 350 µL 全血/供体通过 Ocean NanoTech 试剂盒进行处理,并以 100 µL 洗脱。1 µg 纯化的 DNA 在 37°C 下用 BamHI、BglII 和 BamHI+BglII 消化 30 分钟。此后限制性产物在1%琼脂糖凝胶/TAE上电泳1小时。

 

从分离的基因组和线粒体 DNA 进行长距离 PCR 使用 Ocean NanoTech 的 Blood gDNA 试剂盒对从全血中分离的基因组 DNA 进行长距离 PCR。3 x 350 µL 全血/供体通过 Ocean NanoTech 试剂盒进行处理,并以 100 µL 洗脱。使用 TaKaRa LA Taq® 和 (A) 7.3 kb 人葡糖脑苷脂酶片段和 (B) 8.2 kb 线粒体 NADH-泛醌氧化还原酶链 1 (MT-ND1) 片段的引物,通过 PCR 扩增 20 ng 纯化 DNA。 PCR 产物在 1% 琼脂糖凝胶/TAE 上电泳 1 小时。这些高分子量目标的成功 PCR 扩增突出了分离 DNA 的结构完整性和我们的试剂盒分离线粒体 DNA 的能力。

与商业血液稳定剂管的兼容性: 血液基因组 DNA 试剂盒可用于从商业血液稳定剂管中分离不含抑制剂的 gDNA。将捐献者血液抽取到 3 种市售血液稳定产品中,并在室温下储存 4 天。使用标准方案通过 Ocean NanoTech 试剂盒处理来自试管的 350 µL 等分试样。作为稳定过程的一部分,DNA/RNA Shield™ 管也没有使用 Ocean NanoTech 裂解缓冲液进行处理,因为 DNA/RNA Shield™ 裂解细胞。如分析生物化学,2006 年 4 月 15 日;351(2):308-10 中详述的,测定了从每次分离中洗脱的 100 ng DNA 抑制 SPUD 扩增子扩增的能力。观察到的 Cq 与分离的 DNA 模板相对于 SPUD 阳性对照的均匀性表明分离的 DNA 不含 PCR/qPCR 抑制剂。

性能与其他商用产品的对比: Ocean NanoTech的Blood gDNA试剂盒大大优于其他基于磁珠的血液gDNA分离试剂盒。来自同一供体的血液被吸入 K2-EDTA 管中,并使用试剂盒所需的输入血量通过每个试剂盒处理。分离的 DNA 以 100 µL 洗脱,并通过 NanoDrop 分析和 Qubit 分析评估纯度。计算每个试剂盒的总产量(基于 Qubit 测量)和作为血液输入量函数的产量。所有值均来自三个生物学重复。

 

    特征:

    • 无RNA污染。
    • 来自全血的高分子量 gDNA,不需要 RBC 和 WBC 的差异裂解。
    • 分离 > 9 微克 DNA/350μL 输入血样。
    • 与商业稳定剂管(例如 PAXgene Blood DNA 管、BioMatrica DNAgard Blood)兼容。
    • 自动化友好的 KingFisher(Duo、Duo Primer 和 Flex)脚本可用。

目录# 产品 单元尺寸 单价
B0711-096 PureBind血液基因组DNA分离试剂盒 1微米 199.00 美元
B0711-384 PureBind血液基因组DNA分离试剂盒 10纳米 $ 677.00
产品描述 PureBind血液基因组DNA分离试剂盒
应用 从全血中分离核酸

 

 

DNA分选磁珠(完美替代AMPure XP磁珠)|Hieff NGS® DNA Selection Beads

DNA分选磁珠(完美替代AMPure XP磁珠)|Hieff NGS® DNA Selection Beads

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品描述

Hieff NGS® DNA Selection Beads基于SPRI (Solid Phase Reverse Immobilization)原理,配合精心优化过的缓冲体系,可用于二代测序文库构建过程中的DNA片段分选、纯化。本产品可适用于各品牌的DNA、RNA建库试剂盒,和目前广泛使用的AMPure XP Beads使用方式相同,片段回收效率和文库大小分布均与AMPure XP Beads高度吻合。

 

运输与保存方法

冰袋运输。2-8℃保存,效期一年。避免冷冻!

 

注意事项

1)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

2)磁珠使用前须在室温平衡至少30 min。

3)80%乙醇需现用现配,否则将影响回收效率。

4)进行长度分选时,初始样品体积需≥100μL,不足时请用超纯水补齐。样品体积太小,将导致移液误差增大,进而影响分选的准确性。

5) 本产品仅用作科研用途!

 

使用方法

1. 准备工作

将磁珠由冰箱中取出,室温平衡至少30 min。配制80%乙醇。

2. 长度分选(双轮法)

长度分选操作流程如1所示,具体操作如下。

DNA分选磁珠(完美替代AMPure XP磁珠)|Hieff NGS® DNA Selection Beads
1双轮分选操作流程

1)请涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证混匀。

2)根据要求,参考1DNA溶液中加入第一轮分选磁珠,涡旋混匀或移液器吹打10次混匀。

3)室温孵育5 min。

4)将离心管短暂离心并置于磁力架中,待溶液澄清后(约5 min),小心转移上清到干净的离心管中。

注意:转移上清时,请残留2 μL液体于管底,切勿全部吸出上清,避免吸到磁珠并影响分选效果。

举例:当初始体积为100 μL,第一轮使用0.8×比例,即加入80 μL磁珠,推荐吸出178 μL的上清。

5)参考1向上清中加入第二轮分选磁珠。

6)涡旋混匀或移液器吹打10次混匀,室温静置5 min。

7)将离心管短暂离心并置于磁力架中,待溶液澄清后(约5 min),小心移除上清。

8)保持离心管始终处于磁力架中,加入200 μL新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠,室温孵育30 s,小心移除上清。

9)重复步骤8。

10)保持离心管始终处于磁力架中,开盖干燥磁珠至刚刚出现龟裂(约5 min)。

注意:切记磁珠不要干燥时间太久,磁珠干燥过度将影响纯化效果。

11)将离心管从磁力架中取出,加入适量ddH2O(≥20 μL),涡旋振荡或使用移液器轻轻吹打充分混匀,室温孵育5 min。

12)将离心管短暂离心并置于磁力架中分离磁珠和液体。待溶液澄清后(约5 min),小心吸取上清至干净的管中,即完成分选。

3. DNA片段分选参考条件

通过超声法将小牛胸腺DNA进行片段化,制备100-1000 bp的Smear片段,根据表1进行双轮分选。结果使用Agilent 2100 Bioanalyzer进行分析(2)。

1磁珠文库分选推荐比例

DNA片段大小

250-350 bp

320-420 bp

450-550 bp

550-700 bp

700-900 bp

800-1000 bp

第一轮体积比(Beads:DNA)

0.80×

0.70×

0.60×

0.55×

0.50×

0.45×

第二轮体积比(Beads:DNA)

0.20×

0.20×

0.20×

0.15×

0.15×

0.15×

注:表中“×”表示样品DNA体积。如文库插入片段长度为250 bp,样品DNA体积为100mL,则第一轮分选磁珠使用体积为0.80×100 mL=80 mL;第二轮分选磁珠使用体积为0.20×100 mL=20 mL。

DNA分选磁珠(完美替代AMPure XP磁珠)|Hieff NGS® DNA Selection BeadsDNA分选磁珠(完美替代AMPure XP磁珠)|Hieff NGS® DNA Selection BeadsDNA分选磁珠(完美替代AMPure XP磁珠)|Hieff NGS® DNA Selection Beads

2 Agilent 2100 high sensitivity DNA chip electopherogram

Smear fragments溶于ddH2O,使用0.80×/0.20×至0.45×/0.15×磁珠进行片段分选

HB220528

Q:12601可以用来纯化DNA吗?

A:可以纯化150bp以上的DNA片段,如果纯化的DNA中含有较多的150bp以下的建议用货号12600的产品,可以纯化50bp以上的DNA。

Q:12601可以分选1Kb或以上的DNA片段吗?

A:需要自行摸索体系,目前筛选的片段范围确定的体系为说明中的体系,其它片段分选的可以参考说明书中的分选体系调整。

Q: 不小心将磁珠放到-20℃,但未结冰,是否可以继续使用?

A:不建议使用。因为低温会破坏磁珠的结构,使得磁珠的抓取效率降低,影响磁珠回收性能。

Q:磁珠未开封的时候 4℃保存,开封后一直室温保存使用,是否会影响磁珠的回收性能?

A:室温放置对磁珠的回收性能会有一定影响,不建议室温放置太久,使用完后建议 4℃ 保存。PEG 分离效果易受 pH、温度等影响。

Q:磁珠原理

A1) DNA 分选磁珠:基于一种固相载体可逆化固定SPRI)的分离纯化方法,磁珠体系一般包含:磁珠、DNAPEG、盐离子主要是 Na+)等。在一定浓度的 PEG 盐离子环境中,DNA 可通过 Na+桥吸附到羧基修饰的高分子磁珠表面即固相载体该过程是可逆的,在不同的 PEG 浓度条件下,结合的 DNA 分子可以被洗脱回收。

2)RNA 纯化磁珠:目前还没有报道明确的原理,一般来说也是静电吸附,但如何做到特异性吸附 RNA,目前我们也不清楚(因为磁珠不是我们生产的,这类产品商家都有各自的专利和机密

3)RNA 富集磁珠:磁珠上偶联了 Oligo(dT)的微米级顺磁性微球,在一定浓度的缓冲液中通过与带有poly(A)尾巴的mRNA 相结合,将mRNA 从总RNA 中进行分离纯化。

Q:磁珠回收率低可能的原因是什么?

A:1)磁珠与DNA 混匀不充分,未能充分吸附。建议反应体系充分混匀;

2)磁珠比例不对,建议按照说明书进行选择合适的比例;

3)孵育时间不足,保证孵育时间至少 5 min;

4)磁珠分选时,二轮磁珠吸附的时候吸到磁珠。可在 200 μL 枪头前串联 10μL 枪头用于移液,可防止吸到磁珠;

5)磁珠洗涤时的乙醇非现配,导致乙醇浓度过低,建议乙醇浓度不低于 70%;

6)干燥过度:磁珠长时间干燥导致表面龟裂,DNA 难以洗脱,得率降低;建议干燥时间不宜过长,表面刚出现龟裂即可;

7)洗脱液体积不足:最终洗脱液应完全覆盖管内磁珠。

Q:12601可以纯化或回收150bp以下的片段吗?

A:不建议使用12601,建议使用12600,最低可回收100bp左右的片段,50bp以上的回收率可能会有影响。

Q:是否可以纯化单链DNA,该使用多少磁珠?

A:磁珠可以吸附双链DNA和单链DNA,但不能区分单链或双链DNA。磁珠纯化单链DNA的倍数可以参考双链的说明书。

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产品描述

Hieff NGS® DNA Selection Beads基于SPRI (Solid Phase Reverse Immobilization)原理,配合精心优化过的缓冲体系,可用于二代测序文库构建过程中的DNA片段分选、纯化。本产品可适用于各品牌的DNA、RNA建库试剂盒,和目前广泛使用的AMPure XP Beads使用方式相同,片段回收效率和文库大小分布均与AMPure XP Beads高度吻合。

 

运输与保存方法

冰袋运输。2-8℃保存,效期一年。避免冷冻!

 

注意事项

1)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

2)磁珠使用前须在室温平衡至少30 min。

3)80%乙醇需现用现配,否则将影响回收效率。

4)进行长度分选时,初始样品体积需≥100μL,不足时请用超纯水补齐。样品体积太小,将导致移液误差增大,进而影响分选的准确性。

5) 本产品仅用作科研用途!

 

使用方法

1. 准备工作

将磁珠由冰箱中取出,室温平衡至少30 min。配制80%乙醇。

2. 长度分选(双轮法)

长度分选操作流程如1所示,具体操作如下。

DNA分选磁珠(完美替代AMPure XP磁珠)|Hieff NGS® DNA Selection Beads
1双轮分选操作流程

1)请涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证混匀。

2)根据要求,参考1DNA溶液中加入第一轮分选磁珠,涡旋混匀或移液器吹打10次混匀。

3)室温孵育5 min。

4)将离心管短暂离心并置于磁力架中,待溶液澄清后(约5 min),小心转移上清到干净的离心管中。

注意:转移上清时,请残留2 μL液体于管底,切勿全部吸出上清,避免吸到磁珠并影响分选效果。

举例:当初始体积为100 μL,第一轮使用0.8×比例,即加入80 μL磁珠,推荐吸出178 μL的上清。

5)参考1向上清中加入第二轮分选磁珠。

6)涡旋混匀或移液器吹打10次混匀,室温静置5 min。

7)将离心管短暂离心并置于磁力架中,待溶液澄清后(约5 min),小心移除上清。

8)保持离心管始终处于磁力架中,加入200 μL新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠,室温孵育30 s,小心移除上清。

9)重复步骤8。

10)保持离心管始终处于磁力架中,开盖干燥磁珠至刚刚出现龟裂(约5 min)。

注意:切记磁珠不要干燥时间太久,磁珠干燥过度将影响纯化效果。

11)将离心管从磁力架中取出,加入适量ddH2O(≥20 μL),涡旋振荡或使用移液器轻轻吹打充分混匀,室温孵育5 min。

12)将离心管短暂离心并置于磁力架中分离磁珠和液体。待溶液澄清后(约5 min),小心吸取上清至干净的管中,即完成分选。

3. DNA片段分选参考条件

通过超声法将小牛胸腺DNA进行片段化,制备100-1000 bp的Smear片段,根据表1进行双轮分选。结果使用Agilent 2100 Bioanalyzer进行分析(2)。

1磁珠文库分选推荐比例

DNA片段大小

250-350 bp

320-420 bp

450-550 bp

550-700 bp

700-900 bp

800-1000 bp

第一轮体积比(Beads:DNA)

0.80×

0.70×

0.60×

0.55×

0.50×

0.45×

第二轮体积比(Beads:DNA)

0.20×

0.20×

0.20×

0.15×

0.15×

0.15×

注:表中“×”表示样品DNA体积。如文库插入片段长度为250 bp,样品DNA体积为100mL,则第一轮分选磁珠使用体积为0.80×100 mL=80 mL;第二轮分选磁珠使用体积为0.20×100 mL=20 mL。

DNA分选磁珠(完美替代AMPure XP磁珠)|Hieff NGS® DNA Selection BeadsDNA分选磁珠(完美替代AMPure XP磁珠)|Hieff NGS® DNA Selection BeadsDNA分选磁珠(完美替代AMPure XP磁珠)|Hieff NGS® DNA Selection Beads

2 Agilent 2100 high sensitivity DNA chip electopherogram

Smear fragments溶于ddH2O,使用0.80×/0.20×至0.45×/0.15×磁珠进行片段分选

HB220528

Q:12601可以用来纯化DNA吗?

A:可以纯化150bp以上的DNA片段,如果纯化的DNA中含有较多的150bp以下的建议用货号12600的产品,可以纯化50bp以上的DNA。

Q:12601可以分选1Kb或以上的DNA片段吗?

A:需要自行摸索体系,目前筛选的片段范围确定的体系为说明中的体系,其它片段分选的可以参考说明书中的分选体系调整。

Q: 不小心将磁珠放到-20℃,但未结冰,是否可以继续使用?

A:不建议使用。因为低温会破坏磁珠的结构,使得磁珠的抓取效率降低,影响磁珠回收性能。

Q:磁珠未开封的时候 4℃保存,开封后一直室温保存使用,是否会影响磁珠的回收性能?

A:室温放置对磁珠的回收性能会有一定影响,不建议室温放置太久,使用完后建议 4℃ 保存。PEG 分离效果易受 pH、温度等影响。

Q:磁珠原理

A1) DNA 分选磁珠:基于一种固相载体可逆化固定SPRI)的分离纯化方法,磁珠体系一般包含:磁珠、DNAPEG、盐离子主要是 Na+)等。在一定浓度的 PEG 盐离子环境中,DNA 可通过 Na+桥吸附到羧基修饰的高分子磁珠表面即固相载体该过程是可逆的,在不同的 PEG 浓度条件下,结合的 DNA 分子可以被洗脱回收。

2)RNA 纯化磁珠:目前还没有报道明确的原理,一般来说也是静电吸附,但如何做到特异性吸附 RNA,目前我们也不清楚(因为磁珠不是我们生产的,这类产品商家都有各自的专利和机密

3)RNA 富集磁珠:磁珠上偶联了 Oligo(dT)的微米级顺磁性微球,在一定浓度的缓冲液中通过与带有poly(A)尾巴的mRNA 相结合,将mRNA 从总RNA 中进行分离纯化。

Q:磁珠回收率低可能的原因是什么?

A:1)磁珠与DNA 混匀不充分,未能充分吸附。建议反应体系充分混匀;

2)磁珠比例不对,建议按照说明书进行选择合适的比例;

3)孵育时间不足,保证孵育时间至少 5 min;

4)磁珠分选时,二轮磁珠吸附的时候吸到磁珠。可在 200 μL 枪头前串联 10μL 枪头用于移液,可防止吸到磁珠;

5)磁珠洗涤时的乙醇非现配,导致乙醇浓度过低,建议乙醇浓度不低于 70%;

6)干燥过度:磁珠长时间干燥导致表面龟裂,DNA 难以洗脱,得率降低;建议干燥时间不宜过长,表面刚出现龟裂即可;

7)洗脱液体积不足:最终洗脱液应完全覆盖管内磁珠。

Q:12601可以纯化或回收150bp以下的片段吗?

A:不建议使用12601,建议使用12600,最低可回收100bp左右的片段,50bp以上的回收率可能会有影响。

Q:是否可以纯化单链DNA,该使用多少磁珠?

A:磁珠可以吸附双链DNA和单链DNA,但不能区分单链或双链DNA。磁珠纯化单链DNA的倍数可以参考双链的说明书。

[1]He J, Liu T, Wang W, Wu X, Wang J, Yan W. Comprehensive improvement of soil quality and rice yield by flooding-midseason drying-flooding. Appl Microbiol Biotechnol. 2022;106(21):7347-7359. doi:10.1007/s00253-022-12184-7(IF:5.560)

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[22]Huang C, Gao F, Zhou H, et al. Oral Microbiota Profile in a Group of Anti-AChR Antibody-Positive Myasthenia Gravis Patients. Front Neurol. 2022;13:938360. Published 2022 Jul 7. doi:10.3389/fneur.2022.938360(IF:4.086)

MCLAB 大肠杆菌 DNA连接酶

 

Molecular Cloning Laboratories(MCLAB)成立于1998年,是为生命科学界提供基因组研究耗材和服务的先进者。

MCLAB提供具有成本效益的消耗品和试剂,专注于代以及新一代测序和DNA片段分析。我们提供大量分子生物学相关产品,包括抗体,生化试剂,克隆试剂盒,酶,PCR试剂盒,蛋白质凝胶和溶液等。作为我们自己的制造商,我们可以控制生产流程,并大限度地减少定制和大规模订单的延迟。它有助于确保我们的客户获得高的质量和价值。

MCLAB拥有一支由20 多位经验丰富的科学家组成的团队,致力于为研究人员提供高质量的服务。我们专注于基因组学领域,拥有DNA测序,发酵,片段分析,分子克隆,过表达,蛋白质纯化和蛋白质合成方面的专家。我们采用量身定制的客户服务方式,让您有机会定制您的项目,并直接与我们的科学家团队交流以获得技术支持。凭借二十多年的经验,我们才华横溢,技术的员工致力于为您提供所需的成果。

大肠杆菌 DNA连接酶

E. coli DNA Ligase

大肠杆菌 DNA连接酶是NAD +依赖性酶,其催化dsDNA的互补3'-羟基和5'-磷酰基末端之间的磷酸二酯键的形成。

 

名称

货号

尺寸

浓度

大肠杆菌DNA连接酶

EDLA-100

1,000个单位

10,000 U / ml

大肠杆菌DNA连接酶

EDLA-200

5,000个单位

10,000 U / ml

大肠杆菌DNA连接酶

EDLA-OEM

任何尺寸

 

描述:
大肠杆菌 DNA连接酶是NAD +依赖性酶,其催化dsDNA的互补3'-羟基和5'-磷酰基末端之间的磷酸二酯键的形成。该酶与内聚的dsDNA末端一金畔挥*作用,并且对切口DNA也有活性。平末端可以在冷凝试剂例如聚乙二醇或聚蔗糖的存在下结扎®。酶提供10x反应缓冲液。

来源:
大肠杆菌含有的过量生产克隆菌株大肠杆菌 DNA连接酶。

应用:
– 克隆连接
– 冈山和Berg cDNA克隆

单位定义:
一个单位的大肠杆菌DNA连接酶定义为在标准温度16°C下30分钟内提供连接(> 50%)Hind III消化的噬菌体λDNA(5'-DNA末端浓度为0.12μM,300μg/ ml)所需的酶量测定条件。

反应条件:
10× 大肠杆菌 DNA连接酶反应缓冲液
温育在16℃下

10倍的大肠杆菌 DNA连接酶反应缓冲液:
300mM的Tris-盐酸
40毫摩尔MgCl 2
260μMNAD 
的10mM DTT 
的pH 8.0 @ 25℃

具体活动:  10,000单位/ m g

推荐储存条件: -20°C 

参考文献:
1。Zimmerman,SB和Pheifer,BH(1983)Proc。国家科。科学院。Sci。,USA 80,5852-5856。
2. Okayama,H。和Berg,P。(1982)Mol。细胞。生物学。2,161-170。

 

 

上海金畔生物科技有限公司是实验试剂一站式采购服务商

1:强大的进口辐射能力,血清、抗体、耗材、大部分限制进口品等。

2:产品种类齐全,经营超过700多个品牌,基本涵盖所有生物实验试剂耗材。

3:提供加急服务,货品一般1-2周到货。

4:富有竞争力的价格优势,绝大部分价格有优势。

5:多年积累良好的信誉,大部分客户提供货到付款服务。客户包括清华、北大、交大、复旦、中山等100多所高校,ROCHE,阿斯利康、国药、fisher等药企。

6:我们还是Santa,Advanced Biotechnologies Inc,Athens Research & Technology,bangs,BBInternational,crystalchem,dianova,FD Neurotechnologies,Inc. FormuMax Scientific,Inc, Genebridege, Glycotope Biotechnology GmbH; iduron,Innovative Research of America, Ludger, neuroprobe,omicronbio, Polysciences,prospecbi, QA-BIO,quickzyme,RESEARCH DIETS,INC,sterlitech;sysy,TriLink BioTechnologies,Inc;worthington-biochem,zyagen等几十家国外公司代理。

7:我们还是invitrogen,qiagen,MiraiBioam,sigma;neb,roche,merck, rnd,BD, GE,pierce,BioLegend等*批发,欢迎合作。

 

jembio DNA连接酶说明书

jembio DNA连接酶说明书

DNA连接酶(大肠杆菌)

DNA 连接酶(大肠杆菌)催化双链 DNA 中并列的 5' 磷酸和 3' 羟基粘性末端之间形成磷酸二酯键。

描述:

• 催化具有粘性末端的双链 DNA 片段之间形成磷酸二酯键。

• 5'-磷酰基与相邻的 3'-羟基的缩合伴随着 NAD+ 的水解。

• 适用于全长cDNA(1、2)的高效克隆。

单位定义:一个单位定义为产生 50% 的 λ DNA 的 Hind III 片段连接所需的酶量。

在 20 µl DNA 末端浓度为 0.02 µM (50 µg/ml) 的测定混合物中在 16oC 下孵育。

储存条件:储存于-20oC。

反应缓冲液:30 mM Tris-HCl(22°C 时 pH 8.0)、1 mM 二硫苏糖醇、4 mM MgCl2、26 µM NAD+、50 µg/ml 牛血清白蛋白。

最佳连接发生在 16°C。

储存缓冲液:10 mM Tris-HCl(22°C 时 pH 7.4)、50 mM KCl、0.1 mM EDTA、10 mM 硫酸铵、1 mM 二硫苏糖醇和 50% (v/v) 甘油。

质量控制:所有制备物都经过了内切核酸酶和外切酶活性的污染测试,以及连接反应中的功能测试。

连接分析条件:30 mM Tris-HCl(22°C 时 pH 8.0)、4 mM MgCl2、1.2 mM EDTA、1 mM 二硫苏糖醇、0.026 mM NAD+、50 µg/ml 牛血清白蛋白和 λ DNA 的 Hind III 片段。在 16°C 下孵育 30 分钟。

Zymoclean凝胶DNA回收试剂盒简介

 

Zymoclean凝胶DNA回收试剂盒

目录号:geneseesci 11-300


未封顶的列

50次/单位

品牌:Zymo Research

 

  • 快速(15分钟)从琼脂糖凝胶中回收超纯DNA
  • 色谱柱设计可将高浓度的DNA洗脱至最小体积(小至6 µl)
  • 洗脱的DNA非常适合用于DNA连接,测序,标记,PCR等
  • DNA大小限制:50 bp至23 kb
  • 样品:从TAE / TBE缓冲琼脂糖凝胶中切除的DNA
  • 处理时间:15分钟

?

Zymoclean™凝胶DNA回收试剂盒可从TAE / TBE缓冲的琼脂糖凝胶中快速纯化高质量的DNA。该产品具有快速旋转技术,可在短短几分钟内产生高质量的纯化DNA。使用Zymoclean™凝胶DNA回收试剂盒纯化的DNA非常适合用于DNA连接反应,测序,DNA标记反应,PCR等。

通常,每根色谱柱最多可使用约6 µl水洗脱5 µg总DNA。对于50 bp至10 kb的DNA,回收率为70-90%。对于11 kb至23 kb的DNA,回收率为50-70%。额外的Zymo-Spin色谱柱:不封顶:Cat#11-500&11-501; 封顶:货号#11-500C和11-501C

 

DNA文库构建专用引物试剂盒(Illumina) DNA Library Prep Primer Mix

DNA文库构建专用引物试剂盒(Illumina) DNA Library Prep Primer Mix

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

 

Hieff NGS® DNA Lib Prep Primer Mix for Illumina®Illumina高通量测序平台DNA文库构建专用引物试剂盒,需搭配Hieff NGS® Ultima Pro DNA Library Prep KitCat#12197)和Hieff NGS® OnePot Pro DNA Library Prep Kit(Cat#12195)以及Complete Adapter for Illumina®使用(Cat#13519-13520或其他等效产品)。试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证,最大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性。

 

产品组分

产品编号

产品名称

产品规格

8 T

24T

96 T

12190

DNA Lib Prep Primer Mix for Illumina®

40 μL

120 μL

480 μL

 

运输与保存方法

冰袋运输。

所有组分-20°C保存,有效期1年。

 

注意事项

1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

2. 请于使用前将试剂盒各组分置于室温解冻。解冻后上下颠倒数次充分混匀,短暂离心后置于冰上待用。

3. 配制各步骤反应液时推荐使用移液器吹打混匀或轻轻振荡,剧烈振荡可能会造成文库产出下降。

4. 为避免样品交叉污染,推荐使用带滤芯的枪头,吸取不同样品时请更换枪头。

5. 推荐在带热盖的PCR仪中进行各步骤反应,使用前应预热PCR仪至反应温度附近。

6. PCR产物因操作不当极容易产生气溶胶污染,进而影响实验结果准确性。推荐将PCR反应体系配制区和PCR产物纯化检测区进行强制性的物理隔离;使用专用的移液器等设备;并定时对各实验区域进行清洁(使用0.5%次氯酸钠或10%漂白剂进行擦拭清理),以保证实验环境的洁净度。

7.本产品仅用作科研用途!

 

使用方法

按照建库说明书中文库扩增体系配制反应体系(如下表),反应程序按照建库说明书中程序进行设置。

名称

体积(μL)

Canace® Pro Amplification Mix

25

DNA Lib Prep Primer Mix for Illumina®

5

Adapter Ligated DNA

20

 

HB230203

DNA文库构建专用引物试剂盒(Illumina) DNA Library Prep Primer Mix

暂无内容

DNA文库构建专用引物试剂盒(Illumina) DNA Library Prep Primer Mix

暂无内容

 

Hieff NGS® DNA Lib Prep Primer Mix for Illumina®Illumina高通量测序平台DNA文库构建专用引物试剂盒,需搭配Hieff NGS® Ultima Pro DNA Library Prep KitCat#12197)和Hieff NGS® OnePot Pro DNA Library Prep Kit(Cat#12195)以及Complete Adapter for Illumina®使用(Cat#13519-13520或其他等效产品)。试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证,最大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性。

 

产品组分

产品编号

产品名称

产品规格

8 T

24T

96 T

12190

DNA Lib Prep Primer Mix for Illumina®

40 μL

120 μL

480 μL

 

运输与保存方法

冰袋运输。

所有组分-20°C保存,有效期1年。

 

注意事项

1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

2. 请于使用前将试剂盒各组分置于室温解冻。解冻后上下颠倒数次充分混匀,短暂离心后置于冰上待用。

3. 配制各步骤反应液时推荐使用移液器吹打混匀或轻轻振荡,剧烈振荡可能会造成文库产出下降。

4. 为避免样品交叉污染,推荐使用带滤芯的枪头,吸取不同样品时请更换枪头。

5. 推荐在带热盖的PCR仪中进行各步骤反应,使用前应预热PCR仪至反应温度附近。

6. PCR产物因操作不当极容易产生气溶胶污染,进而影响实验结果准确性。推荐将PCR反应体系配制区和PCR产物纯化检测区进行强制性的物理隔离;使用专用的移液器等设备;并定时对各实验区域进行清洁(使用0.5%次氯酸钠或10%漂白剂进行擦拭清理),以保证实验环境的洁净度。

7.本产品仅用作科研用途!

 

使用方法

按照建库说明书中文库扩增体系配制反应体系(如下表),反应程序按照建库说明书中程序进行设置。

名称

体积(μL)

Canace® Pro Amplification Mix

25

DNA Lib Prep Primer Mix for Illumina®

5

Adapter Ligated DNA

20

 

HB230203

DNA文库构建专用引物试剂盒(Illumina) DNA Library Prep Primer Mix

暂无内容

DNA文库构建专用引物试剂盒(Illumina) DNA Library Prep Primer Mix

暂无内容

土壤DNA提取试剂盒 土壤核酸提取试剂盒|MolPure® Soil DNA Kit

土壤DNA提取试剂盒 土壤核酸提取试剂盒|MolPure® Soil DNA Kit

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

MolPure® Soil DNA Kit适用于各类土壤样品中核酸的提取。样本预处理采用陶瓷珠和二氧化硅颗粒混合而成的玻璃珠,可有效处理真细菌孢子和内生孢子,革兰氏阳性细菌,酵母,藻类,线虫和真菌等土壤中的各类微生物。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料,配合本公司独特的裂解液配方可以可在40 min内最大限度的回收高纯度核酸。提取的DNA纯度高,质量稳定可靠,可适用于各种下游应用实验,如酶切、PCR等实验。

试剂盒组分

编号

组分名称

18815ES08

5 T)

18815ES50

50 T)

18815ES70

200 T)

18815-A

研磨管S1 (Bead Tube S1)

5 个

50 个

200 个

18815-B

DNA吸附柱 (MolPure® DNA Column S1)

5 个

50 个

200 个

18815-C

2 mL收集管 (2 mL Collection Tube S1)

5 个

50 个

200 个

18815-D

缓冲液SP (SP Buffer S1)

5 mL

50 mL

200 mL

18815-E

裂解液LB (LB Buffer S1)

0.6 mL

6 mL

24 mL

18815-F

缓冲液RS* (RS Buffer S1*)

3.5 mL

35 mL

140 mL

18815-G

去蛋白液PL (PL Buffer S1)

1.3 mL

13 mL

52 mL

18815-H

结合液BD (BD Buffer S1)

1.5 mL

15 mL

60 mL

18815-I

漂洗液W* (Wash Buffer*)

1.3 mL

13 mL

50 mL

18815-J

洗脱液 (Elution Buffer)

1 mL

10 mL

20 mL

运输与保存方法

室温运输,室温保存,有效期12个月

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货号

规格

Hieff NGS® OnePot II DNA Library Prep Kit for IlluminaHOT

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Hieff Clone® 一步法快速克隆试剂盒HOT

10911ES20

20 T

Hieff Clone® 多片段一步法快速克隆试剂盒HOT

10912ES10

10 T

Top10化学感受态细胞HOT

11801ES80

10×100 μL

11801ES92

100×100 μL

DH5α化学感受态细胞HOT

11802ES80

10×100 μL

11802ES92

100×100 μL

Hieff Canace® Gold 高保真DNA聚合酶HOT

10148ES60

100 U

10148ES76

500 U

10148ES80

1000 U

2×Hieff Canace® Gold 高保真酶预混液HOT

10149ES03

1 mL

10149ES08

5 mL

YeaRed核酸染料(10,000× 水溶液)HOT

10202ES76

500 μL

Hieff Mut 定点突变试剂盒

11003ES10

10 T

Hieff Mut 多点突变试剂盒

11004ES10

10 T

HB210809

Q:试剂盒提取得到的 DNA,用于 PCR 实验,扩增无条带?

A:可能是提取产量低、DNA 出现降解或纯度低。DNA 提取实验包括样本预处理及DNA 提取两个环节,涉及到提取材料的新鲜程度、样本裂解-核酸的释放方式、柱结合能力等多个关键点。下面将可能的原因及解决方案总结如下:

土壤DNA提取试剂盒 土壤核酸提取试剂盒|MolPure® Soil DNA Kit

土壤DNA提取试剂盒 土壤核酸提取试剂盒|MolPure® Soil DNA Kit

暂无内容

MolPure® Soil DNA Kit适用于各类土壤样品中核酸的提取。样本预处理采用陶瓷珠和二氧化硅颗粒混合而成的玻璃珠,可有效处理真细菌孢子和内生孢子,革兰氏阳性细菌,酵母,藻类,线虫和真菌等土壤中的各类微生物。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料,配合本公司独特的裂解液配方可以可在40 min内最大限度的回收高纯度核酸。提取的DNA纯度高,质量稳定可靠,可适用于各种下游应用实验,如酶切、PCR等实验。

试剂盒组分

编号

组分名称

18815ES08

5 T)

18815ES50

50 T)

18815ES70

200 T)

18815-A

研磨管S1 (Bead Tube S1)

5 个

50 个

200 个

18815-B

DNA吸附柱 (MolPure® DNA Column S1)

5 个

50 个

200 个

18815-C

2 mL收集管 (2 mL Collection Tube S1)

5 个

50 个

200 个

18815-D

缓冲液SP (SP Buffer S1)

5 mL

50 mL

200 mL

18815-E

裂解液LB (LB Buffer S1)

0.6 mL

6 mL

24 mL

18815-F

缓冲液RS* (RS Buffer S1*)

3.5 mL

35 mL

140 mL

18815-G

去蛋白液PL (PL Buffer S1)

1.3 mL

13 mL

52 mL

18815-H

结合液BD (BD Buffer S1)

1.5 mL

15 mL

60 mL

18815-I

漂洗液W* (Wash Buffer*)

1.3 mL

13 mL

50 mL

18815-J

洗脱液 (Elution Buffer)

1 mL

10 mL

20 mL

运输与保存方法

室温运输,室温保存,有效期12个月

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产品名称

货号

规格

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HB210809

Q:试剂盒提取得到的 DNA,用于 PCR 实验,扩增无条带?

A:可能是提取产量低、DNA 出现降解或纯度低。DNA 提取实验包括样本预处理及DNA 提取两个环节,涉及到提取材料的新鲜程度、样本裂解-核酸的释放方式、柱结合能力等多个关键点。下面将可能的原因及解决方案总结如下:

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单链DNA(ssDNA)荧光定量检测试剂盒 ssDNA Assay Kit

单链DNA(ssDNA)荧光定量检测试剂盒 ssDNA Assay Kit

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

qubit试剂搭配酶标仪操作流程

 

产品描述

ssDNA Assay Kit 是一种简便、灵敏、精确的单链 DNA(ssDNA)荧光定量检测试剂盒,在 1~200 ng 区间具有良好的线性关系。本试剂盒包含荧光检测试剂、缓冲液及相关的 ssDNA 标准品,使用前先将荧光检测试剂用缓冲液稀释成工作液,然后加入待测 ssDNA 样品,即可使用荧光酶标仪或 Qubit荧光仪进行读数。试剂盒对单链 DNA 的选择度并不高于双链DNA,但它对常规的污染物如蛋白质、盐类物质、洗涤剂等具有较好的耐受性。

 

产品组分

编号

组分名称

浓度

12645ES60

12645ES76

12645-A

ssDNA Reagent

200× in DMSO

250 μL

1.25 mL

12645-B

ssDNA Buffer

Not applicable

50 mL

250ml

12645-C

ssDNA Standard 1

0 ng/μL in TE buffer

1 mL

5×1 mL

12645-D

ssDNA Standard 2

20 ng/μL in TE buffer

1 mL

5×1 mL

 

运输和保存

冰袋运输,2-8℃避光保存有效期1年,请注意避免反复冻融。

 

注意事项

  1. 特别注意:ssDNA Reagent在2-8℃储存条件下为结冰状态,使用时提前放置室温解冻,务必确认完全溶解,充分混匀后再使用;若有沉淀物,可将该试剂至于 37℃水浴锅中温育, 并轻柔混匀直到沉淀物完全溶解;
  2. 试剂盒对单链 DNA 的选择度并不高于双链DNA,待检样品应避免双链DNA污染;
  3. 检测试剂ssDNA Buffer略起泡,使用时轻柔震荡或颠倒混匀,避免剧烈震荡;
  4. 荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭;
  5. 对于检测试剂和ssDNA标准品,每次使用前轻柔震荡或上下颠倒数次后瞬时离心数秒(请勿涡旋振荡);
  6. 为保证定量结果的精确,请使用校准后的移液器操作,样品浓度较低时请增大待测样品投入体积;
  7. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作;
  8. 本产品仅用作科研用途!

 

实验步骤

使用Qubit荧光仪进行ssDNA定量检测分析

单链DNA(ssDNA)荧光定量检测试剂盒 ssDNA Assay Kit

  1. 实验准备
  1. 使用前,将试剂盒中的各组分恢复至室温(室温放置约半小时),检查ssDNA Reagent(组分A)是否有沉淀,若有沉淀物,可将该试剂至于37℃水浴锅中温育,并轻柔混匀直至沉淀物完全溶解;
  2. 准备足够量0.5 mL PCR薄壁管并标注。请勿在PCR管侧壁标注,以免影响荧光信号采集。推荐使用本公司Qubit专用检测管货号83509ES
  1. 配制检测工作液

在避光塑料容器中,使用ssDNA Buffer按比例将适量ssDNA Reagent稀释至1×(例:取1 μL ssDNA Reagent,加入199 μL ssDNA Buffer),上下颠倒混匀。工作液现用现配,每次配制检测工作液时要使用洁净的容器;

  1. 配制待检样品
  1. 配制待检标准品1和标准品2:取190 μL检测工作液至标准品PCR管中,分别加入10 μL ssDNA Standard 1和ssDNA Standard 2至相应标记的标准品PCR管中,轻柔涡旋振荡2-3 sec,尽量避免气泡产生,瞬时离心数秒;
  2. 配制待检样品:取180-199 μL检测工作液至样本PCR管中,分别加入20-1 μL待检样本,使PCR管中每个样本终体积为200 μL,轻轻涡旋振荡2-3 sec,尽量避免气泡产生;
  1. 检测
  1. 将所有待检PCR管置于室温避光孵育2 min;瞬离收集管壁上液体。
  2. 按照Qubit荧光仪的操作说明,选择ssDNA检测程序,使用待检标准品校正荧光曲线后进行待检样品的浓度测定。

附表1

污染物对ssDNA定量检测试剂盒检测结果的影响

污染物

样品检测时浓度

10 µL样品中的浓度

检测结果

Proteins

牛血清白蛋白

50 mg/mL

1 mg/mL

OK

Salts

氯化钠

2.5 mM

50 mM

OK

氯化镁

0.1 mM

2 mM

OK

醋酸钠

1 mM

20 mM

OK

醋酸铵

1 mM

20 mM

OK

Organic Solvents

乙醇

0.5%

10%

OK

氯仿

0.1%

2%

OK

苯酚

0.01%

0.2%

OK

Detergents

Triton X-100

0.005%

0.1%

OK

 

HB230412

 

单链DNA(ssDNA)荧光定量检测试剂盒 ssDNA Assay Kit

暂无内容

单链DNA(ssDNA)荧光定量检测试剂盒 ssDNA Assay Kit

暂无内容

qubit试剂搭配酶标仪操作流程

 

产品描述

ssDNA Assay Kit 是一种简便、灵敏、精确的单链 DNA(ssDNA)荧光定量检测试剂盒,在 1~200 ng 区间具有良好的线性关系。本试剂盒包含荧光检测试剂、缓冲液及相关的 ssDNA 标准品,使用前先将荧光检测试剂用缓冲液稀释成工作液,然后加入待测 ssDNA 样品,即可使用荧光酶标仪或 Qubit荧光仪进行读数。试剂盒对单链 DNA 的选择度并不高于双链DNA,但它对常规的污染物如蛋白质、盐类物质、洗涤剂等具有较好的耐受性。

 

产品组分

编号

组分名称

浓度

12645ES60

12645ES76

12645-A

ssDNA Reagent

200× in DMSO

250 μL

1.25 mL

12645-B

ssDNA Buffer

Not applicable

50 mL

250ml

12645-C

ssDNA Standard 1

0 ng/μL in TE buffer

1 mL

5×1 mL

12645-D

ssDNA Standard 2

20 ng/μL in TE buffer

1 mL

5×1 mL

 

运输和保存

冰袋运输,2-8℃避光保存有效期1年,请注意避免反复冻融。

 

注意事项

  1. 特别注意:ssDNA Reagent在2-8℃储存条件下为结冰状态,使用时提前放置室温解冻,务必确认完全溶解,充分混匀后再使用;若有沉淀物,可将该试剂至于 37℃水浴锅中温育, 并轻柔混匀直到沉淀物完全溶解;
  2. 试剂盒对单链 DNA 的选择度并不高于双链DNA,待检样品应避免双链DNA污染;
  3. 检测试剂ssDNA Buffer略起泡,使用时轻柔震荡或颠倒混匀,避免剧烈震荡;
  4. 荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭;
  5. 对于检测试剂和ssDNA标准品,每次使用前轻柔震荡或上下颠倒数次后瞬时离心数秒(请勿涡旋振荡);
  6. 为保证定量结果的精确,请使用校准后的移液器操作,样品浓度较低时请增大待测样品投入体积;
  7. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作;
  8. 本产品仅用作科研用途!

 

实验步骤

使用Qubit荧光仪进行ssDNA定量检测分析

单链DNA(ssDNA)荧光定量检测试剂盒 ssDNA Assay Kit

  1. 实验准备
  1. 使用前,将试剂盒中的各组分恢复至室温(室温放置约半小时),检查ssDNA Reagent(组分A)是否有沉淀,若有沉淀物,可将该试剂至于37℃水浴锅中温育,并轻柔混匀直至沉淀物完全溶解;
  2. 准备足够量0.5 mL PCR薄壁管并标注。请勿在PCR管侧壁标注,以免影响荧光信号采集。推荐使用本公司Qubit专用检测管货号83509ES
  1. 配制检测工作液

在避光塑料容器中,使用ssDNA Buffer按比例将适量ssDNA Reagent稀释至1×(例:取1 μL ssDNA Reagent,加入199 μL ssDNA Buffer),上下颠倒混匀。工作液现用现配,每次配制检测工作液时要使用洁净的容器;

  1. 配制待检样品
  1. 配制待检标准品1和标准品2:取190 μL检测工作液至标准品PCR管中,分别加入10 μL ssDNA Standard 1和ssDNA Standard 2至相应标记的标准品PCR管中,轻柔涡旋振荡2-3 sec,尽量避免气泡产生,瞬时离心数秒;
  2. 配制待检样品:取180-199 μL检测工作液至样本PCR管中,分别加入20-1 μL待检样本,使PCR管中每个样本终体积为200 μL,轻轻涡旋振荡2-3 sec,尽量避免气泡产生;
  1. 检测
  1. 将所有待检PCR管置于室温避光孵育2 min;瞬离收集管壁上液体。
  2. 按照Qubit荧光仪的操作说明,选择ssDNA检测程序,使用待检标准品校正荧光曲线后进行待检样品的浓度测定。

附表1

污染物对ssDNA定量检测试剂盒检测结果的影响

污染物

样品检测时浓度

10 µL样品中的浓度

检测结果

Proteins

牛血清白蛋白

50 mg/mL

1 mg/mL

OK

Salts

氯化钠

2.5 mM

50 mM

OK

氯化镁

0.1 mM

2 mM

OK

醋酸钠

1 mM

20 mM

OK

醋酸铵

1 mM

20 mM

OK

Organic Solvents

乙醇

0.5%

10%

OK

氯仿

0.1%

2%

OK

苯酚

0.01%

0.2%

OK

Detergents

Triton X-100

0.005%

0.1%

OK

 

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