Strep(Ⅱ)标签蛋白琼脂糖纯化树脂|Streptactin Agarose Resin 4FF
产品说明书
FAQ
COA
已发表文献
Strep-Tag II为8个氨基酸的小标签（WSHPQFEK），由于标签小，仅为1.06 kDa左右，不影响融合后蛋白质的结构和功能，因此无需去除该标签。其特异性高，单步纯化纯度高，纯化条件温和，蛋白两端均可融合等突出特点迅速得到了广泛应用。Twin Strep-tag II是一个顺序排列的两个Strep-tag II序列（通过内部氨基酸连接），该标签能够像Strep-tag II一样进行温和、快速的纯化。
Streptactin 是最稳定的蛋白之一，其偶联至高度交联的 4%琼脂糖微球上，可用于各种表达系统，包括杆状病毒、哺乳动物细胞、酵母和细菌中含有Strep-Tag II标签蛋白纯化，同时该树脂也可用于 Twin Strep-Tag II 标签纯化。
产品性质
|
基质 |
高度交联的4%琼脂糖微球 |
|
配体 |
Streptactin |
|
粒径 |
45-165 µm |
|
载量 |
3-5 mg Twin Strep-tag II蛋白/mL 介质 |
|
最大流速 |
300cm/h |
|
储存缓冲液 |
含20%乙醇的1×PBS |
运输和保存方法
冰袋运输。2~8℃保存，有效期2年。
注意事项
1.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2.本产品仅作科研用途！
使用方法
1 缓冲液的准备
所用水和缓冲液在使用之前建议用 0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜过滤。
平衡/洗杂液: 100 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, pH 8.0
或PBS：50 mM sodium phosphate,280 mM NaCl, 6 mM potassium chloride, pH7.4。
洗脱液: 在平衡/洗杂液中添加2.5 mM的脱硫生物素或D-生物素混匀即可。
再生液：1 M NaOH或平衡液中加入1 mM HABA。
注：D-生物素与Streptactin结合紧密，高浓度氢氧化钠清洗后载量只能达到初始载量的50%左右。
2 样品准备
样品在上样前建议用 0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜过滤，防止堵塞柱子。
3样品纯化
3.1重力柱纯化
3.1.1装柱
1）取一支空柱，将下垫片压制柱底部并压实，用去离子水冲洗垫片，待水从下出口流出后马上关闭下出口。
2）将树脂悬浮起来，用枪取适量浆液加入柱中（保存液与填料比是 1：1），打开下出口流干保护液。
3）加入适量去离子水润洗柱料，待柱料流干后关闭下出口。
4）装入上垫片，确保垫片与柱料无空隙，注意不可用力要垫片，防止损坏柱料。
3.1.2 平衡：用5倍柱体积的平衡/洗杂液进行平衡，使填料处于与目的蛋白相同缓冲体系下。
3.1.3 上样：将样品加入平衡好的柱子中，样品保留至少2min,保证样品和介质充分接触，可以多次上样增加结合效率。
【注】注意收集流出液，用于后续SDS-PAGE检测蛋白的结合情况。
3.1. 4 平衡/洗杂：用10倍柱体积的平衡/洗杂液进行洗杂，去除非特异性结合的杂蛋白，收集洗杂液。
3.1. 5 洗脱：再用5倍柱体积的洗脱液进行洗脱目的蛋白，分管收集。
3.2中压层析柱纯化
3.2.1装柱
1）用去离子水冲洗层析柱底筛板与接头，确保柱底筛板上无气泡，关闭柱底出口，并在柱底部留出 1~2 cm 的去离子水。
2）将树脂悬浮起来，小心的将浆液连续地倒入层析柱中。用玻璃棒沿着柱壁倒入浆液可减少气泡的产生。
3）打开层析柱底部出口，开启泵，使其在设定的流速下进行。最初应让缓冲液缓慢流过层析柱，然后缓慢增加至最终流
速，这样可避免液压对所形成柱床的冲击，也可以避免柱床形成的不均匀。如果达不到推荐的压力或流速，可以用你所使用
泵的最大流速，这样也可以得到一个很好的装填效果。当柱床高度稳定后，在最后的装柱流速下至少再上3倍柱床体积的去离子水，标上柱床高度。
【注】在随后的色谱程序中，不要超过最大装柱流速的 75%。
3.2.2 平衡：使用至少 5 倍柱床体积的平衡/洗杂液平衡色谱柱。
3.2.3 上样：利用泵或样品环上样。
注意:样品的粘度增加使得即使上样体积很少，也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的
样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。
3.2. 4 平衡/洗杂：用平衡/洗杂液冲洗柱子，直到紫外吸收达到一个稳定的基线（一般至少 10~15 个柱体积）。
3.2. 5 洗脱：使用 5~10 倍柱体积的洗脱液洗脱，收集洗脱液，即目的蛋白组分。
4 填料再生和清洗
4.1 再生
4.1.1 洗脱剂为脱硫生物素
1）5倍柱体积的去离子水清洗柱子；
2）15倍柱体积的1 mM HABA的平衡液再生；
3）30 倍柱体积平衡液清洗；
4.1.2 洗脱剂为D-生物素
1）5倍柱体积的去离子水清洗柱子；
2）15倍柱体积的1 M NaOH再生；
3）30 倍柱体积平衡液清洗；
4.2 保存
填料再生清洗后保存在等体积的保护液中，2~8℃保存。
附表1 Streptactin Agarose Resin 4FF试剂耐受情况
|
试剂种类 |
浓度 |
|
还原剂 |
50 mM DTT 50 mM β-mercaptoethanol |
|
去污剂 |
2% TritonTM X-100(nonionic) 2% TweenTM20(nonionic) 0.1% CHAPS (zwitterionic) |
|
其他类 |
2 M (NH4)2SO4 1 M CaCl2 |
HB230215
Strep-Tag II为8个氨基酸的小标签（WSHPQFEK），由于标签小，仅为1.06 kDa左右，不影响融合后蛋白质的结构和功能，因此无需去除该标签。其特异性高，单步纯化纯度高，纯化条件温和，蛋白两端均可融合等突出特点迅速得到了广泛应用。Twin Strep-tag II是一个顺序排列的两个Strep-tag II序列（通过内部氨基酸连接），该标签能够像Strep-tag II一样进行温和、快速的纯化。
Streptactin 是最稳定的蛋白之一，其偶联至高度交联的 4%琼脂糖微球上，可用于各种表达系统，包括杆状病毒、哺乳动物细胞、酵母和细菌中含有Strep-Tag II标签蛋白纯化，同时该树脂也可用于 Twin Strep-Tag II 标签纯化。
产品性质
|
基质 |
高度交联的4%琼脂糖微球 |
|
配体 |
Streptactin |
|
粒径 |
45-165 µm |
|
载量 |
3-5 mg Twin Strep-tag II蛋白/mL 介质 |
|
最大流速 |
300cm/h |
|
储存缓冲液 |
含20%乙醇的1×PBS |
运输和保存方法
冰袋运输。2~8℃保存，有效期2年。
注意事项
1.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2.本产品仅作科研用途！
使用方法
1 缓冲液的准备
所用水和缓冲液在使用之前建议用 0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜过滤。
平衡/洗杂液: 100 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, pH 8.0
或PBS：50 mM sodium phosphate,280 mM NaCl, 6 mM potassium chloride, pH7.4。
洗脱液: 在平衡/洗杂液中添加2.5 mM的脱硫生物素或D-生物素混匀即可。
再生液：1 M NaOH或平衡液中加入1 mM HABA。
注：D-生物素与Streptactin结合紧密，高浓度氢氧化钠清洗后载量只能达到初始载量的50%左右。
2 样品准备
样品在上样前建议用 0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜过滤，防止堵塞柱子。
3样品纯化
3.1重力柱纯化
3.1.1装柱
1）取一支空柱，将下垫片压制柱底部并压实，用去离子水冲洗垫片，待水从下出口流出后马上关闭下出口。
2）将树脂悬浮起来，用枪取适量浆液加入柱中（保存液与填料比是 1：1），打开下出口流干保护液。
3）加入适量去离子水润洗柱料，待柱料流干后关闭下出口。
4）装入上垫片，确保垫片与柱料无空隙，注意不可用力要垫片，防止损坏柱料。
3.1.2 平衡：用5倍柱体积的平衡/洗杂液进行平衡，使填料处于与目的蛋白相同缓冲体系下。
3.1.3 上样：将样品加入平衡好的柱子中，样品保留至少2min,保证样品和介质充分接触，可以多次上样增加结合效率。
【注】注意收集流出液，用于后续SDS-PAGE检测蛋白的结合情况。
3.1. 4 平衡/洗杂：用10倍柱体积的平衡/洗杂液进行洗杂，去除非特异性结合的杂蛋白，收集洗杂液。
3.1. 5 洗脱：再用5倍柱体积的洗脱液进行洗脱目的蛋白，分管收集。
3.2中压层析柱纯化
3.2.1装柱
1）用去离子水冲洗层析柱底筛板与接头，确保柱底筛板上无气泡，关闭柱底出口，并在柱底部留出 1~2 cm 的去离子水。
2）将树脂悬浮起来，小心的将浆液连续地倒入层析柱中。用玻璃棒沿着柱壁倒入浆液可减少气泡的产生。
3）打开层析柱底部出口，开启泵，使其在设定的流速下进行。最初应让缓冲液缓慢流过层析柱，然后缓慢增加至最终流
速，这样可避免液压对所形成柱床的冲击，也可以避免柱床形成的不均匀。如果达不到推荐的压力或流速，可以用你所使用
泵的最大流速，这样也可以得到一个很好的装填效果。当柱床高度稳定后，在最后的装柱流速下至少再上3倍柱床体积的去离子水，标上柱床高度。
【注】在随后的色谱程序中，不要超过最大装柱流速的 75%。
3.2.2 平衡：使用至少 5 倍柱床体积的平衡/洗杂液平衡色谱柱。
3.2.3 上样：利用泵或样品环上样。
注意:样品的粘度增加使得即使上样体积很少，也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的
样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。
3.2. 4 平衡/洗杂：用平衡/洗杂液冲洗柱子，直到紫外吸收达到一个稳定的基线（一般至少 10~15 个柱体积）。
3.2. 5 洗脱：使用 5~10 倍柱体积的洗脱液洗脱，收集洗脱液，即目的蛋白组分。
4 填料再生和清洗
4.1 再生
4.1.1 洗脱剂为脱硫生物素
1）5倍柱体积的去离子水清洗柱子；
2）15倍柱体积的1 mM HABA的平衡液再生；
3）30 倍柱体积平衡液清洗；
4.1.2 洗脱剂为D-生物素
1）5倍柱体积的去离子水清洗柱子；
2）15倍柱体积的1 M NaOH再生；
3）30 倍柱体积平衡液清洗；
4.2 保存
填料再生清洗后保存在等体积的保护液中，2~8℃保存。
附表1 Streptactin Agarose Resin 4FF试剂耐受情况
|
试剂种类 |
浓度 |
|
还原剂 |
50 mM DTT 50 mM β-mercaptoethanol |
|
去污剂 |
2% TritonTM X-100(nonionic) 2% TweenTM20(nonionic) 0.1% CHAPS (zwitterionic) |
|
其他类 |
2 M (NH4)2SO4 1 M CaCl2 |
HB230215
Q：用脱硫生物素洗脱，除了用HABA再生以外，还可以用氢氧化钠再生吗？可以重复使用几次？
A：使用脱硫生物素作为洗脱液，1 mM HABA或0.1M氢氧化钠再生10次左右。
Q：这个产品可以用D-生物素洗脱吗？
A: 可以用，但是用D-生物素洗脱后必须用高浓度氢氧化钠再生，重复使用时载量会明显变低。所以如果填料需要重复使用就必须用脱硫生物素洗脱。
Q：这个产品属于第几代？
A: 我们产品属于第二代。第三代填料的洗脱液可用D-生物素，能在低浓度生物素或者变性等特殊条件下结合Strep标签蛋白，再生方法可用氢氧化钠再生且重复使用效果较好。第三代我们目前没有。
Q：这个产品耐压多少？
A: 填料耐压0.3MPa。
Q：如果我的Strep-Tag II 标签是位于我融合蛋白的中间位置 可以用这个树脂吗？
A: 要看标签的暴露情况
Q：如果用蛋白洗脱不下来，那怎么办?
A: 在洗脱液中加终浓度0.1%-0.5%Triton X-100 ，室温混合孵育30min。
Q：一个streptactin beads上大概有多少个strep-tag II 的结合位点？我想知道这一个beads上能负载多少个蛋白？
A: 1ml微球上的strep-tag II结合位点约为1.8×10^17个，1ml填料中的微球颗粒数约为1×10^6
Q：用HABA再生后填料变色？并洗不白？如下图
A: 这个是HABA和配体结合，可以平衡后直接上样，strep标签蛋白会将HABA竞争下来。
暂无内容