A尾法miRNA第一链cDNA反转录试剂盒|miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit

发表于2024年3月24日由上海金畔生物科技有限公司

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

microRNA是一类被广泛关注的非编码RNA，长度为22 nt左右，对植物和动物的基因表达有着非常重要的调控作用。本试剂盒采用加A尾法来进行miRNA第一链cDNA的反转录，产品中的2×Hifair^® miRNA RT buffer包含了miRNA加A尾反应和逆转录反应的所有原料和引物，并经过精心优化，可保证miRNA 3'末端的Poly(A)修饰过程和逆转录过程同时高效进行。后续qPCR中只需设计特异性正向引物，配合试剂盒中的通用反向引物，即可对样本中的miRNA进行检测。此外，试剂盒中提供了人、大鼠、小鼠通用的 U6 内参上下游引物，可在宽广的区域内得到良好的标准曲线。

本产品推荐与本公司的Hieff^® miRNA Universal qPCR SYBR Master Mix（Cat#11171）配套使用，以获得最优的实验结果。

产品组分

组分编号	组分名称	产品编号/规格
组分编号	组分名称	11148ES10(10 T)	11148ES50(50 T)
11148-A	Hifair^® miRNA RT enzyme mix	17.5 μL	87.5 μL
11148-B	2×Hifair^® miRNA RT buffer	50 μL	250 μL
11148-C	RNase-free H₂O	2 mL	10 mL
11148-D	Universal Reverse Primer (10 μM)	800 μL	4 mL
11148-E	U6 Forward Primer (10 μM)	100 μL	500 μL
11148-F	U6 Reverse Primer (10 μM)	100 μL	500 μL

运输与保存方式

冰袋运输。-20℃保存，有效期1年。

操作步骤

一、体系配制

室温融化Hifair^® miRNA RT enzyme mix和2×Hifair^® miRNA RT buffer后轻微颠倒混匀，置于冰上并按下表配置反应体系：

组分	体积 (μL)	终浓度
2×Hifair^® miRNA RT buffer	5	1×
Hifair^® miRNA RT enzyme mix	1.75	–
RNA*	–	X
RNase-free H₂O	Up to 10	–

*总RNA及提取的miRNA的浓度范围10 pg-2 μg，合成的miRNA拷贝数最低可达60 copies，投入体积不超过3.25 μL。

二、逆转录程序

移液器轻轻混匀上述配制的反应液，按下表程序进行miRNA的逆转录反应：

反应温度	反应时间	备注
37℃	50 min	miRNA加A尾及反转录过程
85℃	5 sec	酶失活过程

【注】：逆转录产物可直接进行下游qPCR检测。为避免逆转录体系对qPCR反应的抑制，可将产物稀释10-1000倍后使用。若短时间内不进行下游实验，可放置于-20℃保存。若长期保存，建议分装后，于-80°C保存，避免反复冻融。

注意事项

1）使用前，将冻存的各组分充分融解并轻轻混匀后使用。

2）实验时，请使用无RNase污染的耗材，避免不必要的损失影响实验结果。

3）本产品避免反复冻融，配制时应避免强光照射。

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

5）本产品仅作科研用途！

HB221202

本产品推荐与本公司的Hieff^® miRNA Universal qPCR SYBR Master Mix（Cat#11171）配套使用，以获得最优的实验结果。

产品组分

组分编号	组分名称	产品编号/规格
组分编号	组分名称	11148ES10(10 T)	11148ES50(50 T)
11148-A	Hifair^® miRNA RT enzyme mix	17.5 μL	87.5 μL
11148-B	2×Hifair^® miRNA RT buffer	50 μL	250 μL
11148-C	RNase-free H₂O	2 mL	10 mL
11148-D	Universal Reverse Primer (10 μM)	800 μL	4 mL
11148-E	U6 Forward Primer (10 μM)	100 μL	500 μL
11148-F	U6 Reverse Primer (10 μM)	100 μL	500 μL

运输与保存方式

冰袋运输。-20℃保存，有效期1年。

操作步骤

一、体系配制

室温融化Hifair^® miRNA RT enzyme mix和2×Hifair^® miRNA RT buffer后轻微颠倒混匀，置于冰上并按下表配置反应体系：

组分	体积 (μL)	终浓度
2×Hifair^® miRNA RT buffer	5	1×
Hifair^® miRNA RT enzyme mix	1.75	–
RNA*	–	X
RNase-free H₂O	Up to 10	–

*总RNA及提取的miRNA的浓度范围10 pg-2 μg，合成的miRNA拷贝数最低可达60 copies，投入体积不超过3.25 μL。

二、逆转录程序

移液器轻轻混匀上述配制的反应液，按下表程序进行miRNA的逆转录反应：

反应温度	反应时间	备注
37℃	50 min	miRNA加A尾及反转录过程
85℃	5 sec	酶失活过程

注意事项

1）使用前，将冻存的各组分充分融解并轻轻混匀后使用。

2）实验时，请使用无RNase污染的耗材，避免不必要的损失影响实验结果。

3）本产品避免反复冻融，配制时应避免强光照射。

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

5）本产品仅作科研用途！

HB221202

Q: 试剂盒中的下游通用引物序列是什么？

A: 下游通用引物是保密的。当前市面上常见到的加A法反转录试剂中，加上的带A序列是不一样的，均是根据自己的加尾酶设计并完善的，出于专利保护所以不做公开。

Q: 试剂中的U6引物和通用反向引物是干什么用的？
A: U6是miRNA的内参，提供的引物可用于后续荧光定量检测。
通用反向引物可以让您后续qPCR中，只需设计特异性正向引物，配合试剂盒中的通用反向引物，即可对样本中的miRNA进行检测。
Q: 后续做荧光定量，必须搭配11171ES吗？可以用普通的荧光定量试剂吗？
A: 市面上常见的普通荧光定量大多只能满足80-300bp的片段，短片段的扩增不了。专门的miRNA 荧光定量试剂可以保证短片段产物的合成。

[1] Huang G, Chen J, Liu J, Zhang X, Duan H, Fang Q. MiR-935/HIF1α Feedback Loop Inhibits the Proliferation and Invasiveness of Glioma. Onco Targets Ther. 2020;13:10817-10828. Published 2020 Oct 23. doi:10.2147/OTT.S244409(IF:4.147)
[2] Li H, Pan R, Lu Q, et al. MicroRNA‑145‑5p inhibits osteosarcoma cell proliferation by targeting E2F transcription factor 3. Int J Mol Med. 2020;45(5):1317-1326. doi:10.3892/ijmm.2020.4504(IF:4.101)

茎环法miRNA通用qPCR预混液|miRNA Universal qPCR SYBR Master Mix

发表于2024年3月24日由上海金畔生物科技有限公司

茎环法miRNA通用qPCR预混液|miRNA Universal qPCR SYBR Master Mix

产品说明书

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已发表文献

Hieff^® miRNA Universal qPCR SYBR Master Mix是2×实时定量PCR扩增的预混液，具有高灵敏度和高特异性的特点，同时，定量PCR可以在宽广的定量区域内获得良好的线性关系。核心组分Hieff^® miRNA Taq DNA聚合酶采用抗体法热启动，再配以优化的Buffer，可以有效抑制样品准备过程中引物退火导致的非特异性扩增。另外，预混液体系中添加了ROX Reference Dye，能够适用于不同qPCR仪器，配置反应体系时只需加入引物和模板即可进行扩增。

运输和保存方法

冰袋运输。-20℃可避光保存，有效期18个月。

本品避免反复冻融。产品中含有荧光染料 SYBR Green I，保存或配制反应体系时需避免强光照射。

注意事项

1）推荐与本公司Hifair^® III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus) (Cat#11139ES) 配套使用。

2）Master Mix组分在使用前都应充分震荡混匀，低速离心。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

4）本产品仅作科研用途！

反应体系

组分	体积（μL）
Hieff^® miRNA Universal qPCR SYBR Master Mix	10
Forward Primer (10 μM)	0.5
Reverse Primer (10 μM)	0.5
模板cDNA	x
ddH2O	to 20

【注】：使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。

a）引物浓度：通常引物终浓度为0.25 μM，也可以根据情况在0.1-1.0 μM之间进行调整。

b）模板浓度：如模板为未稀释 cDNA 原液，使用体积不应超过 qPCR 反应总体积的1/10。

c) 模板稀释：cDNA原液建议5-10倍稀释，最佳模板加入量以扩增得到的Ct值在20-30个循环为好。

d) 反应体系：推荐使用20 μL体系反应，以确保目的基因扩增的有效性和重复性。
e) 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。

反应程序

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	5 min	1
变性	95℃	10 sec	40
退火/延伸	60℃	30 sec*	40
熔解曲线阶段	仪器默认设置		1

【注】：a）退火温度和时间：请根据引物和目的基因的长度进行调整

b）荧光信号的采集（*）：请按照仪器使用说明书要求进行实验程序设置，几种常见仪器的时间设定如下：

20 sec：Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast

31 sec：Applied Biosystems 7300

32 sec：Applied Biosystems 7500

30 sec：BIO-Rad CFX 96

c）熔解曲线：仪器类型不同，熔解曲线采集程序不同，使用程序默认的熔解程序即可

结果分析

定量检测至少需要三个生物学重复，反应结束后需要确认扩增曲线的线形及平滑度，熔解曲线的峰形。

1) 扩增曲线：标准扩增曲线为S型。

Ct值落在20-32之间时，定量分析比较准确；

Ct值小于10，需要将稀释模板后，重新进行实验；

Ct值介于30-35之间时，需要提高模板浓度，或者增大反应体系的体积，以提高扩增效率，保证结果分析的准确性；

Ct值大于35时，检测结果无法定量分析基因的表达量，但可用于定性分析。

2) 熔解曲线：

熔解曲线单峰，表明反应特异性好可以进行定量结果分析；若熔解曲线出现双峰或者多峰，则不能进行定量分析。

若熔解曲线出现双峰的情况，可以通过DNA琼脂糖凝胶电泳进一步判断非目标峰是引物二聚体还是非特异性扩增。

如果是引物二聚体，建议降低引物浓度，或者重新设计扩增效率高的引物。

如果是非特异性扩增，请提高退火温度，或者重新设计更高特异性的引物。

相关产品

产品名称	产品编号	规格
Hifair^® III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus)	11139ES60	100 T
MolPure^® Cell/Tissue miRNA Kit 细胞/组织miRNA提取试剂盒	19331ES50	50 T
MolPure^® Serum/Plasma miRNA Kit 血清/血浆miRNA提取试剂盒	19332ES50	50 T
MolPure^® Cell/Tissue Total RNA Kit 细胞/组织总RNA提取试剂盒	19221ES50	50 T
Hieff UNICON^® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix	11184ES08	5 mL

HB211216

运输和保存方法

冰袋运输。-20℃可避光保存，有效期18个月。

本品避免反复冻融。产品中含有荧光染料 SYBR Green I，保存或配制反应体系时需避免强光照射。

注意事项

1）推荐与本公司Hifair^® III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus) (Cat#11139ES) 配套使用。

2）Master Mix组分在使用前都应充分震荡混匀，低速离心。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

4）本产品仅作科研用途！

反应体系

组分	体积（μL）
Hieff^® miRNA Universal qPCR SYBR Master Mix	10
Forward Primer (10 μM)	0.5
Reverse Primer (10 μM)	0.5
模板cDNA	x
ddH2O	to 20

【注】：使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。

a）引物浓度：通常引物终浓度为0.25 μM，也可以根据情况在0.1-1.0 μM之间进行调整。

b）模板浓度：如模板为未稀释 cDNA 原液，使用体积不应超过 qPCR 反应总体积的1/10。

c) 模板稀释：cDNA原液建议5-10倍稀释，最佳模板加入量以扩增得到的Ct值在20-30个循环为好。

反应程序

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	5 min	1
变性	95℃	10 sec	40
退火/延伸	60℃	30 sec*	40
熔解曲线阶段	仪器默认设置		1

【注】：a）退火温度和时间：请根据引物和目的基因的长度进行调整

b）荧光信号的采集（*）：请按照仪器使用说明书要求进行实验程序设置，几种常见仪器的时间设定如下：

20 sec：Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast

31 sec：Applied Biosystems 7300

32 sec：Applied Biosystems 7500

30 sec：BIO-Rad CFX 96

c）熔解曲线：仪器类型不同，熔解曲线采集程序不同，使用程序默认的熔解程序即可

结果分析

定量检测至少需要三个生物学重复，反应结束后需要确认扩增曲线的线形及平滑度，熔解曲线的峰形。

1) 扩增曲线：标准扩增曲线为S型。

Ct值落在20-32之间时，定量分析比较准确；

Ct值小于10，需要将稀释模板后，重新进行实验；

Ct值介于30-35之间时，需要提高模板浓度，或者增大反应体系的体积，以提高扩增效率，保证结果分析的准确性；

Ct值大于35时，检测结果无法定量分析基因的表达量，但可用于定性分析。

2) 熔解曲线：

熔解曲线单峰，表明反应特异性好可以进行定量结果分析；若熔解曲线出现双峰或者多峰，则不能进行定量分析。

若熔解曲线出现双峰的情况，可以通过DNA琼脂糖凝胶电泳进一步判断非目标峰是引物二聚体还是非特异性扩增。

如果是引物二聚体，建议降低引物浓度，或者重新设计扩增效率高的引物。

如果是非特异性扩增，请提高退火温度，或者重新设计更高特异性的引物。

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产品名称	产品编号	规格
Hifair^® III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus)	11139ES60	100 T
MolPure^® Cell/Tissue miRNA Kit 细胞/组织miRNA提取试剂盒	19331ES50	50 T
MolPure^® Serum/Plasma miRNA Kit 血清/血浆miRNA提取试剂盒	19332ES50	50 T
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Hieff UNICON^® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix	11184ES08	5 mL

HB211216

茎环法miRNA通用qPCR预混液|miRNA Universal qPCR SYBR Master Mix

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[1] Chen T, Lei S, Zeng Z, et al. MicroRNA‑137 suppresses the proliferation, migration and invasion of cholangiocarcinoma cells by targeting WNT2B. Int J Mol Med. 2020;45(3):886-896. doi:10.3892/ijmm.2020.4474(IF:4.101)

A尾法miRNA通用qPCR预混液|miRNA Universal qPCR SYBR Master Mix

发表于2024年3月23日由上海金畔生物科技有限公司

A尾法miRNA通用qPCR预混液|miRNA Universal qPCR SYBR Master Mix

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

microRNA是一类被广泛关注的非编码RNA，长度为22 nt左右，对植物和动物的基因表达有着非常重要的调控作用。本试剂盒采用SYBR^® Green I嵌合荧光法的原理进行miRNA荧光定量检测。本产品中的2×Hieff^®miRNA Universal qPCR SYBR Master Mix是专门为miRNA定量检测而研发的新一代预混形式的荧光定量PCR检测试剂，含有特殊的ROX Passive Reference Dye，适用于所有qPCR仪器，无需在不同的仪器上调整ROX的浓度，只需在配制反应体系时加入引物和模板即可进行扩增。DNA Polymerase采用化学修饰的热启动聚合酶，配合特殊的Buffer体系，使反应特异性更好，灵敏度更高，并能在更广的范围内进行准确定量。

本产品必须与本公司的Hifair^® miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit（加A法）(Cat#11148ES)配套使用，以获得最终的实验结果。

产品组分

组分编号	组分名称	产品规格
组分编号	组分名称	11171ES03 (20 μL×100 rxn)	11171ES08 (20 μL×500 rxn)
11171-A	2×Hieff^® miRNA Universal qPCR SYBR Master Mix	1 mL	5×1 mL
11171-B	RNase-free H₂O	2×1 mL	5×1 mL

运输与保存方式

冰袋运输。-20℃避光保存，有效期1年。

需自备的试剂及耗材

1）无核酸酶污染的枪头及离心管。

2）PCR上游引物（Forward Primer）。

Forward Primer设计原则

通常以成熟的miRNA序列为基础，将U替换成T。Tm值建议在65℃左右。可适当在引物的5’端添加若干个G或C碱基以增加Tm值，也可适当在5’或3’端去掉若干碱基以减少Tm值，注意避免引入二级结构。

注意事项

1）使用前，将冻存的各组分充分融解并轻轻混匀后使用。

2）实验时，请尽量使用无污染的耗材，避免污染。

3）本产品避免反复冻融，配制时应避免强光照射。

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

5）本产品仅作科研用途！

操作步骤

一、体系配制

1）将试剂放置室温下融化，使用前上下颠倒，轻轻混匀，并轻微离心后使用，避免起泡。

2）将试剂置于冰上，按照下表配制试剂。RNase-free H₂O可替换为其他用于分子生物学实验的无核酸酶水。

【注】：没有混匀试剂、使用振荡器混匀、未在冰上配置试剂等会导致反应性能下降。

3）荧光定量PCR体系配制

组分	体积 (μL)	体积 (μL)	终浓度
2×Hieff^®miRNA Universal qPCR SYBR Master Mix	10 μL	25 μL	1 ×
Forward Primer（自备）	X	X	400 nM
Reverse Primer (10 μM)	0.8 μL	2 μL	400 nM
cDNA	X	X	–
RNase-free H₂O	Up to 20 μL	Up to 50 μL	–

【注】：a) miRNA第一链cDNA的加入量不要超过qRT-PCR体积的1/10。高浓度cDNA易导致非特异扩增，可对cDNA适当稀释10-1000倍。

b) Reverse Primer (10 μM) 来源于试剂盒11148ES。由于专利的保密性，miRNA加A法反转录后，cDNA下游引物序列不同厂商之间存在差异，建议使用翌圣加A法反转录试剂盒11148ES，以保证最终的实验结果。

二、PCR反应程序设置

可参考以下两个程序进行定量PCR反应。

a. 荧光定量PCR常规扩增程序（两步法）

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	10 min	1
变性	95℃	15 sec	35-40
退火/延伸	60℃	20 sec	35-40
熔解曲线阶段	仪器默认设置		1

b. 荧光定量PCR快速扩增程序（两步法）

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	10 sec	1
变性	95℃	5 sec	40
退火/延伸	60℃	20 sec	40
熔解曲线阶段	仪器默认设置		1

【注】：

1）退火/延伸温度和时间可根据实验要求适当调整。

2）常规程序与快速程序根据实验仪器选择，例如：ABI QuantStudio 5等仪器可以进行快速程序设置，Bio-Rad CFX96等仪器不可设置快速程序，需要进行常规程序设置。

HB221202

本产品必须与本公司的Hifair^® miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit（加A法）(Cat#11148ES)配套使用，以获得最终的实验结果。

产品组分

组分编号	组分名称	产品规格
组分编号	组分名称	11171ES03 (20 μL×100 rxn)	11171ES08 (20 μL×500 rxn)
11171-A	2×Hieff^® miRNA Universal qPCR SYBR Master Mix	1 mL	5×1 mL
11171-B	RNase-free H₂O	2×1 mL	5×1 mL

运输与保存方式

冰袋运输。-20℃避光保存，有效期1年。

需自备的试剂及耗材

1）无核酸酶污染的枪头及离心管。

2）PCR上游引物（Forward Primer）。

Forward Primer设计原则

注意事项

1）使用前，将冻存的各组分充分融解并轻轻混匀后使用。

2）实验时，请尽量使用无污染的耗材，避免污染。

3）本产品避免反复冻融，配制时应避免强光照射。

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

5）本产品仅作科研用途！

操作步骤

一、体系配制

1）将试剂放置室温下融化，使用前上下颠倒，轻轻混匀，并轻微离心后使用，避免起泡。

2）将试剂置于冰上，按照下表配制试剂。RNase-free H₂O可替换为其他用于分子生物学实验的无核酸酶水。

【注】：没有混匀试剂、使用振荡器混匀、未在冰上配置试剂等会导致反应性能下降。

3）荧光定量PCR体系配制

组分	体积 (μL)	体积 (μL)	终浓度
2×Hieff^®miRNA Universal qPCR SYBR Master Mix	10 μL	25 μL	1 ×
Forward Primer（自备）	X	X	400 nM
Reverse Primer (10 μM)	0.8 μL	2 μL	400 nM
cDNA	X	X	–
RNase-free H₂O	Up to 20 μL	Up to 50 μL	–

【注】：a) miRNA第一链cDNA的加入量不要超过qRT-PCR体积的1/10。高浓度cDNA易导致非特异扩增，可对cDNA适当稀释10-1000倍。

二、PCR反应程序设置

可参考以下两个程序进行定量PCR反应。

a. 荧光定量PCR常规扩增程序（两步法）

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	10 min	1
变性	95℃	15 sec	35-40
退火/延伸	60℃	20 sec	35-40
熔解曲线阶段	仪器默认设置		1

b. 荧光定量PCR快速扩增程序（两步法）

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	10 sec	1
变性	95℃	5 sec	40
退火/延伸	60℃	20 sec	40
熔解曲线阶段	仪器默认设置		1

【注】：

1）退火/延伸温度和时间可根据实验要求适当调整。

HB221202

Q: 加A法搭配你们的哪一款逆转录试剂？
A: 推荐搭配11148ES
Q: 除了加A法，茎环法推荐哪款产品做逆转录和qPCR？
A: 茎环法逆转录推荐用11139ES搭配自己的茎环引物；qPCR推荐使用11170ES。
Q: 茎环法和加A法的区别是什么？

A: 茎环法和加A法都可以用于miRNA的反转录。

茎环法最大的特点是其逆转录和qPCR都是序列特异性的。但由于茎环引物的特异性，针对同一样本中不同的目的miRNA，需要配制不同的逆转录体系。简单来说，就是茎环法特异性更好，但需要设计茎环引物，并且一次逆转录只适用于一个miRNA。

加A法相对更简单一些，但它是将所有的miRNA反转，所以后续的qPCR的假阳性的可能性会更高一点。

A尾法miRNA通用qPCR预混液|miRNA Universal qPCR SYBR Master Mix

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siRNA/miRNA体外转染试剂|Hieff Trans® in vitro siRNA/miRNA Transfection Reagent

发表于2024年3月20日由上海金畔生物科技有限公司

siRNA/miRNA体外转染试剂|Hieff Trans® in vitro siRNA/miRNA Transfection Reagent

产品说明书

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已发表文献

产品描述
Hieff Trans^®siRNA/miRNA体外转染试剂是一种非脂质体PEI阳离子、两性分子转染试剂，为siRNA转染到哺乳动物细胞中而开发。适用于siRNA和miRNA的转染。这种转染试剂包裹siRNA或miRNA形成阳离子复合物，该复合物与细胞表面带负电的蛋白聚糖相互作用吸附在细胞表面，通过内吞进入细胞，形成内含体。该转染试剂具有质子海绵的作用，能够吸收溶酶体中的H⁺，质子的不断流入，导致复合体肿胀破裂，从而使外源siRNA或miRNA释放到细胞质中。

该产品可在广泛的细胞系中，实现1 nM的siRNA超过90%的表达效率，避免了脱靶效应。适用于多种细胞转染，包括Hela、MCF-7、HepG2、CHO等贴壁细胞；以及难以转染的悬浮细胞系，如K562或THP-1细胞，可达到80%的沉默效率；同时还包括一些原代细胞，原代人成纤维细胞和原代人肝细胞等，可达到80%的沉默效率。

运输与保存方法

冰袋（wet ice）运输。产品2-8 ℃保存，一年有效。不可冷冻！

注意事项

1）整个实验过程使用无RNA酶和无热原性的材料，如离心管、枪头、缓冲液。

2）转染前，确保siRNA是经过PAGE纯化和脱盐处理过的，高纯度的siRNA或者miRNA有助于获得较高的转染效率。

3）PEI阳离子转染试剂应该在2-8 ℃保存，要注意避免多次反复长时间开盖，否则可能会导致PEI挥发，降低转染效率。

4）转染前一天，确保接种贴壁细胞密度在30%-50%左右，对于一些小细胞和生长缓慢的细胞，接种密度可适当扩大2倍。

5）转染前，确保siRNA/miRNA基因沉默表达不会影响细胞活力。

6）该产品只适合体外转染，不能用于体内转染。

7）本产品仅作科研用途！

操作流程

一．贴壁细胞转染（以24孔板和转染1 nM siRNA为例，其他培养板加样体积请参考表1）
接种贴壁细胞

1.为了提高转染效率，建议在转染前一天接种细胞，接种细胞密度建议30%-50%左右，建议初次使用时设置梯度进行优化最佳使用量。

2.按照以下体系配制siRNA-PEI或miRNAPEI子核酸转染试剂阳离复合物：

1）对于每孔细胞，使用100 μL无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释8.4 ng siRNA (0.6 pmoles)，混匀。

2）立刻向100 μL的siRNA中加入2 μL的转染试剂，旋涡10秒，充分混匀。

3）在室温下孵育10 min，使得形成siRNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物。
【注】：孵育时间不要超过30min

4）在形成复合物过程中，移除细胞生长培养基，每孔中加入500 μL新鲜预热的完全培养基。

5）直接将100 µL siRNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物加入细胞中，摇动培养板，轻轻混匀。最终体积为600 µL ，siRNA终浓度为1 nM。

6）37 ℃，5% CO₂培养箱培养，直至目的基因表达。建议一般mRNA表达水平通常在24–72 h，蛋白表达水平在48-96 h。

siRNA/miRNA体外转染试剂|Hieff Trans® in vitro siRNA/miRNA Transfection Reagent

图1 转染贴壁细胞操作流程

【注】：由于靶基因、细胞类型、siRNA效价、靶mRNA的半衰期和靶蛋白的周转率等因素，均会影响siRNA的转染效率。建议选取siRNA浓度在1 nM到10 nM之间。转染试剂的体积应根据siRNA浓度和培养皿的大小进行调整，请参见下表1。

表1 siRNA终浓度为1 nM时，转染试剂、培养基的用量参考值

培养皿	siRNA物质的量(pmoles)	每孔siRNA的含量（ng）	siRNA转染试剂体积（µL）	形成PEI-siRNA复合物的体积（µL）	完全培养基的体积（含血清+双抗）	加入复合物后，细胞培养基总体积
96孔板	0.17	2.4	0.7-0.8	50	125 µL	175 µL
24孔板	0.6	8.6	1-3	100	500 µL	600 µL
12孔板	1.2	17	2-6	200	1 mL	1.2 mL
6孔板	2.2	31	4-12	200	2 mL	2.2 mL
25cm²培养瓶	4.4	62	10-20	400	4 mL	4.4 mL
75cm²培养瓶	10.5	147	30-50	500	10 mL	10.5 mL

表2 siRNA终浓度为10 – 50 nM时，转染试剂、培养基的用量参考值

培养皿	siRNA转染试剂体积（µL）	形成复合物的体积（无血清培养基）（µL）	完全培养基的体积（含血清+双抗）	加入复合物后，细胞总体积
96孔板	0.5-1.5	50	125 µL	175 µL
24孔板	2-4	100	500 µL	600 µL
12孔板	4-8	200	1 mL	1.2 mL
6孔板	8-16	200	2 mL	2.2 mL
25cm²培养瓶	15-25	400	4 mL	4.4 mL

二．悬浮细胞转染（以24孔板和转染5 nM siRNA为例，其他培养板加样体积请参考表4）
接种细胞

1.为了优化悬浮细胞转染条件，与贴壁细胞相比，需要降低悬浮细胞培养基的体积。根据培养皿大小和完整培养基的体积，推荐接种悬浮细胞的数量如下表3所示。

表3 转染当天，根据培养皿的大小，接种悬浮细胞数量参考值

培养皿	底面积(cm²)	每孔接种细胞悬浮液体积（μL）	转染当天接种细胞数
384孔板	0.1	25	5 ×10³~1×10⁴
96孔板	0.32	50	1×10⁴~ ×10⁴
24孔板	2	200	1×10⁵ ~ 2×10⁵
12孔板	4.5	500	2×10⁵ ~ 4×10⁵
6孔板	9.6	1000	5×10⁵ ~ 2×10⁶
25cm²培养瓶	25-28	2000	2×10⁶~ 5×10⁶

2.按照以下体系配制siRNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物：

1）对于每孔细胞，使用100 μL无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释21 ng siRNA (1.5 pmols)，混匀。

2）向100 μL的siRNA中加入4 μL的转染试剂，立刻旋涡10秒，充分混匀。

3）在室温孵育15 min，使得形成siRNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物。
【注】：孵育时间不要超过30 min

4）在每孔200 μL细胞悬浮液中，加入100 μL的siRNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物，轻轻混匀。最终体积为300 µL，siRNA终浓度为5 nM。

5）37 ℃，5% CO₂培养箱培养4-6 h后，再加入700 µL完全培养基，轻轻摇动培养板使其混匀。

6）继续放入培养箱中孵育，直至目的基因表达。建议一般mRNA表达水平通常在24–72 h，蛋白表达水平在48-96 h。

【注】：为了优化内源性基因沉默，建议选取siRNA浓度在5 nM到20 nM之间。转染试剂的体积应根据siRNA浓度和培养皿的大小进行调整，请参见下表4。

表4 siRNA浓度为5 nM时，在悬浮细胞中的参考值

培养皿	siRNA的浓度(pmoles)	每孔siRNA的含量（ng）	转染试剂体积（µL）	形成复合物培养基体积（µL）	悬浮细胞的体积	转染4-6h后另加入培养基的体积
384孔板	0.25	3.75	1 ± 0.5	25	25 µL	0 µL
96孔板	0.5	7.5	2 ± 1	50	50 µL	100 µL
24孔板	1.5	21	3 ± 2	100	200 µL	700 µL
12孔板	3.5	49	6 ± 4	200	500 µL	1 mL
6孔板	6	84	10 ± 8	200	1 mL	2 mL
25cm²培养瓶	12	168	15 ±10	400	2 mL	4 mL

表5 悬浮细胞中siRNA浓度、转染试剂的用量参考值

培养皿	siRNA的终浓度/孔（nM）	转染试剂的体积/孔（µL）
96孔板	1 ~ 20	1 ± 0.5
24孔板		2 ± 1
12孔板		3 ± 2
6孔板		10 ± 8
96孔板	20 ~ 50	1.5 ± 0.5
24孔板		3 ± 1
12孔板		5 ± 2
6孔板		15 ± 8

三．miRNA转染操作流程
该转染试剂也适合转染miRNA，转染贴壁细胞和悬浮细胞的具体操作请参考siRNA的操作流程。

HB220930

运输与保存方法

冰袋（wet ice）运输。产品2-8 ℃保存，一年有效。不可冷冻！

注意事项

1）整个实验过程使用无RNA酶和无热原性的材料，如离心管、枪头、缓冲液。

2）转染前，确保siRNA是经过PAGE纯化和脱盐处理过的，高纯度的siRNA或者miRNA有助于获得较高的转染效率。

3）PEI阳离子转染试剂应该在2-8 ℃保存，要注意避免多次反复长时间开盖，否则可能会导致PEI挥发，降低转染效率。

4）转染前一天，确保接种贴壁细胞密度在30%-50%左右，对于一些小细胞和生长缓慢的细胞，接种密度可适当扩大2倍。

5）转染前，确保siRNA/miRNA基因沉默表达不会影响细胞活力。

6）该产品只适合体外转染，不能用于体内转染。

7）本产品仅作科研用途！

操作流程

一．贴壁细胞转染（以24孔板和转染1 nM siRNA为例，其他培养板加样体积请参考表1）
接种贴壁细胞

1.为了提高转染效率，建议在转染前一天接种细胞，接种细胞密度建议30%-50%左右，建议初次使用时设置梯度进行优化最佳使用量。

2.按照以下体系配制siRNA-PEI或miRNAPEI子核酸转染试剂阳离复合物：

1）对于每孔细胞，使用100 μL无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释8.4 ng siRNA (0.6 pmoles)，混匀。

2）立刻向100 μL的siRNA中加入2 μL的转染试剂，旋涡10秒，充分混匀。

3）在室温下孵育10 min，使得形成siRNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物。
【注】：孵育时间不要超过30min

4）在形成复合物过程中，移除细胞生长培养基，每孔中加入500 μL新鲜预热的完全培养基。

5）直接将100 µL siRNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物加入细胞中，摇动培养板，轻轻混匀。最终体积为600 µL ，siRNA终浓度为1 nM。

6）37 ℃，5% CO₂培养箱培养，直至目的基因表达。建议一般mRNA表达水平通常在24–72 h，蛋白表达水平在48-96 h。

siRNA/miRNA体外转染试剂|Hieff Trans® in vitro siRNA/miRNA Transfection Reagent

图1 转染贴壁细胞操作流程

表1 siRNA终浓度为1 nM时，转染试剂、培养基的用量参考值

培养皿	siRNA物质的量(pmoles)	每孔siRNA的含量（ng）	siRNA转染试剂体积（µL）	形成PEI-siRNA复合物的体积（µL）	完全培养基的体积（含血清+双抗）	加入复合物后，细胞培养基总体积
96孔板	0.17	2.4	0.7-0.8	50	125 µL	175 µL
24孔板	0.6	8.6	1-3	100	500 µL	600 µL
12孔板	1.2	17	2-6	200	1 mL	1.2 mL
6孔板	2.2	31	4-12	200	2 mL	2.2 mL
25cm²培养瓶	4.4	62	10-20	400	4 mL	4.4 mL
75cm²培养瓶	10.5	147	30-50	500	10 mL	10.5 mL

表2 siRNA终浓度为10 – 50 nM时，转染试剂、培养基的用量参考值

培养皿	siRNA转染试剂体积（µL）	形成复合物的体积（无血清培养基）（µL）	完全培养基的体积（含血清+双抗）	加入复合物后，细胞总体积
96孔板	0.5-1.5	50	125 µL	175 µL
24孔板	2-4	100	500 µL	600 µL
12孔板	4-8	200	1 mL	1.2 mL
6孔板	8-16	200	2 mL	2.2 mL
25cm²培养瓶	15-25	400	4 mL	4.4 mL

二．悬浮细胞转染（以24孔板和转染5 nM siRNA为例，其他培养板加样体积请参考表4）
接种细胞

表3 转染当天，根据培养皿的大小，接种悬浮细胞数量参考值

培养皿	底面积(cm²)	每孔接种细胞悬浮液体积（μL）	转染当天接种细胞数
384孔板	0.1	25	5 ×10³~1×10⁴
96孔板	0.32	50	1×10⁴~ ×10⁴
24孔板	2	200	1×10⁵ ~ 2×10⁵
12孔板	4.5	500	2×10⁵ ~ 4×10⁵
6孔板	9.6	1000	5×10⁵ ~ 2×10⁶
25cm²培养瓶	25-28	2000	2×10⁶~ 5×10⁶

2.按照以下体系配制siRNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物：

1）对于每孔细胞，使用100 μL无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释21 ng siRNA (1.5 pmols)，混匀。

2）向100 μL的siRNA中加入4 μL的转染试剂，立刻旋涡10秒，充分混匀。

3）在室温孵育15 min，使得形成siRNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物。
【注】：孵育时间不要超过30 min

4）在每孔200 μL细胞悬浮液中，加入100 μL的siRNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物，轻轻混匀。最终体积为300 µL，siRNA终浓度为5 nM。

5）37 ℃，5% CO₂培养箱培养4-6 h后，再加入700 µL完全培养基，轻轻摇动培养板使其混匀。

6）继续放入培养箱中孵育，直至目的基因表达。建议一般mRNA表达水平通常在24–72 h，蛋白表达水平在48-96 h。

【注】：为了优化内源性基因沉默，建议选取siRNA浓度在5 nM到20 nM之间。转染试剂的体积应根据siRNA浓度和培养皿的大小进行调整，请参见下表4。

表4 siRNA浓度为5 nM时，在悬浮细胞中的参考值

培养皿	siRNA的浓度(pmoles)	每孔siRNA的含量（ng）	转染试剂体积（µL）	形成复合物培养基体积（µL）	悬浮细胞的体积	转染4-6h后另加入培养基的体积
384孔板	0.25	3.75	1 ± 0.5	25	25 µL	0 µL
96孔板	0.5	7.5	2 ± 1	50	50 µL	100 µL
24孔板	1.5	21	3 ± 2	100	200 µL	700 µL
12孔板	3.5	49	6 ± 4	200	500 µL	1 mL
6孔板	6	84	10 ± 8	200	1 mL	2 mL
25cm²培养瓶	12	168	15 ±10	400	2 mL	4 mL

表5 悬浮细胞中siRNA浓度、转染试剂的用量参考值

培养皿	siRNA的终浓度/孔（nM）	转染试剂的体积/孔（µL）
96孔板	1 ~ 20	1 ± 0.5
24孔板		2 ± 1
12孔板		3 ± 2
6孔板		10 ± 8
96孔板	20 ~ 50	1.5 ± 0.5
24孔板		3 ± 1
12孔板		5 ± 2
6孔板		15 ± 8

三．miRNA转染操作流程
该转染试剂也适合转染miRNA，转染贴壁细胞和悬浮细胞的具体操作请参考siRNA的操作流程。

HB220930

Q：绿光标记的siRNA，转染5h后观察，只有一些杂点，没有细胞形态什么原因？

A：转染进去的整个细胞是绿色的，可以清晰的看到细胞形态，没有转染进去的就是绿色的杂点儿。

Q：转染后可以换液吗？

A：可以换液，转然后8h换液，建议不换液，转染试剂毒性很小，不换液转染效率可以提高。

[1] Zhang Y, Hu R, Xi B, Nie D, Xu H, Liu A. Mechanisms of Senescence-Related NKG2D Ligands Release and Immune Escape Induced by Chemotherapy in Neuroblastoma Cells. Front Cell Dev Biol. 2022;10:829404. Published 2022 Mar 2. doi:10.3389/fcell.2022.829404(IF:6.684)
[2] Cui B, Wang Y, Jin J, et al. Resveratrol Treats UVB-Induced Photoaging by Anti-MMP Expression, through Anti-Inflammatory, Antioxidant, and Antiapoptotic Properties, and Treats Photoaging by Upregulating VEGF-B Expression. Oxid Med Cell Longev. 2022;2022:6037303. Published 2022 Jan 4. doi:10.1155/2022/6037303(IF:6.543)
[3] Liu Y, Zeng Y, Si HB, Tang L, Xie HQ, Shen B. Exosomes Derived From Human Urine-Derived Stem Cells Overexpressing miR-140-5p Alleviate Knee Osteoarthritis Through Downregulation of VEGFA in a Rat Model. Am J Sports Med. 2022;50(4):1088-1105. doi:10.1177/03635465221073991(IF:6.203)
[4] Zhang ZD, Wen B, Li DJ, et al. AKT serine/threonine kinase 2-mediated phosphorylation of fascin threonine 403 regulates esophageal cancer progression. Int J Biochem Cell Biol. 2022;145:106188. doi:10.1016/j.biocel.2022.106188(IF:5.085)
[5] Tan S, Zhou Y, Zhao H, et al. Comprehensive transcriptome analysis of hypothalamus reveals genes associated with disorders of sex development in pigs. J Steroid Biochem Mol Biol. 2021;210:105875. doi:10.1016/j.jsbmb.2021.105875(IF:4.294)
[6] Niu M, Yi M, Dong B, Luo S, Wu K. Upregulation of STAT1-CCL5 axis is a biomarker of colon cancer and promotes the proliferation of colon cancer cells. Ann Transl Med. 2020;8(15):951. doi:10.21037/atm-20-4428(IF:3.297)

细胞/组织miRNA提取试剂盒|MolPure® Cell/Tissue miRNA Kit

发表于2024年3月15日由上海金畔生物科技有限公司

细胞/组织miRNA提取试剂盒|MolPure® Cell/Tissue miRNA Kit

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

MolPure^®Cell/Tissue miRNA Kit采用MolPure^® RNA Column M1和microRNA Column M1以及新型的溶液体系，适用于从多种新鲜或冻存的动物组织或培养细胞中快速提取总RNA、microRNA和其它各种小RNA。独特的裂解液可迅速裂解细胞并灭活RNA酶，操作简便，30 min即可完成动物组织或细胞（50-100 mg动物组织或5×10⁶~1×10⁷个动物细胞）总RNA的提取纯化工作。试剂盒内的MolPure^® RNA Column M1可选择性吸附核酸，不吸附蛋白质、多糖和其它非核酸类物质；microRNA Column M1则能从总RNA中有效富集到15-30 nt左右的小RNA（包括siRNA和miRNA）。DNase I直接在柱上消化gDNA，无DNase残留，提取的总RNA纯度高，可直接用于反转录、荧光定量PCR、二代测序、芯片、Northern-blot、RACE、RNAi等多种分子生物学实验。

产品组分

类别	编号	组分名称	19331ES08（5 T）	19331ES50（50 T）
Part I	19331-A	裂解液LB (LB Buffer M1)	5 mL	50 mL
Part II	19331–B	RNA吸附柱M1 (MolPure^® RNA Column M1)	5 个	50 个
	19331–C	miRNA吸附柱M1 (miRNA Column M1)	5 个	50 个
	19331–D	2 mL收集管 (2 mL Collection Tube M1)	10 个	100 个
	19331-E	去蛋白液PL^* (PL Buffer M1^*)	1.2 mL	12 mL
	19331-F	漂洗液W^* (Wash Buffer M1^*)	1.3 mL	13 mL
	19331-G	RNase-free H₂O	1 mL	5 mL

运输和保存方法

Part I组分常温运输，4℃避光保存，Part II组分常温运输，常温保存。

产品有效期12个月。

注意事项

1. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

2. 漂洗液W*添加乙醇后，易形成沉淀，不影响使用。使用时，吸取上清即可。

3. 裂解液LB和去蛋白液PL*含有刺激性物质，为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

4. 本产品仅作科研用途！

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[1] Dong Z, Zheng N, Hu C, et al. Nosema bombycis microRNA-like RNA 8 (Nb-milR8) Increases Fungal Pathogenicity by Modulating BmPEX16 Gene Expression in Its Host, Bombyx mori. Microbiol Spectr. 2021;9(2):e0104821. doi:10.1128/Spectrum.01048-21(IF:7.171)
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产品组分

类别	编号	组分名称	19331ES08（5 T）	19331ES50（50 T）
Part I	19331-A	裂解液LB (LB Buffer M1)	5 mL	50 mL
Part II	19331–B	RNA吸附柱M1 (MolPure^® RNA Column M1)	5 个	50 个
	19331–C	miRNA吸附柱M1 (miRNA Column M1)	5 个	50 个
	19331–D	2 mL收集管 (2 mL Collection Tube M1)	10 个	100 个
	19331-E	去蛋白液PL^* (PL Buffer M1^*)	1.2 mL	12 mL
	19331-F	漂洗液W^* (Wash Buffer M1^*)	1.3 mL	13 mL
	19331-G	RNase-free H₂O	1 mL	5 mL

运输和保存方法

Part I组分常温运输，4℃避光保存，Part II组分常温运输，常温保存。

产品有效期12个月。

注意事项

1. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

2. 漂洗液W*添加乙醇后，易形成沉淀，不影响使用。使用时，吸取上清即可。

3. 裂解液LB和去蛋白液PL*含有刺激性物质，为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

4. 本产品仅作科研用途！

相关产品

产品名称	货号	规格
MolPure^® Cell/Tissue Total RNA Kit 细胞/组织总RNA提取试剂盒	19221ES08/50	5/50 T
MolPure^® TRIeasy Plus Total RNA Kit 总RNA提取试剂盒(带离心柱）	19211ES60	100 T
Hifair^® III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus)	11139ES60	100 T
Hifair^® II 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus)	11121ES60	100 T
Hieff UNICON^® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix	11184ES08	5×1 mL
Hieff UNICON^® Power qPCR SYBR Green Master Mix ( 抗体法，No Rox)	11195ES08	5×1 mL
Hieff UNICON^® Power qPCR SYBR Green Master Mix ( 抗体法，Low Rox)	11196ES08	5×1 mL
Hieff UNICON^® Power qPCR SYBR Green Master Mix ( 抗体法，High Rox)	11197ES08	5×1 mL
Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit 双荧光素酶报告基因检测试剂盒	11402ES60/80	100/1000 T

HB210708

细胞/组织miRNA提取试剂盒|MolPure® Cell/Tissue miRNA Kit

暂无内容

血清/血浆miRNA提取试剂盒|MolPure® Serum/Plasma miRNA Kit

发表于2024年3月15日由上海金畔生物科技有限公司

血清/血浆miRNA提取试剂盒|MolPure® Serum/Plasma miRNA Kit

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品简介

MolPure® Serum/Plasma miRNA Kit适用于血浆、血清、淋巴液等样品中总RNA和miRNA的提取。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料，配合本公司独特的裂解液配方可以可最大限度的回收高纯度RNA和miRNA。提取的RNA纯度高，质量稳定可靠，可适用于RT-qPCR等下游应用实验。

产品信息

货号	19332ES08 / 19332ES50
规格	5 T /50 T

组分信息

类别	组分编号	组分名称	19332ES08	19332ES50
Part I	19332-A	裂解液LB (LB Buffer S3)	5 mL	50 mL
Part II	19332-B	RNA吸附柱S3 (MolPure® RNA Column S3)	5 个	50 个
	19332-C	miRNA吸附柱S3 (miRNA Column S3)	5 个	50 个
	19332-D	2 mL收集管 (2 mL Collection Tube S3)	10 个	100 个
	19332-E	去蛋白液PL* (PL Buffer S3*)	1.2 mL	12 mL
	19332-F	漂洗液W* (Wash Buffer S3*)	1.3 mL	13 mL
	19332-G	RNase-free H2O	1 mL	5 mL

储存条件

Part I组分冰袋运输，4℃避光保存。Part II组分常温运输，常温保存。产品有效期12个月。

注意事项

1. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

2. 漂洗液W*添加乙醇后，易形成沉淀，不影响使用。使用时，吸取上清即可。

3. 裂解液LB和去蛋白液PL*含有刺激性物质，为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

4. 本产品仅作科研用途！

使用说明

使用前准备

1. 自备设备和试剂：台式离心机、振荡仪、水浴锅或金属浴，氯仿、无水乙醇，RNase-free离心管等。

2. 除特殊指明外，所有的离心步骤均在室温完成，使用可以达到12,000 rpm转速的传统台式离心机。

3. 首次使用前，在去蛋白液PL* 和漂洗液W*瓶中参照下表加入指定体积的无水乙醇，充分混匀后使用，并做好标记。

编号	组分名称	5 T规格无水乙醇加入量	50 T规格无水乙醇加入量
19332-E	去蛋白液PL^*	2.8 mL	28 mL
19332-F	漂洗液W^*	5.2 mL	52 mL

操作方法

一、样本预处理：

1. 取250 μL血清或血浆等液体样本转移至1.5 mL的RNase-free离心管中。

【注】：不足 250 μL时，需用PBS或生理盐水补足。

2. 加入750 μL裂解液LB，反复吹打，并剧烈振荡混匀。

3. 室温（22-30℃）静置5 min。

4. 加入200 μL 氯仿（自备），剧烈振荡15 sec混匀。

5. 室温静置2 min。

6. 4℃ 12,000rpm 离心10 min，使样品分层。取上层水相转移至1.5 mL的RNase-free离心管中。

【注】：样品会分为三层，下层为有机相，中间层和上层无色的水相，RNA存在于上层水相中。

【注】：上层容量约为所加裂解液LB总量的70%。如加入750 μL 裂解液LB，上层水相约为525 μL。建议吸取500 μL，以防吸到中间层造成DNA污染。

二、（推荐）总RNA（含miRNA）提取方法：

1. 将RNA吸附柱S3套入2 mL收集管中，备用。

2. 加入1.5倍上层水相体积的无水乙醇（自备）至上层水相，吹打混匀。

【注】：出现沉淀属正常现象。

【注】：无水乙醇必须是室温保存。

3. 将上述混合液加入到RNA吸附柱S3中，12,000 rpm离心1 min，弃掉废液。

【注】：混合液每次最大加入体积650 μL，可分多次离心。

【注】：离心后，若滤膜仍有液体残留，可延长离心时间至5 min。

4. 加入700 μL去蛋白液PL^*，12,000 rpm离心30 sec，弃废液。

【注】：确保去蛋白液PL^*已添加无水乙醇。

5. 将RNA吸附柱S3放回收集管，加入500 µL漂洗液W^*，12,000 rpm室温离心30 sec，弃废液。

【注】：确保漂洗液W^*已添加无水乙醇。

6. 重复一遍步骤5。

7. 将RNA吸附柱S3放回收集管，空柱12,000 rpm室温离心2 min，以除去残留的漂洗液W^*。

8. 将RNA吸附柱S3放入新的1.5 mL RNase-free离心管中，在RNA吸附柱S3中央加入30-50 µL RNase-free H₂O，室温放置2 min。然后12,000 rpm离心1 min。收集滤液，即为RNA溶液。

【注】：可通过以下方式提高回收产量：①65℃预热RNase-free H₂O；②将RNA滤液再次上柱，室温放置2 min后，洗脱。

9. RNA溶液可置于-80℃长期保存。

三、仅当miRNA提取量不理想时，可尝试用miRNA富集方法：

1. 将RNA吸附柱S3和miRNA吸附柱S3分别套入2 mL收集管中，备用。

2. 加入0.5倍上层水相体积的无水乙醇（自备）至上层水相，吹打混匀。

【注】：无水乙醇必须是室温保存。

3. 将上述混合液加入到RNA吸附柱S3中，12,000 rpm离心1 min，收集滤液。并将滤液转移至新的RNase-free离心管中。

【注】：混合液每次最大加入体积650 μL，可分多次离心。

【注】：miRNA在滤液中，吸附柱上为去除miRNA的总RNA。

4. 计算滤液体积，加入0.65倍体积室温保存的无水乙醇，吹打混匀。

5. 将上述混合物加入miRNA吸附柱S3中，12,000 rpm离心1 min，弃掉滤液。

【注】：混合液每次最大加入体积650 μL，可分多次离心。

【注】：离心后，若滤膜仍有液体残留，可延长离心时间至5 min。

6. 按照总RNA（含miRNA）提取方法步骤4~9漂洗，获取miRNA。

【注】：此操作中，步骤4~9用到的离心柱应为miRNA吸附柱S3。

Ver.CN20231114

产品简介

产品信息

货号	19332ES08 / 19332ES50
规格	5 T /50 T

组分信息

类别	组分编号	组分名称	19332ES08	19332ES50
Part I	19332-A	裂解液LB (LB Buffer S3)	5 mL	50 mL
Part II	19332-B	RNA吸附柱S3 (MolPure® RNA Column S3)	5 个	50 个
	19332-C	miRNA吸附柱S3 (miRNA Column S3)	5 个	50 个
	19332-D	2 mL收集管 (2 mL Collection Tube S3)	10 个	100 个
	19332-E	去蛋白液PL* (PL Buffer S3*)	1.2 mL	12 mL
	19332-F	漂洗液W* (Wash Buffer S3*)	1.3 mL	13 mL
	19332-G	RNase-free H2O	1 mL	5 mL

储存条件

Part I组分冰袋运输，4℃避光保存。Part II组分常温运输，常温保存。产品有效期12个月。

注意事项

1. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

2. 漂洗液W*添加乙醇后，易形成沉淀，不影响使用。使用时，吸取上清即可。

3. 裂解液LB和去蛋白液PL*含有刺激性物质，为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

4. 本产品仅作科研用途！

使用说明

使用前准备

1. 自备设备和试剂：台式离心机、振荡仪、水浴锅或金属浴，氯仿、无水乙醇，RNase-free离心管等。

2. 除特殊指明外，所有的离心步骤均在室温完成，使用可以达到12,000 rpm转速的传统台式离心机。

3. 首次使用前，在去蛋白液PL* 和漂洗液W*瓶中参照下表加入指定体积的无水乙醇，充分混匀后使用，并做好标记。

编号	组分名称	5 T规格无水乙醇加入量	50 T规格无水乙醇加入量
19332-E	去蛋白液PL^*	2.8 mL	28 mL
19332-F	漂洗液W^*	5.2 mL	52 mL

操作方法

一、样本预处理：

1. 取250 μL血清或血浆等液体样本转移至1.5 mL的RNase-free离心管中。

【注】：不足 250 μL时，需用PBS或生理盐水补足。

2. 加入750 μL裂解液LB，反复吹打，并剧烈振荡混匀。

3. 室温（22-30℃）静置5 min。

4. 加入200 μL 氯仿（自备），剧烈振荡15 sec混匀。

5. 室温静置2 min。

6. 4℃ 12,000rpm 离心10 min，使样品分层。取上层水相转移至1.5 mL的RNase-free离心管中。

【注】：样品会分为三层，下层为有机相，中间层和上层无色的水相，RNA存在于上层水相中。

【注】：上层容量约为所加裂解液LB总量的70%。如加入750 μL 裂解液LB，上层水相约为525 μL。建议吸取500 μL，以防吸到中间层造成DNA污染。

二、（推荐）总RNA（含miRNA）提取方法：

1. 将RNA吸附柱S3套入2 mL收集管中，备用。

2. 加入1.5倍上层水相体积的无水乙醇（自备）至上层水相，吹打混匀。

【注】：出现沉淀属正常现象。

【注】：无水乙醇必须是室温保存。

3. 将上述混合液加入到RNA吸附柱S3中，12,000 rpm离心1 min，弃掉废液。

【注】：混合液每次最大加入体积650 μL，可分多次离心。

【注】：离心后，若滤膜仍有液体残留，可延长离心时间至5 min。

4. 加入700 μL去蛋白液PL^*，12,000 rpm离心30 sec，弃废液。

【注】：确保去蛋白液PL^*已添加无水乙醇。

5. 将RNA吸附柱S3放回收集管，加入500 µL漂洗液W^*，12,000 rpm室温离心30 sec，弃废液。

【注】：确保漂洗液W^*已添加无水乙醇。

6. 重复一遍步骤5。

7. 将RNA吸附柱S3放回收集管，空柱12,000 rpm室温离心2 min，以除去残留的漂洗液W^*。

【注】：可通过以下方式提高回收产量：①65℃预热RNase-free H₂O；②将RNA滤液再次上柱，室温放置2 min后，洗脱。

9. RNA溶液可置于-80℃长期保存。

三、仅当miRNA提取量不理想时，可尝试用miRNA富集方法：

1. 将RNA吸附柱S3和miRNA吸附柱S3分别套入2 mL收集管中，备用。

2. 加入0.5倍上层水相体积的无水乙醇（自备）至上层水相，吹打混匀。

【注】：无水乙醇必须是室温保存。

3. 将上述混合液加入到RNA吸附柱S3中，12,000 rpm离心1 min，收集滤液。并将滤液转移至新的RNase-free离心管中。

【注】：混合液每次最大加入体积650 μL，可分多次离心。

【注】：miRNA在滤液中，吸附柱上为去除miRNA的总RNA。

4. 计算滤液体积，加入0.65倍体积室温保存的无水乙醇，吹打混匀。

5. 将上述混合物加入miRNA吸附柱S3中，12,000 rpm离心1 min，弃掉滤液。

【注】：混合液每次最大加入体积650 μL，可分多次离心。

【注】：离心后，若滤膜仍有液体残留，可延长离心时间至5 min。

6. 按照总RNA（含miRNA）提取方法步骤4~9漂洗，获取miRNA。

【注】：此操作中，步骤4~9用到的离心柱应为miRNA吸附柱S3。

Ver.CN20231114

Q:试剂盒是只提取了 miRNA 吗？

A:不是，是把血清或者血浆中总 RNA 与miRNA 一起提取出来

Q:试剂盒 miRNA 提取量不理想？

A:可尝试用 miRNA 富集方法进行提取

Q:提取的RNA/miRNA用紫外测定的浓度很低，是不是提取效果不行？

A: 本身血液中RNA/miRNA含量较低，而nanodrop测定20ng/ul以下就不准了，不建议用紫外测定浓度，直接进行后续的RT-PCR或RT-qPCR分析看实验结果。

血清/血浆miRNA提取试剂盒|MolPure® Serum/Plasma miRNA Kit

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Signosis miRNA研究

发表于2024年3月11日由上海金畔生物科技有限公司

Signosis是一家生物测定供应商，致力于基于板的分析产品的开发和商业化。我们专注于这些重要的调节分子：细胞因子，转录因子，miRNA和疾病标记物。我们的使命是成为具有高灵敏度和成本效益的创新化验产品的供应商。

miRNA Research

miRNA研究

miRNA是小的非编码RNA分子，其调节高达30％的哺乳动物基因表达。它们充当转录后调节因子并与靶信使RNA转录物（mRNA）上的互补序列结合，导致翻译抑制或靶降解。到目前为止，已经在人类基因组中鉴定了超过400种miRNA，其中许多只在一个或几个核苷酸中不同。miRNA的失调可能与许多疾病如癌症有关; 因此，miRNA的研究非常重要。

Signosis为miRNA的研究提供了多种创新工具，包括用于同时分析多种miRNA或监测一种特定miRNA的miRNA阵列。

miRNA阵列
miRNA实时PCR
miRNA Northern Blot Assays
miRNA荧光素酶报告载体
miRNA荧光素酶目标报告载体
miRNA荧光素酶载体集
miRNA板分析
直接杂交板分析

miRNA阵列

miRNA阵列用于同时分析多达132种miRNA。

优点：

高度辨别力 – 它能够区分所有miRNA同种型。在测定中可以清楚地区分所有let7同种型。
线性扩增 – 捕获的miRNA经历T7扩增而不在PCR中引入偏倚。
没有miRNA的预分离 – 可以直接将总RNA用于测定而无需预先分离miRNA。
简单的程序 – 分析简单明了。

产品名称	目录＃
人类miRNA阵列I.	AP-0001
人类miRNA阵列II	AP-0002
人类miRNA阵列III	AP-0008
人类miRNA阵列IV	AP-0009
癌症miRNA阵列	AP-0003
细胞凋亡相关的miRNA阵列	AP-0004
干细胞相关的miRNA阵列	AP-0007
小鼠miRNA阵列	AP-0005
大鼠miRNA阵列	AP-0006

miRNA实时PCR

使用miRNA Real-Time PCR试剂盒，可以直接从总RNA或细胞裂解液中分析miRNA而无需cDNA转化。

优点：

方便 – 所有试剂，从细胞裂解到PCR，都包含在一个试剂盒中。
没有RNA制备 – 细胞裂解物可以直接用于逆转录，尽管总RNA非常好。
实时 – 可以实时监控分析。

产品名称	目录＃
miRNA实时PCR检测试剂盒	CL-0004
miR-17-92 Cluster实时PCR检测试剂盒	CL-0005
Let7 Isoform实时PCR检测试剂盒	CL-0006

miRNA Northern Blot Assays

测定试剂盒是非放射性的，包括所有试剂，并且探针是预先标记的生物素。Signosis还提供高灵敏度Northern Blot Assay试剂盒，其灵敏度是传统化学发光检测的100倍。

优点：

· 无需同位素 – 使用化学发光的安全检测方法。

· 无探针制备 – 每个试剂盒中包含预先标记的生物素探针。

· 一个试剂盒中的所有组件 – 包括执行测定所需的一切。

· 简单的程序 – 不需要miRNA分离，可以直接使用总RNA。

产品名称	目录＃
miRNA Northern Blot Assay Kit包括2个凝胶	NB-0001
miRNA Northern Blot Assay Kit不包括2个凝胶	NB-0002
高度敏感的miRNA Northern Blot Assay Kit	NB-1001

miRNA荧光素酶报告载体

miRNA已经被证明可以调节许多发育和生理过程，并且miRNA的失调与许多疾病过程有关，包括癌症。miRNA在微调基因表达调节因子（称为“调光开关”）中发挥重要作用，因为它们能够在不*沉默基因表达的情况下抑制基因表达。监测miRNA表达，特别是在基于细胞的分析中，可以帮助揭示miRNA对癌症病因，分化阶段和治疗发展的潜在影响。Signosis开发了miRNA报告载体。通过将miRNA互补序列（~20nt）作为相应的miRNA结合位点插入荧光素酶报告基因的下游来构建每个报告载体。当细胞中的miRNA与3'处的互补位点结合时 UTR下游的报告荧光素酶基因，它导致荧光素酶表达的抑制并导致荧光素酶活性的降低。miRNA表达水平定量地对应于荧光素酶活性。

100+荧光素酶报告载体可用于体内监测不同的miRNA。Signosis还为您可能感兴趣的任何未列出的miRNA提供定制服务。

优点：

· 功能测定 – 监测细胞中的miRNA表达。

· 定量分析 – 通过抑制萤火虫荧光素酶基因表达来测量miRNA的表达和活化。

产品名称	目录＃
pLet7b – 吕克	LR-0001
pMiR-7-5p – 吕克	LR-0002
pMiR-7B-5P – 吕克	LR-0003
pMiR-1-5P – 吕克	LR-0004
pMiR-16-5p – 吕克	LR-0005
pMiR-17-5p – 吕克	LR-0006
pMiR-17-3p – 吕克	LR-0007
pMiR-19A-3P – 吕克	LR-0008
pMiR-20A-5P – 吕克	LR-0009
pMiR-21-5p – 吕克	LR-0010
pMiR-24-3p – 吕克	LR-0011
pMiR-26A-5P – 吕克	LR-0012
pMiR-29A-3P – 吕克	LR-0013
pMiR-34A-5P – 吕克	LR-0014
pMiR-101-3p – 吕克	LR-0015
pMiR-106A-5P – 吕克	LR-0016
pMiR-107-吕克	LR-0017
pMiR-122A-5P – 吕克	LR-0018
pMiR-12-5P – 吕克	LR-0019
pMiR-125B-5P – 吕克	LR-0020
pMiR-127-5p – 吕克	LR-0021
pMiR-132-3p – 吕克	LR-0022
pMiR-144-3p – 吕克	LR-0023
pMiR-146A-5P – 吕克	LR-0024
pMiR-155-5p – 吕克	LR-0025
pMiR-181A-5P – 吕克	LR-0026
pMiR-194-5p – 吕克	LR-0027
pMiR-196A-5P – 吕克	LR-0028
pMiR-199A-5P – 吕克	LR-0029
pMiR-206-吕克	LR-0030
pMiR-214-3p – 吕克	LR-0031
pMiR-221-3p – 吕克	LR-0032
pMiR-222-3p – 吕克	LR-0033
pMiR-372-3p – 吕克	LR-0035
pMiR-373-5p – 吕克	LR-0036
pLet7a – 吕克	LR-0037
pLet7c – 吕克	LR-0038
pLet7d – 吕克	LR-0039
pLet7e – 吕克	LR-0040
pLet7f – 吕克	LR-0041
pLet7g – 吕克	LR-0042
pLet7i – 吕克	LR-0043
pMiR -1-吕克	LR-0044
pMiR-10A-5P – 吕克	LR-0045
pMiR-10B-5P – 吕克	LR-0046
pMiR-143-3p – 吕克	LR-0047
pMiR-145-5p – 吕克	LR-0048
pMiR-15B-5P – 吕克	LR-0049
pMiR-181B-5P – 吕克	LR-0050
pMiR-18A-5P – 吕克	LR-0051
pMiR-19B-3P – 吕克	LR-0053
pMiR-9-5p – 吕克	LR-0054
pMiR-205-5p – 吕克	LR-0055
pMiR-208A-3P – 吕克	LR-0056
pMiR-34B-5P – 吕克	LR-0057
pMiR-34C-5P – 吕克	LR-0058
pMiR-210-3p – 吕克	LR-0059
pMiR-451A-吕克	LR-0060
pMiR-106B-3P – 吕克	LR-0061
pMiR-18B-5P – 吕克	LR-0062
pMiR-29B-3P – 吕克	LR-0063
pMiR-153-3p	LR-0064
pMiR-195-5p	LR-0065
pMiR-223-3p	LR-0066
（妈妈）pMiR-380-5p-吕克	LR-0067
pMiR-496A-3P	LR-0068
pMiR-448	LR-0069
pMiR-885-5p	LR-0070
pMiR-455-5p	LR-0071
pMiR-208B-3P	LR-0072
pMiR-200C-3P	LR-0073
pMiR-29C-3P	LR-0074
pMiR-28 – 吕克	LR-0075
pMiR-122-吕克	LR-0076
pMiR-141-吕克	LR-0077
pMiR-198-吕克	LR-0078
pMiR-200-吕克	LR-0079
pMiR-320-吕克	LR-0080
pMiR-349-吕克	LR-0081
pMiR-451-吕克	LR-0082
pMiR-655-吕克	LR-0083
pMiR-181-吕克	LR-0084
pMiR-101A-吕克	LR-0085
pMiR-200A-吕克	LR-0086
pMiR-19-5p – 吕克	LR-0087
pMiR-27A-吕克	LR-0088
pMiR-30B – 吕克	LR-0089
pMiR-380-吕克	LR-0090
pMiR-885-吕克	LR-0091
pMiR-99A-吕克	LR-0092
pMiR – 吕克 – 控制	LR-1000

miRNA荧光素酶目标报告载体

miRNA已经被证明可以调节许多发育和生理过程，并且miRNA的失调与许多疾病过程有关，包括癌症。miRNA在微调基因表达调节因子（称为“调光开关”）中发挥重要作用，因为它们能够在不*沉默基因表达的情况下抑制基因表达。监测miRNA表达，特别是在基于细胞的分析中，可以帮助揭示miRNA对癌症病因，分化阶段和治疗发展的潜在影响。Signosis开发了miRNA 靶标记者向量。通过将miRNA 3'UTR（~1kb）作为相应的miRNA结合位点插入荧光素酶报告基因的下游来构建每个靶标报告载体。当细胞中的miRNA与报告荧光素酶基因下游3'UTR处的靶位点结合时，其导致荧光素酶表达的抑制并导致荧光素酶活性降低。miRNA表达水平定量地对应于荧光素酶活性。

优点：

· 功能测定 – 通过miRNA监测靶基因的调节。

· 定量分析 – 通过抑制萤火虫荧光素酶基因表达来测量miRNA的表达和活化。

产品名称	目录＃
pLuc3U-BCL2	LR-1001
pLuc3U COX-2	LR-1002
pLuc3U，DNMT3B	LR-1003
pLuc3U-E2F1	LR-1004
pLuc3U-E2F3	LR-1005
pLuc3U-EGFR	LR-1006
pLuc3U时代	LR-1007
pLuc3U-FOS	LR-1008
pLuc3U-HNF1A	LR-1009
pLuc3U-HOXD10	LR-1010
pLuc3U，KRAS	LR-1011
pLuc3U-PTEN	LR-1012
pLuc3U-RB	LR-1013
pLuc3U-TCL1	LR-1014
pLuc3U-TPM1	LR-1015
pLuc3U-TSP1	LR-1016
pLuc3U捻	LR-1017

miRNA荧光素酶载体集

优点：

功能测定 – 它提供功能测定以监测细胞中的miRNA表达。
定量分析 – 通过抑制萤火虫荧光素酶基因表达来测量miRNA的表达和活性。
综合 – 一次检测中的Moniter 7种miRNA。

产品名称	目录＃
氧化应激miRNA报告载体集	LR-4001-50
氧化应激miRNA报告载体集	LR-4001-2000
基因毒性应激Luciferase记者矢量包	LR-4002-50
基因毒性应激Luciferase记者矢量包	LR-4002-2000

miRNA板分析

使用Plate Assay试剂盒，不需要将miRNA转换成cDNA。它比Northern Blot Assay灵敏100倍，区分miRNA异构体的辨别力也更高。

优点：

简单 – 做miRNA检测就像做ELISA一样。它不需要从miRNA酶促转换成cDNA。整个测定程序是“孵育和洗涤”。
更高的灵敏度和更好的鉴别能力 – 检测灵敏度比miRNA Northern blot高约100倍。此外，它在分化miRNA同种型中具有比miRNA Northern印迹更高的辨别能力。
定量比较 – 可以定量分析两个或多个样品的差异。

产品名称	目录＃
miRNA Plate Assay Kit（与MO-XXXX配合使用）	MA-0101
miR-17-92簇板测定	MA-0102
癌症miRNA分析板测定I.	MA-0103
miR-21平板测定	MA-0104
乳腺癌miRNA Plate Assay Kit I	MA-0105
乳腺癌miRNA Plate Assay Kit II	MA-0106
乳腺癌miRNA Plate Assay Kit III	MA-0107
肺癌miRNA板检测I	MA-0108
结直肠癌miRNA板测定I.	MA-0109
结肠直肠癌miRNA板测定II	MA-0110
结肠直肠癌miRNA板测定III	MA-0111
结肠直肠癌miRNA板测定IV	MA-0112
肝癌miRNA板检测I	MA-0113
肝癌miRNA Plate Assay II	MA-0114
胰腺癌miRNA板检测I	MA-0115
胰腺癌miRNA板测定II	MA-0116
膀胱癌miRNA Plate Assay I	MA-0117
卵巢癌miRNA板检测I	MA-0118
卵巢癌miRNA板测定II	MA-0119
卵巢癌miRNA板测定III	MA-0120
前列腺癌miRNA板检测I	MA-0121
甲状腺癌miRNA板检测I	MA-0122
甲状腺癌miRNA Plate Assay II	MA-0123
淋巴瘤miRNA板检测I	MA-0124
白血病miRNA板测定I.	MA-0125
白血病miRNA Plate Assay III	MA-0126
白血病miRNA板测定IV	MA-0127
白血病miRNA Plate Assay V.	MA-0128
干细胞特异性miRNA板检测试剂盒I.	MA-0129
干细胞特异性miRNA板检测试剂盒II	MA-0130
干细胞特异性miRNA板测定试剂盒IV	MA-0131
肺癌miRNA板测定II	MA-0132
淋巴瘤miRNA板测定II	MA-0133
白血病miRNA板测定II	MA-0134
干细胞特异性miRNA板测定试剂盒III	MA-0135

直接杂交板分析

通过RNA样品的直接杂交可以同时定量分析48种miRNA，无需任何添加步骤。该过程很简单，不需要将miRNA转换成cDNA。

优点：

简单 – 做miRNA检测就像做ELISA一样。它不需要从miRNA酶促转换成cDNA。整个测定程序是“孵育和洗涤”。
更高的灵敏度和更好的鉴别能力 – 检测灵敏度比miRNA Northern blot高约100倍。此外，它在区分miRNA同种型中具有比miRNA Northern印迹更高的辨别能力。
定量比较 – 可以定量分析特定miRNA表达中两个或多个样品的差异。

产品名称	目录＃
miRNA直接杂交平板阵列I.	MA-1001
细胞凋亡相关的miRNA板阵列	MA-1002
干细胞相关的miRNA板阵列	MA-1003

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