离子交换主要包括强阳离子交换、弱阳离子交换、强阴离子交换和弱阴离子交换4种，广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的分离纯化。

本品Magnify SP HP是一种强阳离子交换层析介质，以表面接枝了葡聚糖的高刚性琼脂糖为基架，具有高流速状态下仍具有高的动态结合能力的优点，可以很好的提高工业下游工艺的生产效率。且本品平均粒径在40 μm左右，具有更高的比表面积，更高的载量和分辨率。本品离子交换基团-SO₃^–。

 

产品性质

基质	高刚性琼脂糖微球
平均粒径	40 µm
离子交换类型	强阳离子
载量	0.20-0.24 mmol H+/mL 介质
流速	≤300 cm/h
pH范围	2-12（长期）/ 2-14（短期）
储存缓冲液	20%乙醇，0.2M醋酸钠

 

运输和保存方法

冰袋运输。4-30℃保存，有效期5年。

 

使用方法

1 缓冲液的准备

所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤。下表为常用的阳离子交换缓冲液。

表1：阳离子交换缓冲液

pH 范围	缓冲盐	浓度（mM）	平衡离子	pKa(25℃)
1.4-2.4	Maleic acid	20	Na+	1.92
2.6-3.6	Methyl malonic acid	20	Na+或 Li+	3.07
2.6-3.6	Citric acid	20	Na+	3.13
3.3-4.3	Lactic acid	50	Na+	3.86
3.3-4.3	Formic acid	50	Na+或 Li+	3.75
3.7-4.7	Succinic acid	50	Na+	4.21
4.3-5.3	Acetic acid	50	Na+或 Li+	4.75
5.1-6.1	Succinic acid	50	Na+	5.64
5.2-6.2	Methyl malonic acid	50	Na+或 Li+	5.76
5.6-6.6	MES	50	Na+或 Li+	6.27
6.7-7.7	Phosphate	50	Na+	7.20
7.0-8.0	HEPES	50	Na+或 Li+	7.56
7.8-8.8	BICINE	50	Cl–	8.33

 

2 样品准备

样品在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。

3 样品纯化

1）将介质装入合适的层析柱，层析用5倍柱体积的结合Buffer进行平衡，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。

2）将样品加到平衡好的Magnify SP HP中（保证目的蛋白与填料充分接触，提高目的蛋白的回收率），收集流出液。

3）用10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。

4）使用5-10倍柱体积的洗脱Buffer，收集洗脱液，即目的蛋白组分。

5）依次使用3倍柱体积的结合Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料，最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的20%的乙醇中，置于4度保存，防止填料被细菌污染。

4 填料清洗

离子交换树脂每次使用后可以用1M NaCl 甚至更高离子强度溶液或高pH溶液清洗，然后用至少5倍柱体积的Buffer 进行平衡至离子强度或pH值稳定。

CIP（Cleaning In Place）清洗

离子交换树脂可以重复使用而无需再生，但随着非特异性结合的蛋白的增多和蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量都下降，这时可按照下面方法对树脂进行清洗。

1）去除一些沉淀或变性物质

用2倍柱体积的1M NaOH 溶液进行清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS, pH7.4清洗。

2）去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质

用3-4倍柱体积的70%乙醇或3-4倍柱体积的1% Triton™ X-100 清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS, pH7.4清洗。

3）去除一些离子键结合物质

用3-4倍柱体积的2M NaCl清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS, pH 7.4清洗。

 

注意事项

1）请勿冷冻保存本产品。

2）填料使用前一定要充分颠倒若干次，使琼脂糖珠混合均匀。

3）所有操作过程中，样本需要在4℃或冰上操作。

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

5）本产品仅作科研用途！

 

附表 问题及解决方案

问题	可能原因	推荐解决方案
柱子反压过高	填料被堵塞	按照【填料清洗】部分对树脂进行清洗。
		样品中含有微小的固体颗粒，建议使用前用0.22µm或0.45µm滤膜过滤。
洗脱样品较杂	树脂重复多次使用	按照【填料清洗】部分对树脂进行清洗或更换新树脂。
	平衡不充分	增加平衡液体积，确保树脂充分平衡/洗杂。

HB220629