MBP标签蛋白纯化预装柱5ml 标签蛋白纯化预装柱|MBPSep Dextrin 6FF Chromatography Column,5ml
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产品简介
MBPSep Dextrin Agarose Resin 是一种纯化带有麦芽糖结合蛋白（MBP）标签蛋白的亲和层析介质，MBP可促进连接蛋白的正确折叠，增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF可以一步纯化MBP融合蛋白，结合的融合蛋白可以用10 mM麦芽糖进行温和洗脱，保护了目的蛋白的活性，MBP融合部分后续可用位点特异性蛋白酶切除。此外，MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF以高度交联的6%琼脂糖凝胶为基质，具有更高的物理化学特性，可以耐受更高的压力，在相对较高的流速下，实现对目的蛋白的纯化，更适于工业大规模蛋白的纯化。
MBPSep Dextrin 6FF Chromatography Column, 5 mL是装填了MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF的一种中压预装柱，规格5 mL，预装柱具有标准接口，可以适配商品化的各类中压色谱系统，如ÄKTA等，方便客户操作。
产品信息
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货号 |
20517ES03/20517ES25 |
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规格 |
5 mL / 5×5 mL |
产品性质
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基质（Matrix） |
高度交联的6%琼脂糖微球 |
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配体（Ligand） |
糊精 |
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粒径（Bead size） |
45-165 µm |
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载量（Capacity） |
>10 mg MBP蛋白（80 kDa）/mL基质 |
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最大压力（PressureMax） |
0.3 MPa，3 bar |
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pH稳定范围（pH range） |
3-12 |
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储存缓冲液（Buffer） |
含20%乙醇的1×PBS |
储存条件
2~8℃保存，有效期2年。
需准备试剂
所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤除菌。
平衡/洗杂缓冲液：20 mM Tris-HCl, 200 mM NaCl, 1 mM EDTA, pH7.4
洗脱缓冲液：20 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, 10 mM 麦芽糖, pH7.4
【注】平衡/洗杂缓冲液或洗脱缓冲液中可加入1 mM DTT 或 10 mM β-巯基乙醇。
使用说明
【注】样品在上样前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤，减少杂质以防阻塞柱子。
1. 样品纯化（以Akta为例）
1）准备：将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子，将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口，将预装柱接到色谱系统中，并旋紧。
2）清洗：3-5倍柱体积去离子水冲洗层析柱中储存液。
3）平衡：用5倍柱体积的平衡Buffer平衡层析柱，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
4）上样：将样品加到平衡好的层析柱中，推荐流速1-5 mL/min，保证目的蛋白与树脂充分接触，提高目的蛋白的回收率，收集流出液，待检测。
注：样品的粘度增加使得即使上样体积很少，也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。
5）洗杂：用10-15倍柱体积的洗杂buffer进行清洗，直到紫外吸收达到一个稳定的基线，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液，待检测。
6）洗脱：用洗脱Buffer采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中，通常5倍柱体积洗脱液足够将目的蛋白洗脱下来。也可以用一个小的梯度，例如20倍柱体积或更多，来分离不同结合强度的蛋白质。
7）清洗与保存：依次使用3倍柱体积的平衡Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料，最后用5倍柱体积的20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的20%乙醇中，置于2-8℃保存，防止填料被细菌污染。
2. SDS-PAGE检测
将纯化过程中得到的样品（包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等）利用SDS-PAGE进行检测，判定其纯化效果。
3.填料清洗
MBP标签蛋白纯化产品可以重复使用而无需再生，但随着非特异结合蛋白的增多和蛋白的聚集，会造成流速和结合载量性能下降，这时可按照下面方法对填料进行清洗。
1）3倍柱体积的去离子水；
2）3倍柱体积的0.1%SDS或0.1 M NaOH溶液；
3）3倍柱体积去离子水；
4）填料清洗后保存在等体积的20%乙醇中，置于2-8℃保存。
注意事项
- 请勿冷冻保存本产品。
- 所有操作过程中，样本需要在4℃或冰上操作。
- 本产品仅作科研用途。
- 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
附表 问题及解决方案
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问题 |
可能原因 |
推荐解决方案 |
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柱子反压过高 |
填料被堵塞 |
清洗树脂 |
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裂解液中含有微小的固体颗粒，建议上样前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤，或离心去除 |
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洗脱组分中无目的蛋白 |
目的蛋白未表达 |
优化实验方案，确保目的蛋白表达 |
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样品或缓冲液中存在一些干扰因素如非离子去污剂 |
样品透析或用平衡buffer稀释 |
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细胞产生大量的淀粉酶影响结合力 |
培养基中添加葡萄糖，抑制淀粉酶的表达 |
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融合蛋白使麦芽糖结合位点阻塞或扭曲影响了目的蛋白的结合力 |
更换载体 |
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柱子结合时间太短 |
将样品与树脂振荡孵育4℃，2h或更长时间 |
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洗脱样品较杂 |
目的蛋白降解 |
加一些蛋白酶抑制剂，如PMSF、EDTA等 |
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平衡/洗杂不充分 |
增加平衡液体积，确保树脂充分平衡/洗杂。 |
Ver.CN20231117
产品简介
MBPSep Dextrin Agarose Resin 是一种纯化带有麦芽糖结合蛋白（MBP）标签蛋白的亲和层析介质，MBP可促进连接蛋白的正确折叠，增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF可以一步纯化MBP融合蛋白，结合的融合蛋白可以用10 mM麦芽糖进行温和洗脱，保护了目的蛋白的活性，MBP融合部分后续可用位点特异性蛋白酶切除。此外，MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF以高度交联的6%琼脂糖凝胶为基质，具有更高的物理化学特性，可以耐受更高的压力，在相对较高的流速下，实现对目的蛋白的纯化，更适于工业大规模蛋白的纯化。
MBPSep Dextrin 6FF Chromatography Column, 5 mL是装填了MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF的一种中压预装柱，规格5 mL，预装柱具有标准接口，可以适配商品化的各类中压色谱系统，如ÄKTA等，方便客户操作。
产品信息
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货号 |
20517ES03/20517ES25 |
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规格 |
5 mL / 5×5 mL |
产品性质
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基质（Matrix） |
高度交联的6%琼脂糖微球 |
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配体（Ligand） |
糊精 |
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粒径（Bead size） |
45-165 µm |
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载量（Capacity） |
>10 mg MBP蛋白（80 kDa）/mL基质 |
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最大压力（PressureMax） |
0.3 MPa，3 bar |
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pH稳定范围（pH range） |
3-12 |
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储存缓冲液（Buffer） |
含20%乙醇的1×PBS |
储存条件
2~8℃保存，有效期2年。
需准备试剂
所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤除菌。
平衡/洗杂缓冲液：20 mM Tris-HCl, 200 mM NaCl, 1 mM EDTA, pH7.4
洗脱缓冲液：20 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, 10 mM 麦芽糖, pH7.4
【注】平衡/洗杂缓冲液或洗脱缓冲液中可加入1 mM DTT 或 10 mM β-巯基乙醇。
使用说明
【注】样品在上样前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤，减少杂质以防阻塞柱子。
1. 样品纯化（以Akta为例）
1）准备：将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子，将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口，将预装柱接到色谱系统中，并旋紧。
2）清洗：3-5倍柱体积去离子水冲洗层析柱中储存液。
3）平衡：用5倍柱体积的平衡Buffer平衡层析柱，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
4）上样：将样品加到平衡好的层析柱中，推荐流速1-5 mL/min，保证目的蛋白与树脂充分接触，提高目的蛋白的回收率，收集流出液，待检测。
注：样品的粘度增加使得即使上样体积很少，也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。
5）洗杂：用10-15倍柱体积的洗杂buffer进行清洗，直到紫外吸收达到一个稳定的基线，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液，待检测。
6）洗脱：用洗脱Buffer采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中，通常5倍柱体积洗脱液足够将目的蛋白洗脱下来。也可以用一个小的梯度，例如20倍柱体积或更多，来分离不同结合强度的蛋白质。
7）清洗与保存：依次使用3倍柱体积的平衡Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料，最后用5倍柱体积的20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的20%乙醇中，置于2-8℃保存，防止填料被细菌污染。
2. SDS-PAGE检测
将纯化过程中得到的样品（包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等）利用SDS-PAGE进行检测，判定其纯化效果。
3.填料清洗
MBP标签蛋白纯化产品可以重复使用而无需再生，但随着非特异结合蛋白的增多和蛋白的聚集，会造成流速和结合载量性能下降，这时可按照下面方法对填料进行清洗。
1）3倍柱体积的去离子水；
2）3倍柱体积的0.1%SDS或0.1 M NaOH溶液；
3）3倍柱体积去离子水；
4）填料清洗后保存在等体积的20%乙醇中，置于2-8℃保存。
注意事项
- 请勿冷冻保存本产品。
- 所有操作过程中，样本需要在4℃或冰上操作。
- 本产品仅作科研用途。
- 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
附表 问题及解决方案
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问题 |
可能原因 |
推荐解决方案 |
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柱子反压过高 |
填料被堵塞 |
清洗树脂 |
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裂解液中含有微小的固体颗粒，建议上样前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤，或离心去除 |
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洗脱组分中无目的蛋白 |
目的蛋白未表达 |
优化实验方案，确保目的蛋白表达 |
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样品或缓冲液中存在一些干扰因素如非离子去污剂 |
样品透析或用平衡buffer稀释 |
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细胞产生大量的淀粉酶影响结合力 |
培养基中添加葡萄糖，抑制淀粉酶的表达 |
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融合蛋白使麦芽糖结合位点阻塞或扭曲影响了目的蛋白的结合力 |
更换载体 |
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柱子结合时间太短 |
将样品与树脂振荡孵育4℃，2h或更长时间 |
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洗脱样品较杂 |
目的蛋白降解 |
加一些蛋白酶抑制剂，如PMSF、EDTA等 |
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平衡/洗杂不充分 |
增加平衡液体积，确保树脂充分平衡/洗杂。 |
Ver.CN20231117
Q：为什么柱子反压过高？
A：可能是填料被堵塞；裂解液中含有微小的固体颗粒，建议上样前最好用 0.22µm 或0.45µm 滤膜过滤，或离心去除。
Q：填料可以使用多少次？
A：由于非特异结合蛋白的增多和蛋白的聚集，会造成流速和结合载量性能下降。具体实验次数需要根据柱效和实验结果。
Q：为什么洗脱组分中无目的蛋白？
A：可能是融合蛋白使麦芽糖结合位点阻塞或扭曲影响了目的蛋白的结合力；建议更换载体。
Q：为什么洗脱样品较杂？
A：可能是平衡/洗杂不充分；建议加一些蛋白酶抑制剂，如PMSF、EDTA 等。
[1] Xu C, Ye P, Wu Q, et al. Identification and functional characterization of three iridoid synthases in Gardenia jasminoides. Planta. 2022;255(3):58. Published 2022 Feb 3. doi:10.1007/s00425-022-03824-3(IF:4.116)