产品描述

Streptavidin Agarose Resin 6FF是一种生物素或生物素化的蛋白、抗体等物质的纯化树脂，其作用原理是基于链霉亲和素与生物之间的相互作用，将链霉亲和素高度交联于6%琼脂糖上，独特的制备工艺使其具有更高的物理化学特性，可以耐受更高的压力，在相对较高的流速下，实现对目的蛋白的纯化，更适于工业大规模蛋白的纯化。

由于链霉亲和素与生物之间的亲和力很强，纯化时需要在变性条件下洗脱；而链霉亲和素对亚氨基生物素的亲和力相对较弱，可以在 pH 9.5-11.0 结合，pH 4.0 时洗脱，不需要使用变性剂，所以能更好的保持亲和素偶联物的活性。

BiotSep Streptavidin 6FF Chromatography Column, 5ML是装填了Streptavidin Agarose Resin 6FF的一种中压预装柱，规格5 mL，预装柱具有标准接口，可以适配商品化的各类中压色谱系统，如ÄKTA 等，方便客户操作。

产品性质

基质（Matrix）	高度交联的6%琼脂糖微球
配体（Ligand）	链霉亲和素
粒径（Bead   size）	45-165 µm
载量（Capacity）	>200 nmol Biotin/mL介质
最大压力（PressureMax）	0.3 MPa，3 bar
pH稳定范围（pH   range）	2-10
储存缓冲液（Buffer）	20%乙醇

运输和保存方法

冰袋运输。4℃保存，有效期2年。

 

需准备试剂

所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤除菌。

生物素或生物素化物质的纯化

结合/洗杂缓冲液：150 mM NaCl，20 mM NaH2PO4，pH 7.4

洗脱缓冲液：8 M盐酸胍，pH 1.5

亚氨基生物素标签物质的纯化

结合/洗杂缓冲液：50 mM碳酸铵，0.5 M NaCl，pH 10.0

洗脱缓冲液：50 mM碳酸铵，0.5 M NaCl，pH 4.0

使用方法

注：样品在上样前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤，减少杂质以防阻塞柱子。另外，确保样品溶液有合适的离子强度和pH值，可以用结合/洗涤缓冲液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释，或者样品用结合/洗涤缓冲液透析。

1.样品纯化（以ÄKTA为例）

1）准备：将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子，将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口，将预装柱接到色谱系统中，并旋紧。

2）清洗：3-5倍柱体积去离子水冲洗层析柱中储存液。

3）平衡：用5倍柱体积的结合Buffer平衡层析柱，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
4）上样：将样品加到平衡好的层析柱中，推荐流速1-5 mL/min，保证目的蛋白与树脂充分接触，提高目的蛋白的回收率，收集流出液，待检测。
注：样品的粘度增加使得即使上样体积很少，也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。
5）洗杂：用10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗，直到紫外吸收达到一个稳定的基线，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液，待检测。
6）洗脱：用洗脱Buffer 采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中，通常5倍柱体积洗脱液足够将目的蛋白洗脱下来。也可以用一个小的梯度，例如20倍柱体积或更多，来分离不同结合强度的蛋白质。
7）清洗及保存：依次使用3倍柱体积的结合Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料，最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的20%的乙醇中，置于4度保存，防止填料被细菌污染。

 

2 .SDS-PAGE检测

将纯化过程中得到的样品（包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等）利用SDS-PAGE进行检测，判定其纯化效果。
【注】由于盐酸胍的带电性强，会中和SDS的电荷，影响后面蛋白在上样缓冲液里的带电性能，电泳时产生沉淀，导致无法电泳。因此后续可以对样本进行透析或者盐析（透析可利用透析袋，PBS作为透析液，透析两次，每次1小时，透析液的体积可控制在样本的100倍）。

 

3 .填料清洗

随着非特异结合蛋白的增多和蛋白的聚集，会造成流速和结合载量性能下降，此时需对填料进行清洗。

1）去除一些沉淀或变形物质

用2倍柱体积的0.1 M NaOH或6 M盐酸胍或8 M尿素溶液进行清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS，pH 7.4清洗。

2）去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质

用3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积1% Triton X-100清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS，pH 7.4清洗。

注意事项

1）请勿冷冻保存本产品。

2）所有操作过程中，样本需要在4℃或冰上操作。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

4）本产品仅作科研用途！

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HB200817

Q：上样的流速是多少？

A：推荐流速 1 -5 mL/min，保证目的蛋白与树脂充分接触，提高目的蛋白的回收率， 收集流出液，待检测。

Q：该产品的配体是什么？

A：链霉亲和素。

Q：上样量如何确定？

A：根据载量>200 nmol Biotin/mL 介质，及柱效来确定上样量。

Q：样品能不能在室温下操作？

A：不能，所有操作过程中，样本需要在 4℃或冰上操作。

Q：该产品的主要应用是什么？

A：主要是用于固定生物素化抗原纯化抗体或者固定生物素化抗体纯化抗原。也可以用于纯化亚氨基生物素标签蛋白。如果用于纯化生物素的蛋白，只能在变性的条件下洗脱下来，那样柱子也就没法继续使用，所以一般不直接纯化生物素的蛋白。

[1] Lin J, Jiang X, Dong M, et al. Hepatokine Pregnancy Zone Protein Governs the Diet-Induced Thermogenesis Through Activating Brown Adipose Tissue. Adv Sci (Weinh). 2021;8(21):e2101991. doi:10.1002/advs.202101991(IF:16.806)