BIO-DL Micro Drop超微量分光光度计

BIO-DL Micro Drop超微量分光光度计

加工定制

BIO-DL Micro Drop超微量分光光度计的产品特点:
更精确——使光程的精度达到0.001mm,实现吸光度检测的高度重复性
更微量——Z小检测体积0.5μL,节约珍贵样本
更快速——高浓度样本可不用稀释直接测量,5秒内显示即时检测结果
更宽范围——Z大可测~15,000ng/μL dSDNA,连续波长范围185-910nm

BIO-DL Micro Drop超微量分光光度计

产品简介:

  • 全波长扫描:185-910nm全波长扫描,显示吸收曲线;
  • 核酸检测:可检测dsDNA、ssDNA、RNA等不同类型核酸的浓度及其在260nm、280nm处的吸光值; 
  • 紫外检测:常规紫外光波长下检测样品吸光值; 
  • 蛋白检测:检测普通纯化后蛋白的浓度和280nm处的吸光值,BCA、Bradford、Lowry、Pierce 660nm 蛋白定量分析; 
  • 探针检测:检测荧光标记探针的吸光值,可用于去除未能标记探针的样品;
  • 菌液/悬浮细胞浓度检测:可检测菌液OD600值及监测悬浮细胞生长情况;
  • 动力学检测:用于酶活力和生长曲线等动力学实验的测定;
  • 用户自定义检测:可自定义设置检测的参数,如大吸收峰,计算公式等。

BIO-DL Micro Drop超微量分光光度计

产品特点:

  • 更精确——使光程的精度达到0.001mm,实现吸光度检测的高度重复性
  • 更微量——小检测体积0.5μL,节约珍贵样本
  • 更快速——高浓度样本可不用稀释直接测量,5秒内显示即时检测结果
  • 更宽范围——大可测~15,000ng/μL dSDNA,连续波长范围185-910nm
  • 更加友好——WiFi无线连接功能,节省时间和空间
  • 更加方便——配套高分辨率平板电脑,实现本地一指控制

产品技术参数
a. 超微量基座模式:
*1. 波长范围: 185-910nm; 
*2. 小样品量:0.5μl;
3. 波长精度: 1nm; 
4. 分辨率: <1.8 nm (FWHM at Hg 253.7 nm); 
5. 光程: 1mm光程长度(可自动调整到0.05mm); 
*6. 检测下限:2ng/μl(dsDNA); 
*7. 检测上限:15000ng/μl(dsDNA); 
8. 吸光率精确度:0.002Abs(1mm 光程); 
9. 吸光率准确性:3%(0.65Abs at 350nm); 
10. 吸光率范围:0.02-300 (相当于10mm光程); 
11. 核酸检测周期:< 5s; 
b. 比色皿模式:
1. 光柱高度:8.5 mm;
2. 控温精确,37 ± 0.5 °C;
3. 搅拌速度: 150-850 rpm;
4. 四种光径可供选择,分别为1,2,5,10mm;
5. 吸光率范围:0.002-1.5;
6. 检测下限:0.4 ng/μl (dsDNA);
7. 检测上限:750 ng/μl (dsDNA);
*8. 无线连接:Wifi
9. 电源:AC110V-220V 50HZ/60HZ电源适配器
10. 尺寸:220×135×180mm
11. 重量:2.1 kg.

售后服务
*免费保修5年,终身维护
免费升级软件

BIO-DL Micro Drop超微量分光光度计

HBS-3096A兽药残留检测仪器

HBS-3096A兽药残留检测仪器

HBS-3096A兽药残留检测仪器采用酶联免疫(ELISA)检测技术,适用标准48T或96T检测试剂盒进行定性或定量检测。兽药残留,是指用药后蓄积或存留于畜禽机体或产品(如鸡蛋、奶品、肉品,蜂蜜等)中原型药物或其代谢产物,包括与兽药有关的杂质的残留。

HBS-3096A兽药残留检测仪器

产品简介

 HBS-3096A兽药残留速测仪采用酶联免疫(ELISA)检测技术,适用标准48T或96T检测试剂盒进行定性或定量检测。兽药残留,是指用药后蓄积或存留于畜禽机体或产品(如鸡蛋、奶品、肉品,蜂蜜等)中原型药物或其代谢产物,包括与兽药有关的杂质的残留,包括磺胺类、硝基呋喃类、氨基糖苷类、四环素类以及一些非法添加物,如三聚氰胺、克伦特罗、莱克多巴胺、孔雀石绿等。

产品特点

工业级彩色液晶显示、触摸屏操作

八通道光纤测量系统、进口探测器

三种线性振板功能、速度时间可调

超宽电压输入设计、全球电压适用

特有的开放式Cut-Off判断公式、设您所设

终点法、两点法、动力学、单/双波长测试模式

专用兽药残留计算方法、适用于禽畜、蛋类、肉品、奶品等药物残留的检测HBS-6096全系列产品,适用德铁公司三年质保服务标准

主要技术参数

光      源:进口卤钨灯、节能设计

测量通道:垂直8光路通道

波长范围:400-800nm

滤 光 片 :标配405、450、492、630nm四片标准滤光片,其它波长可选配,最多可装载15片滤光片

读数范围:0.000-4.000Abs

线性范围:0.000-3.000Abs

重 复 性 :CV≤0.3%

稳 定 性 :≤±0.003Abs示值误差:≤±0.01Abs波长误差:≤±2nm分 辨 率 :0.001Abs(显示、打印)、内部运算0.0001Abs振板功能:振板强度(由弱到强)3级可选,振板时间0 – 255秒可调,误差±2秒显示输入:8吋彩色液晶显示、触摸屏输入电源输入:宽电压设计 AC100V-240V  50-60Hz产品质量:约11Kg

外形尺寸:433mm(L)*320mm(W)*308mm(H)


注:产品规格、参数如有变化,恕不另行通知。


产品常见应用

激素及代谢产物检测(兽药残留)
克伦特罗(Clenbuterol),俗称瘦肉精。因其能改善脂肪型动物的肉与脂肪的比例,并能加速动物生长,而被广泛添加于动物饲料中,克伦特罗可以残留在动物的体内。对人有严重的副作用,轻则导致心跳及心律不正常,重则可引发心脏病。
莱克多巴胺(Ractopamine它可以加快畜禽生长速度,降低酮体脂肪含量,提高瘦肉率。
(19-Nortestosterone)为一种蛋白质同化类.有促进蛋白质合成,减少蛋白质分解,刺激骨髓造血,加速骨生长等作用。有引起性功能紊乱,肝肾功能损害,甚至于诱发肿瘤等潜在危害。
4. 抗生素检测(兽药残留)
8 磺胺类(三合一,五合一):适用于治疗溶血性链球菌、脑膜炎球菌、肺炎球菌等感染疾病,药效持久。用作饲料添加剂,用于防治葡萄球菌及溶血性链球菌等的感染,即主要治疗禽霍乱、禽伤寒,鸡球虫病等。
9硝基呋喃类(Nitrofurans)药物是一种广谱抗生素,因价格较低且效果好,而广泛用于畜禽及水产养殖业,但由于硝基呋喃类药物及其代谢物对人体有致癌、致畸胎副作用,1995年起欧盟禁止硝基呋喃类药物在畜禽及水产动物食品中使用,并严格执行对水产中硝基呋喃的残留检测。
10孔雀石绿是一种带有金属光泽的绿色结晶体,其既是杀真菌剂,又是染料。长期以来,渔民都用它来预防鱼的水霉病、鳃霉病、小瓜虫病等,而且为了使鳞受损的鱼延长生命,在运输过程中和存放池内,也常使用孔雀石绿。研究显示,孔雀石绿在鱼内残留时间太长,且其具有高毒性、高残留和致癌、致畸、致突变等副作用。

HBS-3096A兽药残留检测仪器

HBS-3096A兽药残留检测仪器

biosb——免疫组化(IHC)抗体和检测

biosb——免疫组化(IHC)抗体和检测

biosb

链接:www.biosb.com

biosb成立于1998年,位于美国加利福尼亚州,致力于分子病理学研究,研发高品质的组织化学检测产品。biosb提供高质量的人类和动物组织样本、抗体、试剂和诊断试剂等产品,用于科研和诊断领域。该公司的产品主要用于用于免疫组织化学(IHC)、免疫细胞化学(ICC)、免疫荧光(IF)、显色原位杂交(CISH)和荧光原位杂交(FISH)技术涵盖癌症、免疫学、神经科学、糖尿病、心血管和代谢疾病等领域的研究和治疗。biosb的使命是开发和提供高质量的产品,同时为客户提供优质的技术服务。


biosb主要产品线:

一、免疫组织化学产品

免疫组织化学使用抗体、酶偶联物在组织或细胞中定位特定抗原的方法。抗原抗体反应可以在光学显微镜下观察到。抗体可以是多克隆的或单克隆的(通常来自老鼠或兔子)。用于研究和临床实验室检测感染性病原体、癌症其他目标蛋白质。

biosb提供广泛的免疫组织化学产品(IHC),包括用于IVDASR应用的兔和小鼠单克隆抗体和多克隆抗体,以及完整的检测系统或其组件。biosb提供HRPAP试剂盒:ImmunoDetector试剂盒使用传统的三步生物素链霉亲和素酶/底物色原技术,而PolyDetectorPolyDetectorPlus试剂盒是使用专有的串联超标记技术开发的,用于用酶直接标记免疫球蛋白。这确保了在不同类型的组织或细胞中对所有类型的细胞核、细胞质和膜抗原进行一致且可重复的免疫染色。我们还提供用于ER/PRHER-2neuCD117RUO Complete PolyDetector HRP/DAB试剂盒,包括所有试剂、溶液、组织对照和试剂对照

 

二、免疫荧光产品

免疫荧光是一种用于荧光显微镜的光学显微镜技术,主要用于生物样品。该技术利用抗体对其抗原的特异性,同时使用荧光染料在细胞内产生抗原抗体的信号,因此使靶分子在样品中的分布可视化。biosb提供一系列的直接免疫荧光和间接免疫荧光抗体

 

三、荧光原位杂交法(FISH)与显色原位杂交法(CISH

biosb通过与德国ZytoVision的分销合作伙伴关系,提供分子病理学行业最大的CISHFISH产品线之一。包括数百个用于CISHFISH应用的探针和试剂盒。ZytoFast®Zytodot®提供多种ChromegenecCISH)解决方案。此外ZytoLight®产品线提供了100多种单色、双色、三色和四色探针。

 

四、组织和细胞系芯片

正常人组织芯片NH-TMA)、癌症组织芯片CH-TMA)和癌症人细胞系芯片CH-CLMA)是在多个组织上测试抗体、ISH探针或其他试剂的一种方法。

所有产品都已通过免疫组织化学方法进行了验证,并且对100多种抗体呈阳性。

biosb优势:

1.专业研发:Bio SB专注于免疫组织化学(IHC)抗体和检测系统的研发,提供包括IHC、ICC、IF、CISH和FISH技术在内的广泛产品线,满足不同研究和诊断需求。

2.高质量标准:公司产品遵循FDA QSR 21 CFR Part 820 cGMP、CE IVD和ISO 13485:2016等国际认证标准生产,确保了产品的高标准和质量。

3.环境友好:Bio SB提供环保型的辅助设备,体现了公司对环境保护和可持续发展的承诺。

4.创新技术:公司致力于开发独t的IVD验证抗体和检测系统,推动分子病理学领域的技术进步。

5.国际认可:Bio SB的产品和解决方案在全球范围内受到认可,服务于多个国家和地区的科研和医疗市场。

6.以人为本:公司注重团队合作和人才发展,以诚信和热忱的态度完成工作,推动公司创新和成功。

7.社交媒体影响力:Bio SB在LinkedIn等职业社交网络上拥有一定的关注者,显示出其在行业内的社交影响力和认可度。

biosb客户群:

1.医院和诊断实验室:这些机构需要使用Bio SB提供的免疫组织化学(IHC)抗体和检测系统来进行疾病诊断和研究。

2.大学和研究机构:在进行基础科学研究和开发新型治疗方法时,这些学术机构会使用Bio SB的产品。

3.生物技术公司:专注于生物制药和分子诊断的公司可能会采用Bio SB的产品进行药物开发和生物技术研究。

4.制药企业:在开发新药和进行临床试验的过程中,制药企业可能会利用Bio SB的IVD验证抗体和其他分子病理学产品。

5.认证机构:在产品的认证和标准化过程中,可能需要使用Bio SB的高质量标准产品。

6.消费部门:随着生物基产品需求的增长,终端消费者市场也在逐渐成为Bio SB的潜在客户群。

7.全球市场:Bio SB的产品和解决方案在全球范围内受到认可,服务于不同国家和地区的科研和医疗市场。

8.社交媒体关注者:Bio SB在LinkedIn上的1,235名关注者可能包括行业内专业人士、合作伙伴或潜在客户。

 biosb热卖产品

货号

产品名称

规格

品牌

BSB-3739-05

MTAP

0.5 mL

biosb

BSB2224

Survivin (EP119), RMab

7 mL

biosb

BSB-3739-01

MTAP

0.1 mL

biosb

BSB-3728-01

HEG1

0.1 mL

biosb

BSB6866

c-myc

0.1 mL

biosb

BSB 2227

Survivin (EP119), RMab

0.5 mL

biosb

BSB6583

Tinto c-Met/HGFR

3 mL

biosb

BSB6558

Cyclin E1

0.1 mL

biosb

BSB6556

Tinto Cyclin E1

7 mL

biosb

BSB3200

SATB2

0.1 mL

biosb

BSB0128

PolyDetector HRP Green Kit

15 mL

biosb

BSB 2223

Survivin (EP119), RMab

3.0 mL

biosb

BSB-3754-3

Tinto Trop-2/EGP-1

3 mL

biosb

BSB3363

Tinto LAG-3/CD223

3 mL

biosb

BSB6956

MUM1

0.1 mL

biosb

BSB2513

HER2 neu

0.1 mL

biosb

BSB2981

MDM2

0.1 mL

biosb

BSB3282

Helicobacter Pylori (EP279), RMab

0.1 mL

biosb

BSB3283

Helicobacter Pylori (EP279), RMab

0.5 mL

biosb

BSB3284

Helicobacter Pylori (EP279), RMab

1.0 mL

biosb

BSB5270

CD56

0.1 mL

biosb

BSB5642

Herpes Simplex Virus I & II

0.5 mL

biosb

BSB0155

ChromoProtector

500 mL

biosb

BSB6936

MSH6

0.5 mL

biosb

BSB5712

Ki-67

0.5 mL

biosb

BSB6243

Glypican-3

0.1 mL

biosb

BSB6579

c-myc

0.1ml

biosb

BSB6720

EGFR Phospho

0.5 mL

biosb

BSB-0355-5

Mohs PolyDetector Plus DAB HRP Brown Detection System

5 mL

biosb

BSB 0309

Mohs Mouse/Rabbit PolyDetector DAB HRP Brown Detection System

100 mL

biosb

BSB 2225

Tinto Survivin

15 mL

biosb

BSB 3202

SATB2 (EP281), RMab

1 mL

biosb

BSB 5272

CD56 (123C3.D5), MMab

1 mL

biosb

BSB 6320

CD25

0.1 mL

biosb

BSB 6560

Cyclin E1 (EP126), RMab

1.0 mL

biosb

BSB 6581

c-Myc (EP121), RMab

1 mL

biosb

BSB 6868

c-Myc (9E10), MMab

1 mL

biosb

BSB 6958

MUM1 (EP190), RMab

1 mL

biosb

BSB2136

Prolactin

0.1 mL

biosb

BSB-3739-1

MTAP

1 mL

biosb

BSB-3742-05

pan-TRK

0.5 mL

biosb

BSB-3803-3

Tinto Candida Albicans

3 mL

biosb

BSB-7087

TintoRetriever Digital Pressure Cooker Bundle

EA

biosb

BSB-9419-CS

Trop-2/EGP-1

5 Slides

biosb

BSB0077

PolyDetector Alk Magenta

15 mL

biosb

BSB 0307S

Mohs Mouse/Rabbit PolyDetector DAB HRP Brown Detection System

5.0 ml

biosb

BSB2073

p40

0.1 mL

biosb

BSB2123

PMS2

0.5 mL

biosb

atilabiosystems——致力于核酸扩增和检测技术

atilabiosystems——致力于核酸扩增和检测技术

atilabiosystems

链接:https://atilabiosystems.com/

自 2009 年以来,Atila BioSystems 一直专注于开发用于核酸扩增和临床诊断应用检测的新型化学方法。我们的团队在生物和化学工程方面拥有深厚的专业知识,致力于开发具有超高多路复用能力、准确性和速度的创新技术。我们用于癌症、传染病和产前筛查的免提取分子检测试剂盒与多种检测平台兼容。

atilabiosystems产品线包括:

1、C0VID-19测试试剂盒:

iAMP C0VID-19检测试剂盒是一种实时逆转录等温扩增测试。该测试基于一种称为 OMEGA 扩增的专有等温扩增技术(专li:WO 2017/205510 A1;出版物:The Journal of Molecular Diagnostics,第 22 卷,第 3 期,419-428,2020 年)。OMEGA 引物组旨在特异性检测疑似 C0VID-19 患者的鼻腔、鼻咽和/或口咽拭子中 SARS-CoV-2 病毒的 N 和 ORF-1ab 基因的 RNA 和后来的 cDNA。

2、猴痘检测试剂盒:

Atila AmpFire 猴痘检测试剂盒设计用于从病灶顶部的干拭子或湿拭子、皮肤或囊泡顶部的粘结或新鲜活检中快速定性检测猴痘病毒 DNA。该检测方法可以从其他正痘病毒中特异性地检测猴痘病毒,并且能够检测该病毒的西非和中非分支。

3、产前检查试剂盒:

4、癌症筛查/检测试剂盒:

5、传染病检测试剂盒

6、POWERGENE 9600 PLUS 实时荧光定量 PCR 系统:

Power-Gene 9600 Plus 采用 Ferrotec 特制的 Peltier、先进的光纤技术、全新的全球宽范围电源、独t的专li块耗散技术和底部检测模式,提供更好的加热/冷却速率、温度精度、均匀性和稳定性。Power-Gene 9600 Plus拥有高达96个样品容量和快速的双色扫描速度,5通道检测设计也覆盖了整个荧光检测波长。新设计的自动热盖,无需手动操作,可确保各种管子高度的恒定压力。这种自动热盖模式可以很容易地集成到各种自动系统中。其Windows平板电脑和新的触摸屏带来了出色的操作体验。新改进的Power-Gene 9600 Plus实时荧光定量PCR检测系统可以满足各种客户的研究或临床需求。

7、IAMP PS96 个人工作站:

iAMP PS96 Personal Station 是一款快速而强大的核酸分析仪,可在 60 分钟以内的运行时间内处理 96 个孔。新设计的自动热盖可确保各种管子高度的恒定压力,并可轻松集成到各种自动系统中。仪器配备5通道检测,覆盖整个荧光检测波长。iAMP PS96 Personal Station 采用先进的光纤技术和独t的专li块消散技术,具有更好的温度精度、均匀性和稳定性。

Atila BioSystems的优势:

1.创新技术:Atila BioSystems 自2009年以来一直致力于开发具有超高多重性、准确性和速度的分子检测技术。

2.3N技术:该公司拥有3N技术,这是一种与现有PCR技术设计根本不同的创新核酸扩增技术,能够完q解决引物二聚体和非特异性扩增的问题,为核酸扩增和检测提供优越的灵敏度和多重性。

3.Omega技术:Atila BioSystems拥有Omega核酸扩增技术,这是一项专li的等温扩增技术,允许在扩增过程中引入任何人工序列。Omega技术能够在无需提取过程的情况下,直接从原始样本中以j高多重性的等温实时荧光检测格式检测目标核酸。

4.合作与市场推广:Atila BioSystems与Stilla Technologies合作,推广用于naica®系统(Stilla Technologies)的数字PCR试剂盒和检测,这些试剂盒专为6色naica®系统优化,用于从液体活检样本中检测循环肿瘤DNA(ctDNA)。

5.专业团队:公司团队在生物和化学工程方面拥有深厚的专业知识,致力于开发创新技术,并在极j协作性的工作环境中快速实现项目里程碑。

6.产品应用:Atila BioSystems的产品专注于临床分子诊断应用,包括针对高风险HPV类型的检测,能够在单一管反应中检测14种高风险HPV类型,并同时对HPV 16、18和其他12种进行基因分型。


Atila BioSystems的客户群:

1.医疗机构:公司的产品和技术被用于临床诊断,服务于医疗机构和实验室。

2.研究和科学机构:Atila BioSystems与全球顶级研究机构和科学家合作,参与早期研发和投资合作。

3.制药和生物技术公司:公司与多家国际z名药企合作,进行研发合作,例如与Boehringer-Ingelheim联合建立BI-ATLATL联合实验室,针对合成生物学进行研发合作。

4.高校和高新技术园区:Atila BioSystems与高校和高新技术园区合作,参与创新综合载体的开发、建设和运营,实现前沿科技的快速转化。

5.CRO公司:公司与CRO公司合作,提供驻场服务以及研发组装管理体系,以支持药物开发和测试流程。

quansysbio-多因子检测试剂盒简介

quansysbio-多因子检测试剂盒简介

quansysbio创立于2004专注于开发和提供高质量的生物技术产品和服务,以帮助科学家和研究人员在生命科学领域进行研究和创新。quansysbio技术平台包括Q-Plex™多分析平台和Q-View™软件,可以帮助研究人员进行高通量的生物分析和数据处理。quansysbio还提供定制的实验设计和数据分析服务,以满足客户的特定需求。quansysbio致力于以创新的方法和高效的解决方案,推动生命科学领域的研究和发展。他们的产品和服务已经在全球范围内得到广泛应用,并受到了科学界的认可和好评。

主要产品线

一、Q-Plex单因子检测试剂盒

Q-Plex™ Singleplex分析用于检测和量化各种生物标志物。Q-Plex测试可以测量一个孔118个生物标志物。多重分析有助于解开复杂的免疫特征并识别感兴趣的分析物,而单一因子Q-Plex分析使用相同的抗体对,确保分析之间的数据具有直接可比性。

二、Q-Plex™多因子检测试剂盒

多因子检测试剂盒可实现多种分泌性蛋白(细胞因子、趋化因子、生长因子等)的同时检测和定量,对于生物系统的综合研究而言具有宝贵价值。多因子检测试剂盒,不但具有更优的效率、速度和检测范围。此外,采用多重检测能降低每个靶标结果的成本。quansysbio提供一系列Q-Plex™多因子检测试剂盒。

三、试剂

quansysbio提供全面的缓冲液、稀释液和底物,用于构建和与Q-Plex™技术一起使用。经过多年的评估和性能验证,这些试剂已经针对Q‑Plex™产品和其他基于ELISA的应用进行了优化。

quansysbio热卖产品

货号

产品名称

规格

品牌

115249MS

Q-Plex Mouse Cytokine Panel 1 (6-Plex)

kit

quansysbio

104150GR

Q-View™ Imager LS with PC

kit

quansysbio

104402GR

Q-View Imager Qualification Plate

kit

quansysbio

110433HU

Q-Plex™ Human Cytokine Inflammation Panel 1 (9-plex)

kit

quansysbio

112533HU

Q-Plex™ Human High-Sensitivity (4-plex)

kit

quansysbio

115233HU

Q-Plex™ Human Cytokine Panel 1 (6-plex)

kit

quansysbio

150233HU

Q-Plex Human Angiogenesis (9-Plex)

kit

quansysbio

作为quansysbio中国区域代理,上海金畔生物科技有限公司将为中国客户提供全面的quansysbio的产品。欢迎大家随时联系我们!!!

biomedicadiagnostics——提供专业血栓和凝血检测产品

biomedicadiagnostics——提供专业血栓和凝血检测产品

biomedicadiagnostics

链接:https://biomedicadiagnostics.com/

Biomedica Diagnostic是一家专注于血栓和凝血检测产品的公司,并提供大包装产品的定制服务。BioMedica 的产品和技术遍布 70 多个国家/地区,为不断增长的国际合作伙伴群体带来创新、优质和负担得起的诊断解决方案,这些合作伙伴专注于帮助改善止血和血栓形成领域的患者预后。

Biomedica Diagnostic的产品被用于医疗诊断,帮助医生评估患者的凝血状态,预防和治疗与血栓相关的疾病。由于血栓和凝血障碍与多种疾病相关,包括心脏病和中风等,Biomedica Diagnostic的产品对于提高这些疾病的诊断准确性和治疗成功率具有重要意义。

Biomedica Diagnostic的产品线主要包括:

1、凝血治疗:抗凝疗法的作用是阻断凝血因子的活性。抗凝剂可以阻断凝血级联反应中的特定靶标。批准用于急性冠脉综合征 (ACS)/经皮冠状动脉介入治疗 (PCI) 患者急性期的抗凝剂根据其作用机制进行分类。凝血酶抑制剂是z常用的,分为间接和直接凝血酶抑制剂。抗 X 抑制剂也可用,但在接受 PCI 的患者中使用有限。阻断凝血因子至关重要,因为它们与增强血小板反应性有关,从而增加血栓形成风险。

2、抗磷脂综合征:抗磷脂综合征 (APS) 是一种自身免疫性高凝状态,由抗磷脂抗体干扰凝块形成引起。APS 会导致动脉和静脉血栓形成以及与妊娠相关的并发症,例如流产、死产、早产和严重的先兆子痫。APS 的诊断标准包括一次临床事件(即血栓形成或妊娠并发症)和两次间隔至少三个月的抗体血液检查,以确认狼疮抗凝剂或抗 β2-糖蛋白-I 抗体的存在。由于 β2-糖蛋白-I 抗体是抗心磷脂抗体的一个子集,因此抗心磷脂检测可作为特异性较低的替代品进行。

3、出血曲线:出血特征是筛查测试(活化部分凝血活酶时间、凝血酶原时间、凝血酶时间、纤维蛋白原、D-二聚体),旨在检测异常凝血。基于凝血级联的途径,一起解释时的测试结果用于识别凝血因子的缺陷和缺陷、凝血因子抑制剂的存在、血液稀释药物的有效性、遗传性疾病、严重感染和肝脏问题。在外科手术之前,也可以进行出血剖面以确认正常的血液凝固。

4、D-二聚体:D-二聚体是一种交联纤维蛋白降解产物 (XL-FDP),是凝块降解后存在于血液中的小蛋白质片段。 纤 溶。 测量患者体内 D-二聚体的水平有助于指示血凝块的存在。因此,低于预定临界阈值的水平可用于排除深静脉血栓形成 (DVT)、肺栓塞 (PE) 和中风等疾病。 D-二聚体水平可用于帮助诊断弥散性血管内凝血 (DIC) 并监测 DIC 治疗的有效性。

biomedicadiagnostics热卖产品

货号 品名 规格 品牌
238L SPECTROZYME® TH 50 umoles biomedicadiagnostics
3570 Murine MAb against Gla (gamma-carboxyglutamyl) amino acid, 0.5 mg EA biomedicadiagnostics
848 ACTICHROME® TFPI EA biomedicadiagnostics
848RUO ACTICHROME® TFPI 100T biomedicadiagnostics
222L SPECTROZYME® FXa 50 umole vial biomedicadiagnostics
299 SPECTYROZYME® FIXa, chromogenic substrate for Factor IXa, 10 µmole EA biomedicadiagnostics
449B Factor IXa, human, beta sub-unit, 500 μg EA biomedicadiagnostics
824 ACTICLOT® dPT™ EA biomedicadiagnostics
812RUO Actifluor™ Adamts13 Activity Assay 96T biomedicadiagnostics
470HT human alpha-thrombin(α人凝血酶) 2500Units biomedicadiagnostics
812 ACTIFLUR ADAMTS13 Activity 48T biomedicadiagnostics
222F SPECTROFLUOR™ FXa, fluorogenic substrate for FXa, 10 μmole  EA biomedicadiagnostics
814RUO IMUBIND® ADAMTS13 Autoantibody ELISA 96T biomedicadiagnostics
816A LAtrol™ Lupus Anticoagulant Abnormal Control Plasma, 10 x 0.5 mL EA biomedicadiagnostics
816N LAtrol™ Lupous Anticoagulant Normal Control Plasma, 10 x 1.0 mL EA biomedicadiagnostics
222B SPECTROZYME® FXa, 0.5 gram vial EA biomedicadiagnostics
C.BMD.FIBL-01ML-8A Fibrinogen Control Low Abnormal 10x1ml biomedicadiagnostics
C.BMD.CON3-01ML-8A Control Level 3 High Abnormal 10x1ml biomedicadiagnostics
C.BMD.FIBN-01ML-8A Fibrinogen Control Normal 10x1ml biomedicadiagnostics
SCCN-180 Special Coagulation Control Normal CE Mark 10 x 1.0 mL biomedicadiagnostics
C.BMD.CON2-01ML-8A Control Level 2 Low Abnormal 10x1ml biomedicadiagnostics
RCCN-040 Routine Coagulation Control Normal CE Mark 10 x 1.0 mL biomedicadiagnostics
C.BMD.CON1-01ML-8A Control Level 1 Normal 10x1ml biomedicadiagnostics
2042 von Willebrand Factor (vWF), human, FVIII free, 100 μg EA biomedicadiagnostics
820 ACTICHROME® Heparin (Anti-FIIa) EA biomedicadiagnostics
813RUO IMUBIND® ADAMTS13 ELISA 96T biomedicadiagnostics
4509 Tissue Factor, Human 0.5mg biomedicadiagnostics
350 Murine MAb against fibrin neotope beta-chain IgG, 0.5 mg EA biomedicadiagnostics
299FL SPECTROFLUOR™FIXa 50umole biomedicadiagnostics
251L SPECTROZYME® PL, 50 μmole vial EA biomedicadiagnostics
245 Protac®, direct protein C activator, 3 units EA biomedicadiagnostics
222-5umole SPECTROZYME® FXa 5 umole vial biomedicadiagnostics
814 IMUBIND® ADAMTS13 Autoantibody ELISA EA biomedicadiagnostics

如何选择您的胶原蛋白检测试剂盒?

 

 

如何选择您的胶原蛋白检测试剂盒?

 

胶原蛋白是脊椎动物体内丰富的蛋白质,约占全身蛋白质的30%。它们在组织结构中起着重要作用,并具有许多其他功能,如细胞生长、分化、组织修复和许多病理条件。
胶原蛋白是一个细胞外基质蛋白家族;在脊椎动物中,至少鉴定出27种胶原类型,具有42条不同的多肽链。I型、II型、III型、V型、XI型、XXIV型、XXVII型胶原是形成原纤维的胶原,含有三重螺旋结构,能够捆绑成原纤维。
胶原的特点是存在稳定胶原三螺旋所需的羟脯氨酸残基。
一些胶原的组织分布有限,例如II、IX和XI型胶原几乎只存在于软骨中,IV型胶原的存在仅限于基底膜。I型、II型和III型胶原是组织中含量丰富的胶原。
虽然人体中存在超过3公斤的胶原蛋白,但胶原蛋白是一种难以纯化和分析的分子。这部分是由于胶原蛋白分子通过不同类型的交联形成了广泛的网络,这使得胶原蛋白分子不可溶且难以提取。

目前,对于胶原蛋白的分析,存在各种类型的分析方法:
-ELISA检测胶原特异性前体结构域
-ELISA检测特定类型的胶原蛋白
-利用特异性胶原抗体进行蛋白质印迹
-组织切片天狼星红染色
-基于天狼星红的可溶性胶原蛋白分析
-样品水解后羟脯氨酸残留的测定(通过比色试剂盒或HPLC)。
QuickZyme Biosciences开发了一套分析胶原蛋白的方法,无论是从任何物种和任何组织中可溶的还是不溶的。
QuickZyme Biosciences提供胶原蛋白分析
•QuickZyme可溶性胶原蛋白分析
•QuickZyme总胶原蛋白测定
•QuickZyme敏感组织胶原蛋白分析
•QuickZyme羟脯氨酸测定
•QuickZyme敏感组织羟脯氨酸测定

QuickZyme可溶性胶原蛋白测定
该分析可识别可溶性或(酸/胃蛋白酶)溶解的纤维状胶原蛋白。
该分析为比色法,采用96孔板格式,基于胶原与天狼星红(一种含磺酸基的阴离子染料)的沉淀。染料在高pH下从沉淀的络合物中释放,然后进行比色检测。对测定进行了优化,使其他蛋白质(如白蛋白)不会干扰。明胶(变性胶原蛋白)不被该分析所识别。该试验需要可溶性或可溶性的原纤维胶原。
应用:该方法用于测定细胞培养基中的可溶性胶原蛋白和细胞提取物中的可溶性胶原蛋白(酸或酸/胃蛋白酶)。化验不是胶原蛋白分析:哪种化验可以用于什么应用?
建议用于组织,因为大多数组织胶原蛋白是交联的和不溶的。

 

QuickZyme总胶原蛋白测定
该分析可识别所有类型的胶原蛋白(成熟、未成熟、前胶原、降解胶原蛋白、交联胶原蛋白、各种来源和种类的胶原蛋白)。
该分析为比色法,采用96孔板格式,并基于羟脯氨酸的定量,羟脯氨酸是氨基酸脯氨酸的一种改良版本,几乎只存在于胶原蛋白中。含胶原蛋白样品经酸水解后,羟脯氨酸从胶原蛋白中释放出来。水解在95℃下进行,水解产物可直接用于羟脯氨酸分析,无需洗涤或干燥步骤。
应用:该方法用于总胶原蛋白的定量。这包括所有前胶原、未折叠胶原、成熟胶原以及样本中所有胶原类型的胶原降解产物和明胶。由于第一步是样品的*水解,提取胶原蛋白的困难不起作用。该分析适用于所有类型
样本,包括任何物种的组织。由于组织样品中的未知物质,该分析受到基质效应的影响。在许多样品中,可以通过稀释水解物来防止这种影响。如果由于胶原蛋白浓度较低(例如在肝组织中),因此不需要充分稀释水解物,我们建议使用敏感组织
胶原蛋白测定QuickZyme羟脯氨酸测定
该测定与总胶原蛋白测定相似,不同之处在于不包括胶原蛋白水解的方案和试管。
应用:该分析与总胶原蛋白分析具有相同的应用领域,但适用于有自己的水解方法或收集待分析水解样品的客户。
QuickZyme敏感组织胶原测定
该测定法与QuickZyme总胶原蛋白测定法非常相似,但不受基质效应的影响,因此是低胶原蛋白浓度和大量基质效应的肝组织等组织的测定法。
应用:该测定法用于测定(组织)样品中的总胶原蛋白,该样品具有低浓度的胶原蛋白和基质效应,需要在QuickZyme总胶原蛋白测定中稀释

 

QuickZyme敏感组织羟脯氨酸测定
该试验与QuickZyme敏感组织胶原蛋白试验相似,不同之处在于不包括胶原蛋白水解的方案和管道。
应用:该分析与QuickZyme敏感组织胶原蛋白分析具有相同的应用领域,但适用于有自己的酸水解方法或收集待分析水解样品的客户。

 

One 96 well plate kit   .
Two 96 well plate kits  .
Five plate bulk kit         .
€   352     .
€   665     .
€ 1317   .
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DNA残留检测试剂盒


DNA残留检测试剂盒

简要描述:对所使用的疫苗,我们Z关心的是疫苗的效果和其安全性。

详细介绍

产品咨询

疫苗DNA残留对人体的潜在危害

对所使用的疫苗,我们zui关心的是疫苗的效果和其安全性。现在很多疫苗是细胞培养疫苗,比如重组(CHO细胞)乙肝疫苗,Vero细胞狂犬病疫苗等大多数疫苗都是用细胞培养的方法生产,而对疫苗的纯化是关键问题,我们要尽可能的去除宿主细胞DNA和宿主蛋白。假若宿主细胞的DNA和蛋白同疫苗一起注入人体将会产生不可预料的后果。就以疫苗DNA残留为例,疫苗DNA残留可能造成插入突变﹑导致抑癌基因失活﹑癌基因被激活等,zui终造成疫苗使用者致癌。

 

疫苗DNA残留的相关法规

由于有如此潜在的危险性,所以许多机构对疫苗DNA残留制定了相关标准,1986年世界卫生组织规定用细胞系生产的疫苗DNA残留不能超过100 pg /支 ,而在1998年世界卫生组织认为细胞系生产的疫苗DNA残留不能超过10 ng /支,而在1997年美国药品食品卫生监督局规定在美国使用的细胞系疫苗DNA残留不能超过10 pg /支,中国规定的细胞系疫苗DNA残留不能超过100 pg /支。

所以在疫苗生产中要随时对DNA残留进行检测,以便知道每个过程除掉DNA残留的能力。在每一批产品中我们必须检测DNA残留,所以我们必须运用敏感且行之有效的对DNA残留定量的检测方法。通常规定每支疫苗DNA残留不能超过100 pg,也就大约等同于17个甚至更少CHO细胞基因组DNA的含量,对如此微量的DNA残留进行检测,所用的技术方法就必须相当敏感和稳定,现在对DNA残留定量的方法主要有以下三种:
1、分子杂交技术检测DNA残留
2、基于DNA结合蛋白的方法(Threshold® immunoassay)检测DNA残留
3、实时定量PCR法检测DNA残留

 

分子杂交技术检测DNA残留的原理和方法

分子杂交分析的基本原理是基于DNA探针检测变性而且固定在硝-酸纤维素膜上的宿主细胞DNA。这些探针可以不依赖宿主细胞DNA来制备,例如用随机引物制备探针。探针上标记酶﹑生物素﹑放射性同位素﹑地高辛(Dig)等。由于地高辛标记核酸探针,操作方便、灵敏度高,已标记的探针在4℃贮存可达两年之久,方便随时应用,所以现在常采用地高辛标记核酸探针,用光标记法将光敏Dig标记到探针上,制成光敏-Dig-核酸探针,再与固定在硝–酸膜上的靶核酸进行靶DNA分子杂交,使之与抗Dig-碱性磷酸酶结合,zui后可用不同的检测方式进行检测,发光检测和显色检测均可,灵敏度可达10pg以下(表 1  三种DNA残留检测方法的比较)。

 

基于DNA结合蛋白的方法(Threshold® Immunoassay)检测DNA残留的原理和方法

Threshold® Immunoassay分析系统是基于两种DNA序列非特异性蛋白,单链DNA(ssDNA)结合蛋白(SSB)和抗ssDNA 的单抗。检测的基本过程是当生物素—DNA单链结合蛋白和尿素酶—抗ssDNA 的单抗与变性的宿主细胞DNA结合zui终形成复合物,通过亲合素将此复合物连接到生物素—硝–酸纤维素膜,在通过洗涤所有非特异性的被洗脱掉,zui后放于有尿素溶液的读数仪,尿素酶催化尿素分解成NH3和CO2 导致PH值发生变化,读数仪根据PH值的变化换算成DNA的量,从而达到检测DNA残留含量的目的。

 

实时定量PCR法检测DNA残留的原理和方法

荧光定量PCR是基于PCR扩增时,在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,产物的增加可以通过荧光信号指示,通过实时监控PCR体系中的荧光信号,对样本中初始模板进行定量分析。定量PCR可实时检测产物量,通过加入已知浓度的标准样品绘制标准曲线,然后根据待测样品在标准曲线中的位置推算初始模板的浓度,从而达到检测DNA残留含量的目的。

 

三种检测DNA残留方法的比较

3种方法用来检测疫苗DNA残留都要对样品进行相应的处理,这对zui终的结果的准确性至关重要。而杂交相对对样品DNA的损失小,而用Q-PCR需要提取样品的DNA,损失较大。在我们选择那种方法时我们要考虑它的稳定性,敏感性,成本等以至找到*的性价比的方法(表 1),从表1 我们不难发现使用分子杂交的方法是一种比较可行经济实用的方法,目前国内也主要是用此方法。

表 1  三种DNA残留检测方法的比较

 

Hybridization

Threshold® Immunoassay

Q-PCR

特异性

物种特异性

无特异性

序列特异性

检测的zui小序列长度(bp)

50

600

150

抗干扰性和稳定性

++

+

+

所需时间(h)

48

6

2

敏感性(pg)

10

6

<1

初期花费($)

1200

>40000

>70000

 

罗氏Roche DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit II试剂盒产品简介

产品中文名称:高效DNA地高辛标记和检测试剂盒II

罗氏应用科学部(Roche Applied Science)是zui早致力于向用户提供非放射标记技术的公司之一,让更多的科研工作者们可以避免使用危险的放射性同位素。DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit II(第二代)是由罗氏公司研发,并且是在DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit I(*代)的基础上优化升级的,具有更高的准确性、更好的灵敏度、操作时间更短等特点。自1995年地高辛产品上市以来,尽管有定量PCR技术的应用,DIG系统仍然是非放射性高效标记—检测技术的*,被广泛地应用各种膜杂交及原位杂交技术中。

 

高效DNA地高辛标记和检测试剂盒II 图片

 

欲了解详细信息请咨询 

 

罗氏Roche DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit II检测原理

该产品是用地高辛(地高辛:英文名Digoxigenin,简称DIG;又称异羟基洋地黄毒甙元,是一种类固醇半抗原分子)标记的DNA探针,应用于分子杂交和随后的化学发光检测。检测主要分三阶段进行:1. DNA标记:根据随机引物标记技术,生成DIG地高辛标记的DNA探针。 2. 杂交:按照标准杂交方法进行,将地高辛标记的DNA探针用于核酸点杂交,可选择带正电的尼龙膜或纯硝–酸纤维素膜作为杂交膜。 3. 免疫学检测:首先将标记有AP的地高辛抗体与杂交探针免疫结合;然后在477 nm波长下,通过检测碱性磷酸酶与CSPD底物产生的化学发光反应的数值,从而达到免疫检测的目的。

 

罗氏Roche DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit II的显著特点

★ Accurate and fast—–使用预混合的高效地高辛(DIG)标记的随机引物可以缩短标记DNA探针的操作时间,提高标记物的产量。
★ Sensitive—–在人类DNA的复合物和植物基因组中,可以检测到单个拷贝的基因。
★ Time-saving—–地高辛(DIG)标记的探针可以储存一年以上,杂交液可以反复使用3~5次(具体要根据每次杂交过程中标记探针产生信号的强弱来确定)。

 

起福生物为您提供配套的产品

生物制品加工过程中培养物残留的污染物(Bioprocess Contaminant, BC)ELISA检测试剂盒

宿主细胞蛋白(Host Cell Protein, HCP)残留检测ELISA试剂盒

例如: Vero Cell HCP ELISA Kit
           CHO HCP ELISA Kit, 3G
           Pichia pastoris HCP ELISA Kit 
           E.coli HCP ELISA Kit
           Human Erythropoietin(EPO) Quantikine IVD ELISA Kit 

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           尼龙膜
           PVDF膜
           硝–酸纤维素膜
           鱼精DNA
           蛋白酶K

 

11745832910

Product Quantity  Cat. No.
Qubit® 2.0 Fluorometer Each Q32866
Qubit® Quantitation Starter Kit Each Q32871
Qubit® Quantitation Lab Starter Kit Each Q32872
Qubit® dsDNA BR Assay Kit 100 assays, 2–1000 ng
500 assays, 2–1000 ng
Q32850
Q32853
Qubit® dsDNA HS Assay Kit 100 assays, 0.2–100 ng
500 assays, 0.2–100 ng
Q32851
Q32854
Qubit® ssDNA Assay Kit 100 assays, 1–200 ng Q10212
Qubit® RNA Assay Kit 100 assays, 5–100 ng
500 assays, 5–100 ng
Q32852
Q32855
Qubit® RNA BR Assay Kit 100 assays, 20–1000 ng
500 assays, 20–1000 ng
Q10210
Q10211
Qubit® Protein Assay Kit 100 assays, 0.25–5 μg
500 assays, 0.25–5 μg
Q33211
Q33212
Qubit® Assay Tubes Set of 500 Q32856

 

疫苗生产中DNA残留检测试剂盒


疫苗生产中DNA残留检测试剂盒

简要描述:产品是用地高辛(地高辛:英文名Digoxigenin,简称DIG;又称异羟基洋地黄毒甙元,是一种类固醇半抗原分子)标记的DNA探针,应用于分子杂交和随后的化学发光检测。检测主要分三阶段进行:1. DNA标记:根据随机引物标记技术,生成DIG地高辛标记的DNA探针。

详细介绍

产品咨询

疫苗DNA残留对人体的潜在危害

对所使用的疫苗,我们zui关心的是疫苗的效果和其安全性。现在很多疫苗是细胞培养疫苗,比如重组(CHO细胞)乙肝疫苗,Vero细胞狂犬病疫苗等大多数疫苗都是用细胞培养的方法生产,而对疫苗的纯化是关键问题,我们要尽可能的去除宿主细胞DNA和宿主蛋白。假若宿主细胞的DNA和蛋白同疫苗一起注入人体将会产生不可预料的后果。就以疫苗DNA残留为例,疫苗DNA残留可能造成插入突变﹑导致抑癌基因失活﹑癌基因被激活等,zui终造成疫苗使用者致癌。

 

疫苗DNA残留的相关法规

由于有如此潜在的危险性,所以许多机构对疫苗DNA残留制定了相关标准,1986年世界卫生组织规定用细胞系生产的疫苗DNA残留不能超过100 pg /支 ,而在1998年世界卫生组织认为细胞系生产的疫苗DNA残留不能超过10 ng /支,而在1997年美国药品食品卫生监督局规定在美国使用的细胞系疫苗DNA残留不能超过10 pg /支,中国规定的细胞系疫苗DNA残留不能超过100 pg /支。

所以在疫苗生产中要随时对DNA残留进行检测,以便知道每个过程除掉DNA残留的能力。在每一批产品中我们必须检测DNA残留,所以我们必须运用敏感且行之有效的对DNA残留定量的检测方法。通常规定每支疫苗DNA残留不能超过100 pg,也就大约等同于17个甚至更少CHO细胞基因组DNA的含量,对如此微量的DNA残留进行检测,所用的技术方法就必须相当敏感和稳定,现在对DNA残留定量的方法主要有以下三种:
1、分子杂交技术检测DNA残留
2、基于DNA结合蛋白的方法(Threshold® immunoassay)检测DNA残留
3、实时定量PCR法检测DNA残留

 

分子杂交技术检测DNA残留的原理和方法

分子杂交分析的基本原理是基于DNA探针检测变性而且固定在纤维素膜上的宿主细胞DNA。这些探针可以不依赖宿主细胞DNA来制备,例如用随机引物制备探针。探针上标记酶﹑生物素﹑放射性同位素﹑地高辛(Dig)等。由于地高辛标记核酸探针,操作方便、灵敏度高,已标记的探针在4℃贮存可达两年之久,方便随时应用,所以现在常采用地高辛标记核酸探针,用光标记法将光敏Dig标记到探针上,制成光敏-Dig-核酸探针,再与固定在膜上的靶核酸进行靶DNA分子杂交,使之与抗Dig-碱性磷酸酶结合,zui后可用不同的检测方式进行检测,发光检测和显色检测均可,灵敏度可达10pg以下(表 1  三种DNA残留检测方法的比较)。

 

基于DNA结合蛋白的方法(Threshold® Immunoassay)检测DNA残留的原理和方法

Threshold® Immunoassay分析系统是基于两种DNA序列非特异性蛋白,单链DNA(ssDNA)结合蛋白(SSB)和抗ssDNA 的单抗。检测的基本过程是当生物素—DNA单链结合蛋白和尿素酶—抗ssDNA 的单抗与变性的宿主细胞DNA结合zui终形成复合物,通过亲合素将此复合物连接到生物素—纤维素膜,在通过洗涤所有非特异性的被洗脱掉,zui后放于有尿素溶液的读数仪,尿素酶催化尿素分解成NH3和CO2 导致PH值发生变化,读数仪根据PH值的变化换算成DNA的量,从而达到检测DNA残留含量的目的。

 

实时定量PCR法检测DNA残留的原理和方法

荧光定量PCR是基于PCR扩增时,在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,产物的增加可以通过荧光信号指示,通过实时监控PCR体系中的荧光信号,对样本中初始模板进行定量分析。定量PCR可实时检测产物量,通过加入已知浓度的标准样品绘制标准曲线,然后根据待测样品在标准曲线中的位置推算初始模板的浓度,从而达到检测DNA残留含量的目的。

 

三种检测DNA残留方法的比较

3种方法用来检测疫苗DNA残留都要对样品进行相应的处理,这对zui终的结果的准确性至关重要。而杂交相对对样品DNA的损失小,而用Q-PCR需要提取样品的DNA,损失较大。在我们选择那种方法时我们要考虑它的稳定性,敏感性,成本等以至找到*的性价比的方法(表 1),从表1 我们不难发现使用分子杂交的方法是一种比较可行经济实用的方法,目前国内也主要是用此方法。

表 1  三种DNA残留检测方法的比较

 

Hybridization

Threshold® Immunoassay

Q-PCR

特异性

物种特异性

无特异性

序列特异性

检测的zui小序列长度(bp)

50

600

150

抗干扰性和稳定性

++

+

+

所需时间(h)

48

6

2

敏感性(pg)

10

6

<1

初期花费($)

1200

>40000

>70000

如何检测蛋白磷酸化

蛋白激酶将磷酸基团从ATP 转移到蛋白多肽底物上的丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸残基,直接影响目标的活性和功能。放射性研究表明,真核细胞中大约30%的蛋白经过磷酸化修饰。这一关键的 翻译后修饰调控了广泛的细胞活性,包括细胞周期、分化、代谢和神经元通讯。此外,异常的磷酸化事件与许多疾病状态相关。在评估磷酸化时,选择的方法可能会 有所不同,这取决于多个因素,包括提出的具体问题以及特殊仪器或试剂的可用性。如何检测蛋白磷酸化,本文简要介绍了几种常用方法,并提出了每种方法的优点 和缺点。

激酶活性分析

蛋白激酶通常是多个信号转导网络的常见组分,它们影响了众多负责生物反应的下游效应物, 因此,评估某个特定激酶的活性可能为平行通路提供宝贵信息。生物学样品中的激酶活性通常是在体外测定的,在ATP的存在下将免疫沉淀的激酶与外源底物共同 孵育。之后通过一些报告系统来评估特定激酶对底物的磷酸化,包括显色、放射性或荧光检测。此外,R&D Systems还提供非放射性的Universal Kinase Activity Kit,能够定量任何可产生ADP的激酶的活性。尽管我们能够获得有关特定激酶行为的信息,但评估细胞提取物中的酶活性仅仅揭开了信号通路的冰山一角。我 们对蛋白如何被修饰还知之甚少,且体外活性分析也不能说明内源磷酸酶活性的潜在作用。磷酸化蛋白的直接检测可能为细胞如何应对外界刺激提供更详细的分析, 因为磷酸化肽段的鉴定为蛋白的表达和功能状态提供信息。

磷酸化特异抗体的开发

直接测定蛋白磷酸化的一种经典方法是将整个细胞与放射性标记的32P-磷酸盐共同孵育, 获得细胞提取物,通过SDS-PAGE分离,并曝光在胶片上。这种繁琐的方法需要多次几小时的孵育,且使用放射性同位素。其他传统方法包括2D凝胶电泳, 这种技术假定磷酸化会改变蛋白的迁移率和等电点。

鉴于这些方法很费力,磷酸化依赖抗体的开发受到研究人员的极大欢迎。1981年,*个 有记录的磷酸化抗体在兔子中产生,使用的是钥孔虫戚血蓝蛋白(KLH)的苯甲酰磷酸结合物。这一抗体广泛地识别了包含磷酸酪氨酸的蛋白。十年后,利用合成 的磷酸化肽段来免疫兔子,开发出多个磷酸化状态特异抗体,这些磷酸化肽段代表了目标蛋白磷酸化位点周围的氨基酸序列。之后将免疫血清上样到肽段亲和柱中, 产生高度特异的免疫试剂。磷酸化特异抗体的出现为传统方法的改进以及新的免疫分析技术的开发打开了大门。在任何技术中使用磷酸化特异抗体的忠告是,成功的 检测依赖于抗体与目的磷酸化蛋白的特异性和亲和力。

Western Blot

Western blot是评估蛋白磷酸化状态的zui常用方法,大部分细胞生物学实验室都拥有开展这些实验的设备。利用SDS-PAGE分离生物样品,随后转移到膜上(通常 是PVDF或尼龙膜),之后利用磷酸化特异的抗体来鉴定目的蛋白。典型的Western blot实验步骤避免了使用放射性同位素时的危险品和废物处理要求。许多磷酸化特异抗体十分灵敏,可轻松检测常规样品(如10-30 µg细胞提取物)中的磷酸化蛋白。由于测得的磷酸化蛋白水平可能随处理或凝胶上样误差而变化,研究人员常常利用一个抗体来检测同源蛋白的总水平(而不考虑 磷酸化状态),以确定磷酸化组分相对于总组分的比例,并充当上样内对照。化学发光和显色法都很常用,而分子量marker常用来提供蛋白分子量的信息。

酶联免疫吸附分析(ELISA

ELISA已逐渐成为测定蛋白磷酸化的一种有力方法。ELISA的定量能力优于 Western blot,且在调节激酶活性和功能的研究中表现出巨大的作用。这种微孔板形式的分析一般利用目的蛋白特异的捕获抗体,与磷酸化状态无关。随后让目的蛋白结 合在抗体包被的分析板中,目的蛋白可以是纯的,也可以是复杂的异质样品(如细胞裂解液)中的一个组分。加入待分析的磷酸化位点特异的检测抗体。这些分析通 常设计为显色或荧光检测。产生的信号强度与zui初样品中存在的磷酸化蛋白的浓度成正比。与更为传统的免疫印迹相比,磷酸化特异的ELISA技术具有一些优 点。首先,利用经过校准的标准品,可轻松定量结果。其次,以三明治形式使用目的蛋白特异的两个抗体,带来了高的特异性。第三,ELISA的灵敏度更高允许 使用更少量样品,检测低丰度的蛋白。zui后,微孔板形式的通量比传统的Western blotting要高得多。ELISA通常带来了激酶活性的间接测定。不过,另一类ELISA技术使用固定化的捕获抗体、底物和磷酸化底物的检测方法,带 来激酶活性的更直接测定。

基于细胞的ELISA

尽管体外生物化学激酶分析(如典型的三明治ELISA)常用于假说检验和药物筛选,但它 们无法复制细胞内的环境。分析完整细胞内的蛋白磷酸化也许能更准确地代表特定信号通路网络的状态。一些免疫分析zui近被开发出来,能够在完整细胞的背景下测 定蛋白磷酸化。细胞在同一个孔中被刺激、固定和阻断。使用磷酸化特异抗体,利用荧光或显色检测系统来评估磷酸化状态。此外,在微孔板的同一个孔中同时检测 磷酸化蛋白和总蛋白。因此,来自目的蛋白的信号可通过第二种蛋白来标准化,校正各孔之间的差异,实现磷酸化蛋白水平的准确评估,并比较多个样品,与传统免 疫印迹中使用磷酸化特异和总蛋白抗体相似。这些分析绕过了制备细胞裂解液的需要,因此更适合高通量分析。

细胞内流式细胞术和ICC/IHC

传统的细胞内流式细胞术和免疫细胞化学/免疫组织化学(ICC/IHC)是检测磷酸化事 件的有力工具。流式细胞仪利用激光来激发用于抗体检测的荧光染料。在评估同一个细胞中的多个蛋白时,必须精心选择滤光片组合和荧光染料,其光谱不能重叠。 流式细胞术很有优势,因其实现了快速、定量的单细胞分析。通过细胞表面标志的分型可检测异质群体中特定细胞类型的蛋白,而无需在物理上分离细胞。通过这种 方法可分析稀有的细胞群体,而不用担心细胞损失或细胞分选过程中可能发生的蛋白表达变化。

ICC通常指的是利用显微镜对培养细胞中的蛋白进行检测,而IHC指的是对完整组织切片 中的蛋白进行检测。与流式细胞术相似,这些技术实现了细胞或组织内多个蛋白的评估,只是要足够重视,避免荧光光谱或颜色的重叠。荧光和显色检测技术都经常 使用。与监控磷酸化的其他形式不同,ICC通常是确定细胞内定位的方法。流式细胞术和ICC/IHC都需要高亲和力、高特异性的抗体、阻断步骤、对照 和抗体滴定,以避免因非特异性结合而带来的不明确结果。

通过流式细胞术和ICC来检测磷酸化蛋白要求蛋白是稳定的,且抗体能够接近。细胞通常经 过刺激,并由甲醛或多聚甲醛固定,以交联磷酸化蛋白,使其稳定,便于分析。固定后的细胞必须经过透化处理,让磷酸化特异抗体可进入细胞。对于不同的亚细胞 定位,通常使用不同的透化技术。温和的去垢剂可实现细胞质蛋白的检测,而抗体要想接近核蛋白,可能需要使用酒精。酒精透化也可增强磷酸化特异抗体的磷酸化 蛋白检测,因酒精具有变性的特点。

质谱

复杂的生物样品(如细胞裂解液)中蛋白质磷酸化的全面评估(磷酸化蛋白质组学)对于了解 基于磷酸化的信号网络很重要。复杂的蛋白混合物中大规模的磷酸化蛋白分析包括磷酸化蛋白和磷酸化肽段的鉴定,以及磷酸化残基的测序。质谱(MS)技术是完 成这些任务的有用工具。尽管质谱在鉴定单个蛋白上具有出色的灵敏度和分辨率,但对于磷酸化蛋白的分析,还有一些固有的困难。首先,磷酸化肽段的信号通常较 弱,因为它们带负电荷,而电喷雾质谱在正电模式下作用,因此电离效果不好。其次,在大量非磷酸化蛋白的高背景之下,很难观察到低丰度目的蛋白的信号。为了 克服这些缺点,人们已经开发出一些富集策略,包括固定化金属亲和层析(IMAC)、磷酸化特异抗体富集、化学修饰法(如磷酸化丝氨酸和苏氨酸的β-消去反 应),以及用生物素化的基团取代磷酸基团。

多个分析物图谱分析

质谱技术如碰撞诱导解离(CID)和电子转移解离(ETD),提供了肽段序列和翻译后修 饰(磷酸化)的全面平行分析。这些技术相当费力,而当特定通路作为主要研究目标时,可能不需要全面的磷酸化分析策略。这导致一些同时测定多个分析物的蛋白 磷酸化的新方法被开发出来。总的来说,这些方法涉及到磷酸化特异抗体的使用,包括基于微孔板、磁珠和膜,基于磁珠和基于膜的检测形式。这些分析zui明显的好 处在于通量能力被大大提高,避免了运行多个Western blot或传统的ELISA分析的需要。这些技术也能够提供更多的数据,而所需的样品量极少。相应地,蛋白图谱分析通常被认为灵敏度不及传统的对应技术, 因潜在的抗体交叉反应性。

磷酸化蛋白多重分析

新的基于微孔板的Proteome Profiler 96 Phospho Antibody Arrays

特点:

• 高达16个分析物/孔

• 3小时的快速分析时间

• 低的样品量要求

• 化学发光和近红外检测

• 易于高通量

结论

评估蛋白磷酸化往往是细胞生物学家保留曲目中*的一部分,可了解引起细胞活性的细 胞内因子。考虑到激酶扮演的重要角色,研究人员必须要有的工具,才能测定蛋白磷酸化和/或激酶活性。每种技术在不同的背景下发挥优势,因此必须精心挑 选实验设计的方法。这篇综述简要介绍了一些评估蛋白磷酸化的zui常用方法。由于需求在不断增长,方法也在不断改善,让研究人员能够更深入地了解这些复 杂而重要的过程,zui终控制细胞功能。