ATP发光法细胞活力检测试剂盒|ATP Luminescent Cell Viability Assay Kit
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COA
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ATP是细胞内最重要的能量分子，可以用来衡量细胞新陈代谢水平，并与活细胞数目具有良好的线性关系，因此，可通过ATP含量反应活细胞的数目。本试剂盒借ATP依赖的荧光素酶催化的荧光素发光反应，通过化学发光信号测定细胞内 ATP含量，从而检测细胞活力或定量检测活细胞数目，灵敏度高、线性范围宽。本试剂盒兼容少量样品检测以及大量样品的高通量筛选检测。
本试剂盒提供的发光法细胞活力检测试剂线性范围宽、灵敏度高、稳定性好。96孔板中，在100个至100,000个细胞范围内有良好的线性关系，但不同细胞的检测数量上限会有不同。此外，操作简单，试剂盒中提供的检测试剂为即用型，读数稳定，检测速度快，完成检测仅需约10 min，无需洗涤细胞，也无需更换或去除培养液。相比于其他常见的细胞活力测定方法，如Calcein-AM、CCK-8等，发光法细胞活力检测更加简单快捷。
运输和保存方法
冰袋运输。-20 ºC避光保存，有效期3年。
注意事项
1）试剂中含有荧光素酶，反复冻融会影响其活性。建议分装后置于-20 ℃避光保存。
2）试剂及细胞样品使用前均需平衡至室温，以避免酶催化效果的影响。
3）药物含量较高时可能会干扰荧光素酶反应，从而影响化学发光信号。建议设置含有药物的细胞培养液照孔以排除溶剂的干扰。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
5）本产品仅供科研使用。
使用方法
一、细胞培养
使用适合进行化学发光检测的96孔板，每孔接种100 μL细胞（根据培养时间确定初始接种的细胞密度，检测时每孔细胞数量不宜超过10万个），同时设置不含细胞的培养液的孔作为阴性对照。37 ℃，5 % CO2培养细胞。也可以设置细胞的浓度梯度，以得到最佳的实验结果。根据需要在合适的时间加药处理细胞。
二、（可选）ATP标准曲线的制作
把自备的ATP标准溶液用 PBS稀释成适当的浓度梯度，96孔板每孔加入100 μL的标准品。
三、细胞活力检测
1. 融解冻存的发光法检测试剂，并平衡至室温；
2. 取出细胞培养板，室温平衡10 min；
3. 96孔板每孔加入100 μL检测试剂（由于孔的边缘效应，可能会导致发光信号不稳定，不建议在边缘铺板）；
4. 室温振荡2 min，以促进细胞的裂解；
5. 室温放置10 min，使发光信号趋于稳定；
6. 使用多功能酶标仪进行化学发光检测，检测波长560 nm。根据仪器要求设置相应的参数，每孔的检测时间一般为0.25-1 s，具体需根据仪器的检测灵敏度进行适当的调整；
7. 根据化学发光读数计算细胞的相对活力，或根据ATP标准曲线计算ATP含量从而得出细胞的相对活力。
【注】：检测效果因细胞的种类不同而异，对于一些ATP含量特别高的细胞，在细胞数量达到100,000以上可能会出现化学发光读数继续升高，但丧失线性关系。
HB220913
ATP是细胞内最重要的能量分子，可以用来衡量细胞新陈代谢水平，并与活细胞数目具有良好的线性关系，因此，可通过ATP含量反应活细胞的数目。本试剂盒借ATP依赖的荧光素酶催化的荧光素发光反应，通过化学发光信号测定细胞内 ATP含量，从而检测细胞活力或定量检测活细胞数目，灵敏度高、线性范围宽。本试剂盒兼容少量样品检测以及大量样品的高通量筛选检测。
本试剂盒提供的发光法细胞活力检测试剂线性范围宽、灵敏度高、稳定性好。96孔板中，在100个至100,000个细胞范围内有良好的线性关系，但不同细胞的检测数量上限会有不同。此外，操作简单，试剂盒中提供的检测试剂为即用型，读数稳定，检测速度快，完成检测仅需约10 min，无需洗涤细胞，也无需更换或去除培养液。相比于其他常见的细胞活力测定方法，如Calcein-AM、CCK-8等，发光法细胞活力检测更加简单快捷。
运输和保存方法
冰袋运输。-20 ºC避光保存，有效期3年。
注意事项
1）试剂中含有荧光素酶，反复冻融会影响其活性。建议分装后置于-20 ℃避光保存。
2）试剂及细胞样品使用前均需平衡至室温，以避免酶催化效果的影响。
3）药物含量较高时可能会干扰荧光素酶反应，从而影响化学发光信号。建议设置含有药物的细胞培养液照孔以排除溶剂的干扰。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
5）本产品仅供科研使用。
使用方法
一、细胞培养
使用适合进行化学发光检测的96孔板，每孔接种100 μL细胞（根据培养时间确定初始接种的细胞密度，检测时每孔细胞数量不宜超过10万个），同时设置不含细胞的培养液的孔作为阴性对照。37 ℃，5 % CO2培养细胞。也可以设置细胞的浓度梯度，以得到最佳的实验结果。根据需要在合适的时间加药处理细胞。
二、（可选）ATP标准曲线的制作
把自备的ATP标准溶液用 PBS稀释成适当的浓度梯度，96孔板每孔加入100 μL的标准品。
三、细胞活力检测
1. 融解冻存的发光法检测试剂，并平衡至室温；
2. 取出细胞培养板，室温平衡10 min；
3. 96孔板每孔加入100 μL检测试剂（由于孔的边缘效应，可能会导致发光信号不稳定，不建议在边缘铺板）；
4. 室温振荡2 min，以促进细胞的裂解；
5. 室温放置10 min，使发光信号趋于稳定；
6. 使用多功能酶标仪进行化学发光检测，检测波长560 nm。根据仪器要求设置相应的参数，每孔的检测时间一般为0.25-1 s，具体需根据仪器的检测灵敏度进行适当的调整；
7. 根据化学发光读数计算细胞的相对活力，或根据ATP标准曲线计算ATP含量从而得出细胞的相对活力。
【注】：检测效果因细胞的种类不同而异，对于一些ATP含量特别高的细胞，在细胞数量达到100,000以上可能会出现化学发光读数继续升高，但丧失线性关系。
HB220913
Q：ATP的细胞活力检测试剂，可以在荧光显微镜下观察拍照吗？
A：不可以，该试剂盒的检测原理是化学发光法。
Q：那换算成ATP浓度大概是多少呢？
A：这个不能直接换算，需要客户自己去做标准曲线才能知道，客户测出来的是发光值。
Q: 新出的ATP细胞活力检测，可以检测细菌细胞吗？
A: 细菌这块没有做过特定的实验不能确定。
Q: 40210ES10 新出的测ATP的试剂盒 可以检测ATP的量吗?是否有标准品？
A: 是检测活细胞类的ATP的量，跟CCK8一样，也是用酶标仪测得，测出来的是发光值，没有标准品。
Q: 这个只能用于96孔板嘛，大孔板裂解后转移到96孔里测可以吗，效果会不会有差别?
A: 这个试剂加样量和细胞悬液加样量是1比1的，换成大孔版注意调整试剂加样量就好了，转移不会有影响。
Q：40210 10ml可以做多少次？
A：100T
Q：标准曲线浓度梯度设定分别是多少呢？
A：浓度可以设置0.3nM，0.6nM，1.2nM，2.4nM，4.8nM，9.6nM，具体的浓度可以根据自己的实验调整。
[1] Zou Y, Chen X, Sun Y, et al. Antibiotics-free nanoparticles eradicate Helicobacter pylori biofilms and intracellular bacteria [published online ahead of print, 2022 Jun 9]. J Control Release. 2022;348:370-385. doi:10.1016/j.jconrel.2022.05.044(IF:9.776)
[2] Mao G, Xin D, Wang Q, Lai D. Sodium molybdate inhibits the growth of ovarian cancer cells via inducing both ferroptosis and apoptosis. Free Radic Biol Med. 2022;182:79-92. doi:10.1016/j.freeradbiomed.2022.02.023(IF:7.376)