双链DNA(dsDNA)荧光定量试剂|Picogreen dsDNA Quantitation Reagent
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COA
已发表文献
qubit试剂搭配酶标仪操作流程
产品描述
Picogreen是一种极为灵敏的荧光核酸染料，其仅在与DNA双链结合后才发出荧光，且所产生的荧光与DNA浓度呈正比，因而可用于精确测量多个来源的dsDNA，包括基因组DNA、病毒DNA、PCR扩增产物、测序文库等。
本产品Picogreen dsDNA Quantitation Reagent定量具有以下优势：①灵敏度高：可检测低至200 pg的dsDNA，节省宝贵样品；②特异性强：在等摩尔的RNA存在的条件下，对dsDNA具有特异性；③耐受性好：耐受较高浓度的盐、尿素、乙醇、氯仿、去垢剂、蛋白或琼脂糖，可以直接定量PCR扩增产物而无需从反应混合物中纯化DNA。④易于使用——只需在样品中加入染料，等待5分钟，然后读数即可，且适用于96和384孔板；与大多数基于荧光的酶标仪和荧光计兼容。⑤适用范围广：可适用于PCR的分析、芯片样品、DNA损伤分析、酶活分析、基因组DNA定量以及复杂混合物中dsDNA的检测和病毒DNA定量等多种领域。
运输和保存方法
室温运输。-20℃避光密封保存，有效期2年。
注意事项
1. Picogreen定量试剂含有DMSO（已知有毒试剂），请小心操作；
2. 尽管目前尚未有数据表明Picogreen具有诱变性和毒性，但是该试剂能结合双链DNA，请操作时务必小心；
3. 为了您的健康，实验操作时请穿实验服和戴一次性手套。
4. 本产品仅用作科研用途！
应用实例
【注】：本方法参照2010《中国药典》进行操作。
1．染料工作液的配置
PicoGreen dsDNA定量试剂取出后回温至室温，该试剂是以100 µL 200×的浓缩液形式保存于无水DMSO中的。实验当天，根据实验用量用1×TE（10 mM Tris-HCl，1 mM EDTA，pH 7.5）按1:200 的比例稀释PicoGreen浓缩液。
【注】：1）由于试剂容易吸附到玻璃表面，要在塑料容器中配制。
2）PicoGreen试剂见光易降解，所以应将配好的溶液用铝箔包住或放置暗处避光保存。
3）溶液最好在配制好数小时内使用，以保证最佳结果。
2．标准品工作液的配制
取λDNA标准品，用无菌TE buffer配制成100 μg/mL的标准品工作液。
【注】：标准品也可用其他已知浓度的纯化DNA；有一些产品描述可使用小牛胸腺DNA作为标准品，按照我们实际操作经验，并不推荐它作为标准品。
3．标准品工作液稀释
1) 母液稀释：使用TE缓冲液将100 μg/mL的标准品稀释为2 μg/mL。
2) 梯度稀释：参照表1，对DNA标品母液进行梯度稀释。
表1 标曲制作
|
TE体积（μL） |
2 μg∕mL DNA标准品母液（μL） |
Picogreen染料工作液（μL） |
DNA标准品终浓度 |
|
0 |
1,000 |
1,000 |
1 μg/mL |
|
900 |
100 |
1,000 |
100 ng/mL |
|
990 |
10 |
1,000 |
10 ng/mL |
|
999 |
1 |
1,000 |
1 ng/mL |
|
1,000 |
0 |
1,000 |
Blank |
3) 标准曲线的制备：向经稀释的各梯度标准品溶液中加入1 mL染料工作液混匀，避光室温孵育5 min。使用酶标仪或荧光计检测荧光强度（Ex=480 nm，Em=520 nm）；将溶液加入比色皿或取200 μL加入微孔板，确信不要在样品中引入气泡；以1×TE缓冲液空白对照，测定标准品荧光值；用标准品溶液的浓度（ng/mL）对应的荧光强度作直线回归，制备标准曲线。
4) 测量剩余样品的荧光值：荧光计将给出一个直接的浓度读数，数据可以用来产生DNA浓度的标准曲线。
HB220615
qubit试剂搭配酶标仪操作流程
产品描述
Picogreen是一种极为灵敏的荧光核酸染料，其仅在与DNA双链结合后才发出荧光，且所产生的荧光与DNA浓度呈正比，因而可用于精确测量多个来源的dsDNA，包括基因组DNA、病毒DNA、PCR扩增产物、测序文库等。
本产品Picogreen dsDNA Quantitation Reagent定量具有以下优势：①灵敏度高：可检测低至200 pg的dsDNA，节省宝贵样品；②特异性强：在等摩尔的RNA存在的条件下，对dsDNA具有特异性；③耐受性好：耐受较高浓度的盐、尿素、乙醇、氯仿、去垢剂、蛋白或琼脂糖，可以直接定量PCR扩增产物而无需从反应混合物中纯化DNA。④易于使用——只需在样品中加入染料，等待5分钟，然后读数即可，且适用于96和384孔板；与大多数基于荧光的酶标仪和荧光计兼容。⑤适用范围广：可适用于PCR的分析、芯片样品、DNA损伤分析、酶活分析、基因组DNA定量以及复杂混合物中dsDNA的检测和病毒DNA定量等多种领域。
运输和保存方法
室温运输。-20℃避光密封保存，有效期2年。
注意事项
1. Picogreen定量试剂含有DMSO（已知有毒试剂），请小心操作；
2. 尽管目前尚未有数据表明Picogreen具有诱变性和毒性，但是该试剂能结合双链DNA，请操作时务必小心；
3. 为了您的健康，实验操作时请穿实验服和戴一次性手套。
4. 本产品仅用作科研用途！
应用实例
【注】：本方法参照2010《中国药典》进行操作。
1．染料工作液的配置
PicoGreen dsDNA定量试剂取出后回温至室温，该试剂是以100 µL 200×的浓缩液形式保存于无水DMSO中的。实验当天，根据实验用量用1×TE（10 mM Tris-HCl，1 mM EDTA，pH 7.5）按1:200 的比例稀释PicoGreen浓缩液。
【注】：1）由于试剂容易吸附到玻璃表面，要在塑料容器中配制。
2）PicoGreen试剂见光易降解，所以应将配好的溶液用铝箔包住或放置暗处避光保存。
3）溶液最好在配制好数小时内使用，以保证最佳结果。
2．标准品工作液的配制
取λDNA标准品，用无菌TE buffer配制成100 μg/mL的标准品工作液。
【注】：标准品也可用其他已知浓度的纯化DNA；有一些产品描述可使用小牛胸腺DNA作为标准品，按照我们实际操作经验，并不推荐它作为标准品。
3．标准品工作液稀释
1) 母液稀释：使用TE缓冲液将100 μg/mL的标准品稀释为2 μg/mL。
2) 梯度稀释：参照表1，对DNA标品母液进行梯度稀释。
表1 标曲制作
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TE体积（μL） |
2 μg∕mL DNA标准品母液（μL） |
Picogreen染料工作液（μL） |
DNA标准品终浓度 |
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0 |
1,000 |
1,000 |
1 μg/mL |
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900 |
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1,000 |
100 ng/mL |
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990 |
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1,000 |
10 ng/mL |
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999 |
1 |
1,000 |
1 ng/mL |
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1,000 |
0 |
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Blank |
3) 标准曲线的制备：向经稀释的各梯度标准品溶液中加入1 mL染料工作液混匀，避光室温孵育5 min。使用酶标仪或荧光计检测荧光强度（Ex=480 nm，Em=520 nm）；将溶液加入比色皿或取200 μL加入微孔板，确信不要在样品中引入气泡；以1×TE缓冲液空白对照，测定标准品荧光值；用标准品溶液的浓度（ng/mL）对应的荧光强度作直线回归，制备标准曲线。
4) 测量剩余样品的荧光值：荧光计将给出一个直接的浓度读数，数据可以用来产生DNA浓度的标准曲线。
HB220615
Q：该产品是否包含DNA标准品？
A：该产品不包含DNA标准品，只含有染料，且翌圣不单独售卖标准品；如果需要标准品，可以购买12640，包含标准品、TE Buffer和染料。
Q：该产品能否用于直接定量检测血清、培养基和细胞上清等样品中的的双链DNA?
A：不建议，污染物较多，会对检测造成干扰。
Q：问12641是否可以用来做组织或者细胞的dsDNA染色，直接用显微镜观察荧光吗?
A：我们这款产品目前主要针对双链DNA的定量。观察荧光的实验客户自己根据文献来判断或者做预实验看看，我们这边没有这方面的数据。
Q：这款产品能用于细胞dsDNA定量吗？
A：这个不能染细胞，所以不存在细胞固定与否，如果客户想对活细胞DNA染色，推荐 Hoechst 33342。
Q：这款产品能用于拍共聚焦吗？
A：我们这款产品目前的定位是dsDNA溶液的定量，没有用于共聚焦方面的数据，其它方向的用途可以参考相关的文献。
[1] Wang Y, Chen J, Duan R, et al. High-Z-Sensitized Radiotherapy Synergizes with the Intervention of the Pentose Phosphate Pathway for In Situ Tumor Vaccination. Adv Mater. 2022;34(13):e2109726. doi:10.1002/adma.202109726(IF:30.849)
[2] Wang C, Sun Z, Zhao C, et al. Maintaining manganese in tumor to activate cGAS-STING pathway evokes a robust abscopal anti-tumor effect. J Control Release. 2021;331:480-490. doi:10.1016/j.jconrel.2021.01.036(IF:9.776)
[3] Zhong W, Rao Z, Xu J, et al. Defective mitophagy in aged macrophages promotes mitochondrial DNA cytosolic leakage to activate STING signaling during liver sterile inflammation. Aging Cell. 2022;21(6):e13622. doi:10.1111/acel.13622(IF:9.304)
[4] Lu J, Wang C, Cheng X, et al. A breakdown in microglial metabolic reprogramming causes internalization dysfunction of α-synuclein in a mouse model of Parkinson's disease. J Neuroinflammation. 2022;19(1):113. Published 2022 May 22. doi:10.1186/s12974-022-02484-0(IF:8.322)
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