蛋白A/G免疫(共)沉淀试剂盒 rProtein A/G IP/Co-IP Kit

蛋白A/G免疫(共)沉淀试剂盒 rProtein A/G IP/Co-IP Kit

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品简介

 

rProtein A/G IP/Co-IP kit (蛋白A/G免疫(共)沉淀试剂盒)是一种通过高质量的重组Protein A/G磁珠,配合用户自备的特异性抗体,进行目的蛋白免疫沉淀或免疫共沉淀的试剂盒。本试剂盒包含足够完成40个反应的试剂,每个反应使用25 uL磁珠,同时可进行10个阴性对照。

rProtein A/G免疫沉淀磁珠使用“纳米表面生物技术”(S-TEC),将rProtein A/G高密度定向包被到粒径为200 nm的纳米磁珠表面,纳米级磁珠提供的超大比表面积,具有更多的结合位点、更高的抗体结合能力和极低的蛋白非特异性吸附率。蛋白A/G免疫(共)沉淀试剂盒配有经过优化验证的必要试剂,为免疫沉淀实验提供了最佳的反应条件,增强了免疫沉淀实验的稳定性。本产品可广泛应用于细胞裂解物、细胞分泌上清、血清、腹水等样品中抗原的免疫沉淀反应。

天然蛋白A(Protein A)是一种发现于金黄色葡萄球菌的细胞壁表面蛋白,天然蛋白G(Protein G)是一种分离自G型或C型链球菌属的细胞表面蛋白,二者功能相似,主要通过与免疫球蛋白(Ig)的Fc区相互作用,可结合大多数哺乳动物的IgG,但在两者结合特异性上有所不同。rProtein A/G免疫磁珠同时共价偶联了蛋白A和蛋白G,比单独的蛋白A或者蛋白G都有更广的结合范围,实用性更高。同时,本品使用的是基因改造后的蛋白A和蛋白G,不仅维持其本身的Ig亲和特性,同时也去除了天然蛋白本身的非主要结合域以降低非特异性结合。

 

产品信息

 

类别

编号

组分名称

36421ES40(40T)

保存方式

翌圣货号

Part Ⅰ

36421-A

Lysis Buffer for IP Assays

免疫沉淀用(IP)裂解液

100 mL

-25~-15℃

20118ES

36421-B

蛋白酶抑制剂Cocktail,EDTA-free,100×DMSO储液

1 mL

-25~-15℃

20124ES

36421-C

Mouse IgG(1mg/mL)

25 uL

-25~-15℃

36111ES

36421-D

Rabbit IgG(1mg/mL)

25 uL

-25~-15℃

36113ES

36421-E

5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液

1 mL

-25~-15℃

20315ES

Part Ⅱ

36421-F

rProtein A/G MagBeads (IP Grade)

1 mL

2~8℃

36417ES

36421-G

1x TBS Buffer,TBS 缓冲液(粉末),PH 7.4,1L

1 L

RT

60157ES

36421-H

洗脱缓冲液

5 mL

2~8℃

N/A

36421-I

中和缓冲液

1 mL

2~8℃

N/A

 

储存条件

 

Part Ⅰ-25~-15℃保存;Part 2~8℃保存;有效期1年。

Part Ⅱ中的rProtein A/G MagBeads (IP Grade)避免冷冻。

 

使用说明

 

工作液浓度应根据具体实验确定,建议进行预实验摸索最佳实验浓度。

  1. 缓冲液配制

裂解缓冲液:免疫沉淀用(IP)裂解液(36421-A)可解冻后直接使用。

平衡/结合/洗杂缓冲液:1x TBS Buffer,TBS 缓冲液(粉末),PH 7.4,1L(36421-G), 使用时用蒸馏水或超纯水溶解,定容至1L即可。

洗脱缓冲液:洗脱缓冲液(36421-H)可直接使用。

中和缓冲液:中和缓冲液(36421-I)可直接使用。

SDS-PAGE Sample Loading Buffer (1X)的配制:取适量SDS-PAGE Sample Loading Buffer (5X)(36421-E)用水稀释5倍即为SDS-PAGE Sample Loading Buffer (1X)。

  1. 抗原样品制备

本操作说明书提供以下四种样品处理方法,建议您根据不同来源的抗原样品选择适当的方式进行预处理,使待检测抗原释放至样品溶液中。

血清样品处理:若目标蛋白丰度较高, 建议用结合缓冲液稀释血清样品至目标蛋白终浓度为10-100 µg/mL,置于冰上备用(或置于-20℃长期保存)。

悬浮细胞样品处理:离心收集细胞(4℃, 1000g, 5 min),用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250 μL裂解液的比例加入含蛋白酶抑制剂的裂解液裂解液在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂Cocktail,使蛋白酶抑制剂Cocktail的最终浓度为混匀后置于冰上处理10 min;离心收集上清液(4℃, 14000g, 10 min),置于冰上备用(或置于-20℃长期保存)。

贴壁细胞样品处理:移去培养基,用PBS清洗细胞遍;用细胞刮棒刮脱细胞,收集至1.5mL EP管内按照6孔板每孔加入150-250 μL裂解液的比例加入含蛋白酶抑制剂的裂解液裂解液在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂Cocktail,使蛋白酶抑制剂Cocktail的最终浓度为用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。混匀后置于冰上处理10 min;离心收集上清液(4℃, 14000g, 10 min),置于冰上备用(或置于-20℃长期保存)。

大肠杆菌样品处理 离心收集大肠杆菌(4℃, 12000g, 2 min),弃上清后称重, 按每克(湿重)菌体10 mL的比例用1×PBS洗涤2次;按每克(湿重)菌体5-10 mL的比例加入结合缓冲液,同时加入蛋白酶抑制剂Cocktail,重悬菌体,超声裂解细胞,离心收集上清(4℃, 17000g, 10 min)。

  1.  磁珠预处理
  1. 将磁珠漩涡振荡1 min,使其充分混悬;
  2. 25 µL磁珠悬液置于1.5 mL EP管中放置在磁分离器上,待溶液变澄清后,用移液器吸弃保护液。
  3. 加入200 µL结合缓冲液洗涤,进行磁性分离,吸弃上清,重复1次。

4.  抗体吸附

1)  加入目标抗体溶液2-10 µg抗体总量),充分混匀

2)  室温孵育 10 min,可以振荡或漩涡混合均匀。

3)  EP 管置于磁分离器上,待磁珠全部吸附后,吸弃上清液。如需要可留做进一步检测。

4)  加入500 μL 洗杂液混合均匀,置于磁分离器上,待磁珠全部吸附后,吸弃上清液。重复洗杂至少 3次。 

可选做:使用抗体种属相同的正常IgG配制相同稀释比或终浓度的正常IgG工作液,以用于去除非特异性结合或作为阴性对照。所谓种属相同的正常IgG是指,例如后续免疫沉淀时用的抗体是小鼠IgG,则在本步骤中可以用TBS稀释适量的Mouse IgG等以用于降低背景或作为阴性对照。

5 抗原结合反应

1)  加入含有抗原的样品(通常300-500 μL,每个免疫沉淀反应推荐的总蛋白量为 500 ~1500 μg),用移液器轻轻吹打使抗原与磁珠-抗体复合物均匀分散。

2)  在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管 10 min,使抗原与抗体充分结合,如结合力较弱则可在室温下反应1h或者在4℃下反应过夜。

3)  上述完成抗原吸附的磁珠-抗体-抗原复合物进行磁性分离,收集上清液,以备后续检测。

4)  向离心管中加入1 mL洗杂液,用移液器轻轻吹打使磁珠-抗体-抗原复合物均匀分散,然后进行磁性分离,弃上清液;从磁分离器上取下离心管,再重复洗涤两次。

6.抗原洗脱

A. 变性洗脱 此方法洗脱的样品适用于SDS-PAGE检测。

1) 从磁分离器上取下离心管,向其中加入80~100 μL 1×SDS-PAGE Loading Buffer 混合均匀, 95℃加热 5min。

2) 置于磁性分离器上,进行磁性分离,收集上清液进行SDS-PAGE检测。

B. 非变性洗脱

1) 向磁珠-抗体-抗原复合物中加入100 μL洗脱液,混合均匀,室温孵育10 min。

2) 置于磁性分离器上,进行磁性分离,收集洗脱液至新的 EP 管中。

3) 重复步骤 1)和2),收集洗脱液,与2)中洗脱液混合,加入中和液中和至 pH7.0-8.0。

 

注意事项

 

1. 请勿高速离心、干燥或冷冻磁珠,这些操作会导致磁珠聚集而降低结合能力。

2. 本试剂盒提供的Lysis Buffer for IP Assays经反复测试,适合很多情况下的免疫沉淀或免疫共沉淀时的样品裂解和后续的洗涤。但 IP 实验中不同类型的抗体与抗原结合的亲和性是有区别的,抗体与抗原结合还会受到 Lysis/Wash Buffer 的影响,因此可自行优化操作细节或者筛选及配制缓冲液进行实验。

3. 本产品仅作科研用途

4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

Ver.CN20240117

蛋白A/G免疫(共)沉淀试剂盒 rProtein A/G IP/Co-IP Kit

暂无内容

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暂无内容

产品简介

 

rProtein A/G IP/Co-IP kit (蛋白A/G免疫(共)沉淀试剂盒)是一种通过高质量的重组Protein A/G磁珠,配合用户自备的特异性抗体,进行目的蛋白免疫沉淀或免疫共沉淀的试剂盒。本试剂盒包含足够完成40个反应的试剂,每个反应使用25 uL磁珠,同时可进行10个阴性对照。

rProtein A/G免疫沉淀磁珠使用“纳米表面生物技术”(S-TEC),将rProtein A/G高密度定向包被到粒径为200 nm的纳米磁珠表面,纳米级磁珠提供的超大比表面积,具有更多的结合位点、更高的抗体结合能力和极低的蛋白非特异性吸附率。蛋白A/G免疫(共)沉淀试剂盒配有经过优化验证的必要试剂,为免疫沉淀实验提供了最佳的反应条件,增强了免疫沉淀实验的稳定性。本产品可广泛应用于细胞裂解物、细胞分泌上清、血清、腹水等样品中抗原的免疫沉淀反应。

天然蛋白A(Protein A)是一种发现于金黄色葡萄球菌的细胞壁表面蛋白,天然蛋白G(Protein G)是一种分离自G型或C型链球菌属的细胞表面蛋白,二者功能相似,主要通过与免疫球蛋白(Ig)的Fc区相互作用,可结合大多数哺乳动物的IgG,但在两者结合特异性上有所不同。rProtein A/G免疫磁珠同时共价偶联了蛋白A和蛋白G,比单独的蛋白A或者蛋白G都有更广的结合范围,实用性更高。同时,本品使用的是基因改造后的蛋白A和蛋白G,不仅维持其本身的Ig亲和特性,同时也去除了天然蛋白本身的非主要结合域以降低非特异性结合。

 

产品信息

 

类别

编号

组分名称

36421ES40(40T)

保存方式

翌圣货号

Part Ⅰ

36421-A

Lysis Buffer for IP Assays

免疫沉淀用(IP)裂解液

100 mL

-25~-15℃

20118ES

36421-B

蛋白酶抑制剂Cocktail,EDTA-free,100×DMSO储液

1 mL

-25~-15℃

20124ES

36421-C

Mouse IgG(1mg/mL)

25 uL

-25~-15℃

36111ES

36421-D

Rabbit IgG(1mg/mL)

25 uL

-25~-15℃

36113ES

36421-E

5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液

1 mL

-25~-15℃

20315ES

Part Ⅱ

36421-F

rProtein A/G MagBeads (IP Grade)

1 mL

2~8℃

36417ES

36421-G

1x TBS Buffer,TBS 缓冲液(粉末),PH 7.4,1L

1 L

RT

60157ES

36421-H

洗脱缓冲液

5 mL

2~8℃

N/A

36421-I

中和缓冲液

1 mL

2~8℃

N/A

 

储存条件

 

Part Ⅰ-25~-15℃保存;Part 2~8℃保存;有效期1年。

Part Ⅱ中的rProtein A/G MagBeads (IP Grade)避免冷冻。

 

使用说明

 

工作液浓度应根据具体实验确定,建议进行预实验摸索最佳实验浓度。

  1. 缓冲液配制

裂解缓冲液:免疫沉淀用(IP)裂解液(36421-A)可解冻后直接使用。

平衡/结合/洗杂缓冲液:1x TBS Buffer,TBS 缓冲液(粉末),PH 7.4,1L(36421-G), 使用时用蒸馏水或超纯水溶解,定容至1L即可。

洗脱缓冲液:洗脱缓冲液(36421-H)可直接使用。

中和缓冲液:中和缓冲液(36421-I)可直接使用。

SDS-PAGE Sample Loading Buffer (1X)的配制:取适量SDS-PAGE Sample Loading Buffer (5X)(36421-E)用水稀释5倍即为SDS-PAGE Sample Loading Buffer (1X)。

  1. 抗原样品制备

本操作说明书提供以下四种样品处理方法,建议您根据不同来源的抗原样品选择适当的方式进行预处理,使待检测抗原释放至样品溶液中。

血清样品处理:若目标蛋白丰度较高, 建议用结合缓冲液稀释血清样品至目标蛋白终浓度为10-100 µg/mL,置于冰上备用(或置于-20℃长期保存)。

悬浮细胞样品处理:离心收集细胞(4℃, 1000g, 5 min),用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250 μL裂解液的比例加入含蛋白酶抑制剂的裂解液裂解液在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂Cocktail,使蛋白酶抑制剂Cocktail的最终浓度为混匀后置于冰上处理10 min;离心收集上清液(4℃, 14000g, 10 min),置于冰上备用(或置于-20℃长期保存)。

贴壁细胞样品处理:移去培养基,用PBS清洗细胞遍;用细胞刮棒刮脱细胞,收集至1.5mL EP管内按照6孔板每孔加入150-250 μL裂解液的比例加入含蛋白酶抑制剂的裂解液裂解液在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂Cocktail,使蛋白酶抑制剂Cocktail的最终浓度为用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。混匀后置于冰上处理10 min;离心收集上清液(4℃, 14000g, 10 min),置于冰上备用(或置于-20℃长期保存)。

大肠杆菌样品处理 离心收集大肠杆菌(4℃, 12000g, 2 min),弃上清后称重, 按每克(湿重)菌体10 mL的比例用1×PBS洗涤2次;按每克(湿重)菌体5-10 mL的比例加入结合缓冲液,同时加入蛋白酶抑制剂Cocktail,重悬菌体,超声裂解细胞,离心收集上清(4℃, 17000g, 10 min)。

  1.  磁珠预处理
  1. 将磁珠漩涡振荡1 min,使其充分混悬;
  2. 25 µL磁珠悬液置于1.5 mL EP管中放置在磁分离器上,待溶液变澄清后,用移液器吸弃保护液。
  3. 加入200 µL结合缓冲液洗涤,进行磁性分离,吸弃上清,重复1次。

4.  抗体吸附

1)  加入目标抗体溶液2-10 µg抗体总量),充分混匀

2)  室温孵育 10 min,可以振荡或漩涡混合均匀。

3)  EP 管置于磁分离器上,待磁珠全部吸附后,吸弃上清液。如需要可留做进一步检测。

4)  加入500 μL 洗杂液混合均匀,置于磁分离器上,待磁珠全部吸附后,吸弃上清液。重复洗杂至少 3次。 

可选做:使用抗体种属相同的正常IgG配制相同稀释比或终浓度的正常IgG工作液,以用于去除非特异性结合或作为阴性对照。所谓种属相同的正常IgG是指,例如后续免疫沉淀时用的抗体是小鼠IgG,则在本步骤中可以用TBS稀释适量的Mouse IgG等以用于降低背景或作为阴性对照。

5 抗原结合反应

1)  加入含有抗原的样品(通常300-500 μL,每个免疫沉淀反应推荐的总蛋白量为 500 ~1500 μg),用移液器轻轻吹打使抗原与磁珠-抗体复合物均匀分散。

2)  在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管 10 min,使抗原与抗体充分结合,如结合力较弱则可在室温下反应1h或者在4℃下反应过夜。

3)  上述完成抗原吸附的磁珠-抗体-抗原复合物进行磁性分离,收集上清液,以备后续检测。

4)  向离心管中加入1 mL洗杂液,用移液器轻轻吹打使磁珠-抗体-抗原复合物均匀分散,然后进行磁性分离,弃上清液;从磁分离器上取下离心管,再重复洗涤两次。

6.抗原洗脱

A. 变性洗脱 此方法洗脱的样品适用于SDS-PAGE检测。

1) 从磁分离器上取下离心管,向其中加入80~100 μL 1×SDS-PAGE Loading Buffer 混合均匀, 95℃加热 5min。

2) 置于磁性分离器上,进行磁性分离,收集上清液进行SDS-PAGE检测。

B. 非变性洗脱

1) 向磁珠-抗体-抗原复合物中加入100 μL洗脱液,混合均匀,室温孵育10 min。

2) 置于磁性分离器上,进行磁性分离,收集洗脱液至新的 EP 管中。

3) 重复步骤 1)和2),收集洗脱液,与2)中洗脱液混合,加入中和液中和至 pH7.0-8.0。

 

注意事项

 

1. 请勿高速离心、干燥或冷冻磁珠,这些操作会导致磁珠聚集而降低结合能力。

2. 本试剂盒提供的Lysis Buffer for IP Assays经反复测试,适合很多情况下的免疫沉淀或免疫共沉淀时的样品裂解和后续的洗涤。但 IP 实验中不同类型的抗体与抗原结合的亲和性是有区别的,抗体与抗原结合还会受到 Lysis/Wash Buffer 的影响,因此可自行优化操作细节或者筛选及配制缓冲液进行实验。

3. 本产品仅作科研用途

4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

Ver.CN20240117

蛋白A/G免疫(共)沉淀试剂盒 rProtein A/G IP/Co-IP Kit

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蛋白A/G免疫(共)沉淀试剂盒 rProtein A/G IP/Co-IP Kit

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HieffNGS®Hyb&Wash Kit靶向捕获杂交清洗试剂盒

HieffNGS®Hyb&Wash Kit靶向捕获杂交清洗试剂盒

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

 

Hieff NGS®Hyb & Wash Kit是专门针对翌圣靶向捕获系列产品开发的捕获杂交清洗试剂,搭配新型双链RNA探针(120-mer)将目标DNA捕捉并富集后进行高通量测序,精心优化的一管式杂交缓冲液体系能得到更稳定且更优异的捕获效果。NGS靶向捕获试剂盒凭借卓越的产品性能,更好的灵敏度及特异性,广泛应用于新型分子诊断与检测等领域的研究。试剂盒中提供的所有试剂都经过了严格的质量控制和功能验证,最大程度上保证了实验的稳定性和重复性。

 

组分信息

组分编号

组分名称

12245ES04

12245ES16

12245ES96

 

BOX-I

12245-A

Wash Buffer 1

3.2 mL

12.8 mL

76.8 mL

12245-B

Wash Buffer 2

800 μL

3.2 mL

19.2 mL

12245-C

Wash Buffer 3

2.8 mL

11.2 mL

67.2 mL

 

BOX-II

12245-D

2 × Hyb Buffer

72 μL

290 μL

1.73 mL

12245E

RNase Inhibitor

2 μL

10 μL

50 µL

12245F

Post PCR Mix

100 μL

400 μL

2.4 mL

 

储存条件

BOX-I:室温保存,有效期1年。

BOX-II:-25~-15℃保存,有效期1年。

 

注意事项

  1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
  2. 对于FFPE样本,由于样本降解程度不同,建议不与其他样本类型一起进行捕获。
  3. 预文库质控:将已准备好的DNA预文库使用Qubit准确测定浓度,并使用1%的琼脂糖电泳或自动化毛细管电泳进行质控评估。文库主峰大约在300-400 bp,预文库总量一般为1-2 µg左右 。
  4. 需保证所使用PCR管,96孔板或8连管和盖子或膜的密封性以及和PCR仪器的适配性,在第一次实验前必须做密封性检测实验。建议在待测管中加入36 µL Nuclease-free Water,盖严压紧后在热盖模式下65℃过夜,用移液器去除剩余液体,确保体积不低于30 µL,管子和盖子不变形。
  5. 使用前请核对预文库的接头类型,选择对应Blockers;如使用的Blockers与预文库接头类型不匹配,将造成捕获文库的中靶率降低、杂交捕获反应失败。
  6. 杂交和清洗过程中需严格控制温度,如温度控制不准确,可能导致捕获文库的中靶率及均一度降低。
  7. 磁珠浓缩预文库可能导致GC偏好,推荐使用真空浓缩仪对预文库进行浓缩。
  8. 在漂洗链霉亲和磁珠后,使用Nuclease-free ddH2O重悬磁珠,切勿丢弃磁珠。
  9. 本产品仅作科研用途!

 

使用说明

一、自备材料

1. 配套试剂

货号

名称

备注

13577ES

Hieff NGS® DNA Library Prep Kit

机械法预文库制备

12195ES

Hieff NGS® OnePot Pro DNA Library Prep Kit V2

酶切法预文库制备

12244ES

Hieff NGS® Human All Exon Probes

人全外显子探针

12246ES

Hieff NGS® Universal Blocking Oligo (with cot-1)

接头封阻剂

12247ES

Hieff NGS® Universal Post PCR Primer for Illumina

扩增引物

12248ES

Hieff NGS® Hyper Enrichment Beads

捕获磁珠

12601ES

Hieff NGS® DNA Selection Beads

纯化磁珠

12642ES

1×dsDNA HS Assay Kit

测定捕获后终文库浓度

  1. 其他材料

无水乙醇、Nuclease-free Water、Low TE (pH 8.0);

200 μl低吸附PCR管、8连管、96孔板、1.5 ml低吸附Nuclease-free离心管、磁力架;

  1. 配套仪器

真空浓缩PCR仪、金属浴、垂直旋转仪、涡旋振荡仪、微型离心机、Qubit定量仪、移液器、Agilent Technologies 2100 Bioanalyzer或其他等效产品。

二、操作流程

HieffNGS®Hyb&Wash Kit靶向捕获杂交清洗试剂盒

1杂交捕获实验流程图

三、操作步骤

1. 样本及探针杂交

1.1 -20 ℃冰箱取出Hieff NGS® Hyb & Wash Kit Box-II  Hieff NGS® Universal Blocking Oligo (with cot-1),并取出-80 ℃冰箱保存的Probes 2 × Hyb Buffer放置于65 ℃金属浴中预热。ProbesRNase InhibitorUniversal Blocking Oligo (with cot-1)放置于冰上融化。其余组分放回冰箱保存。

1.2 根据Qubit浓度,将1-6个预文库等量混合到一个新的PCR, 8连管或96孔板中(建议使用96孔板或8连管做,如果使用单管则需要在杂交过程中的PCR仪上该单管四周放置4个空PCR管进行支撑,避免变形)。具体用量参考表1确保每个预文库所用的 Index 是唯一的。对于cfDNAFFPE样本或其他质量较差的样本建议采用1个预文库单独进行杂交捕获,并取全部的文库进入杂交过程。

【注】Qubit 浓度为较精确的检测,浓度定量的误差可能导致测序时数据产量的不均一。

1  预文库Pooling

每个Pool包含的预文库数

每个Index文库的量

Pool的总量

1

750 ng

750 ng

2

500 ng

1000 ng

3

500 ng

1500 ng

4

500 ng

2000 ng

5

500 ng

2500 ng

6

500 ng

3000 ng

1.3 若根据上表计算的预文库投入量体积不超过5 µL,直接补水至5 µL。若预文库投入体积超过5 µL,则需使用浓缩干燥仪进行浓缩,浓缩温度不超过45℃。将离心管放入离心浓缩仪。打开PCR管盖,启动离心浓缩仪,开始浓缩。根据离心浓缩仪的型号不同,干燥时间5-15 min不等,注意观察。干燥后加入5 µL Nuclease-free Water充分震荡混匀,离心后静置备用。

【注】不能过分干燥,否则会造成DNA溶解困难。若无浓缩干燥仪设备,可以采用附件1的磁珠浓缩富集的替代方案。但会引起文库的少量损失1.4 取新的1.5 mL离心管或0.2 mL PCR管放置于常温管架上进行杂交混合液的配制。对于全外显子的Panel探针杂交体系配制参考表2。从65 ℃金属浴上取下2 × Hyb Buffer,观察底部确保其澄清透明无沉淀。按照表格中的体积和样本量计算,依次加入其他试剂,然后上下颠倒2次后使用旋涡混匀仪震荡2 s混匀,快速离心5 s将管壁液体离心至管底,配制成单个或多个杂交混合液,放置于常温备用。

【注】2 × Hyb Buffer 比较粘稠,需要缓慢吸取。不要在冰上配制杂交混合液。对于多个杂交建议按照每个组分体积乘以实际杂交反应数再乘以1.2倍配制混合液。

2  全外显子的Panel探针杂交体系配制

名称

1次反应体积(µL

8次反应体积(µL

16次反应体积(µL

Universal Blocking Oligo (with cot-1)

7.5

72

144

2 × Hyb Buffer

18

172.8

345.6

RNase Inhibitor

0.5

4.8

9.6

Human All Exon Probes

5

48

96

Total

31

297.6

595.2

1.5 将配制好的杂交混合液按照每个反应31 µL加入到步骤1.3的5 µL预文库中,并使用移液器轻轻吹打混匀8次 (注意吹打过程时移液器下压到取液量程2/3左右然后松开,反复8次,避免全部按压到底产生气泡)。用管盖或96孔板密封膜密封,快速离心5 s。将预文库杂交混合液放置于杂交用的PCR仪上。

【注】确保彻底密封,建议使用压盖器或压膜刮板。

1.6 设定3所示反应程序,热盖模式(105℃)设定体积40 µL(杂交总体积36 µL)。

3  杂交 PCR 程序

温度

时间

热盖105 °C

On

95 °C

30 s

65 °C

Hold

1.7 运行3PCR程序,65 °C杂交16 h

【注】杂交15 – 20 h不影响下游捕获性能,一般可以考虑第一天下午4 5时做上杂交,第二天上午8  9时进行杂交后捕获。

  1. 链霉亲和素磁珠准备

2.1 捕获前,先从4 ℃冰箱取出Hieff NGS® Hyper Enrichment Beads,在漩涡震荡器上震荡30 s至磁珠充分重悬后,室温平衡30 min以上。

2.2 在室温平衡 30 min期间,从常温的Hieff NGS® Hyb & Wash Kit Box-I中取出 Wash Buffer 1Wash Buffer 2 Wash Buffer 3,在另外一台PCR仪上,设置65 Hold,热盖程序点击开启(热盖设定为70 ℃)。放入多个8连管或96孔板到PCR仪上,根据杂交反应数,每个反应准备3Wash Buffer 3。按照每个孔170 μL Wash Buffer 3 加入8连管或96孔板,盖好管盖并确保密封,备用。

【注】如果没有足够的PCR仪,可以采用金属浴或水浴锅代替,但务必用标准温度计测量以确保温度非常准确,如果温度低于65℃会导致捕获效率下降。

2.3 室温平衡30 min后,再将Hieff NGS® Hyper Enrichment Beads在漩涡震荡器上震荡30 s重悬,向8连管的每个孔中加入50 µL Hieff NGS® Hyper Enrichment Beads,注意加到管底位置,避免沾到管壁和管盖部分。

2.4 然后向每个孔加入150 μL的Wash Buffer 1,用8连排移液器轻轻吹打8次,充分混匀磁珠。

2.5 放置于磁力架上静置澄清后弃掉上清液。如果管壁或管盖有沾到磁珠,则快速离心5 s甩至管底。

【注】确保全部磁珠在管底侧壁,吸取过程移液器枪头从磁力架对侧贴近管壁逐渐向下吸取,直至管底。避免吸上清过程吸入磁珠。

2.6 重复操作步骤2.4 2.5,Wash Buffer 1总共清洗3次最后吸走上清液,仅保留磁珠在管底。

2.7 最后每个孔加入150 µL的Wash Buffer 1重悬磁珠,在每个孔上标记对应的杂交样本名称,室温放置待用。

3. 捕获磁珠富集文库及清洗

3.1 杂交混合液65 ℃孵育16 h后,确保剩余杂交体系体积不低于20 µL,在PCR仪上打开PCR管、8连管或96孔板,用8连排移液器将准备好的150 μL磁珠重悬液加入到杂交混合液中,并使用移液器轻轻吹打8次。然后将包含磁珠和杂交体系的混合液全部转移至2.7步骤中标记的磁珠8连管中,注意杂交管上的标记和磁珠管上的标记一一对应。

【注】不要从PCR仪上拿下杂交混合液。温度的下降会导致捕获效率降低。

3.2 将上述磁珠杂交混合液从PCR仪上取下放置在垂直旋转仪上并固定好,室温旋转孵育30 min。也可以用震荡金属浴,设置为1000-1500 r/min进行室温震荡孵育。

【注】取下杂交混合液后PCR仪不要关闭,保持65 ℃,后续步骤的Wash buffer3孵育清洗时需用。

3.3 从-20 ℃冰箱取出Hieff NGS® Hyb & Wash Kit Box-II和Universal Post PCR Primer for Illumina, 找到Post PCR Primer for IlluminaPost PCR Mix放置于冰上融化。

3.4 30 min后从旋转仪或震荡金属浴上取下8连管,快速离心5 s,放置磁力架2-5 min,确保液体清澈,吸弃上清。

3.5 从磁力架上取下8连管,每个孔加入150 μL的Wash Buffer 2来重悬磁珠,移液器轻轻吹打10次,室温孵育15 min,每间隔5 min,上下快速颠倒15次。

3.6 Wash Buffer 2室温孵育完成后,快速离心5 s后放置磁力架上待液体清澈后,吸弃上清液,放置在65 ℃杂交用的PCR仪上,立即用8连排移液器加入150 μL的已预热好的Wash Buffer 3,在PCR仪上吹吸10次使磁珠充分混匀,盖上管盖65 ℃孵育10 min

【注】吸取上清后需要快速加入 Wash Buffer 3,磁珠不能干燥。

3.7 65 ℃孵育10 min后,从PCR仪出反应管并放置在磁力架上,待液体清澈后吸弃上清

3.8 重复步骤3.6-3.7,Wash Buffer 3清洗3次。

【注】磁力架尽可能靠近PCR仪,从PCR仪上取下8连管放在磁力架上,时间尽可能短,避免温度的大幅下降。

3.9 Wash Buffer 3孵育期间,在冰上采用1.5 mL LoBind管配置Post-PCR反应体系,参考表4。按照反应数目分装到新的8连管或96孔板,每孔30 µL。做好样本标记,放置于冰上备用。同时取出Hieff NGS® DNA Selection Beads纯化磁珠放置室温平衡至少30 min

4  Post -PCR 反应体系

名称

1次反应体积(µL

8次反应体积(µL

16次反应体积(µL

Post PCR Mix

25

240

480

Post PCR Primer for Illumina

5

48

96

Total

30

288

546

【注】对于多个PCR体系建议按照每个组分体积乘以实际反应数再乘以 1.2 倍配制混合液

3.10 三次清洗完成后,快速离心10 s,再次放置于磁力架上用10 µL移液器尽可能吸走全部残余液体,最后加入20 µL Nuclease-free Water重悬磁珠,移液器轻轻吹打8次,将8连排移液器量程调至40 µL,吸取全部磁珠混悬液加入3.9步骤标记好的8连管或96孔板中,再次轻轻吹打混匀8次,确保磁珠和PCR反应体系混合均匀。

【注】包含磁珠的PCR反应液不要离心,尽快放置于PCR仪上开始运行程序。

4. Post-PCR反应

4.1 将步骤3.10的混合体系放置于PCR仪上,按照5程序进行PCR扩增:

5  Post – PCR反应程序

温度

时间

循环数

98°C

45 s

1

98°C

HieffNGS®Hyb&Wash Kit靶向捕获杂交清洗试剂盒15 s

 

循环数参照表6

60°C

30 sec

72°C

30 sec

72°C

5 min

1

4°C

Hold

4.2 根据所使用的Probes类型选择不同的PCR循环数,6为建议起始循环数:

6  Post – PCR循环数推荐

Probes

单杂

2-4个样品多杂

5-6个样品多杂

0.5 Mb

13-14

12-13

11-12

0.5 Mb-3 Mb

12-13

11-12

10-11

3 Mb-5 Mb

11-12

10-11

9-10

5 Mb

10-11

9-10

8-9

4.3 PCR 完成后,将8连管或96孔板取下,快速离心5 s后放置于磁力架上,静置1 min后吸取全部上清液转移至新的PCR管中,然后加入90 µL(1.8×)Hieff NGS® DNA Selection Beads纯化磁珠,移液器吹打8-10次充分混匀。

【注】上清液中包括捕获后文库,请勿遗弃。确保Hieff NGS® DNA Selection Beads纯化磁珠已在室温平衡30 min以上,且使用前需充分斡旋混匀。

4.4 室温放置5 min。在此期间准备80%的乙醇,用Nuclease-free Water进行配制,每个样本预计用量400 µL。

【注】此时PCR管不要放在磁力架上。

4.5 放置于磁力架上静置3- 5 min澄清后吸弃上清液。

4.6 管子保持在磁力架上不要取下,加入150 µL 80%乙醇,静置至磁珠完全吸附到一侧后,将管子从磁力架上取下方向调转180度,待磁珠完全吸附到另一侧后,再次调转。共调转4次后,吸弃上清。

4.7 重复步4.6操作。

4.8 快速离心后用10 µL移液器弃去残余乙醇,室温放置1- 3 min,直至磁珠表面无明显液体残留,无光泽或哑光状态。

【注】磁珠不要干燥过度以防文库产量降低。

4.9 从磁力架上取下管子,加入20 µL的Low TE洗脱,移液器吹打8- 10次后室温静置2 min

4.10 放置于磁力架上静置澄清后吸取上清液,转移至新的PCR管中,放置于-20 ℃冰箱保存待文库质检和上机。

5. 文库质检和上机准备

5.1 使用Agilent Bioanalyzer 2100仪器对样本进行质检,2100所需试剂为High Sensitivity DNA Assay。

5.2 杂交捕获文库的峰值约为300~ 500bp, 一般文库浓度约在0.5-10 ng/µL。文库适用于Illumina (HiSeq 3000/ 4000,NextSeq platform,X-Ten及NovaSeq等平台)对于存在降解的FFPE样本,建议额外提高测试数据量

【注】如果文库有小片段残余,总量足够情况下,可补水至50 µL,0.8X40 µL)磁珠再纯化一次。

HieffNGS®Hyb&Wash Kit靶向捕获杂交清洗试剂盒

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HieffNGS®Hyb&Wash Kit靶向捕获杂交清洗试剂盒

暂无内容

 

Hieff NGS®Hyb & Wash Kit是专门针对翌圣靶向捕获系列产品开发的捕获杂交清洗试剂,搭配新型双链RNA探针(120-mer)将目标DNA捕捉并富集后进行高通量测序,精心优化的一管式杂交缓冲液体系能得到更稳定且更优异的捕获效果。NGS靶向捕获试剂盒凭借卓越的产品性能,更好的灵敏度及特异性,广泛应用于新型分子诊断与检测等领域的研究。试剂盒中提供的所有试剂都经过了严格的质量控制和功能验证,最大程度上保证了实验的稳定性和重复性。

 

组分信息

组分编号

组分名称

12245ES04

12245ES16

12245ES96

 

BOX-I

12245-A

Wash Buffer 1

3.2 mL

12.8 mL

76.8 mL

12245-B

Wash Buffer 2

800 μL

3.2 mL

19.2 mL

12245-C

Wash Buffer 3

2.8 mL

11.2 mL

67.2 mL

 

BOX-II

12245-D

2 × Hyb Buffer

72 μL

290 μL

1.73 mL

12245E

RNase Inhibitor

2 μL

10 μL

50 µL

12245F

Post PCR Mix

100 μL

400 μL

2.4 mL

 

储存条件

BOX-I:室温保存,有效期1年。

BOX-II:-25~-15℃保存,有效期1年。

 

注意事项

  1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
  2. 对于FFPE样本,由于样本降解程度不同,建议不与其他样本类型一起进行捕获。
  3. 预文库质控:将已准备好的DNA预文库使用Qubit准确测定浓度,并使用1%的琼脂糖电泳或自动化毛细管电泳进行质控评估。文库主峰大约在300-400 bp,预文库总量一般为1-2 µg左右 。
  4. 需保证所使用PCR管,96孔板或8连管和盖子或膜的密封性以及和PCR仪器的适配性,在第一次实验前必须做密封性检测实验。建议在待测管中加入36 µL Nuclease-free Water,盖严压紧后在热盖模式下65℃过夜,用移液器去除剩余液体,确保体积不低于30 µL,管子和盖子不变形。
  5. 使用前请核对预文库的接头类型,选择对应Blockers;如使用的Blockers与预文库接头类型不匹配,将造成捕获文库的中靶率降低、杂交捕获反应失败。
  6. 杂交和清洗过程中需严格控制温度,如温度控制不准确,可能导致捕获文库的中靶率及均一度降低。
  7. 磁珠浓缩预文库可能导致GC偏好,推荐使用真空浓缩仪对预文库进行浓缩。
  8. 在漂洗链霉亲和磁珠后,使用Nuclease-free ddH2O重悬磁珠,切勿丢弃磁珠。
  9. 本产品仅作科研用途!

 

使用说明

一、自备材料

1. 配套试剂

货号

名称

备注

13577ES

Hieff NGS® DNA Library Prep Kit

机械法预文库制备

12195ES

Hieff NGS® OnePot Pro DNA Library Prep Kit V2

酶切法预文库制备

12244ES

Hieff NGS® Human All Exon Probes

人全外显子探针

12246ES

Hieff NGS® Universal Blocking Oligo (with cot-1)

接头封阻剂

12247ES

Hieff NGS® Universal Post PCR Primer for Illumina

扩增引物

12248ES

Hieff NGS® Hyper Enrichment Beads

捕获磁珠

12601ES

Hieff NGS® DNA Selection Beads

纯化磁珠

12642ES

1×dsDNA HS Assay Kit

测定捕获后终文库浓度

  1. 其他材料

无水乙醇、Nuclease-free Water、Low TE (pH 8.0);

200 μl低吸附PCR管、8连管、96孔板、1.5 ml低吸附Nuclease-free离心管、磁力架;

  1. 配套仪器

真空浓缩PCR仪、金属浴、垂直旋转仪、涡旋振荡仪、微型离心机、Qubit定量仪、移液器、Agilent Technologies 2100 Bioanalyzer或其他等效产品。

二、操作流程

HieffNGS®Hyb&Wash Kit靶向捕获杂交清洗试剂盒

1杂交捕获实验流程图

三、操作步骤

1. 样本及探针杂交

1.1 -20 ℃冰箱取出Hieff NGS® Hyb & Wash Kit Box-II  Hieff NGS® Universal Blocking Oligo (with cot-1),并取出-80 ℃冰箱保存的Probes 2 × Hyb Buffer放置于65 ℃金属浴中预热。ProbesRNase InhibitorUniversal Blocking Oligo (with cot-1)放置于冰上融化。其余组分放回冰箱保存。

1.2 根据Qubit浓度,将1-6个预文库等量混合到一个新的PCR, 8连管或96孔板中(建议使用96孔板或8连管做,如果使用单管则需要在杂交过程中的PCR仪上该单管四周放置4个空PCR管进行支撑,避免变形)。具体用量参考表1确保每个预文库所用的 Index 是唯一的。对于cfDNAFFPE样本或其他质量较差的样本建议采用1个预文库单独进行杂交捕获,并取全部的文库进入杂交过程。

【注】Qubit 浓度为较精确的检测,浓度定量的误差可能导致测序时数据产量的不均一。

1  预文库Pooling

每个Pool包含的预文库数

每个Index文库的量

Pool的总量

1

750 ng

750 ng

2

500 ng

1000 ng

3

500 ng

1500 ng

4

500 ng

2000 ng

5

500 ng

2500 ng

6

500 ng

3000 ng

1.3 若根据上表计算的预文库投入量体积不超过5 µL,直接补水至5 µL。若预文库投入体积超过5 µL,则需使用浓缩干燥仪进行浓缩,浓缩温度不超过45℃。将离心管放入离心浓缩仪。打开PCR管盖,启动离心浓缩仪,开始浓缩。根据离心浓缩仪的型号不同,干燥时间5-15 min不等,注意观察。干燥后加入5 µL Nuclease-free Water充分震荡混匀,离心后静置备用。

【注】不能过分干燥,否则会造成DNA溶解困难。若无浓缩干燥仪设备,可以采用附件1的磁珠浓缩富集的替代方案。但会引起文库的少量损失1.4 取新的1.5 mL离心管或0.2 mL PCR管放置于常温管架上进行杂交混合液的配制。对于全外显子的Panel探针杂交体系配制参考表2。从65 ℃金属浴上取下2 × Hyb Buffer,观察底部确保其澄清透明无沉淀。按照表格中的体积和样本量计算,依次加入其他试剂,然后上下颠倒2次后使用旋涡混匀仪震荡2 s混匀,快速离心5 s将管壁液体离心至管底,配制成单个或多个杂交混合液,放置于常温备用。

【注】2 × Hyb Buffer 比较粘稠,需要缓慢吸取。不要在冰上配制杂交混合液。对于多个杂交建议按照每个组分体积乘以实际杂交反应数再乘以1.2倍配制混合液。

2  全外显子的Panel探针杂交体系配制

名称

1次反应体积(µL

8次反应体积(µL

16次反应体积(µL

Universal Blocking Oligo (with cot-1)

7.5

72

144

2 × Hyb Buffer

18

172.8

345.6

RNase Inhibitor

0.5

4.8

9.6

Human All Exon Probes

5

48

96

Total

31

297.6

595.2

1.5 将配制好的杂交混合液按照每个反应31 µL加入到步骤1.3的5 µL预文库中,并使用移液器轻轻吹打混匀8次 (注意吹打过程时移液器下压到取液量程2/3左右然后松开,反复8次,避免全部按压到底产生气泡)。用管盖或96孔板密封膜密封,快速离心5 s。将预文库杂交混合液放置于杂交用的PCR仪上。

【注】确保彻底密封,建议使用压盖器或压膜刮板。

1.6 设定3所示反应程序,热盖模式(105℃)设定体积40 µL(杂交总体积36 µL)。

3  杂交 PCR 程序

温度

时间

热盖105 °C

On

95 °C

30 s

65 °C

Hold

1.7 运行3PCR程序,65 °C杂交16 h

【注】杂交15 – 20 h不影响下游捕获性能,一般可以考虑第一天下午4 5时做上杂交,第二天上午8  9时进行杂交后捕获。

  1. 链霉亲和素磁珠准备

2.1 捕获前,先从4 ℃冰箱取出Hieff NGS® Hyper Enrichment Beads,在漩涡震荡器上震荡30 s至磁珠充分重悬后,室温平衡30 min以上。

2.2 在室温平衡 30 min期间,从常温的Hieff NGS® Hyb & Wash Kit Box-I中取出 Wash Buffer 1Wash Buffer 2 Wash Buffer 3,在另外一台PCR仪上,设置65 Hold,热盖程序点击开启(热盖设定为70 ℃)。放入多个8连管或96孔板到PCR仪上,根据杂交反应数,每个反应准备3Wash Buffer 3。按照每个孔170 μL Wash Buffer 3 加入8连管或96孔板,盖好管盖并确保密封,备用。

【注】如果没有足够的PCR仪,可以采用金属浴或水浴锅代替,但务必用标准温度计测量以确保温度非常准确,如果温度低于65℃会导致捕获效率下降。

2.3 室温平衡30 min后,再将Hieff NGS® Hyper Enrichment Beads在漩涡震荡器上震荡30 s重悬,向8连管的每个孔中加入50 µL Hieff NGS® Hyper Enrichment Beads,注意加到管底位置,避免沾到管壁和管盖部分。

2.4 然后向每个孔加入150 μL的Wash Buffer 1,用8连排移液器轻轻吹打8次,充分混匀磁珠。

2.5 放置于磁力架上静置澄清后弃掉上清液。如果管壁或管盖有沾到磁珠,则快速离心5 s甩至管底。

【注】确保全部磁珠在管底侧壁,吸取过程移液器枪头从磁力架对侧贴近管壁逐渐向下吸取,直至管底。避免吸上清过程吸入磁珠。

2.6 重复操作步骤2.4 2.5,Wash Buffer 1总共清洗3次最后吸走上清液,仅保留磁珠在管底。

2.7 最后每个孔加入150 µL的Wash Buffer 1重悬磁珠,在每个孔上标记对应的杂交样本名称,室温放置待用。

3. 捕获磁珠富集文库及清洗

3.1 杂交混合液65 ℃孵育16 h后,确保剩余杂交体系体积不低于20 µL,在PCR仪上打开PCR管、8连管或96孔板,用8连排移液器将准备好的150 μL磁珠重悬液加入到杂交混合液中,并使用移液器轻轻吹打8次。然后将包含磁珠和杂交体系的混合液全部转移至2.7步骤中标记的磁珠8连管中,注意杂交管上的标记和磁珠管上的标记一一对应。

【注】不要从PCR仪上拿下杂交混合液。温度的下降会导致捕获效率降低。

3.2 将上述磁珠杂交混合液从PCR仪上取下放置在垂直旋转仪上并固定好,室温旋转孵育30 min。也可以用震荡金属浴,设置为1000-1500 r/min进行室温震荡孵育。

【注】取下杂交混合液后PCR仪不要关闭,保持65 ℃,后续步骤的Wash buffer3孵育清洗时需用。

3.3 从-20 ℃冰箱取出Hieff NGS® Hyb & Wash Kit Box-II和Universal Post PCR Primer for Illumina, 找到Post PCR Primer for IlluminaPost PCR Mix放置于冰上融化。

3.4 30 min后从旋转仪或震荡金属浴上取下8连管,快速离心5 s,放置磁力架2-5 min,确保液体清澈,吸弃上清。

3.5 从磁力架上取下8连管,每个孔加入150 μL的Wash Buffer 2来重悬磁珠,移液器轻轻吹打10次,室温孵育15 min,每间隔5 min,上下快速颠倒15次。

3.6 Wash Buffer 2室温孵育完成后,快速离心5 s后放置磁力架上待液体清澈后,吸弃上清液,放置在65 ℃杂交用的PCR仪上,立即用8连排移液器加入150 μL的已预热好的Wash Buffer 3,在PCR仪上吹吸10次使磁珠充分混匀,盖上管盖65 ℃孵育10 min

【注】吸取上清后需要快速加入 Wash Buffer 3,磁珠不能干燥。

3.7 65 ℃孵育10 min后,从PCR仪出反应管并放置在磁力架上,待液体清澈后吸弃上清

3.8 重复步骤3.6-3.7,Wash Buffer 3清洗3次。

【注】磁力架尽可能靠近PCR仪,从PCR仪上取下8连管放在磁力架上,时间尽可能短,避免温度的大幅下降。

3.9 Wash Buffer 3孵育期间,在冰上采用1.5 mL LoBind管配置Post-PCR反应体系,参考表4。按照反应数目分装到新的8连管或96孔板,每孔30 µL。做好样本标记,放置于冰上备用。同时取出Hieff NGS® DNA Selection Beads纯化磁珠放置室温平衡至少30 min

4  Post -PCR 反应体系

名称

1次反应体积(µL

8次反应体积(µL

16次反应体积(µL

Post PCR Mix

25

240

480

Post PCR Primer for Illumina

5

48

96

Total

30

288

546

【注】对于多个PCR体系建议按照每个组分体积乘以实际反应数再乘以 1.2 倍配制混合液

3.10 三次清洗完成后,快速离心10 s,再次放置于磁力架上用10 µL移液器尽可能吸走全部残余液体,最后加入20 µL Nuclease-free Water重悬磁珠,移液器轻轻吹打8次,将8连排移液器量程调至40 µL,吸取全部磁珠混悬液加入3.9步骤标记好的8连管或96孔板中,再次轻轻吹打混匀8次,确保磁珠和PCR反应体系混合均匀。

【注】包含磁珠的PCR反应液不要离心,尽快放置于PCR仪上开始运行程序。

4. Post-PCR反应

4.1 将步骤3.10的混合体系放置于PCR仪上,按照5程序进行PCR扩增:

5  Post – PCR反应程序

温度

时间

循环数

98°C

45 s

1

98°C

HieffNGS®Hyb&Wash Kit靶向捕获杂交清洗试剂盒15 s

 

循环数参照表6

60°C

30 sec

72°C

30 sec

72°C

5 min

1

4°C

Hold

4.2 根据所使用的Probes类型选择不同的PCR循环数,6为建议起始循环数:

6  Post – PCR循环数推荐

Probes

单杂

2-4个样品多杂

5-6个样品多杂

0.5 Mb

13-14

12-13

11-12

0.5 Mb-3 Mb

12-13

11-12

10-11

3 Mb-5 Mb

11-12

10-11

9-10

5 Mb

10-11

9-10

8-9

4.3 PCR 完成后,将8连管或96孔板取下,快速离心5 s后放置于磁力架上,静置1 min后吸取全部上清液转移至新的PCR管中,然后加入90 µL(1.8×)Hieff NGS® DNA Selection Beads纯化磁珠,移液器吹打8-10次充分混匀。

【注】上清液中包括捕获后文库,请勿遗弃。确保Hieff NGS® DNA Selection Beads纯化磁珠已在室温平衡30 min以上,且使用前需充分斡旋混匀。

4.4 室温放置5 min。在此期间准备80%的乙醇,用Nuclease-free Water进行配制,每个样本预计用量400 µL。

【注】此时PCR管不要放在磁力架上。

4.5 放置于磁力架上静置3- 5 min澄清后吸弃上清液。

4.6 管子保持在磁力架上不要取下,加入150 µL 80%乙醇,静置至磁珠完全吸附到一侧后,将管子从磁力架上取下方向调转180度,待磁珠完全吸附到另一侧后,再次调转。共调转4次后,吸弃上清。

4.7 重复步4.6操作。

4.8 快速离心后用10 µL移液器弃去残余乙醇,室温放置1- 3 min,直至磁珠表面无明显液体残留,无光泽或哑光状态。

【注】磁珠不要干燥过度以防文库产量降低。

4.9 从磁力架上取下管子,加入20 µL的Low TE洗脱,移液器吹打8- 10次后室温静置2 min

4.10 放置于磁力架上静置澄清后吸取上清液,转移至新的PCR管中,放置于-20 ℃冰箱保存待文库质检和上机。

5. 文库质检和上机准备

5.1 使用Agilent Bioanalyzer 2100仪器对样本进行质检,2100所需试剂为High Sensitivity DNA Assay。

5.2 杂交捕获文库的峰值约为300~ 500bp, 一般文库浓度约在0.5-10 ng/µL。文库适用于Illumina (HiSeq 3000/ 4000,NextSeq platform,X-Ten及NovaSeq等平台)对于存在降解的FFPE样本,建议额外提高测试数据量

【注】如果文库有小片段残余,总量足够情况下,可补水至50 µL,0.8X40 µL)磁珠再纯化一次。

HieffNGS®Hyb&Wash Kit靶向捕获杂交清洗试剂盒

暂无内容

HieffNGS®Hyb&Wash Kit靶向捕获杂交清洗试剂盒

暂无内容

耐高盐全能核酸酶ELISA检测试剂盒(Salt Active UltraNuclease ELISA kit)

耐高盐全能核酸酶ELISA检测试剂盒(Salt Active UltraNuclease ELISA kit)

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

 

Salt Active UltraNuclease(耐高盐全能核酸酶)是一种来源于海洋微生物的重组非特异性核酸内切酶,与UltraNuclease相比在0.5M NaCl条件下具有最佳活性,广泛应用于生产工艺流程中,有效去除核酸污染。

本试剂盒应用双抗夹心酶联免疫检测(ELISA)的实验原理进行耐高盐全能核酸酶残留量检测,将耐高盐全能核酸酶标准品和待测样本加入预包被抗耐高盐全能核酸酶抗体的酶标板(36703-A),然后加入稀释后的生物素标记的耐高盐全能核酸酶检测抗体(36703-C),最后加入Streptavidin-HRP(SA-HRP)(36703-D),形成抗体+抗原+抗体‐Biotin+ SA‐HRP 复合物,洗板后加入TMB显色液(36703-H)显色。TMB在HRP酶的催化下由无色转化成蓝色并在终止液(36703-I)的作用下最终转化成黄色。黄色的深浅与样本中被检测到的耐高盐全能核酸酶的量呈正相关。

 

产品信息

货号

36703ES48 / 36703ES96

规格

48 T / 96 T

检测范围

0-3 ng/mL

检测方法

双抗夹心法

检测时长

3.5小时

灵敏度

0.024 ng/mL

回收率

75 – 125%

板内差

<10%

板间差

<10%

 

实验数据

  1. 标曲数据

典型的参考标准曲线如下(以下标准曲线图仅供参考,应以同次实验标准品所绘标准曲线计算样本含量):

耐高盐全能核酸酶ELISA检测试剂盒(Salt Active UltraNuclease ELISA kit)

  1. 检测流程图

耐高盐全能核酸酶ELISA检测试剂盒(Salt Active UltraNuclease ELISA kit)

2:实验步骤流程简图

耐高盐全能核酸酶ELISA检测试剂盒(Salt Active UltraNuclease ELISA kit)

暂无内容

耐高盐全能核酸酶ELISA检测试剂盒(Salt Active UltraNuclease ELISA kit)

暂无内容

 

Salt Active UltraNuclease(耐高盐全能核酸酶)是一种来源于海洋微生物的重组非特异性核酸内切酶,与UltraNuclease相比在0.5M NaCl条件下具有最佳活性,广泛应用于生产工艺流程中,有效去除核酸污染。

本试剂盒应用双抗夹心酶联免疫检测(ELISA)的实验原理进行耐高盐全能核酸酶残留量检测,将耐高盐全能核酸酶标准品和待测样本加入预包被抗耐高盐全能核酸酶抗体的酶标板(36703-A),然后加入稀释后的生物素标记的耐高盐全能核酸酶检测抗体(36703-C),最后加入Streptavidin-HRP(SA-HRP)(36703-D),形成抗体+抗原+抗体‐Biotin+ SA‐HRP 复合物,洗板后加入TMB显色液(36703-H)显色。TMB在HRP酶的催化下由无色转化成蓝色并在终止液(36703-I)的作用下最终转化成黄色。黄色的深浅与样本中被检测到的耐高盐全能核酸酶的量呈正相关。

 

产品信息

货号

36703ES48 / 36703ES96

规格

48 T / 96 T

检测范围

0-3 ng/mL

检测方法

双抗夹心法

检测时长

3.5小时

灵敏度

0.024 ng/mL

回收率

75 – 125%

板内差

<10%

板间差

<10%

 

实验数据

  1. 标曲数据

典型的参考标准曲线如下(以下标准曲线图仅供参考,应以同次实验标准品所绘标准曲线计算样本含量):

耐高盐全能核酸酶ELISA检测试剂盒(Salt Active UltraNuclease ELISA kit)

  1. 检测流程图

耐高盐全能核酸酶ELISA检测试剂盒(Salt Active UltraNuclease ELISA kit)

2:实验步骤流程简图

耐高盐全能核酸酶ELISA检测试剂盒(Salt Active UltraNuclease ELISA kit)

暂无内容

耐高盐全能核酸酶ELISA检测试剂盒(Salt Active UltraNuclease ELISA kit)

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Protein A残留量ELISA检测试剂盒(Protein A ELISA Kit)

Protein A残留量ELISA检测试剂盒(Protein A ELISA Kit)

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

 

Protein A纯化介质由于与大多数抗体有特异性吸附,因此被广泛地用于抗体药物生产过程中,其中Protein A通过共价键与纯化介质结合,但在纯化过程中Protein A有一定脱落几率而残留下来。Protein A ELISA Kit是一款能够准确定量样品中残留Protein A的ELISA试剂盒,可用于抗体纯化过程中的工艺优化、关键质量参数评价以及中间产品和终产品中的Protein A残留量检测。

本试剂盒应用双抗夹心酶联免疫检测(ELISA)的实验原理进行Protein A残留量检测,将Protein A标准品(36716-B)和待测样品加入预包被抗Protein A抗体的Protein A捕获微孔板条(36716-A),然后加入稀释后的生物素标记的Protein A检测抗体(36716-C),最后加入Streptavidin-HRP(SA-HRP)(36716-D),形成抗体+抗原+抗体‐Biotin+ SA‐HRP 复合物,洗板后加入TMB显色液(36716-F)显色。TMB在HRP酶的催化下由无色转化成蓝色并在终止液(36716-G)的作用下最终转换成黄色。黄色的深浅与样品中被检测到的Protein A的量呈正相关。

 

产品信息

货号

36716ES48 / 36716ES96

规格

48 T / 96 T

检测范围

0-1000 pg/mL

检测方法

双抗夹心法

检测时长

3.5小时

灵敏度

7.8125 pg/mL

回收率

90 – 110%

板内差

<10%

板间差

<15%

 

实验数据

  1. 标曲数据

典型的参考标准曲线如下(以下标准曲线图仅供参考,应以同次实验标准品所绘标准曲线计算样本含量):

Protein A残留量ELISA检测试剂盒(Protein A ELISA Kit)

  1. 检测流程图

Protein A残留量ELISA检测试剂盒(Protein A ELISA Kit)

2:实验步骤流程简图

Protein A残留量ELISA检测试剂盒(Protein A ELISA Kit)

暂无内容

Protein A残留量ELISA检测试剂盒(Protein A ELISA Kit)

暂无内容

 

Protein A纯化介质由于与大多数抗体有特异性吸附,因此被广泛地用于抗体药物生产过程中,其中Protein A通过共价键与纯化介质结合,但在纯化过程中Protein A有一定脱落几率而残留下来。Protein A ELISA Kit是一款能够准确定量样品中残留Protein A的ELISA试剂盒,可用于抗体纯化过程中的工艺优化、关键质量参数评价以及中间产品和终产品中的Protein A残留量检测。

本试剂盒应用双抗夹心酶联免疫检测(ELISA)的实验原理进行Protein A残留量检测,将Protein A标准品(36716-B)和待测样品加入预包被抗Protein A抗体的Protein A捕获微孔板条(36716-A),然后加入稀释后的生物素标记的Protein A检测抗体(36716-C),最后加入Streptavidin-HRP(SA-HRP)(36716-D),形成抗体+抗原+抗体‐Biotin+ SA‐HRP 复合物,洗板后加入TMB显色液(36716-F)显色。TMB在HRP酶的催化下由无色转化成蓝色并在终止液(36716-G)的作用下最终转换成黄色。黄色的深浅与样品中被检测到的Protein A的量呈正相关。

 

产品信息

货号

36716ES48 / 36716ES96

规格

48 T / 96 T

检测范围

0-1000 pg/mL

检测方法

双抗夹心法

检测时长

3.5小时

灵敏度

7.8125 pg/mL

回收率

90 – 110%

板内差

<10%

板间差

<15%

 

实验数据

  1. 标曲数据

典型的参考标准曲线如下(以下标准曲线图仅供参考,应以同次实验标准品所绘标准曲线计算样本含量):

Protein A残留量ELISA检测试剂盒(Protein A ELISA Kit)

  1. 检测流程图

Protein A残留量ELISA检测试剂盒(Protein A ELISA Kit)

2:实验步骤流程简图

Protein A残留量ELISA检测试剂盒(Protein A ELISA Kit)

暂无内容

Protein A残留量ELISA检测试剂盒(Protein A ELISA Kit)

暂无内容

DNA建库接头引物试剂盒|Hieff NGS® 384 CDI Primer for Illumina®

DNA建库接头引物试剂盒|Hieff NGS® 384 CDI Primer for Illumina®

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

Hieff NGS® 384 CDI Primer for Illumina®Illumina®高通量测序平台DNA文库构建专用接头引物试剂盒,共分为2个Set,每个Set包含二代测序建库中使用的PE adapter以及 8种i5 Index Primer和12种i7 Index Primer。 2个Set共提供16种i5 Index Primer和24种i7 Index Primer,配合 Yeasen出品的DNA建库试剂盒使用可构建多达384种不同组合的双端index标记的文库。试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证,最大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性。

产品组分

编号

名称

规格

12412ES02

PE Adapter

2×336 μL

P 501-508

60 μL each

P 701-712

40 μL each

12413ES02

PE Adapter

2×336 μL

P 509-516

60 μL each

P 713-724

40 μL each

运输与保存方法

冰袋运输。

所有组分-20°C保存,有效期18个月

注意事项

1)本试剂盒中PE Adapter的浓度为15 μM,单个文库构建的接头使用量根据所用建库试剂盒进行调整。Index Primer的浓度为25 μM

2)本试剂盒提供的PE Adapter为通用型短接头,需要通过PCR扩增获得完整的文库。Index Primer提供Barcode序列标签,用于高通量测序时区分样品。

3)本试剂盒每个Set包含8种i5 Index Primer (P 5xx)和12种i7 Index Primer (P 7xx),相互组合可以构建96种不同组合的双端Index标记文库。2个Set共提供16种i5 Index Primer和24种i7 Index Primer。您可以使用Cat#12412中的i5 Index Primer(或i7 Index Primer)与Cat#12413中的i7 Index Primer(或i5 Index Primer)组合用以构建多达384种不同组合的双端Index标记文库。

4)切勿加热接头,应在室温让其缓慢溶解,实验室温度最好设置为20-25℃。接头避免反复冻融,建议分装保存,可短暂存放于4℃。

5)使用Hieff NGS® 384 CDI Primer for Illumina®试剂盒构建的测序文库结构如下:

  

DNA建库接头引物试剂盒|Hieff NGS® 384 CDI Primer for Illumina®

6)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
7)本产品仅作科研用途!

使用方法

1. 接头的使用:参照所用建库说明书中对不同投入量的推荐用量稀释至合适浓度使用。

2. Index Primer的使用:按照建库说明书中文库扩增体系配制反应体系(如下表),反应程序按照建库说明书中程序进行设置。

组分名称

体积(μL)

2× High Fidelity DNA PCR Mix

25

P 5xx

2.5

P 7xx

2.5

Adapter Ligated DNA

20

Total

50

序列信息

PE Adapter for Illumina:

5´-/5Phos/ GATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGT*C -3´

5´-ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATC*T-3´

i5 Index Primer for Illumina:

5´-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACAC[i5 Index]ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT -3´

i7 Index Primer for Illumina:

5´-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGAT[i7 Index]GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATC-3´

[i5 Index]表示8 bp 的i5 Index序列,[i7 Index]表示8 bp 的i7 Index序列,各引物对应的Index名称、引物中包含的Index序列以及测序时对应的Index序列信息如下表所示:

 

I5 Index Primers

引物中的序列

Sample Sheet输入/测序时Index序列

NovaSeq 6000 v1.0 reagents, MiSeq, HiSeq 2000/2500

NovaSeq 6000 v1.5 reagents,

MiniSeq, NextSeq,
HiSeq 3000/4000

P501

TATAGCCT

TATAGCCT

AGGCTATA

P502

ATAGAGGC

ATAGAGGC

GCCTCTAT

P503

CCTATCCT

CCTATCCT

AGGATAGG

P504

GGCTCTGA

GGCTCTGA

TCAGAGCC

P505

AGGCGAAG

AGGCGAAG

CTTCGCCT

P506

TAATCTTA

TAATCTTA

TAAGATTA

P507

CAGGACGT

CAGGACGT

ACGTCCTG

P508

GTACTGAC

GTACTGAC

GTCAGTAC

P509

GACCTGTA

GACCTGTA

TACAGGTC

P510

ATGTAACT

ATGTAACT

AGTTACAT

P511

GTTTCAGA

GTTTCAGA

TCTGAAAC

P512

CACAGGAT

CACAGGAT

ATCCTGTG

P513

TAGCTGCC

TAGCTGCC

GGCAGCTA

P514

AGCGAATG

AGCGAATG

CATTCGCT

P515

TATGCTGC

TATGCTGC

GCAGCATA

P516

AGAAGACT

AGAAGACT

AGTCTTCT

 

I7 Index Primers

引物中的序列

Sample Sheet输入/测序时Index序列

P701

CGAGTAAT

ATTACTCG

P702

TCTCCGGA

TCCGGAGA

P703

AATGAGCG

CGCTCATT

P704

GGAATCTC

GAGATTCC

P705

TTCTGAAT

ATTCAGAA

P706

ACGAATTC

GAATTCGT

P707

AGCTTCAG

CTGAAGCT

P708

GCGCATTA

TAATGCGC

P709

CATAGCCG

CGGCTATG

P710

TTCGCGGA

TCCGCGAA

P711

GCGCGAGA

TCTCGCGC

P712

CTATCGCT

AGCGATAG

P713

CCTACACG

CGTGTAGG

P714

GTAGTGTC

GACACTAC

P715

TGTATGCA

TGCATACA

P716

CCAGACTG

CAGTCTGG

P717

AGGTGCCA

TGGCACCT

P718

TCACCTTG

CAAGGTGA

P719

GTATCTTT

AAAGATAC

P720

CAGCTCCA

TGGAGCTG

P721

TCGCCTTA

TAAGGCGA

P722

CTAGTACG

CGTACTAG

P723

AGCGTAGC

GCTACGCT

P724

GAGCCTCG

CGAGGCTC

 

HB210118

DNA建库接头引物试剂盒|Hieff NGS® 384 CDI Primer for Illumina®

暂无内容

DNA建库接头引物试剂盒|Hieff NGS® 384 CDI Primer for Illumina®

暂无内容

Hieff NGS® 384 CDI Primer for Illumina®Illumina®高通量测序平台DNA文库构建专用接头引物试剂盒,共分为2个Set,每个Set包含二代测序建库中使用的PE adapter以及 8种i5 Index Primer和12种i7 Index Primer。 2个Set共提供16种i5 Index Primer和24种i7 Index Primer,配合 Yeasen出品的DNA建库试剂盒使用可构建多达384种不同组合的双端index标记的文库。试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证,最大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性。

产品组分

编号

名称

规格

12412ES02

PE Adapter

2×336 μL

P 501-508

60 μL each

P 701-712

40 μL each

12413ES02

PE Adapter

2×336 μL

P 509-516

60 μL each

P 713-724

40 μL each

运输与保存方法

冰袋运输。

所有组分-20°C保存,有效期18个月

注意事项

1)本试剂盒中PE Adapter的浓度为15 μM,单个文库构建的接头使用量根据所用建库试剂盒进行调整。Index Primer的浓度为25 μM

2)本试剂盒提供的PE Adapter为通用型短接头,需要通过PCR扩增获得完整的文库。Index Primer提供Barcode序列标签,用于高通量测序时区分样品。

3)本试剂盒每个Set包含8种i5 Index Primer (P 5xx)和12种i7 Index Primer (P 7xx),相互组合可以构建96种不同组合的双端Index标记文库。2个Set共提供16种i5 Index Primer和24种i7 Index Primer。您可以使用Cat#12412中的i5 Index Primer(或i7 Index Primer)与Cat#12413中的i7 Index Primer(或i5 Index Primer)组合用以构建多达384种不同组合的双端Index标记文库。

4)切勿加热接头,应在室温让其缓慢溶解,实验室温度最好设置为20-25℃。接头避免反复冻融,建议分装保存,可短暂存放于4℃。

5)使用Hieff NGS® 384 CDI Primer for Illumina®试剂盒构建的测序文库结构如下:

  

DNA建库接头引物试剂盒|Hieff NGS® 384 CDI Primer for Illumina®

6)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
7)本产品仅作科研用途!

使用方法

1. 接头的使用:参照所用建库说明书中对不同投入量的推荐用量稀释至合适浓度使用。

2. Index Primer的使用:按照建库说明书中文库扩增体系配制反应体系(如下表),反应程序按照建库说明书中程序进行设置。

组分名称

体积(μL)

2× High Fidelity DNA PCR Mix

25

P 5xx

2.5

P 7xx

2.5

Adapter Ligated DNA

20

Total

50

序列信息

PE Adapter for Illumina:

5´-/5Phos/ GATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGT*C -3´

5´-ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATC*T-3´

i5 Index Primer for Illumina:

5´-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACAC[i5 Index]ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT -3´

i7 Index Primer for Illumina:

5´-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGAT[i7 Index]GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATC-3´

[i5 Index]表示8 bp 的i5 Index序列,[i7 Index]表示8 bp 的i7 Index序列,各引物对应的Index名称、引物中包含的Index序列以及测序时对应的Index序列信息如下表所示:

 

I5 Index Primers

引物中的序列

Sample Sheet输入/测序时Index序列

NovaSeq 6000 v1.0 reagents, MiSeq, HiSeq 2000/2500

NovaSeq 6000 v1.5 reagents,

MiniSeq, NextSeq,
HiSeq 3000/4000

P501

TATAGCCT

TATAGCCT

AGGCTATA

P502

ATAGAGGC

ATAGAGGC

GCCTCTAT

P503

CCTATCCT

CCTATCCT

AGGATAGG

P504

GGCTCTGA

GGCTCTGA

TCAGAGCC

P505

AGGCGAAG

AGGCGAAG

CTTCGCCT

P506

TAATCTTA

TAATCTTA

TAAGATTA

P507

CAGGACGT

CAGGACGT

ACGTCCTG

P508

GTACTGAC

GTACTGAC

GTCAGTAC

P509

GACCTGTA

GACCTGTA

TACAGGTC

P510

ATGTAACT

ATGTAACT

AGTTACAT

P511

GTTTCAGA

GTTTCAGA

TCTGAAAC

P512

CACAGGAT

CACAGGAT

ATCCTGTG

P513

TAGCTGCC

TAGCTGCC

GGCAGCTA

P514

AGCGAATG

AGCGAATG

CATTCGCT

P515

TATGCTGC

TATGCTGC

GCAGCATA

P516

AGAAGACT

AGAAGACT

AGTCTTCT

 

I7 Index Primers

引物中的序列

Sample Sheet输入/测序时Index序列

P701

CGAGTAAT

ATTACTCG

P702

TCTCCGGA

TCCGGAGA

P703

AATGAGCG

CGCTCATT

P704

GGAATCTC

GAGATTCC

P705

TTCTGAAT

ATTCAGAA

P706

ACGAATTC

GAATTCGT

P707

AGCTTCAG

CTGAAGCT

P708

GCGCATTA

TAATGCGC

P709

CATAGCCG

CGGCTATG

P710

TTCGCGGA

TCCGCGAA

P711

GCGCGAGA

TCTCGCGC

P712

CTATCGCT

AGCGATAG

P713

CCTACACG

CGTGTAGG

P714

GTAGTGTC

GACACTAC

P715

TGTATGCA

TGCATACA

P716

CCAGACTG

CAGTCTGG

P717

AGGTGCCA

TGGCACCT

P718

TCACCTTG

CAAGGTGA

P719

GTATCTTT

AAAGATAC

P720

CAGCTCCA

TGGAGCTG

P721

TCGCCTTA

TAAGGCGA

P722

CTAGTACG

CGTACTAG

P723

AGCGTAGC

GCTACGCT

P724

GAGCCTCG

CGAGGCTC

 

HB210118

DNA建库接头引物试剂盒|Hieff NGS® 384 CDI Primer for Illumina®

暂无内容

DNA建库接头引物试剂盒|Hieff NGS® 384 CDI Primer for Illumina®

暂无内容

RNA建库接头引物试剂盒|Hieff NGS® RNA 384 CDI Primer for Illumina®

RNA建库接头引物试剂盒|Hieff NGS® RNA 384 CDI Primer for Illumina®

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

Hieff NGS® RNA 384 CDI Primer for Illumina®Illumina®高通量测序平台RNA文库构建专用接头引物试剂盒,共分为2个Set,每个Set包含二代测序建库中使用的PE adapter以及 8种i5 Index Primer和12种i7 Index Primer。 2个Set共提供16种i5 Index Primer和24种i7 Index Primer,配合 Yeasen出品的RNA建库试剂盒使用可构建多达384种不同组合的双端index标记的文库。试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证,最大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性。

产品组分

编号

名称

规格

12414ES02

PE Adapter

320 μL

RP 501-508

60 μL each

RP 701-712

40 μL each

12415ES02

PE Adapter

320 μL

RP 509-516

60 μL each

RP 713-724

40 μL each

运输与保存方法

冰袋运输。

所有组分-20°C保存,有效期18个月。

注意事项

1)本试剂盒中PE Adapter的浓度为15 μM,单个文库构建的接头使用量根据所用建库试剂盒的推荐用量进行调整。 Index Primer的浓度为10 μM

2)本试剂盒提供的PE Adapter为通用型短接头,需要通过PCR扩增获得完整的文库。Index Primer提供Barcode序列标签,用于高通量测序时区分样品。

3)本试剂盒每个Set包含8种i5 Index Primer (RP 5xx)12种i7 Index Primer (RP 7xx)互相组合可以构建96种不同组合的双端Index标记文库。2个Set共提供16种i5 Index Primer和24种i7 Index Primer。您可以使用Cat#12414中的i5 Index Primer(或i7 Index Primer)与Cat#12415中的i7 Index Primer(或i5 Index Primer)组合用以构建多达384种不同组合的双端Index标记文库。

4)切勿加热接头,应在室温让其缓慢溶解,实验室温度最好设置为20-25℃。接头避免反复冻融,建议分装保存,可短暂存放于4℃。

5)使用Hieff NGS® RNA 384 CDI Primer for Illumina®试剂盒构建的测序文库结构如下:

  RNA建库接头引物试剂盒|Hieff NGS® RNA 384 CDI Primer for Illumina®

6)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
7)本产品仅作科研用途!

使用方法

1. 接头的使用:参照所用建库说明书中对不同投入量的推荐用量稀释至合适浓度使用。

2. Index Primer的使用:按照建库说明书中文库扩增体系配制反应体系(如下表),反应程序按照建库说明书中程序进行设置。

组分名称

体积(μL)

2× High Fidelity DNA PCR Mix

25

RP 5xx

2.5

RP 7xx

2.5

Adapter Ligated DNA

20

Total

50

 

序列信息

PE Adapter for Illumina:

5´-/5Phos/ GATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGT*C -3´

5´-ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATC*T-3´

i5 Index Primer for Illumina:

5´-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACA