产品描述

Exosome（外泌体）是由活细胞分泌的直径约为30-150 nm的小囊泡，具有典型的脂质双分子层结构；存在于细胞培养上清液、血清、血浆、唾液、尿液、羊水以及其它生物体液中；Exosome携带有多种蛋白质、脂类、DNA和RNA等重要信息，不仅在细胞与细胞间的物质和信息传递中起重要作用，更有望成为多种疾病的早期诊断标志物。

本试剂盒采用独特的分离技术，可以快速从细胞培养上清中获得大量完整的外泌体颗粒，适用于下游的细胞共培养、电镜分析、Western Blot、荧光定量（qPCR）和高通量测序等应用。

产品组分

运输和保存方法

室温运输，本试剂盒可于室温稳定保存24个月。

注意事项

1）为了确保获得的外泌体是来自于您的细胞，最好使用无外泌体的血清进行培养。

2）如果想要进一步纯化外泌体，可以使用相应抗体包被的磁珠进行亲和纯化。

3）产品只针对细胞培养上清来源的外泌体分离，不适用血清/血浆中外泌体的抽提，如果需要进行血清/血浆的外泌体分离，请选用血清/血浆外泌体快速抽提试剂盒。

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

5）本产品仅作科研用途！

操作方法

样品制备：
收集细胞培养基至15 mL离心管中，3000×g，离心10 min；小心收集上清，并转移至新的离心管中（勿破坏沉淀），于冰上放置待用。

注：若收集的细胞上清不能及时使用，可先放置于-20℃或-80℃冷冻。使用时，于25℃水浴锅中解冻，完全溶解后置于冰上待用。

外泌体分离：

1）试剂准备：使用前请将外泌体抽提试剂充分混匀。

2）上清预处理：吸取10 mL的细胞培养上清，加入2.5 mL外泌体抽提试剂（41201-A），涡旋振荡混匀1 min，再放置于2℃至8℃静置2h；

注：上述用量的推荐，仅针对外泌体分泌量高的肿瘤细胞，对于外泌体分泌量少的样品（例如干细胞）可以适当加大上清的用量。其它规格的细胞上清可以根据外泌体抽提试剂的用量进行等比例换算。

3）外泌体沉淀：取出装有混合液的离心管于4℃，10000×g离心60 min，弃上清，收集沉淀（尽可能吸尽上清）。

4）外泌体重悬：取100 μL 1×PBS均匀吹打离心沉淀物，使其充分混匀，并转移至新的1.5 mL离心管中；

注：外泌体颗粒会附着在管壁上，重悬时可以使用PBS对管壁进行反复吹打洗脱（避免剧烈吹打）。重悬用的PBS的量可以根据细胞上清的量进行等比例增加，也可以根据可能获得的外泌体的量进行适当的增加或者减少。

5）外泌体的洗涤：将含有外泌体的1.5mL离心管于4℃，12000×g离心2 min，弃沉淀，保留上清液。

6）外泌体的保存：纯化后的外泌体可于4℃保存3天，-80℃ 长期保存，避免反复冻融。

外泌体浓缩（可选）：

如果获得的外泌体浓度比较低，可以使用密理博3kD孔径的超滤管于4℃，14000×g离心10-30 min，内管中即为纯化后的外泌体颗粒。

外泌体除菌（可选）：

获得的外泌体后期需要与细胞共培养，可以使用0.22 μm的滤器进行过滤除菌。初次尝试时，建议外泌体蛋白浓度在10-100 μg/mL内做梯度摸索，选择一个较为合适的条件。

结果展示：

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  HB180517

Q：外泌体洗涤那步为什么要保留上清液？

A：因为外泌体溶解到上清中了，这个转速下外泌体还是在上清中。

Q:是利用的磁珠法还是柱法？

A:这个不属于纯化，是生物试剂 PEG。

Q：最后得到外泌体沉淀了，为什么还要再洗涤弃沉淀，沉淀是什么？

A：去除提取的或试剂中的不溶性沉淀。

Q4:无外泌体血清培养基（或者无血清培养基）在什么时候使用？

A:细胞在正常含血清的培养基中培养一定的时间后，细胞融合度约为60%-70%时，移去原有含血清的培养基，换成新鲜的无外泌体血清培养基（或者无血清培养基），继续培养24-48h，细胞融合度达到80%-95%左右时收取上清，该上清液即可用于提取外泌体。

Q5:细胞培养过程中的死细胞是否会影响外泌体的提取？

A:会的。在收获细胞时，应确定死亡细胞占比不超过5%。细胞凋亡/死亡过程中会释放大量大小不等的囊泡，它们在外泌体的提取纯化过程中会污染活细胞产生的外泌体，同时有可能产生大量杂质。

Q6:加了抽提试剂离心之后无沉淀，这个现象正常吗？

A:由于某些细胞（如悬浮细胞、干细胞、神经细胞等）中外泌体含量比较低，加了试剂A离心之后肉眼可能无法观察到沉淀，在重悬时使用PBS液朝离心管离心外侧的内壁反复吹打洗脱即可（避免剧烈吹打）。针对提取后的外泌体先进行NTA粒径检测或BCA蛋白定量检测，再决定是否进行后继实验。

[1] Li Z, Qin X, Bian W, et al. Exosomal lncRNA ZFAS1 regulates esophageal squamous cell carcinoma cell proliferation, invasion, migration and apoptosis via microRNA-124/STAT3 axis. J Exp Clin Cancer Res. 2019;38(1):477. Published 2019 Nov 27. doi:10.1186/s13046-019-1473-8(IF:11.161)
[2] Guan X, Zong ZH, Liu Y, Chen S, Wang LL, Zhao Y. circPUM1 Promotes Tumorigenesis and Progression of Ovarian Cancer by Sponging miR-615-5p and miR-6753-5p. Mol Ther Nucleic Acids. 2019;18:882-892. doi:10.1016/j.omtn.2019.09.032(IF:8.886)
[3] Chen G, Yue A, Wang M, Ruan Z, Zhu L. The Exosomal lncRNA KLF3-AS1 From Ischemic Cardiomyocytes Mediates IGF-1 Secretion by MSCs to Rescue Myocardial Ischemia-Reperfusion Injury. Front Cardiovasc Med. 2021;8:671610. Published 2021 Sep 21. doi:10.3389/fcvm.2021.671610(IF:6.050)
[4] Zhang H, Wang J, Wang Y, et al. Long Non-Coding LEF1-AS1 Sponge miR-5100 Regulates Apoptosis and Autophagy in Gastric Cancer Cells via the miR-5100/DEK/AMPK-mTOR Axis. Int J Mol Sci. 2022;23(9):4787. Published 2022 Apr 26. doi:10.3390/ijms23094787(IF:5.924)
[5] Li F, Niu R, Gao S, et al. Pro-Angiogenesis Role of LINC00662 From Esophageal Squamous Cell Carcinoma Cells-Derived Extracellular Vehicles. Front Bioeng Biotechnol. 2022;10:772514. Published 2022 Apr 1. doi:10.3389/fbioe.2022.772514(IF:5.890)
[6] Luo X, Wei J, Yang FL, et al. Exosomal lncRNA HNF1A-AS1 affects cisplatin resistance in cervical cancer cells through regulating microRNA-34b/TUFT1 axis. Cancer Cell Int. 2019;19:323. Published 2019 Dec 3. doi:10.1186/s12935-019-1042-4(IF:5.722)
[7] Wang ZF, Liao F, Wu H, Dai J. Glioma stem cells-derived exosomal miR-26a promotes angiogenesis of microvessel endothelial cells in glioma. J Exp Clin Cancer Res. 2019;38(1):201. Published 2019 May 17. doi:10.1186/s13046-019-1181-4(IF:5.646)
[8] Chen G, Wang M, Ruan Z, Zhu L, Tang C. Mesenchymal stem cell-derived exosomal miR-143-3p suppresses myocardial ischemia-reperfusion injury by regulating autophagy. Life Sci. 2021;280:119742. doi:10.1016/j.lfs.2021.119742(IF:5.037)
[9] Shang A, Wang X, Gu C, et al. Exosomal miR-183-5p promotes angiogenesis in colorectal cancer by regulation of FOXO1. Aging (Albany NY). 2020;12(9):8352-8371. doi:10.18632/aging.103145(IF:4.831)
[10] Ma R, Liang Z, Shi X, et al. Exosomal miR-486-5p derived from human placental microvascular endothelial cells regulates proliferation and invasion of trophoblasts via targeting IGF1. Hum Cell. 2021;34(5):1310-1323. doi:10.1007/s13577-021-00543-x(IF:4.174)
[11] Hu H, Xu H, Lu F, et al. Exosome-Derived miR-486-5p Regulates Cell Cycle, Proliferation and Metastasis in Lung Adenocarcinoma via Targeting NEK2 [retracted in:  Front Bioeng Biotechnol. 2021 Mar 26;9:681918]. Front Bioeng Biotechnol. 2020;8:259. Published 2020 Apr 8. doi:10.3389/fbioe.2020.00259(IF:3.644)
[12] Sun LP, Xu K, Cui J, et al. Cancer‑associated fibroblast‑derived exosomal miR‑382‑5p promotes the migration and invasion of oral squamous cell carcinoma. Oncol Rep. 2019;42(4):1319-1328. doi:10.3892/or.2019.7255(IF:3.041)
[13] Liu Y, Fu W, Cao X, et al. Delivery of miR-224-5p by Exosomes from Cancer-Associated Fibroblasts Potentiates Progression of Clear Cell Renal Cell Carcinoma. Comput Math Methods Med. 2021;2021:5517747. Published 2021 May 24. doi:10.1155/2021/5517747(IF:2.238)
[14] Song H, Zhang X, Chen R, et al. Cortical Neuron-Derived Exosomal MicroRNA-181c-3p Inhibits Neuroinflammation by Downregulating CXCL1 in Astrocytes of a Rat Model with Ischemic Brain Injury. Neuroimmunomodulation. 2019;26(5):217-233. doi:10.1159/000502694(IF:1.351)

产品描述

Exosome（外泌体）是由活细胞分泌的直径约为30-150 nm的小囊泡，具有典型的脂质双分子层结构；存在于细胞培养上清液、血清、血浆、唾液、尿液、羊水以及其它生物体液中；Exosome携带有多种蛋白质、脂类、DNA和RNA等重要信息，不仅在细胞与细胞间的物质和信息传递中起重要作用，更有望成为多种疾病的早期诊断标志物。

本试剂盒采用独特的分离技术，可以快速从血清/血浆中获得大量完整的外泌体颗粒，适用于下游的细胞共培养、电镜分析、Western Blot、荧光定量（qPCR）和高通量测序等应用。

产品组分

运输和保存方法

室温运输，本试剂盒可于室温稳定保存24个月。

注意事项

1、使用前请将外泌体抽提试剂（41202-A）充分混匀。

2、产品只针对血清/血浆样本，不适用其它体液或者是细胞培养上清中外泌体的抽提；如果需要进行细胞上清外泌体分离，

请选用细胞培养上清外泌体快速抽提试剂盒。

3、如果想要进一步纯化外泌体，可以使用相应抗体包被的磁珠进行亲和纯化。

4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

5、本产品仅作科研用途！

操作方法

样品预处理：

1、收集新鲜的样品，置于冰上待用；若为冻存的样品，可于冰箱取出后放于25℃水浴中解冻，待完全融化后置于冰上待用。

2、取1 mL血清/血液样品转移至离心管中，4℃，3000×g离心10 min，弃沉淀，并将上清转移至新的离心管中。

3、将转移的上清，4℃，10,000×g离心20 min，弃沉淀，将上清液转移至新的离心管中。

外泌体分离：

1、向预处理后的样品中，加入4倍体积的1×PBS充分混匀。

2、在PBS稀释后的样品中，继续加入相应量的41202-A试剂；盖紧离心管盖，涡旋振荡1 min，放置于4℃冰箱静置2 h。

3、取出装有混合液的离心管，4℃，10,000×g离心60 min，弃上清（尽可能吸净上清液），收集富含外泌体的沉淀。

4、吸取一定量体积的1×PBS溶液均匀吹打离心沉淀物，待其充分悬浮于PBS后，将悬液转移至新的1.5 mL离心管中。

注：加入PBS的量，建议根据初始样本的体积决定，初始样本体积：1×PBS体积=2.5:1。

5、将含有重悬液的1.5 mL离心管于4℃，12,000×g离心2 min，弃沉淀，保留上清液，该上清液即富含外泌体颗粒的溶液。

注：此时如果依然可以看到明显的沉淀，建议重复步骤4，重新进行洗涤和沉淀。

6、纯化后的外泌体可于4℃保存3天，-80℃ 长期保存，建议对外泌体进行分装后保存，避免反复冻融。

外泌体纯化（可选）：

鉴于血清/血浆中杂蛋白较多，如果后续需要进行细胞共培养或者高通量测序，建议进行进一步纯化。可以使用密理博100kD的孔径的超滤管于4℃以14,000×g离心10-30 min，内管中即为纯化后的外泌体颗粒；除此之外，还可以使用抗体包被的磁珠进行亲和纯化。

外泌体除菌（可选）：

获得的外泌体后期需要与细胞共培养，可以使用0.22 μm的滤器进行过滤除菌。初次尝试时，外泌体浓度在10-100 μg/mL内做梯度摸索，选择一个较为合适的条件。

效果展示

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 HB180417

Q:41202 可以提取哪些样本的外泌体？

A:细胞上清液、尿液（可直接提取）、脑脊液（需处理后再提取）。其他的组织液包括体液、唾液、卵泡液、精液等提取效率较低，建议客户用专门的组织液提取试剂盒。

Q:外泌体血液样本提取需注意事项？

A:1.全血经过长时间放置，冷冻、离心、会发生溶血现象，无法提取外泌体，必须做好血清血浆的分离。2.去除血清外源的外泌体。

Q:如何去除血清外源的外泌体？

A:1.将细胞培养用的血清通过 1×105g 超速离心 10h，去除血清外泌体；

2. 选择无血清培养基进行细胞培养。

Q:无外泌体血清培养基/无血清培养基在什么时候使用？

A:细胞融合度达到 60%-70%时，换成新鲜的无外泌体血清培养基（或者无血清培养基），待细胞融合度达到 80%-95%左右时收取上清即可。

[1] Han J, Zhang L, Hu L, et al. Circular RNA-Expression Profiling Reveals a Potential Role of Hsa_circ_0097435 in Heart Failure via Sponging Multiple MicroRNAs. Front Genet. 2020;11:212. Published 2020 Mar 10. doi:10.3389/fgene.2020.00212(IF:3.260)

Exosome（外泌体）是由活细胞分泌的直径约为30-150 nm的小囊泡，具有典型的脂质双分子层结构；存在于细胞培养上清液、血清、血浆、唾液、尿液、羊水以及其它生物体液中；Exosome携带有多种蛋白质、脂类、DNA和RNA等重要信息，不仅在细胞与细胞间的物质和信息传递中起重要作用，更有望成为多种疾病的早期诊断标志物。

本试剂盒采用独特的分离技术，可以快速从体液如脑脊液、羊水、唾液、肺泡灌洗液及鼻腔盥洗液等体液中获得大量完整的外泌体颗粒，适用于下游的细胞共培养、电镜分析、Western Blot、荧光定量（qPCR）和高通量测序等应用。

产品组分

运输和保存方法

室温运输，本试剂盒可于室温稳定保存24个月。

注意事项

1、使用前请将外泌体抽提试剂（41204-A）充分混匀。

2、产品只针对体液样本，不适用其它血清/血液或者是细胞培养上清中外泌体的抽提；如果需要进行细胞上清外泌体分离，请选用细胞培养上清外泌体快速抽提试剂盒。

3、如果想要进一步纯化外泌体，可以使用相应抗体包被的磁珠进行亲和纯化。

4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

5、本产品仅作科研用途！

操作方法

样品预处理：

1、收集新鲜的样品，置于冰上待用；若为冻存的样品，可于冰箱取出后放于25℃水浴中解冻，待完全融化后置于冰上待用。

2、取1 mL（单次样品量不能低于1 mL）体液样品转移至离心管中，4℃，3000 × g离心10 min，弃沉淀，并将上清转移至新的离心管中。

3、将转移的上清，4 ℃，10,000 × g离心20 min，弃沉淀，将上清液转移至新的离心管中。

外泌体分离：

1、向预处理后的样品中，按照下表加入Exosome isolation solution （其他样品量根据表中试剂用量进行等比例变换）。

2、盖紧离心管盖，涡旋振荡1 min，放置于4℃冰箱静置2 h。

3、取出装有混合液的离心管，4℃，10,000×g离心60 min，弃上清（尽可能吸净上清液），收集富含外泌体的沉淀。

4、吸取一定量体积的1×PBS溶液均匀吹打离心沉淀物，待其充分悬浮于PBS后，将悬液转移至新的1.5 mL离心管中。

【注】加入PBS的量，建议根据初始样本的体积决定，初始样本体积：1×PBS体积=10:1。

5、将含有重悬液的1.5 mL离心管于4℃，12,000×g离心2 min，弃沉淀，保留上清液，该上清液即富含外泌体颗粒的溶液。

【注】此时如果依然可以看到明显的沉淀，建议重复步骤5，多次离心至无明显沉淀。

6、纯化后的外泌体可于4℃保存3天，-80℃ 长期保存，建议对外泌体进行分装后保存，避免反复冻融。

外泌体纯化（可选）：

鉴于体液中杂蛋白较多，如果后续需要进行细胞共培养或者高通量测序，建议进一步纯化外泌体。可以使用密理博100kD的孔径的超滤管于4℃以14,000×g离心10-30 min，内管中即为纯化后的外泌体颗粒；除此之外，还可以使用抗体包被的磁珠进行亲和纯化。

外泌体除菌（可选）：

获得的外泌体后期需要与细胞共培养，可以使用0.22 μm的滤器进行过滤除菌。初次尝试时，外泌体浓度在10-100 μg/mL内做梯度摸索，选择一个较为合适的条件。

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HB210915

Exosome（外泌体）是由活细胞分泌的直径约为30-150 nm的小囊泡，具有典型的脂质双分子层结构，存在于细胞培养上清液、血清、血浆、唾液、尿液、羊水以及其它生物体液中。Exosome携带有多种蛋白质、脂类、DNA和RNA等重要信息，不仅在细胞与细胞间的物质和信息传递中起重要作用，更有望成为多种疾病的早期诊断标志物。

本试剂盒采用独特的分离技术，可以快速从尿液中获得大量完整的外泌体颗粒，适用于下游的细胞共培养、电镜分析、Western Blot、荧光定量（qPCR）和高通量测序等应用。

产品组分

运输和保存方法

室温运输，室温保存，有效期2年。

注意事项

1、使用前请将外泌体抽提试剂（41207-A）充分混匀。

2、产品只针对尿液样本，不适用其它血清/血液或者是细胞培养上清中外泌体的抽提；如果需要进行细胞上清外泌体分离，请选用细胞培养上清外泌体快速抽提试剂盒。

3、如果想要进一步纯化外泌体，可以使用相应抗体包被的磁珠进行亲和纯化。

4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

5、本产品仅作科研用途！

操作方法

样品预处理：

1、收集新鲜的样品，置于冰上待用；若为冻存的样品，可于冰箱取出后放于25℃水浴中解冻，待完全融化后置于冰上待用。

2、取25 mL（单次样品量不能低于25 mL）体液样品转移至离心管中，4℃，3000 × g离心10 min，弃沉淀（可多次离心至无明显沉淀），并将上清转移至过滤柱（41207-B）中。（可多次离心至无明显沉淀）

3、将过滤柱转移至离心机中，4℃，3000×g离心10min，取过滤柱收集管中的液体，转移至新管中。

外泌体分离：

1、向预处理后的样品中，按照下表加入Exosome isolation solution （其他样品量根据表中试剂用量进行等比例变换）

2、盖紧离心管盖，涡旋振荡1 min，放置于4℃冰箱静置2 h。

3、取出装有混合液的离心管，4℃，10,000×g离心60 min，弃上清（尽可能吸净上清液），收集富含外泌体的沉淀。

4、吸取一定量体积的Exosome Buffer溶液均匀吹打离心沉淀物，待其充分悬浮于Exosome Buffer后，将悬液转移至新的1.5 mL离心管中。

【注】加入Exosome Buffer的量，建议根据初始样本的体积决定，初始样本体积：Exosome Buffer体积=50:1。

5、将含有重悬液的1.5 mL离心管于4℃，12,000×g离心5 min，弃沉淀，保留上清液，该上清液即富含外泌体颗粒的溶液。

【注】此时如果依然可以看到明显的沉淀，建议重复步骤5，多次离心至无明显沉淀。

6）外泌体的保存：纯化后的外泌体可于4℃保存3天，分装后于-80℃ 长期保存，避免反复冻融。

外泌体除菌（可选）：

获得的外泌体后期需要与细胞共培养，可以使用0.22 μm的滤器进行过滤除菌。初次尝试时，外泌体浓度在10-100 μg/mL内做梯度摸索，选择一个较为合适的条件。

HB230227

Exosome（外泌体）是由活细胞分泌的直径约为30-150 nm的小囊泡，具有典型的脂质双分子层结构，存在于细胞培养上清液、血清、血浆、唾液、尿液、羊水以及其它生物体液中。Exosome携带有多种蛋白质、脂类、DNA和RNA等重要信息，不仅在细胞与细胞间的物质和信息传递中起重要作用，更有望成为多种疾病的早期诊断标志物。

本试剂盒采用独特的分离技术，可以快速从体液如脑脊液、羊水、唾液、肺泡灌洗液及鼻腔盥洗液等体液中获得大量完整的外泌体颗粒，适用于下游的细胞共培养、电镜分析、Western Blot、荧光定量（qPCR）和高通量测序等应用。

产品组分

运输和保存方法

室温运输，本试剂盒可于室温稳定保存24个月。

注意事项

1、使用前请将外泌体抽提试剂（41208-A）充分混匀。

2、产品只针对体液样本，不适用其它血清/血液或者是细胞培养上清中外泌体的抽提；如果需要进行细胞上清外泌体分离，请选用细胞培养上清外泌体快速抽提试剂盒。

3、如果想要进一步纯化外泌体，可以使用相应抗体包被的磁珠进行亲和纯化。

4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

5、本产品仅作科研用途！

操作方法

样品预处理：

1、收集新鲜的样品，置于冰上待用；若为冻存的样品，可于冰箱取出后放于25℃水浴中解冻，待完全融化后置于冰上待用。

2、取1 mL（单次样品量不能低于1 mL）体液样品转移至离心管中，4℃，3000 × g离心10 min，弃沉淀，并将上清转移至新的离心管中。

3、将转移的上清，4 ℃，10,000 × g离心20 min，弃沉淀，将上清液转移至新的离心管中。

外泌体分离：

1、向预处理后的样品中，按照下表加入Exosome isolation solution （其他样品量根据表中试剂用量进行等比例变换）。

2、盖紧离心管盖，涡旋振荡1 min，放置于4℃冰箱静置2 h。

3、取出装有混合液的离心管，4℃，10,000×g离心60 min，弃上清（尽可能吸净上清液），收集富含外泌体的沉淀。

4、吸取一定量体积的1×PBS溶液均匀吹打离心沉淀物，待其充分悬浮于PBS后，将悬液转移至新的1.5 mL离心管中。

【注】加入PBS的量，建议根据初始样本的体积决定，初始样本体积：1×PBS体积=10:1。

5、将含有重悬液的1.5 mL离心管于4℃，12,000×g离心2 min，弃沉淀，保留上清液，该上清液即富含外泌体颗粒的溶液。

【注】此时如果依然可以看到明显的沉淀，建议重复步骤5，多次离心至无明显沉淀。

外泌体纯化

1）纯化外泌体：将收获的外泌体颗粒粗制品转入Exosome Purification Column （EP柱）上管中，于4℃，3000g离心10 min，收集管底的液体，即为纯化后的外泌体颗粒。

2）外泌体的保存：纯化后的外泌体可于4℃保存3天，分装后于-80℃ 长期保存，避免反复冻融。

外泌体除菌（可选）：

获得的外泌体后期需要与细胞共培养，可以使用0.22 μm的滤器进行过滤除菌。初次尝试时，外泌体浓度在10-100 μg/mL内做梯度摸索，选择一个较为合适的条件。

HB220107

Exosome（外泌体）是由活细胞分泌的直径约为30-150 nm的小囊泡，具有典型的脂质双分子层结构；存在于细胞培养上清液、血清、血浆、唾液、尿液、羊水以及其它生物体液中；Exosome携带有多种蛋白质、脂类、DNA和RNA等重要信息，不仅在细胞与细胞间的物质和信息传递中起重要作用，更有望成为多种疾病的早期诊断标志物。

本试剂盒采用独特的分离技术，可以快速从乳液中获得大量完整的外泌体颗粒，适用于下游的细胞共培养、电镜分析、Western Blot、荧光定量（qPCR）和高通量测序等应用。

产品组分

运输和保存方法

室温运输，本试剂盒可于室温稳定保存24个月。

注意事项

1、产品只针对乳液样本，不适用其它血清/血液或者是细胞培养上清中外泌体的抽提；如果需要进行细胞上清外泌体分离，请选用细胞培养上清外泌体快速抽提试剂盒。

2、如果想要进一步纯化外泌体，可以使用相应抗体包被的磁珠进行亲和纯化。

3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

4、本产品仅作科研用途！

操作方法

样品预处理：

1、收集新鲜的样品，置于冰上待用；若为冻存的样品，可于冰箱取出后放于25℃水浴中解冻，待完全融化后置于冰上待用。

2、取25 mL（单次样品最佳提取量为50 mL）乳液样品转移至离心管中，4℃，10000×g离心20 min，转移分层样品中的中层乳清至新的离心管中。（离心后样品分为三层，上层为脂质层，中层为乳清层，下层为蛋白层。脂质层应致密、稳定，若脂质层松软，不稳定，且蛋白层沉淀较多，可重复此步骤。）

3，向乳清中加入Buffer-A，颠倒混匀离心管至呈现半透明状，再加入Buffer-B，颠倒混匀后2℃至8℃静置10min。（静置结束后摇晃离心管，样品应呈现白色固体和透明液体混合物，若样品仍为乳白色或是未呈现混合状，可以适当加入Buffer-A至液体透明。）

【注】：试剂用量可根据此表进行等比例换算。

4，将样品于4℃，10000×g离心10 min，收集上清液转移至50 mL过滤柱中，4℃，3000×g离心2min。

5，收集过滤后的上清液至新的离心管中，加入和Buffer-B等量的Buffer-C颠倒混匀。

外泌体分离：

1、向预处理后的样品中，按照下表加入Exosome isolation solution （其他样品量根据表中试剂用量进行等比例变换）。

【注】：试剂用量可根据此表进行等比例换算。

2、盖紧离心管盖，涡旋振荡1 min，放置于4℃冰箱静置2 h。

3、取出装有混合液的离心管，4℃，10,000×g离心60 min，弃上清（尽可能吸净上清液），收集富含外泌体的沉淀。

4、吸取一定量体积的1×PBS溶液均匀吹打离心沉淀物，待其充分悬浮于PBS后，将悬液转移至新的1.5 mL离心管中。

【注】加入1×PBS的量，建议根据预处理样本的体积决定，预处理样本体积：Exosome Buffer体积=40:1。

5、将含有重悬液的1.5 mL离心管于4℃，12,000×g离心5 min，弃沉淀，保留上清液，该上清液即富含外泌体颗粒的溶液。

【注】此时如果依然可以看到明显的沉淀，建议重复步骤5，多次离心至无明显沉淀。

6）外泌体的保存：纯化后的外泌体可于4℃保存3天，分装后于-80℃ 长期保存，避免反复冻融。

外泌体除菌（可选）：

获得的外泌体后期需要与细胞共培养，可以使用0.22 μm的滤器进行过滤除菌。初次尝试时，外泌体浓度在10-100 μg/mL内做梯度摸索，选择一个较为合适的条件。

HB220107

Q：50ml过滤株是多大孔径的？

A：0.45um的孔径。

Exosome（外泌体）是由活细胞分泌的直径约为30-150 nm的小囊泡，具有典型的脂质双分子层结构，存在于细胞培养上清液、血清、血浆、唾液、尿液、羊水以及其它生物体液中。Exosome携带有多种蛋白质、脂类、DNA和RNA等重要信息，不仅在细胞与细胞间的物质和信息传递中起重要作用，更有望成为多种疾病的早期诊断标志物。

本试剂盒采用独特的分离技术，可以快速从血清/血浆中获得大量完整的外泌体颗粒，适用于下游的细胞共培养、电镜分析、Western Blot、荧光定量（qPCR）和高通量测序等应用。

产品组分

运输和保存方法

室温运输，本试剂盒可于室温稳定保存24个月。

注意事项

使用前请将外泌体抽提试剂（41206-A）充分混匀。

2、产品只针对血清/血浆样本，不适用其它体液或者是细胞培养上清中外泌体的抽提；如果需要进行细胞上清外泌体分离，

请选用细胞培养上清外泌体快速抽提试剂盒。

3、如果想要进一步纯化外泌体，可以使用相应抗体包被的磁珠进行亲和纯化。

4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

5、本产品仅作科研用途！

操作方法

样品预处理：

收集新鲜的样品，置于冰上待用；若为冻存的样品，可于冰箱取出后放于25℃水浴中解冻，待完全融化后置于冰上待用。

取1 mL血清/血液样品转移至离心管中，4℃，3000×g离心10 min，弃沉淀，并将上清转移至新的离心管中。

3、将转移的上清，4℃，10,000×g离心20 min，弃沉淀，将上清液转移至新的离心管中。

外泌体分离：

1、向预处理后的样品中，加入4倍体积的1×PBS充分混匀。

2、在PBS稀释后的样品中，继续加入相应量的41206-A试剂；盖紧离心管盖，涡旋振荡1 min，放置于4℃冰箱静置2 h。

3、取出装有混合液的离心管，4℃，10,000×g离心60 min，弃上清（尽可能吸净上清液），收集富含外泌体的沉淀。

4、吸取一定量体积的1×PBS溶液均匀吹打离心沉淀物，待其充分悬浮于PBS后，将悬液转移至新的1.5 mL离心管中。

【注】加入PBS的量，建议根据初始样本的体积决定，初始样本体积：1×PBS体积=2.5:1。

5、将含有重悬液的1.5 mL离心管于4℃，12,000×g离心2 min，弃沉淀，保留上清液，该上清液即富含外泌体颗粒的溶液。

【注】此时如果依然可以看到明显的沉淀，建议重复步骤4，重新进行洗涤和沉淀。

外泌体纯化

1）纯化外泌体：将收获的外泌体颗粒粗制品转入Exosome Purification Column （EP柱）上管中，于4℃，3000g离心10 min，收集管底的液体，即为纯化后的外泌体颗粒。

2）外泌体的保存：纯化后的外泌体可于4℃保存3天，分装后于-80℃ 长期保存，避免反复冻融。

外泌体除菌（可选）：

获得的外泌体后期需要与细胞共培养，可以使用0.22 μm的滤器进行过滤除菌。初次尝试时，外泌体浓度在10-100 μg/mL内做梯度摸索，选择一个较为合适的条件。

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Q:  41216和41206有什么区别？

A:  41206是旧版，41216是新版。新版多加了除杂蛋白的试剂solution P2，除杂蛋白的效果会好很多。结果上来说，同样的样品新版提取的蛋白浓度会低一些，但是纯度会高一些。老客户一直在用41206就继续推荐41206，新客户推荐41216。两款试剂盒都是共沉淀法，做蛋白质组学推荐41216新款试剂盒。新款试剂盒对杂蛋白的效果更好，对下游实验的影响也小。

Exosome（外泌体）是由活细胞分泌的直径约为30-150 nm的小囊泡，具有典型的脂质双分子层结构，存在于细胞培养上清液、血清、血浆、唾液、尿液、羊水以及其它生物体液中。Exosome携带有多种蛋白质、脂类、DNA和RNA等重要信息，不仅在细胞与细胞间的物质和信息传递中起重要作用，更有望成为多种疾病的早期诊断标志物。

本试剂盒采用独特的分离技术，可以快速从细胞培养上清中获得大量完整的外泌体颗粒，适用于下游的细胞共培养、电镜分析、Western Blot、荧光定量（qPCR）和高通量测序等应用。

产品组分

运输和保存方法

室温运输，本试剂盒可于室温稳定保存24个月。

注意事项

1）为了确保获得的外泌体是来自于您的细胞，最好使用无外泌体的血清进行培养。

2）如果想要进一步纯化外泌体，可以使用相应抗体包被的磁珠进行亲和纯化。

3）产品只针对细胞培养上清来源的外泌体分离，不适用血清/血浆中外泌体的抽提，如果需要进行血清/血浆的外泌体分离，请选用血清/血浆外泌体快速抽提试剂盒。

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

5）本产品仅作科研用途！

操作方法

样品制备：

收集细胞培养基至15mL离心管中，3000×g，离心10 min；小心收集上清，并转移至新的离心管中（勿破坏沉淀），于冰上放置待用。

【注】若收集的细胞上清不能及时使用，可先放置于-20℃或-80℃冷冻。使用时，于25℃水浴锅中解冻，完全溶解后置于冰上待用。

外泌体分离：

1）试剂准备：使用前请将外泌体抽提试剂充分混匀。

2）上清预处理：吸取10 mL细胞培养上清，加入2.5 mL外泌体抽提试剂（41205-A），涡旋振荡混匀1 min，再放置于2℃至8℃静置2h；

【注】上述用量的推荐，仅针对外泌体分泌量高的肿瘤细胞，对于外泌体分泌量少的样品（例如干细胞）可以适当加大上清的用量。其它规格的细胞上清可以根据外泌体抽提试剂的用量进行等比例换算。

3）外泌体沉淀：取出装有混合液的离心管于4℃，10000×g离心60 min，弃上清，收集沉淀（尽可能吸尽上清）。

4）外泌体重悬：取100 μL 1×PBS均匀吹打离心沉淀物，使其充分混匀，并转移至新的1.5 mL离心管中；

【注】外泌体颗粒会附着在管壁上，重悬时可以使用PBS对管壁进行反复吹打洗脱（避免剧烈吹打）。重悬用的PBS的量可以根据细胞上清的量进行等比例增加，也可以根据可能获得的外泌体的量进行适当的增加或者减少。

5）外泌体的洗涤：将含有外泌体的1.5mL离心管于4℃，12000×g离心2 min，弃沉淀，保留上清液。

外泌体纯化

1）纯化外泌体：将收获的外泌体颗粒粗制品转入Exosome Purification Column （EP柱）上管中，于4℃，3000g离心10 min，收集管底的液体，即为纯化后的外泌体颗粒。

2）外泌体的保存：纯化后的外泌体可于4℃保存3天，分装后于-80℃ 长期保存，避免反复冻融。

外泌体浓缩（可选）：

如果获得的外泌体浓度比较低，可以使用密理博3kD孔径的超滤管于4℃，14000×g离心10-30 min，内管中即为纯化后的外泌体颗粒。

外泌体除菌（可选）：

获得的外泌体后期需要与细胞共培养，可以使用0.22 μm的滤器进行过滤除菌。初次尝试时，建议外泌体蛋白浓度在10-100 μg/mL内做梯度摸索，选择一个较为合适的条件。

HB220107