Jena Bioscience由德国马普所(MPI)的分子生理学家于1998年共同创办的生物公司，致力为的科研院所、医院、制药企业以及诊断试剂盒生产企业提供各类试剂。在结构学研究方面全面提供晶体筛选试剂盒、优化试剂、工具和各类耗材等。
jenabioscience PP-101说明书
JBS dNTP-Mutagenesis Kit
JBS dNTP诱变试剂盒
dNTP类似物的随机诱变
| 货号 |
规格 |
价格（欧元） |
购买/注意 |
| PP-101 |
15反应 |
260,16 |
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图1：dPTP和8-Oxo-dGTP的结构
图2：诱变速率与PCR循环数的关系[Zaccolo 等。]
仅用于体外！
运输：在蓝色冰上运输
储存条件：在-20°C下储存，
避免冷冻/融化循环，强烈建议在使用前等分修饰核苷酸
保质期： 12个月
描述：
JBS诱变系列
在三十亿年的进化过程中，自然界通过反复反复的随机诱变循环，然后通过体内选择编码蛋白的功能，自然产生了过多的蛋白。在过去的二十年中，这个自然进化的例子指导研究人员开发了蛋白质体外排列的策略。
在应用的各种策略中，出现了三种主要的强大技术。
dNTP类似物的随机诱变
此方法基于通过PCR将诱变的dNTP类似物（例如8-oxo-dGTP和dPTP）掺入扩增的DNA片段中。仅在四种天然dNTP的存在下，通过第二个PCR步骤消除了诱变dNTP，致突变率高达20％。
→ JBS dNTP诱变试剂盒＃PP-101
由Caldwell＆Joyce（1992）开发的Error-Prone PCR进行随机诱变该方法在引起DNA聚合酶错误率增加的条件下，利用PCR反应在目的基因中引入了突变。易错PCR的诱变率在0.6-2.0％的范围内。
→ JBS Error-Prone套件＃PP-102
通过DNA
改组进行随机诱变 Stemmer（1994）开发的DNA改组通过随机分裂一个基因或一组相关基因来生成文库，然后在自引发PCR反应中重组片段。该方法允许重组来自不同相关基因的序列。诱变的总速率约为。0.7％。
→ JBS DNA改组试剂盒＃PP-103
Jena Bioscience现在在单独的套件中提供了每种“即用型”技术所需的所有必要组件，并附有精简的文档，可很大程度地提高成功率。
含量：
Taq聚合酶（红色帽）
5单位/微升，40微升
诱变缓冲液（绿帽）
10x浓度，200μl
dNTP混合液（白色帽）
每个10 mM dNTP（dATP，dCTP，dGTP，dTTP），100μl
dPTP（黄色瓶盖）
10 mM，40μl
8-oxo-dGTP（蓝帽）
10 mM，40μl
PCR级水（白色瓶盖）
2x 1毫升
dNTP类似物
8-oxo-dGTP和dPTP的随机诱变是诱变的dNTP类似物，可使用Taq聚合酶通过PCR将其掺入DNA [Zaccolo 等。，Zang 等。]。
将8-Oxo-dGTP掺入模板腺嘌呤对面，产生两个过渡突变：A→C：T→G。诱变的总速率约为 据报道有2％（图2），其中A→C：T→G的比率约为1。1：1.5。
据报道，dNTP模拟物dPTP约为。诱变作用是8-oxo-dGTP的10倍（图2）。dPTP诱导的突变以大约5：4：1：1的比率发生（A→G：T→C：G→A：C→T），总诱变率高达19％。
由8-Oxo-dGTP和/或dPTP诱导的随机诱变在两步PCR过程中进行。首先，在四种天然dNTP加诱变类似物dPTP和/或8-Oxo-dGTP的存在下扩增目标DNA片段。诱变速率可以通过PCR循环数轻松控制（图2）。
然后，在不存在诱变类似物的情况下，将首轮PCR的产物进行第二轮PCR。该步骤在克隆和转化之前从靶DNA中消除了非天然类似物。
推荐的测定准备
- 对于50μl反应，请在无菌小瓶中加入5μl10x诱变缓冲液
- 添加多25 fmol模板DNA和0.2-1μM合适的引物
- 加入2.5μldNTP混合物
- 加入2.5μl每个诱变类似物
- 加入1μl（5 u）Taq聚合酶
- 加入PCR级水至终体积为50μl
推荐的热循环条件
| 变性 |
92°摄氏度 |
1分钟 |
| 退火 |
55°摄氏度 |
1.5分 |
| 延期 |
72°摄氏度 |
5分钟 |
循环数：5-30（请参见图2）
。诱变的速率主要取决于循环数（图2），并且可以通过诱变dNTP的数量进行微调[Zaccolo 等。]。
终PCR
为了消除诱变性dNTP，在第二步PCR中使用等分的1μlPCR反应作为模板。取10x诱变缓冲液，并按上述相同浓度添加模板，引物，dNTP Mix和Taq聚合酶。装满PCR级水至50μl。
使用相同的热循环条件，但20-30个循环。
精选参考文献：
Zang 等。（2006）而高保真度的dCTP与7,8-dihydro-8-oxodeoxyguanosine相对，通过sololotarius DNA聚合酶Dpo4。Journal of Biological Chemistry281：2358。
Zaccolo 等。（1999）高频随机诱变对体外蛋白质进化的影响：TEM-1β-内酰胺酶的研究。J.摩尔 生物学 285（2）：775。
Crameri 等。（1998）DNA改组从不同种类的基因家庭加速定向进化。自然 391：288。
Zaccolo 等。（1996）一种使用核苷类似物的三磷酸酯衍生物的混合物随机诱变DNA的方法。J.摩尔 生物学 255：589。
Stemmer（1994）通过DNA改组在体外快速进化蛋白质。自然 370：389。
Cadwell 等。（1992）通过PCR诱变使基因随机化。PCR方法。应用 2：28。
