karlan  PAF7413说明书

产品详细信息：检测试剂盒： 检测试剂盒产品列表：auto PAF-AH
目录编号：	PAF7413
产品名称：	auto PAF-AH
描述：	血清（血浆）血小板活化因子（PAF）乙酰水解酶测定法。该测定法采用分光光度法，不需要任何样品预处理或使用任何放射性同位素。
数量：	每个（400个测试）
PDF档案：	PAF7413.PDF

 

 

血清（血浆）血小板活化因子 (PAF) 乙酰水解酶测定

 

仅供研究使用。不得用于诊断或治疗程序。

AZWELL 自动 PAF-AH

血清（血浆）血小板活化因子 (PAF) 乙酰水解酶测定

血小板活化因子 (PAF) 是由多种哺乳动物 cel 型合成的具有生物活性的磷脂。它是过敏和炎症反应的介质。PAF 被 PAF 乙酰水解酶 (PAF-AH) 转化为无生物活性的 lyso-PA，后者催化酯化醋酸盐在sn-2 位 PAF-AH 还降解与 PAF 结构相似、与动脉粥样硬化密切相关的氧化磷脂。这些观察结果表明，PAF-AH 在反应性、炎症性和动脉粥样硬化性疾病中起重要作用。在多种疾病中观察到人血浆或血清 PAF-AH 活性的变化。AZWELL 自动 PAF-AH是一种准确且方便的测定血清（血浆）PAF AH 活性的方法 [参考文献 1]。

 

 

[试剂]

R1: 200 mmol/L HEPES 缓冲液，pH 值  7.6.

R2A: 20 mmol/L 柠檬酸一水合物缓冲液，pH 4.5。

R2B: 1-肉豆蔻酰基-2-（4-硝基苯基琥珀酰基）磷脂酰胆碱，90 mmol/L。

 

[申请]

用于测定血清或血浆中 PAF-AH 的活性

 

[含量测定方法]

1. 方法

分光光度法

2. 原理[参考 1]

PAF-AH 水解  sn-底物的 2 位（1-肉豆蔻酰基-2-（4-硝基苯琥珀酰基）磷脂酰胆碱），产生 4-硝基苯琥珀酸酯。该化合物在水溶液中立即降解并释放 4-硝基苯酚。采用分光光度法监测释放，并通过吸收变化测定活性。

3. 特征

(1) 它不需要任何预处理  样品。

(2) 不需要放射性同位素。

(3) 适用于自动分析仪。

(4) 为液体产品（非冻干品），2-8 ℃ 可稳定 11 个月

(5) R2 溶液制备后可持续 14 天。

(6) 该测定法在高达 1500 IU/L 时呈线性。

(7) 不受多种酯酶的影响。

(8) 不受血红蛋白、胆红素或乳糜微粒的影响。

使用该测定法和自动分析仪，可以在数小时内测量成千上万份样本的活性。

 

[制备和程序]

1. 试剂制备

R1：使用提供的缓冲液。2–8 °C 下储存。R2：使用前按 19:1 的比例混合 R2A 和 R2B（例如：R2A，19 mL + R2B，1 mL）。在 2–8 ℃ 下储存。

小心！ 一旦 R2A 和 R2B 混合， 混合物 (R2) 必须在两个

周。请勿长期保存。

2. 测试程序

AZWELL 自动 PAF-AH预期用作试剂  基于上述原理的血清（血浆 PAF-AH 活性）测定。本试剂可与各种自动分析仪配合使用。以下是 Hitachi 7170 型自动分析仪的示例  (Hitach Ltd.,Tokyo,Japan)。使用试剂盒时，请阅读并遵守仪器制造商的说明手册。

程序 1（用于自动分析仪）

(1) 将下表参数输入自动分析仪程序后，自动进行下述分析程序。

测试样品 (2<unk>L) + R1 (240<unk>L) <unk>37 °C,5 min [0–5 min] <unk> 加入 R2 (80<unk>L) <unk>37 °C,5 min [5–10 min] <unk> 测量吸光度 [6–8 min] <unk> 计算 PAF AH 活性

吸光度：405 nm 和 505 nm 之间的差异试剂空白：纯化水或生理盐水

 (2)  Hitachi 917 自动分析仪参数

项目 输入

测试 [PAF-AH]

试验代码 [速率-A] [10] [21] [28] [0] [0]

波长（次/主峰） [505] [405]

样品体积 [2.0]

R1 体积 [240]

R3 体积 [80]

校准

校准方法 [线性]

标准

标准差（1）浓度-位置-体积 [0] [水 (99)][2.0]

K 因子

  确定您自己的 K 系数                       程序 2

(1) 2<unk>L 样品和 240<unk>L R1 等份试样为

混合，并在 37 ℃ 下预孵育 5 min。然后加入 80<unk>L R2 开始反应。加入 R2 后 1 和 3 min，在 405 和 505 nm（分别为主要和亚波长）处测量吸收。将 2<unk>L 水等份试样用作空白对照。

(2) 每分钟吸光度的变化用于

 

采用样品吸光度变化 (<unk>EA)、空白吸光度变化 (<unk>EB) 和 4-硝基苯酚消光系数之间的差异计算活性。

(3) 活性计算

PAF-AH 活性 (IU/L) = (<unk>EA–<unk>EB) <unk>V<unk>10⁶/(<unk><unk>sv<unk>d)，其中：

V：反应混合液的终体积 (<unk>L)

10⁶：从摩尔到微摩尔的转变

<unk><unk>4-硝基苯酚 sv 的消光系数：样品体积 (<unk>L)

d：光路 (cm)

 

[样本]

• 血浆或血清可作为样本。采血后应尽快测定样本。
• 将样品保存在 2–8 °C。如果储存时间超过 24 小时，则冷冻样品。请勿反复冻融。

 

[绩效]

1. 灵敏度

(1) 试剂空白：小于 0.01 abs/min

(2) 灵敏度：0.02-0.06 abs/min，活性为 500 IU/L

2. 专属性

预期含量值的 90-110%

3. 重现性

变异系数：小于 5%

4. 以下潜在干扰物质几乎不影响含量测定值。[参考 2]

(1) 血红蛋白，高达 500 mg/100 mL

(2) 葡萄糖，上限 1000 mg/100 mL

(3) 尿酸，上限 50 mg/100 mL

(4) 尿素，高达 200 mg/100 mL

(5) 结合胆红素，上限 20 mg/100 mL

(6) 游离胆红素，上限 20 mg/100 mL

(7) 抗坏血酸，上限 50 mg/100 mL

 

[测量范围][参考文献 2] 10–1500 IU/L

 

[相关][ref 1] 样本：人血清

N = 100

R = 0.979

y = 15.877x + 14.884

X 轴：放射性同位素检测值

Y 轴：Azwell Auto PAF-AH 的值

 

[日本参考正常值]

低于 800 IU/L[参考 2]

 

[注意事项]

• 避免将试剂暴露于阳光直射下。将试剂储存在 2-8 ℃ 下。避免冷冻。请勿使用任何过期试剂。请勿混合任何不同批号的试剂。

2. 一旦制备 R2（R2A-R2B 混合物），将持续不超过 14 天。

3. 应小心处理样本以避免感染，因为样本可能含有传染性病原体，如 HBV、HCV 和 HIV。

• 用盐水或水稀释样品，如果样品活性超出测量范围，则再次测量其活性。
• 凝血可能堵塞样品探针。试验前除去任何可见凝块。
• 样品中的气泡可能会影响数值，因此避免起泡。
• 请勿重复使用试剂瓶，请勿将制剂、供试品溶液和试剂用于本文所述以外的任何目的。

8. R2A 或 R2 溶液的 pH 值为 4.5。丢弃时请用大量水冲洗，或根据您所在机构的规则或相关法律进行丢弃。

• R2B 中涉及的溶剂为易燃液体（乙醇）。避免在靠近火源处使用。
• 避免接触眼睛。如果发生这种情况，立即用大量水冲洗眼睛，然后去看医生。

 

[储存 ]

2–8 °C

 

[有效期]

11   月   之后 生产。   （失效日期   日期 i 在包装上注明。）

 

[供应体积]

R1: 60 mL ´ 2

R2A: 19 mL ´ 2

R2B: 2.2 mL ´ 1

[注]

仅供研究使用。不得用于诊断或治疗程序。

 

[参考文献]

[1] Kosaka T.、Yamaguchi M.、Soda Y.、Kishimoto T. Tago A.、Toyosato M. 和 Mizuno K. (2000) A 分光光度法 含量测定 针对 血清 血小板活化因子乙酰水解酶活性。Clinica Chimica Acta 296,151-161.

[2] Azwell,Inc. 的内部数据

 

[K 因子]

我们建议您使用自动分析仪或分光光度计、4-硝基苯酚和试剂 R1 和 R2A（不含 R2B 底物）测定您自己的 K 因子或 <unk>（摩尔消光系数），以精确估计 PAF-AH 活性。

 

标准分光光度计方案

 

如果您使用标准分光光度计进行 PAF-AH 测定，请参阅以下程序。

 

程序

(1) 混合 2<unk>L 样品和 240<unk>L R1 等份试样，并在 37 ℃ 下预孵育 5 min。事件

然后加入 80<unk>L R2 开始反应。加入 R2 后 1 和 3 min，在 405 nm 处测定吸收。2<unk>L 水等份试样也用作空白对照。

• 每分钟吸光度的变化用于计算活性，使用样品吸光度变化 (<unk>EA)、空白吸光度变化 (<unk>EB) 和 K 因子之间的差异。PAF-AH 活性 (IU/L) = (<unk>EA–<unk>EB) <unk>K

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

请确定您自己的 K 系数。您可以精确地制备自己的 4-硝基苯酚溶液，但是，您也可以使用以下设计用于设置 K 因子的市售试剂盒。

WAKO Chemicals，433-97501，K 因子校准品 4-硝基苯酚 (5 mL x 4)。可从 Wako Chemicals USA,Inc. 获得（www.wakousa.com)

 

如何计算 K 因子

(1) 测定对硝基苯酚溶液的浓度。（下表中的 Cs1、Cs2 和 Cs3）

• 使用空白溶液和 4-硝基苯酚溶液作为样品进行自己的测定，并测定各吸光度。      (n=5;      Ab,      Ab1,      Ab2,      和       Ab3       in       的       以下       表）   (在此检测中，您必须使用 R2A 而非 R2。然而，当您估计样本时，请在检测中使用 R2。R2 表示 R2A-R2B 混合物比例为 19:1。）

(3) 计算 Ab、Ab1、Ab2 和 Ab3 的平均值。

(4) 空白校正（-空白）：分别从 Ab1、Ab2、Ab3 的平均值中减去 Ab 的平均值。

(5) 计算 Cs2 和 Cs3 的相对吸光度（空白校正后），其中 Cs1（空白校正后）视为 100。使用以下公式。

Cs2（或 Cs3）的相对 Abs = [Cs1/Cs2（或 Cs3）] X [Cs2（或 Cs3）的 Abs/Cs1 的 Abs] X 100

(6) 计算 Cs1、Cs2 和 Cs3 的 K 系数

例如。Cs1 的 K 系数 = [Cs1 浓度 (mmol/L)/空白校正后 Cs1 的平均 Abs] X 10⁷

(7) 确定 K 系数（上述 K 系数的平均值）

计算 Cs1、Cs2 和 Cs3 的平均 K 系数，并将其用作终 K 系数。但是，如果步骤 6 中计算的任何相对吸光度不在 100.0±3.0% 范围内，则从平均计算中排除该 K 系数，以获得终 K 系数。

 

	空白	Cs1	Cs2	Cs3
浓度 (mmol/L)	0.00
	Ab	Ab1	Ab2	Ab3
吸光度
平均值
空白校正
相对吸光度		100%	%	%
K 系数

通常，K 系数必须为 11,000-13,000。（光路 = 1 cm，样品：R1:R2

体积比 = 2:240:80）

 

示例

	空白	Cs1	Cs2	Cs3
浓度 (mmol/L)	0.00	1.01	2.02	3.02
	Ab	Ab1	Ab2	Ab3
吸光度	0.0018 0.0016 0.0016 0.0017 0.0019	0.0846 0.0884 0.0862 0.0867 0.0840	0.1678 0.1666 0.1703 0.1661 0.1665	0.2523 0.2504 0.2560 0.2519 0.2524
平均值	0.00172	0.08598	0.16746	0.2526
空白校正		0.08426	0.16574	0.25088
相对吸光度		100%	98.4%	99.6%
K 系数		11987	12188	12038

K = (11987+12188+12038)/3 = 12071