mypols Volcano2G DNA聚合酶

 Volcano2G DNA polymerase

Volcano2G DNA聚合酶

€95,00

• Volcano 2G是原始Volcano DNA聚合酶的高级版本，具有进一步改善的逆转录活性。该酶是一种经过工程改造的，极耐热的逆转录酶和结合的DNA聚合酶，可通过定向的人工进化获得。Volcano2G DNA聚合酶可直接从RNA模板（无需等温逆转录步骤）直接促进“零步” RT-PCR，因为在循环PCR延伸步骤中逆转录与DNA扩增同时进行。这还允许在高温下进行逆转录反应，从而大程度地减少了在高温下融化的RNA中强大的二级结构所遇到的问题。

Volcano2G DNA聚合酶包含热启动剂配制的，具有逆转录酶活性的工程稳定的热稳定DNA聚合酶和稳健的Taq DNA聚合酶的酶混合物。基于适体的热启动剂设计用于在低温下（例如，在移取反应混合物时）阻断非特异性DNA聚合酶活性，但会在高于50-55°C的温度下分解，从而释放出现已*活化的DNA聚合酶。

Volcano2G DNA聚合酶作为5 U / µl甘油库存与适当的5x Volcano反应缓冲液一起运输，该缓冲液针对60-300 bp的扩增子进行了优化。

Volcano2G逆转录酶可以可靠地从≥1 ng总RNA输入中检测RNA靶标。它不需要Mn ^2+即可  获得宜活性。但是，可以通过向反应中添加Mn ²⁺来进一步优化某些检测方法（建议范围为0.5-1 mM，未提供Mn ²⁺）。

该产品以凉爽包装出售。建议在到达-20°C时存放产品。

RT-PCR活性：已对 Volcano3G RT-PCR Mix进行了成功的RT-PCR性能测试。在实时PCR循环仪中从人总RNA提取物中扩增出一个151 bp的片段（HPRT1 mRNA），并可视化为单个扩增产物。

DNA聚合酶活性：使用人工DNA模板和DNA引物监测Volcano3G DNA聚合酶活性并将其调整为特定的DNA聚合酶活性。
酶浓度通过蛋白质特异性染色确定。

带有“ 0步”方案的便捷RT-PCR

零步协议节省时间

跳过逆转录步骤。不需要等温逆转录步骤。 

Volcano2G是一种具有PCR活性的逆转录酶，非常稳定，在95°C下的半衰期> 40分钟。

灵敏的RNA检测

当添加实时PCR染料时，Volcano2G DNA聚合酶也可用于实时PCR。Volcano2G具有Taq DNA聚合酶样核酸酶结构域，使其也适用于基于水解探针的分析。如此处所示，通过使用基于探针的qPCR分析和零步RT-PCR方案，使用总RNA的10倍稀释系列检测了NONO mRNA。

来自细胞的直接RT-PCR

为了可靠地进行细胞RNA的RT-PCR，样品制备步骤*。然而，这些步骤费力，费时并且需要额外的消耗品。使用我们的VolcanoCell2G RT-PCR 2x预混液，您可以用快速便捷的“零步长”方案代替费力的RNA制备。

节省时间和金钱

VolcanoCell2G RT-PCR 2x预混液具有简化的“零步骤”工作流程，使您能够规避费力的纯化和提取步骤，从而节省了时间和金钱。

出色的灵敏度

VolcanoCell2G RT-PCR 2x实现了低至单个细胞的检测灵敏度。在此示例中，按照VolcanoCell2G协议从单个隆德人中脑（LUHMES）细胞中检测到GAPDH mRNA。

具有更多示例的出版物可以在“出版物”部分中找到。

myPOLS Biotec正在开发新一代的DNA聚合酶

用于和可靠的应用，例如个性化医疗，病原体检测，DNA和RNA诊断，法医学等等。

我们的研发活动包括：

• 改进的DNA聚合酶用于SNP检测和甲基化特异性PCR。
• 病原体检测分析，例如用于流感和诺如病毒诊断。
• 具有逆转录酶活性的热稳定DNA聚合酶。
• 抑制剂抗性聚合酶，用于从样品中直接PCR，如全血，唾液，细菌，细胞 – 颗粒，植物等。 

后但并非不重要：我们所有的酶和混合物都是在康斯坦茨内部生产的，并经过常规测试，符合高质量标准。

myPOLS Biotec是一家来自康斯坦茨大学的生物技术公司，来自Andreas Marx教授的研究小组。凭借我们在高通量DNA聚合酶设计方面的专业知识，我们为您的应用定制酶。

RRNA / RT-PCR

Volcano2G DNA聚合酶

是原始Volcano DNA聚合酶的下一代，具有进一步改善的逆转录活性。该酶是一种工程化的，极其热稳定的逆转录酶和组合的DNA聚合酶，通过定向的人工进化获得。
Volcano2G DNA聚合酶直接从RNA模板促进“零步骤”RT-PCR（没有等温逆转录步骤），因为在循环PCR延伸步骤期间逆转录与DNA扩增同时发生。这也允许在高温下进行逆转录反应，从而小化在高温下熔化的RNA中的强二级结构遇到的问题。

更简单，更快捷：0步RT-PCR协议：

跳过逆转录步骤。不需要等温反转录步骤。 

Volcano2G是一种PCR活性逆转录酶，具有*的热稳定性，在95°C的半衰期> 40 min。

当添加实时PCR染料时，Volcano2G DNA聚合酶也可用于实时PCR。Volcano2G具有Taq DNA聚合酶样核酸酶结构域，因此也适用于基于水解探针的分析。如此处所示，通过使用基于探针的qPCR测定和零步骤RT-PCR方案，使用10倍稀释系列的总RNA检测NONO mRNA：

详细的产品说明

Volcano2G 5x反应缓冲液针对扩增子大小在60-300bp之间进行了优化。

当添加合适的实时PCR染料或荧光探针时，Volcano2G逆转录酶也可用于实时PCR。
这种*的酶能够进行基于PCR的RNA检测，无需单独的逆转录步骤。
Volcano2G逆转录酶可以可靠地检测≥1ng总RNA输入的RNA靶标。

Volcano2G DNA聚合酶不需要Mn 2+  以获得宜活性。然而，通过向反应中添加Mn 2+可以进一步优化一些测定（建议的范围是0.5-1mM，未提供Mn 2+）。

质量控制

RT-PCR活性：测试Volcano2G DNA聚合酶活性的成功RT-PCR性能。在PCR循环仪中从人总RNA提取物扩增151bp片段（HPRT1 mRNA），并将其显示为单一扩增产物。
DNA聚合酶活性：已经使用人工DNA模板和DNA引物监测Volcano2G聚合酶活性并将其调整为特定的DNA聚合酶活性。
通过蛋白质特异性染色确定酶浓度。有关批次特定浓度，请通过info@mypols.de查询更多信息。

存储

本产品采用冷藏包装。请在抵达-20°C时存放产品。

应用

• 快速检测和鉴定RNA靶标
• 逆转录PCR（RT-PCR）
• 实时RT-PCR
• SELEX
• 入门扩展

反应设置

将所有组件保存在冰上。
在使用前仔细旋转并混合所有溶液。

*推荐的终模板浓度在5-50 ng /μl之间。 

典型的0步RT-PCR方案（不需要等温逆转录步骤）

可以使用两步法和三步法PCR方案。
*通过运行温度梯度来理想地建立新的PCR，以便找到每个引物对的宜退火/延伸温度。引物的退火温度受其核酸序列和反应缓冲液组成（盐和pH）的强烈影响。Volcano2G DNA聚合酶在50-95°C之间活跃。

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