Flag Tag Mouse Monoclonal Antibody
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Flag Tag Mouse Monoclonal Antibody(Flag Tag 小鼠单抗)(AF5051)
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| 产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
| AF5051 | Flag Tag Mouse Monoclonal Antibody | 50μl | 456.00元 |
| 来源 | 用途 | 交叉反应性 | 理论分子量 | 实际分子量 |
| Mouse | WB, IP, IF, IHC | – | – | – |
WB, Western blot; IP, Immunoprecipitation; IF, Immunofluorescence; IHC, Immunohistochemistry; ICC, Immunocytochemistry; FC, Flow Cytometry; ChIP, Chromatin Immunoprecipitation Assay; ChIP-seq, ChIP-sequencing.
H, Human; M, Mouse; R, Rat; C, Chicken; Cw, Cow; Dg, Dog; Gp, Guinea pig; Hm, Hamster; Hr, Horse; Mk, Monkey; Pg, Pig; Rb, Rabbit; S, Sheep; Z, Zebrafish; All, all species expected.
配套提供了Western一抗稀释液，可以用于Western检测或其它适当用途时的一抗稀释。
建议抗体使用时的稀释比例如下(实际使用时需根据抗原水平的高低作适当调整)：
| WB | IP | IF | IHC | ICC | FC | ChIP | ChIP-seq |
| 1:1000-1:2000 | 1:50-1:100 | 1:50-1:200 | 1:50-1:200 | 1:50-1:200 | – | – | – |
抗体详细信息如下:
| About this Antibody | |
| Name | Flag Tag Mouse Monoclonal Antibody |
| Category | Mouse Monoclonal Antibody(mAb); Primary antibody |
| Isotype | IgG |
| Purification method | Affinity purification |
| Positive samples | 293T |
| Cellular location | – |
| Customer validation | WB (Human , Pig , Mouse , Plant , Arabidopsis thaliana); IP (Mouse); IF (Human); CoIP (Oryza Sativa); ChIP (Mouse) |
| About the Immunogen | |
| Immunogen | A synthetic Peptide of DDDDK-Tag |
| Sequence | – |
| Gene ID | – |
| SwissProt | – |
| Synonyms | – |
| Category | polypeptide protein tag |
| Background | – |
包装清单：
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| AF5051 | Flag Tag Mouse Monoclonal Antibody | 50μl |
| AZ050 | Western一抗稀释液 | 50ml |
| — | 说明书 | 1份 |
保存条件：
Flag Tag Mouse Monoclonal Antibody -20℃保存，Western一抗稀释液-20℃或4℃保存，一年有效。Western一抗稀释液优先推荐4℃保存，长期不使用可以考虑-20℃保存，但冻融可能会导致出现轻微的浑浊和少量不溶物。
注意事项：
如果本抗体用于Western blot (WB)、免疫荧光(IF)、免疫细胞化学(ICC)等实验，请注意回收使用过的稀释抗体。回收的抗体通常至少可以重复使用5-10次。稀释后的抗体，包括已经使用过的稀释抗体，请4℃保存。
回收后重复使用的抗体，使用方法同新鲜稀释的抗体。如果在重复使用过程中发现抗体出现轻微混浊现象，可以10,000g离心1-3分钟，取上清用于后续检测。如果回收的抗体出现明显的絮状物或长霉长菌等情况，则可以考虑废弃该抗体。
提供的Western一抗稀释液也可以用于免疫荧光(IF)、免疫组化(IHC)、免疫细胞化学(ICC)等适当用途。如果希望获得最佳的检测效果，请考虑使用上述检测专用的一抗稀释液。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
请根据抗体的实际用途选择相应的使用方法。
1.Western检测：
a.按照推荐的稀释比例用碧云天提供的Western一抗稀释液稀释抗体。
b.把经过封闭的蛋白膜与稀释好的一抗4℃缓慢摇动过夜或室温缓慢摇动2小时，确保稀释的抗体至少能在摇动的瞬间覆盖蛋白膜。
c.回收稀释的一抗，4℃保存以备下次继续使用。
d.按照Western的实验步骤进行后续的洗涤、二抗孵育、洗涤和检测等操作。具体操作可以参考如下网页：
http://www.beyotime.com/support/western.htm
2.免疫染色：
可以使用碧云天生产的免疫染色一抗稀释液(P0103)稀释抗体，使用后注意回收稀释好的一抗，具体操作可以参考如下网页：http://www.beyotime.com/support/immunol-staining.htm
3.其它实验操作请自行参考适当的protocol进行。
4.代表性图片：
Fig1. Western blot analysis of over-expressed DDDDK-tagged protein in 293T cells using Flag Tag (DDDDK-Tag) Mouse Monoclonal Antibody at different dilution. Each lane was loaded with 2µg cell lysate. Secondary antibody: HRP-labeled Goat Anti-Mouse IgG(H+L) (A0216) at 1:1000 dilution. Blocking buffer: QuickBlock™ Blocking Buffer (P0231). Detection: BeyoECL Star (P0018A). Exposure time: 3s.
Fig2. Immunofluorescence analysis of 293T cells using Flag Tag Mouse Monoclonal Antibody. Blue: DAPI for nuclear staining.
Fig3. Immunoprecipitation of over-expressed DDDDK-tagged protein in 293T cells using Flag Tag (DDDDK-Tag) Mouse Monoclonal Antibody. A mock served as negative control and over-expressed 293T cell lysate served as positive control.
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| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| E6001 | MiniProGel™蛋白制胶与电泳系统(4胶) | 1套 |
| E6005 | MiniProGel™蛋白制胶与电泳系统(2胶) | 1套 |
| E6050 | MiniBlot™蛋白转膜系统 | 1套 |
| E6150 | MiniProGel™蛋白制胶、电泳与转膜系统(2胶/2膜) | 1套 |
| E6155 | MiniProGel™蛋白制胶、电泳与转膜系统(4胶/2膜) | 1套 |
| E6159 | MiniProGel™蛋白制胶、电泳与转膜系统(4胶/4膜) | 1套 |
| E6080 | BeyoPower™中电流电源(300V/600mA/100W) | 1套 |
| E6085 | BeyoPower™高电流电源(300V/2000mA/200W) | 1套 |
| E6600 | TissueMaster™手持式组织研磨仪 | 1套 |
| EI600 | BeyoImager™ 600化学发光成像系统 | 1套 |
| FFP24 | PVDF膜(进口分装, 6.6×8.5cm, 0.2μm) | 20张/包装 |
| FFP32 | PVDF膜(进口分装, 6.6×8.5cm, 0.45μm) | 20张/包装 |
| FFP51 | 转印滤纸(7.5×10cm) | 100张/包装 |
| FFX050-FFX055 | Western洗膜盒 | 1个/包装 |
| P0006 | Bradford蛋白浓度测定试剂盒 | 1000次 |
| P0012 | BCA蛋白浓度测定试剂盒 | 500次 |
| P0012A | SDS-PAGE凝胶配制试剂盒 | 可制30-50块胶 |
| P0012AC | SDS-PAGE凝胶快速配制试剂盒 | 可制30-50块胶 |
| P0013 | Western及IP细胞裂解液 | 100ml |
| P0013B-P0013D | RIPA裂解液(强、中、弱) | 100ml |
| P0014A/P0014B | SDS-PAGE电泳液(Tris-Gly, Powder) | 1L/10L |
| P0014C/P0014D | SDS-PAGE电泳液(Tris-Gly, 10X) | 100ml/500ml |
| P0015/P0015L | SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X) | 2ml/15ml |
| P0015F | SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(6X) | 2ml |
| P0017F | BeyoBlue™考马斯亮蓝超快染色液 | 250ml |
| P0018A | BeyoECL Star(特超敏ECL化学发光试剂盒) | 100ml/500ml |
| P0018F | BeyoECL Moon (极超敏ECL化学发光试剂盒) | 100ml/500ml |
| P0018S/P0018M | BeyoECL Plus (超敏ECL化学发光试剂盒) | 100ml/500ml |
| P0021A | Western转膜液 | 1L |
| P0021S | PVDF膜浸润活化液 | 250ml |
| P0022 | 丽春红染色液 | 120ml |
| P0023A | Western一抗稀释液 | 100ml/500ml |
| P0023B | Western封闭液 | 100ml/500ml |
| P0023C | Western洗涤液 | 250ml |
| P0023D | Western二抗稀释液 | 100ml/500ml |
| P0025 | Western一抗二抗去除液 | 250ml |
| P0059 | Recombinant 16-Tag Protein | 200μl/1ml |
| P0066 | 预染蛋白质分子量标准(19-117kD) | 200μl |
| P0068 | 彩色预染蛋白质分子量标准(10-180kD) | 200μl |
| P0071 | BeyoColor™彩色预染蛋白分子量标准(6.5-270kD) | 200μl |
| P0075 | BeyoColor™彩色预染蛋白分子量标准(10-170kD) | 200μl |
| P0078 | BeyoColor™彩色预染蛋白分子量标准(15-120kD) | 200μl |
| P0095 | 免疫染色通透液(Saponin) | 100ml/500ml |
| P0096 | 免疫染色通透液(Triton X-100) | 100ml/500ml |
| P0097 | 免疫染色强力通透液 | 100ml/500ml |
| P0098 | 免疫染色固定液 | 100ml/500ml |
| P0099 | 4%多聚甲醛固定液 | 100ml/500ml |
| P0102 | 免疫染色封闭液 | 100ml |
| P0103 | 免疫染色一抗稀释液 | 100ml |
| P0106 | 免疫染色洗涤液 | 250ml |
| P0108 | 免疫荧光染色二抗稀释液 | 100ml |
| P0220-P0235 | QuickBlock™封闭液 | 100ml |
| P0252 | QuickBlock™ Western封闭液 | 100ml/500ml |
| P0256 | QuickBlock™ Western一抗稀释液 | 100ml/500ml |
| P0258 | QuickBlock™ Western二抗稀释液 | 100ml/500ml |
| P0260 | QuickBlock™免疫染色封闭液 | 100ml |
| P0262 | QuickBlock™免疫染色一抗稀释液 | 100ml |
| P0265 | QuickBlock™免疫荧光染色二抗稀释液 | 100ml |
| P0267 | QuickBlock™免疫组化染色二抗稀释液 | 100ml |
| P0280 | InstantView™ SDS-PAGE蛋白染色及上样缓冲液(5X) | 1ml |
| P0050-P0058 | BeyoGel™ SDS-PAGE预制胶(Tris-Gly, 12孔) | 10块/50块 |
| P0448-P0472 | BeyoGel™ Plus PAGE预制胶(Tris-Gly, 10孔/15孔) | 10块/50块 |
| P0501-P0528 | BeyoGel™ Plus PAGE预制胶(Hepes, 10孔/15孔) | 10块/50块 |
| P0552 | BeyoGel™ Plus SDS-PAGE Hepes电泳液(20X) | 100ml/500ml |
| P0670-P0678 | SDS-PAGE下层胶预混液 | 250ml/500ml |
| P0683 | SDS-PAGE上层胶预混液 | 250ml/500ml |
| P0686-P0695 | SDS-PAGE凝胶超快速配制试剂盒 | 可制30-50块胶 |
| P1005-P1031 | 蛋白酶抑制剂混合物(50X/100X) | 1ml/5ml |
| P1045-P1066 | 蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(50X) | 1ml/2ml/5ml/10ml |
| P1081-P1097 | 磷酸酶抑制剂混合物(50X) | 2ml/10ml |
| P1112/P1113 | 去乙酰化酶抑制剂混合物(100X) | 1ml/5ml |
| R0121 | AllProtect™动物组织核酸、蛋白稳定保存液 | 25ml/100ml |
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Flag抗体(小鼠单抗)(AF519)
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| AF519 | Flag抗体(小鼠单抗) | >40次 | 560.00元 |
| 来源 | 用途 | 抗体识别位点 | 抗体类型 |
| Mouse | WB, IP, IF | Flag tag | IgG1 |
WB, Western blot; IP, Immunoprecipitation; IF, Immunofluorescence.
本Flag抗体(Flag antibody)为进口分装，用经过适当修饰的人工合成Flag tag多肽DYKDDDDK作为抗原，然后用protein G和抗原多肽亲和柱经过两步纯化得到的高纯度单克隆抗体，克隆号为M2。
本Flag抗体广泛地用于Flag tag(DYKDDDDK)融合表达蛋白的检测。本抗体可以检测位于融合蛋白N-terminal或C-terminal的Flag tag，也可以检测位于融合蛋白内部的Flag tag。
DNA重组技术使给目标蛋白带上特定tag成为可能，这些常用的tag包括myc、HA、Flag、His、GST等。带上tag后，通常不会影响目标蛋白的生物活性和细胞内定位。但检测和tag融合表达的目标蛋白时，使用商业化的相应tag抗体就可以完成，大大方便了很多实验检测。
本Flag抗体可用于检测和Flag tag融合表达蛋白的表达、细胞内定位，以及纯化、定性或定量检测Flag tag融合表达蛋白等。
配套提供了Western一抗稀释液，可以用于Western检测时的一抗稀释。
建议抗体使用时的稀释比例如下(实际使用时需根据抗原水平的高低作适当调整)：
| WB | IP | IF |
| 1:1000 | 1:100 | 1:1000 |
本抗体如果用于常规的Western检测，至少可以检测40次。
包装清单：
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| AF519-1 | Flag抗体(小鼠单抗) | 40μl |
| AF519-2 | Western一抗稀释液 | 40ml |
| — | 说明书 | 1份 |
保存条件：
Flag抗体-20℃保存，Western一抗稀释液-20℃或4℃保存，一年有效。Western一抗稀释液优先推荐4℃保存，长期不使用可以考虑-20℃保存，但冻融可能会导致出现轻微的浑浊和少量不溶物。
注意事项：
在Western实验后，请注意回收稀释的抗体。回收的抗体在进行Western实验时至少可以重复使用10次。稀释后的抗体，包括已经使用过的稀释抗体，4℃保存。
回收后重复使用的抗体，使用方法同新鲜稀释的抗体。如果在重复使用过程中发现抗体出现轻微混浊现象，可以10000g离心1-3分钟，取上清用于后续检测。如果回收的抗体出现明显的絮状物或长霉长菌等情况，则可以考虑废弃该抗体。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
1. Western检测：
A. 按照1:1000用碧云天提供的Western一抗稀释液稀释抗体。
B. 把经过封闭的蛋白膜与稀释好的一抗4℃缓慢摇动过夜或室温缓慢摇动1-2小时，确保稀释的抗体至少能在摇动的瞬间覆盖蛋白膜。
C. 回收稀释的一抗，4℃保存以备下次继续使用。
D. 按照Western的实验步骤进行后续的洗涤、二抗孵育、洗涤和检测等操作。具体操作可以参考如下网页：
http://www.beyotime.com/support/western.htm
2. 免疫染色：
可以使用碧云天生产的免疫染色一抗稀释液(P0103)稀释抗体，使用后注意回收稀释好的一抗，具体操作可以参考如下网页： http://www.beyotime.com/support/immunol-staining.htm
3. 其它实验操作请自行参考适当的protocol进行。
1. Western检测：
A. 按照1:1000用碧云天提供的Western一抗稀释液稀释抗体。
B. 把经过封闭的蛋白膜与稀释好的一抗4℃缓慢摇动过夜或室温缓慢摇动1-2小时，确保稀释的抗体至少能在摇动的瞬间覆盖蛋白膜。
C. 回收稀释的一抗，4℃保存以备下次继续使用。
D. 按照Western的实验步骤进行后续的洗涤、二抗孵育、洗涤和检测等操作。具体操作可以参考如下网页：
http://www.beyotime.com/support/western.htm
2. 免疫染色：
可以使用碧云天生产的免疫染色一抗稀释液(P0103)稀释抗体，使用后注意回收稀释好的一抗，具体操作可以参考如下网页： http://www.beyotime.com/support/immunol-staining.htm
3. 其它实验操作请自行参考适当的protocol进行。
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Flag Tag Rabbit mAb(Flag Tag兔单抗)(AG8050)
Flag Tag Rabbit Monoclonal Antibody
一键复制产品信息 产品编号: AG8050
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| AG8050 | Flag Tag Rabbit Monoclonal Antibody | 50μl | 456.00元 |
| 来源 | 用途 | 交叉反应性 | 理论分子量 | 实际分子量 |
| Rabbit | WB, FC, IF/ICC, IP | All | – | – |
WB, Western blot; IP, Immunoprecipitation; IF, Immunofluorescence; IHC, Immunohistochemistry; ICC, Immunocytochemistry; FC, Flow Cytometry; ChIP, Chromatin Immunoprecipitation Assay; ChIP-seq, ChIP-sequencing.
H, Human; M, Mouse; R, Rat; Ar, Arabidopsis; B, Bovine; C, Chicken; Cerastium, Ce; Cw, Cow; Dg, Dog; Gp, Guinea pig; Hm, Hamster; Hr, Horse; Mk, Monkey; Ph, Pharbitis; Pg, Pig; Rb, Rabbit; Rc, Rice; S, Sheep; Z, Zebrafish; All, all species expected.
配套提供了Western一抗稀释液，可以用于Western检测或其它适当用途时的一抗稀释。
建议抗体使用时的稀释比例如下(实际使用时需根据抗原水平的高低作适当调整)：
| WB | IP | IF | IHC | ICC | FC | ChIP | ChIP-seq |
| 1:2,000-1:5,000 | 1:50-1:100 | 1:50-1:100 | – | 1:50-1:100 | 1:50-1:100 | – | – |
抗体详细信息如下:
| About this Antibody | |
| Name | Flag Tag Rabbit Monoclonal Antibody |
| Category | Recombinant Rabbit Monoclonal Antibody (mAb); Primary antibody; 标签抗体 |
| Isotype | IgG |
| Purification method | Protein A affinity purification |
| Positive samples | – |
| Cellular location | – |
| Customer validation | – |
| About the Immunogen | |
| Immunogen | Synthetic peptide: DYKDDDDK conjugated to KLH. |
| Sequence | – |
| Gene ID | – |
| SwissProt | – |
| Synonyms | – |
| Category | – |
| Background | Epitope tags are useful for the labeling and detection of proteins using immunoblotting, immunoprecipitation, and immunostainingtechniques. Because of their small size, they are unlikely to affect the tagged protein’s biochemicalproperties. The DYKDDDDK (Flag) peptide has been used extensively asa general epitope tag in expression vectors. This peptide can be expressed and detected with the protein of interest as an amino-terminal or carboxy-terminal fusion. |
包装清单：
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| AG8050 | Flag Tag Rabbit Monoclonal Antibody | 50µl |
| AZ050 | Western一抗稀释液 | 50ml |
| — | 说明书 | 1份 |
保存条件：
Flag Tag Rabbit Monoclonal Antibody -20℃保存，需避免反复冻融。Western一抗稀释液-20℃或4℃保存，一年有效，Western一抗稀释液优先推荐4℃保存，长期不使用可以考虑-20℃保存，但冻融可能会导致出现轻微的浑浊和少量不溶物。
注意事项：
如果本抗体用于Western blot (WB)、免疫荧光(IF)、免疫细胞化学(ICC)等实验，请注意回收使用过的稀释抗体。回收的抗体通常至少可以重复使用5-10次。稀释后的抗体，包括已经使用过的稀释抗体，请4℃保存。
回收后重复使用的抗体，使用方法同新鲜稀释的抗体。如果在重复使用过程中发现抗体出现轻微混浊现象，可以10,000×g离心1-3分钟，取上清用于后续检测。如果回收的抗体出现明显的絮状物或长霉长菌等情况，则可以考虑废弃该抗体。
提供的Western一抗稀释液也可以用于免疫荧光(IF)、免疫组化(IHC)、免疫细胞化学(ICC)等适当用途。如果希望获得最佳的检测效果，请考虑使用上述检测专用的一抗稀释液。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
请根据抗体的实际用途选择相应的使用方法。
1.Western检测：
a.按照推荐的稀释比例用碧云天提供的Western一抗稀释液稀释抗体。
b.把经过封闭的蛋白膜与稀释好的一抗4℃缓慢摇动过夜或室温缓慢摇动2小时，确保稀释的抗体至少能在摇动的瞬间覆盖蛋白膜。
c.回收稀释的一抗，4℃保存以备下次继续使用。
d.按照Western的实验步骤进行后续的洗涤、二抗孵育、洗涤和检测等操作。具体操作可以参考如下网页：
http://www.beyotime.com/support/western.htm
2. 免疫染色：
可以使用碧云天生产的免疫染色一抗稀释液(P0103)稀释抗体，使用后注意回收稀释好的一抗，具体操作可以参考如下网页：http://www.beyotime.com/support/immunol-staining.htm
3. 其它实验操作请自行参考适当的protocol进行。
4. 代表性图片。 
Predicted MW: Depend on fusion protein with DYKDDDDK (Flag) tag Lane 1: 293 cells lysate transfected with C-terminal DYKDDDDK tagged gene. Lane 2: 293 cells lysate transfected with N-terminal DYKDDDDK tagged gene. Lane 3: 293 cells lysate without any transfection. Lane 4: Multi-tag fusion protein. Lane 1/2/3: 3 μg per lane Lane 4: 20 ng per lane 2nd Ab: GAR HRP(H+L) 1:5,000 Exposure: 60s
DYKDDDDK tag was immunoprecipitated from 0.1mg of 293 whole cells lysate transfected with N-terminal DYKDDDDK tagged gene with DYKDDDDK-tag Rabbit Monoclonal Antibody at 1:50 dilution. 2nd Ab: GAR HRP for IP 1:500 Lane 1: DYKDDDDK-tag Rabbit Monoclonal Antibody IP in 293 whole cell lysate transfected with N-terminal DYKDDDDK tagged gene Lane 2: PBS instead of DYKDDDDK-tag Rabbit Monoclonal Antibody in 293 whole cell lysate transfected with N-terminal DYKDDDDK tagged gene Lane 3: 293 whole cell lysate transfected with N-terminal DYKDDDDK tagged gene, 2μg (input) Exposure: 30s
DYKDDDDK-tag Rabbit Monoclonal Antibody staining DYKDDDDK tag in 293 cells transfected with C-terminal DYKDDDDK tagged gene by IF/ICC . Cells were fixed with paraformaldehyde, permeabilized with 0.1% Triton X-100 and blocked with 10% goat serum for half an hour at room temperature. Samples were incubated with primary antibody (1:100) at 4°C. An Alexa Fluor® 488-conjugated Goat Anti-Rabbit IgG polyclonal was used as the secondary antibody (1:500). DAPI (blue) was used as the nuclear counter stain. Control: PBS and secondary antibody, An Alexa Fluor® 488-conjugated Goat Anti-Rabbit IgG (1:500).
Overlay histogram showing 293 cells transfected with N-terminal DYKDDDDK tagged gene stained with DYKDDDDK-tag Rabbit Monoclonal Antibody (Red). The cells were fixed with 4% paraformaldehyde (10 min) and then permeabilized with 0.1% TritonX-100 for 15 min. The cells were then incubated in the antibody (DYKDDDDK-tag Rabbit Monoclonal Antibody, 1:100 dilution) in 1x PBS/1% BSA for 30 min at room temperature. The secondary antibody used was a Goat Anti-Rabbit Alexa Fluor® 488 (IgG H+L) at 1:2,000 dilution for 20 min at room temperature. Unlabelled sample (Black) was used as a control.
请根据抗体的实际用途选择相应的使用方法。
1.Western检测：
a.按照推荐的稀释比例用碧云天提供的Western一抗稀释液稀释抗体。
b.把经过封闭的蛋白膜与稀释好的一抗4℃缓慢摇动过夜或室温缓慢摇动2小时，确保稀释的抗体至少能在摇动的瞬间覆盖蛋白膜。
c.回收稀释的一抗，4℃保存以备下次继续使用。
d.按照Western的实验步骤进行后续的洗涤、二抗孵育、洗涤和检测等操作。具体操作可以参考如下网页：
http://www.beyotime.com/support/western.htm
2. 免疫染色：
可以使用碧云天生产的免疫染色一抗稀释液(P0103)稀释抗体，使用后注意回收稀释好的一抗，具体操作可以参考如下网页：http://www.beyotime.com/support/immunol-staining.htm
3. 其它实验操作请自行参考适当的protocol进行。
4. 代表性图片。
Predicted MW: Depend on fusion protein with DYKDDDDK (Flag) tag Lane 1: 293 cells lysate transfected with C-terminal DYKDDDDK tagged gene. Lane 2: 293 cells lysate transfected with N-terminal DYKDDDDK tagged gene. Lane 3: 293 cells lysate without any transfection. Lane 4: Multi-tag fusion protein. Lane 1/2/3: 3 μg per lane Lane 4: 20 ng per lane 2nd Ab: GAR HRP(H+L) 1:5,000 Exposure: 60s DYKDDDDK tag was immunoprecipitated from 0.1mg of 293 whole cells lysate transfected with N-terminal DYKDDDDK tagged gene with DYKDDDDK-tag Rabbit Monoclonal Antibody at 1:50 dilution. 2nd Ab: GAR HRP for IP 1:500 Lane 1: DYKDDDDK-tag Rabbit Monoclonal Antibody IP in 293 whole cell lysate transfected with N-terminal DYKDDDDK tagged gene Lane 2: PBS instead of DYKDDDDK-tag Rabbit Monoclonal Antibody in 293 whole cell lysate transfected with N-terminal DYKDDDDK tagged gene Lane 3: 293 whole cell lysate transfected with N-terminal DYKDDDDK tagged gene, 2μg (input) Exposure: 30s DYKDDDDK-tag Rabbit Monoclonal Antibody staining DYKDDDDK tag in 293 cells transfected with C-terminal DYKDDDDK tagged gene by IF/ICC . Cells were fixed with paraformaldehyde, permeabilized with 0.1% Triton X-100 and blocked with 10% goat serum for half an hour at room temperature. Samples were incubated with primary antibody (1:100) at 4°C. An Alexa Fluor® 488-conjugated Goat Anti-Rabbit IgG polyclonal was used as the secondary antibody (1:500). DAPI (blue) was used as the nuclear counter stain. Control: PBS and secondary antibody, An Alexa Fluor® 488-conjugated Goat Anti-Rabbit IgG (1:500). Overlay histogram showing 293 cells transfected with N-terminal DYKDDDDK tagged gene stained with DYKDDDDK-tag Rabbit Monoclonal Antibody (Red). The cells were fixed with 4% paraformaldehyde (10 min) and then permeabilized with 0.1% TritonX-100 for 15 min. The cells were then incubated in the antibody (DYKDDDDK-tag Rabbit Monoclonal Antibody, 1:100 dilution) in 1x PBS/1% BSA for 30 min at room temperature. The secondary antibody used was a Goat Anti-Rabbit Alexa Fluor® 488 (IgG H+L) at 1:2,000 dilution for 20 min at room temperature. Unlabelled sample (Black) was used as a control. 相关产品：
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| P0012A | SDS-PAGE凝胶配制试剂盒 | 可制30-50块胶 |
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| P0013 | Western及IP细胞裂解液 | 100ml |
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| P0023A | Western一抗稀释液 | 100ml/500ml |
| P0023B | Western封闭液 | 100ml/500ml |
| P0023C | Western洗涤液 | 250ml |
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| P0025 | Western一抗二抗去除液 | 250ml |
| P0059 | Recombinant 16-Tag Protein | 200μl/1ml |
| P0066 | 预染蛋白质分子量标准(19-117kD) | 200μl |
| P0068 | 彩色预染蛋白质分子量标准(10-180kD) | 200μl |
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| P0095 | 免疫染色通透液(Saponin) | 100ml/500ml |
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| P0102 | 免疫染色封闭液 | 100ml |
| P0103 | 免疫染色一抗稀释液 | 100ml |
| P0106 | 免疫染色洗涤液 | 250ml |
| P0108 | 免疫荧光染色二抗稀释液 | 100ml |
| P0220-P0235 | Quickblock™封闭液 | 100ml |
| P0252 | QuickBlock™ Western封闭液 | 100ml/500ml |
| P0256 | QuickBlock™ Western一抗稀释液 | 100ml/500ml |
| P0258 | QuickBlock™ Western二抗稀释液 | 100ml/500ml |
| P0260 | QuickBlock™免疫染色封闭液 | 100ml |
| P0262 | QuickBlock™免疫染色一抗稀释液 | 100ml |
| P0265 | QuickBlock™免疫荧光染色二抗稀释液 | 100ml |
| P0267 | QuickBlock™免疫组化染色二抗稀释液 | 100ml |
| P0280 | InstantView™ SDS-PAGE蛋白染色及上样缓冲液(5X) | 1ml |
| P0050-P0058 | BeyoGel™ SDS-PAGE预制胶(Tris-Gly, 12孔) | 10块/50块 |
| P0448-P0472 | BeyoGel™ Plus PAGE预制胶(Tris-Gly, 10孔/15孔) | 10块/50块 |
| P0501-P0528 | BeyoGel™ Plus PAGE预制胶(Hepes, 10孔/15孔) | 10块/50块 |
| P0552 | BeyoGel™ Plus SDS-PAGE Hepes电泳液(20X) | 100ml/500ml |
| P0670-P0678 | SDS-PAGE下层胶预混液 | 250ml/500ml |
| P0683 | SDS-PAGE上层胶预混液 | 250ml/500ml |
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Anti-Flag免疫磁珠(Anti-DYKDDDDK (Flag) MagBeads)
Anti-Flag免疫磁珠(Anti-DYKDDDDK (Flag) MagBeads)
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FAQ
COA
已发表文献
Anti-Flag免疫磁珠（Anti-DYKDDDDK (Flag) MagBeads）是一种聚合物磁性微球，由高质量的鼠源IgG单克隆抗体与carboxyl magnetic beads通过供价偶联制备，本产品具有快速的磁响应性，超顺磁性、良好的分散性、粒径均一、极低的非特异结合和丰富的结合位点等特点，可用于带有Flag标签的蛋白免疫沉淀（IP）。
Anti-Flag免疫磁珠（Anti-DYKDDDDK (Flag) MagBeads）可结合Met修饰的N端Flag融合蛋白（Met-FLAG–Protein），N端Flag融合蛋白（FLAG–Protein），C端Flag融合蛋白（Protein-FLAG）。
产品性质
|
配体 |
Anti-Flag Antibody |
|
粒径 |
200 nm |
|
结合能力 |
>0.6 mg蛋白/mL 磁珠 |
|
磁珠浓度 |
10 mg/mL |
|
储存缓冲液 |
ddH2O |
运输和保存方法
冰袋运输。2-8℃储存。避免冻存！有效期1年。
注意事项
- 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
- 本产品仅作科研用途！
使用方法
以免疫沉淀（IP）为例，步骤如下：
1样品准备
样品可以是细菌发酵液或者细胞裂解液， 样品中不能含有颗粒不溶物，可以用0.22 μm滤膜过滤或10,000×g离心15 min。
2 磁珠预处理
2.1 用移液器轻柔吹打Anti-Flag免疫磁珠，使其充分混悬，取 25~50 µL 磁珠悬液置于1.5 mL离心管中。
2.2 加入500 µL IP Lysis/Wash Buffer并轻轻移液器混合，用移液器轻柔吹打重悬Anti-Flag免疫磁珠，接着在磁力架上静置1 min后，吸弃上清。
2.3 重复步骤 2.2 两次。
3样品的结合
3.1 在预处理后的磁珠中加入蛋白样品，置于翻转混合仪上孵育(常温2 h，4 ℃过夜)；
3.2 将上述混合液置于磁力架上静置1 min，然后把上清液转移到新的离心管中备用(上清液可用于检测Flag标签蛋白是否存在残留)，原离心管中剩余的即为 蛋白-磁珠复合物；
注意：结合过程中，磁珠可能会出现聚团或呈片状，属于正常现象，不会影响实验结果。
4洗涤
4.1 向步骤3.2所得的蛋白-磁珠复合物中加入 500 µL IP Lysis/Wash Buffer ，用移液器轻柔吹打重悬，接着在磁力架上静置 1 min 后, 吸弃上清；
4.2 重复步骤4.1两次，直至洗涤后的上清液OD280小于0.05为止；
注意：如上清液的OD280仍大于0.05，则适当增加洗涤次数。
5蛋白洗脱
根据下游用途选择洗脱方法。
5.1 Flag融合蛋白洗脱
1） 配制Flag多肽洗脱液：TBS中溶解Flag多肽，终浓度为0.2-1 mg/mL。
2） 分别加入100 μL Flag多肽洗脱液，4 ℃孵育 2 h-6 h（慢慢摇晃）
3） 分离磁珠上的磁珠并保存含有目标抗原的上清液。
4） 重复洗脱步骤一次以获得更高的回收率
5.2 酸性洗脱（0.1 M Gly-HCl，pH 3.0）
1）加入100 μL 0.1 M Gly-HCl，pH 3.0，室温孵育5-10 min（慢慢摇晃）。
2）分离磁珠上的磁珠并保存含有目标抗原的上清液。
3）中和低pH，每100 μL洗脱液加入20 μL中和缓冲液(1M Tris pH8.5)。最后的溶液可以用作样品用于变性 SDS-PAGE。
5.3 用SDS-PAGE上样缓冲液洗脱
如需直接检测目的蛋白，则在上述洗涤过的蛋白-磁珠复合物中加入100 μL 1×SDS-PAGE上样缓冲液，煮沸 5 min，冷却至室温并在磁力架上静置 1 min 后，取上清进行 SDS-PAGE 检测。
HB230116
Anti-Flag免疫磁珠（Anti-DYKDDDDK (Flag) MagBeads）是一种聚合物磁性微球，由高质量的鼠源IgG单克隆抗体与carboxyl magnetic beads通过供价偶联制备，本产品具有快速的磁响应性，超顺磁性、良好的分散性、粒径均一、极低的非特异结合和丰富的结合位点等特点，可用于带有Flag标签的蛋白免疫沉淀（IP）。
Anti-Flag免疫磁珠（Anti-DYKDDDDK (Flag) MagBeads）可结合Met修饰的N端Flag融合蛋白（Met-FLAG–Protein），N端Flag融合蛋白（FLAG–Protein），C端Flag融合蛋白（Protein-FLAG）。
产品性质
|
配体 |
Anti-Flag Antibody |
|
粒径 |
200 nm |
|
结合能力 |
>0.6 mg蛋白/mL 磁珠 |
|
磁珠浓度 |
10 mg/mL |
|
储存缓冲液 |
ddH2O |
运输和保存方法
冰袋运输。2-8℃储存。避免冻存！有效期1年。
注意事项
- 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
- 本产品仅作科研用途！
使用方法
以免疫沉淀（IP）为例，步骤如下：
1样品准备
样品可以是细菌发酵液或者细胞裂解液， 样品中不能含有颗粒不溶物，可以用0.22 μm滤膜过滤或10,000×g离心15 min。
2 磁珠预处理
2.1 用移液器轻柔吹打Anti-Flag免疫磁珠，使其充分混悬，取 25~50 µL 磁珠悬液置于1.5 mL离心管中。
2.2 加入500 µL IP Lysis/Wash Buffer并轻轻移液器混合，用移液器轻柔吹打重悬Anti-Flag免疫磁珠，接着在磁力架上静置1 min后，吸弃上清。
2.3 重复步骤 2.2 两次。
3样品的结合
3.1 在预处理后的磁珠中加入蛋白样品，置于翻转混合仪上孵育(常温2 h，4 ℃过夜)；
3.2 将上述混合液置于磁力架上静置1 min，然后把上清液转移到新的离心管中备用(上清液可用于检测Flag标签蛋白是否存在残留)，原离心管中剩余的即为 蛋白-磁珠复合物；
注意：结合过程中，磁珠可能会出现聚团或呈片状，属于正常现象，不会影响实验结果。
4洗涤
4.1 向步骤3.2所得的蛋白-磁珠复合物中加入 500 µL IP Lysis/Wash Buffer ，用移液器轻柔吹打重悬，接着在磁力架上静置 1 min 后, 吸弃上清；
4.2 重复步骤4.1两次，直至洗涤后的上清液OD280小于0.05为止；
注意：如上清液的OD280仍大于0.05，则适当增加洗涤次数。
5蛋白洗脱
根据下游用途选择洗脱方法。
5.1 Flag融合蛋白洗脱
1） 配制Flag多肽洗脱液：TBS中溶解Flag多肽，终浓度为0.2-1 mg/mL。
2） 分别加入100 μL Flag多肽洗脱液，4 ℃孵育 2 h-6 h（慢慢摇晃）
3） 分离磁珠上的磁珠并保存含有目标抗原的上清液。
4） 重复洗脱步骤一次以获得更高的回收率
5.2 酸性洗脱（0.1 M Gly-HCl，pH 3.0）
1）加入100 μL 0.1 M Gly-HCl，pH 3.0，室温孵育5-10 min（慢慢摇晃）。
2）分离磁珠上的磁珠并保存含有目标抗原的上清液。
3）中和低pH，每100 μL洗脱液加入20 μL中和缓冲液(1M Tris pH8.5)。最后的溶液可以用作样品用于变性 SDS-PAGE。
5.3 用SDS-PAGE上样缓冲液洗脱
如需直接检测目的蛋白，则在上述洗涤过的蛋白-磁珠复合物中加入100 μL 1×SDS-PAGE上样缓冲液，煮沸 5 min，冷却至室温并在磁力架上静置 1 min 后，取上清进行 SDS-PAGE 检测。
HB230116
暂无内容
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