Worthington Carboxypeptidase B 说明书

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Worthington Biochemical是一家始于1947年,位于美国新泽西州的生产高纯度酶类及相关生化药剂的世界*公司,公司致力于为客户提供zui的产品及服务。Worthington供应的生物药剂主要纯化于牛胰腺、植物、发酵产物及其他自然资源,公司专长的蛋白提取与纯化技术保证了其所提供酶类拥有与其提取来源物中同等的生物活性,从而保证了研究结果的可靠性和稳定性。目前Worthington提供的产品覆盖细胞分离消化酶、DNA酶、RNA酶等几乎所有生命科学研究领域。

 

Carboxypeptidase B

羧肽酶B

I.U.B.: 3.4.17.2 
C.A.S.: 9025-24-5

羧肽酶B(CPDB)是金属羧基肽酶,其催化从多肽的C-末端位置碱解氨基酸,赖氨酸,精氨酸和鸟氨酸的水解:

肽基-L-赖氨酸(-L-碱性氨基酸)+ H 2 O→肽+ L-赖氨酸(L-碱性氨基酸)

羧肽酶由胰腺的腺泡细胞分泌为酶原。酶在胰岛素被小肠激活。

历史:

1931年,Waldschmidt-Leitz 等 证明猪胰腺排泄物含有催化精氨酸从蛋白质释放的酶(Folk 1971)。他们称之为酶“protaminase”。在1933年,Calvery使用蛋白清蛋白来表明它也可能对这种酶敏感,表明赖氨酸和组氨酸也可以释放。在整个20世纪30年代和40年代,据信这种酶与糜蛋白酶相同(Sumner和Somers 1947和Northrop等人, 1948)。

在1940年,霍夫曼和伯格曼的工作表明赖氨酸只是在羧肽酶A(CPDA)存在下从底物缓慢释放出来。Folk在1956年的作品表明赖氨酸在市售的胰脏粉末(Folk 1971)的存在下迅速释放。这两个见解导致实验证实存在两种单独的羧肽酶(Folk 1956,Folk和Gladner 1958)。羧肽酶B名称由Folk 等人 于1960年将其与CPDA区分开来。 

1975年,Titani 等人 确定氨基酸序列。1976年,施密德和赫里奥科特将结构解析为一个2.8Å分辨率,后来被Coll 等人完善。胰腺猪pro-CPDB前段的球状结构域是由Vendrell 等人的 NMR光谱学衍生的在1990年。

zui近的工作包括获得CPDB的更高分辨率晶体结构(Fernández 等, 2010),以及解决有效的硫醇抑制剂的晶体结构(Adler 等, 2005)。

特异性:

CPDB由胰蛋白酶激活。CPDB对赖氨酸和精氨酸是高度特异性的,但显示出对精氨酸的偏好(Tan和Eaton 1995)。它也可以对缬氨酸,亮氨酸,异亮氨酸,天冬酰胺,甘氨酸和谷氨酰胺起作用(速度较慢)(Villegas等, 1995,Nishihira 等, 1995)。与CPDA中的Gly207,Ile243和Ile255相比,羧肽酶A(CPDA)和CPDB之间的特异性差异可归因于CPDB中的残基Ser205,Gly241和Asp253(Coll 等人, 1991)。

分子特征:

Clauser 等人 研究了大鼠前羧肽酶B基因,发现它与牛CPB1 基因非常相似(Clauser 等,1988)。CPB1 基因在许多真核生物中是保守的,在人类,黑猩猩,狗,小鼠,大鼠,鸡,斑马鱼进行了研究,并果蝇(阿维莱斯和2004年本德雷利)。大鼠CPDB的成熟形式与牛CPDB(77%相同)同源,参与催化或配体结合的氨基酸显示无差异。前羧肽酶B的编码区由11个外显子组成(Clauser 等,1988)。大鼠CPDB ,大鼠CPDA 和大鼠CPDA2的比较             基因已经表明,尽管间插序列存在很大差异,但外显子的数目,位置和序列组成是保守的(Gardell 等人,1988,和Clauser 等,1988)。通过cDNA和mRNA测序,CPDB mRNA已被确定为1385个核苷酸,不包括poly(A)尾。大鼠CPDB mRNA比CPDA mRNA长100个核苷酸。这种差异主要是由于CPDB mRNA中3'非翻译区(UTR)较大(Han等,1986)。     

组成:

CPDB的主要形式是单体状态。CPDB每摩尔蛋白质含有1个锌原子。配位锌残基的残基是保守的,包括两个组氨酸,谷氨酸和水(Avilés和Vendrell,2004)。

蛋白质登录号: P09955

CATH分类(v。3.2.0): 

  • 类:Alpha Beta
  • 建筑:3层(aba)三明治
  • 拓扑:氨肽酶 

分子量:

  • 34.3 kDa(Folk et al。, 1960)
  • 34.7 kDa(理论)

*pH:  9.0(Wolff  1962)

等电点:  4.6-5.2(Lipperheide和Otto 1986)

消光系数: 

  • 77,080 -1 M -1  (理论值)
  • 1%,280  = 21.4(Folk 1971)

活性残留物:

  • 谷氨酸(E378)
  • 酪氨酸(Y356)

抑制剂:

  • 由精氨酸,赖氨酸和鸟氨酸竞争性抑制(Wolff  1962)
  • 金属螯合剂如1,10-菲咯啉和EDTA
  • 重金属
  • Not inhibited by diisopropylfluorophosphate (DFP) or phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF)
  • 马铃薯羧肽酶抑制剂(Hass 等, 1981)
  • 水蛭羧肽酶抑制剂(Reverter 等人 1998) 

应用:

  • 通过连续切割C末端碱性氨基酸进行序列分析
  • 急性胰腺炎诊断的血清标记物(Avilés和Vendrell 2004)
  • 细胞色素C逐步消化(苏迪等人 1989)
  • 人胰岛素生产(Ladisch和Kohlmann,1992)