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简要描述:

​Ebba生物科技于2016年创立,实现了荧光示踪剂(optotracers)分子的商业应用和更广泛使用,这是多年*纳米科学和有机化学研究的成果。Ebba生物总部位于Medeon(瑞典马尔默生命科学科技园),子公司位于索尔纳的卡罗林斯卡学院科技园,主要生产、销售多种特制荧光示踪剂(光示踪剂)分子,并向全球的研究实验室、医院和行业提供。

Ebba生物科技于2016年创立,实现了荧光示踪剂(optotracers)分子的商业应用和更广泛使用,这是多年*纳米科学和有机化学研究的成果。Ebba生物总部位于Medeon(瑞典马尔默生命科学科技园),子公司位于索尔纳的卡罗林斯卡学院科技园,主要生产、销售多种特制荧光示踪剂(光示踪剂)分子,并向全球的研究实验室、医院和行业提供。

        光跟踪是一种创新的可视化方法,由科学家为科学家开发,用于荧光显微镜和光谱学。通过使用荧光示踪分子的光示踪技术,Ebba为几个不断扩大的研究领域提供了一种创新方法。光跟踪技术是由卡罗林斯卡学院、林雪平大学和瑞典理工学院(KTH)的科学专家团队研发的,是多年*纳米科学和有机化学研究的成果。


        Ebba生物已将光示踪分子的分销和销售商业化,目前提供三个不同系列的光示踪分子:

一、Amytracker——淀粉样蛋白和其他蛋白质聚集物的荧光示踪剂

Amytracker是荧光示踪分子,提供高质量的蛋白质聚集可视化。使用Amytracker在组织和活细胞中检测到来自各种淀粉样蛋白或肽的淀粉样蛋白的前原纤维状态。主要是帕金森之类的疾病研究。

Carbotrace——用于碳水化合物分析和解剖绘图的光示踪剂

Carbotrace是针对碳水化合物结构的荧光示踪分子。Carbotrace可用于无损碳水化合物分析、碳水化合物鉴别和植物碳水化合物结构的解剖学作图。

三、EbbaBiolight——用于检测细菌和细菌生物膜的光示踪剂

EbbaBiolight是允许识别细菌和细胞外基质成分的荧光示踪分子。使用EbbaBiolight现在有可能跟踪液体和表面上存活的、生长的培养物中生物膜的形成。主要是细菌等微生物的领域研究。

产品列表:

品牌

货号

名称

规格(µl)

Ebba

A5-M&T

AmytrackerMix&Try

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Ebba

A480

Amytracker480

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Amytracker520

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Amytracker540

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Ebba

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Amytracker630

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Ebba

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Amytracker680

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Ebba

C5-M&T

CarbotraceMix&Try

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Ebba

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Carbotrace480

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Ebba

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Carbotrace540

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Ebba

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Carbotrace630

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Ebba

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Carbotrace680

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Ebba

E5-M&T

EbbaBiolightMix&Try

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Ebba

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EbbaBiolight630

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Ebba

E680

EbbaBiolight680

50,100,150,200


神经元示踪剂固蓝fast blue 74749-42-1


神经元示踪剂固蓝fast blue 74749-42-1

简要描述:固蓝(Fast blue,FB)FB系水溶性染料,其颗粒较细密,易于被神经轴索摄取,所以标记神经纤维或胞体多于其他染料,易于从标记细胞内扩散到周围组织,照射时褪色较快,即使保存在低温、避光条件下,仍不能长期保存。对需要标记后较长时间的观察,或需分离培养神经元细胞进行实验研究则不太理想。

详细介绍

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固蓝(Fast blue,FB)FB系水溶性染料,其颗粒较细密,易于被神经轴索摄取,所以标记神经纤维或胞体多于其他染料,易于从标记细胞内扩散到周围组织,照射时褪色较快,即使保存在低温、避光条件下,仍不能长期保存。对需要标记后较长时间的观察,或需分离培养神经元细胞进行实验研究则不太理想。

Fast Blue,产品目录编号 # 17740
•Fast blue是一种广泛用作神经元示踪剂的荧光染料,其是一种亲水性的逆行性示踪剂。
•常用于神经生物学研究所
•由于发光时间更长,因而Fast Blue是zui广泛使用的神经元示踪剂。
•激发波长: 365nm 释放波长:420nm
•可溶于:水、低碳数醇类

产品订购信息:

17740-5 Fast Blue   15827 5mg polysiences
17740-2 Fast Blue   7446 2mg polysiences
17740-1 Fast Blue   4131 1mg polysiences

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FAST BLUE RR BASE 6268-05-9 420 5 g MPBIO ICN
FAST BLUE RR BASE 6268-05-9 1532 100 g MPBIO ICN
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0521192125 FAST BLUE B, BASE 119-90-4 2122 25 g MPBIO ICN

 

24611-500 Luxol Fast Blue, Ready-to-Use   1462 500ml polysiences
00805-25 Luxol Fast Blue ARN (Solvent Blue 37)   1785 25g polysiences

 

常用神经示踪剂及其示踪特点

【摘要】 丰富的神经示踪技术极大的促进了神经解剖学的发展,为神经生物学的各种研究提供了良好基础,在此,我们概述了常用神经示踪剂及其示踪特点,重点介绍了各种荧光染料和植物凝集素IB4的示踪特点。

【关键词】 神经示踪剂;辣根过氧化物酶;荧光染料;植物凝集素IB4;病毒

Common characteristics of the neural tracers

  Zhu He1,2, Li Li2, Zhao Lei2, Ma Ketao2, Si Junqiang2

  (Shihezhi University, Shihezhi Xinjiang 832002)

自20世纪70年代初Kristenson将辣根过氧化物酶(HRP)应用于追踪神经纤维以来,该方面的研究取得了的迅猛发展。此后,许多用途广泛、敏感性强并能选择性地进行顺行、逆行标记或同时具有顺、逆行标记的追踪物质被应用到神经纤维的研究,对神经解剖学的发展起到了积极的推动作用。现就常用的神经示踪剂及其示踪特点综述如下:

  1辣根过氧化物酶

  1.1辣根过氧化物酶(Horseradish peroxidase,HRP) HRP是一种含血红素基的植物糖蛋白。HRP法是20世纪70年代发展并被广泛应用的一种神经追踪方法,但由于HRP显影需要许多复杂的免疫组织化学技术,而且HRP参与细胞代谢,不能在细胞内长期存留,易扩散到邻近组织造成神经元的误染,其反应产物较不稳定,易丢失,另外还存在“再摄取”现象[1], 使得HRP在神经逆行示踪方面的应用大大减少。

订货信息:

OBT7271 HORSERADISH PEROXIDASE   12107 1 g AbD Serotec
OBT7272 HORSERADISH PEROXIDASE   2485 25 mg AbD Serotec
OBT7273 HORSERADISH PEROXIDASE   4314 100 mg AbD Serotec

 

  1.2 霍乱毒素亚单位B结合的辣根过氧化物酶(CBHRP)R. N.Ranson等[2] 对传统的辣根过氧化物酶的染色方法进行了改进,采用结合了霍乱毒素亚单位B的辣根过氧化物酶(CBHRP)作为示踪剂,清晰显示了神经元的胞体和轴突结构。近来也有采用四甲基联苯胺(TMB)为底物替代传统的二氨基联苯胺(DAB)来示踪豚鼠的面神经[3]的报道。TMB与DAB相比有不致癌和HRP反应灵敏度高,操作简便,步骤少,用时短及成本低等诸多优点。

ADI-80-0350 TMB substrate, (10 ml)   360 10 ml ENZO
ADI-80-0615 TMB substrate, (5 ml)   360 5 ml ENZO
ADI-80-1805 TMB substrate, (50 ml)   600 50 ml ENZO
BUF022 DAB SUBSTRATE BUFFER   1292 2 x 50ml AbD Serotec

 

  HRP法标记的神经元经组织化学法处理后,细胞失去了活性,无法进行膜片箝等神经电生理的研究,限制了HRP法在这一领域内的应用。

  2荧光染料

  从上世纪50年代开始,荧光染料示踪技术发展起来。它贮存稳定,特别是组合采用不同的荧光染料分别标记神经元胞核和胞浆,可实现荧光双标或多重标记,这是荧光素示踪的一个zui大优点。这种示踪剂染色后只需使用荧光显微镜,便可观察到已被标记的神经纤维或胞体。下面介绍几种常用的荧光素。

  2.1 固蓝(Fast blue,FB)FB系水溶性染料,其颗粒较细密,易于被神经轴索摄取,所以标记神经纤维或胞体多于其他染料,易于从标记细胞内扩散到周围组织,照射时褪色较快,即使保存在低温、避光条件下,仍不能长期保存。对需要标记后较长时间的观察,或需分离培养神经元细胞进行实验研究则不太理想。

订货信息

17740-5 Fast Blue   15827 5mg polysiences
17740-2 Fast Blue   7446 2mg polysiences
17740-1 Fast Blue   4131 1mg polysiences

  2.2 荧光金(Fluoro gold,FG)FG系脂溶性染料,能标记细胞质,它在紫外线(323nm)激发下发金黄色光(408nm),属慢速轴浆运输类,细胞核不着色,能很好显示树突分支,细胞外无荧光染料渗漏,不易扩散,与周围组织分界清晰,褪色比较慢,可以经受许多组织学染色处理,因而可以和HRP、免疫组织化学等方法结合。其在细胞质内的存在不超过3周[4]。

订货信息:厂家 fluorochrome

780000 荧光金 Fluoro-Gold 10mg ¥2000
780001 荧光金 Fluoro-Gold 50mg ¥6700
780002 荧光金 Fluoro-Gold 100mg ¥12800
780003 荧光金 Fluoro-Gold 150mg ¥18000
780004 荧光金 Fluoro-Gold 200mg ¥21500
781001 荧光金抗体 Antibody to Fluoro-Gold 0.1ml×¥1 5700
781002 荧光金抗体 Antibody to Fluoro-Gold 0.1ml×¥2 9800
781003 荧光金抗体 Antibody to Fluoro-Gold 0.1ml×3 12800
782001 红色荧光金 Fluoro-Ruby 30mg 3200

 

  有学者将其用于视神经的研究,标记了视神经纤维的分布路径和走向[5]。Takayuki Nakajima等[6]采用荧光金结合SP、CGRP免疫荧光标记反应,发现大鼠L6DRG和S1DRG内均存在大小不等的SP/CGRP双标记神经元及中小型大小的FG/SP、FG/CGRP双标记阳性细胞和FG/SP/CGRP三标记阳性细胞,这些标记阳性细胞可能与包皮系带损伤后阴茎自发性疼痛的产生和传递有关。

  2.3 羰化青(1,1′ Dioctadecyl3,3,3′,3′ tetramethylindocarbocyanine perchlorate,DiI) DiI是一种紫红色晶体,具有高度的亲脂性,在水中的溶解度很低,通常用乙醇溶解。它荧光强而稳定,无毒性,不影响被标记细胞的存活、生长,在标记细胞内消失慢、单纯沿脂质膜扩散,有良好的轴突特异性,且对过路纤维影响小。在549nm激发光下可以产生发射波长为565 nm红色荧光[7]。

  1986年Honig[8]等报道DiI可作为荧光示踪剂用于培养的神经细胞和骨骼肌细胞。DiI对试管内动物胚胎的感觉和运动神经元没有显著的毒性作用,因而适用于活的组织、细胞的示踪、标记。但也有研究报道显示DiI易于淬灭及易向神经元胞体外扩散的问题[9]。总的来说, DiI具有在细胞内稳定表达、标记细胞形态良好、对活体细胞无毒性、在标记细胞内消失慢[10]、使用简便、染色速度快的特点。尤其是不影响被标记细胞的电生理和生化特性使其越来越多的被用于神经科学领域的研究[11]。

AAT-22035 DiIC12(3) perchlorate [1,1-Didodecyl-3,3,3,3-tetramethylindocarbocyanine perchlorate]   975 25 mg AAT Bioquest
AAT-22044 DiIC16(3) perchlorate[1,1-Dihexadecyl-3,3,3,3-tetramethylindocarbocyanine perchlorate]   975 25 mg AAT Bioquest
AAT-22102 DiI perchlorate [1,1-Dioctadecyl-3,3,3,3-tetramethylindocarbocyanine perchlorate]   975 100 mg AAT Bioquest

 

  2.4 荧光染料双标染色法 双标技术是通过不同示踪剂对细胞核、细胞浆亲和力不同,用两种示踪剂对不同的神经纤维或靶器官进行标识。

  2.4.1 固蓝(Fast Blue) 和核黄(Nclear Yellow) 双标染色 Viterbo F等[12] 用固蓝和核黄双标染色研究损伤后的胫神经和腓神经的侧芽来源情况,对神经纤维进行了直接的形态学观察。

订货信息:

AAT-17539 Nuclear Yellow [Hoechst S769121]   2535 25 mg AAT Bioquest
17740-5 Fast Blue   15827 5mg polysiences
17740-2 Fast Blue   7446 2mg polysiences
17740-1 Fast Blue   4131 1mg polysiences

  2.4.2固蓝(Fast Blue)和双脒基黄(Diamidino Yellow) 双标染色 双脒基黄(Diamidino Yellow)荧光激发波长360 nm,经神经轴浆流的逆行转运可达细胞核,细胞核呈绿色、黄绿色或黄白色。激发后荧光很强时,细胞浆有时映出部分黄绿色或黄白色。C.T. Byers等[13]比较了固蓝(Fast Blue)和双脒基黄(Diamidino Yellow)逆行标记神经元的效力,研究结果显示无论是单独使用还是二者按任何次序联合使用,被标记的神经元的数目是一致的。证明使用FB和DY进行荧光双标的方法是可行的。相对于FB和其他的荧光染料组合形式,DY和FB的组合更为合理。DY能够标记细胞核的同时FB可以清晰的显示细胞浆,在同一荧光显微镜下,二者可以清晰的显示被标记的细胞而充分互补。

  2.4.3 台盼蓝(Trypan Blue) 和双脒基黄(Diamidino Yellow) 双标染色 台盼蓝荧光激发波长为375 nm,经神经轴浆流的逆行转运可达细胞浆,激发后细胞浆呈亮蓝色。Yang等[14] 使用双脒基黄和台盼蓝荧光双标研究切断腓总神经后行腓总神经断端和胫总神经吻合的脊髓背根神经节细胞发现,在相应L4L6背根神经节及相应脊髓腰膨大中分别存在双脒基黄和台盼蓝双标的细胞,说明两神经之间有交叉支配的存在,表明神经端侧缝合后的再生方式是侧枝芽生。

  1991年Fritzsch和Sonntag[15]比较研究了荧光素和生物素葡糖聚胺的标记效力,随后Harsh[16]等在1991年又比较了FG素和DiI两者之间的标记效能。1993年,Brushart等人又分别比较研究了荧光素和HRP之间的标记效能。这几种示踪剂的组合的弊端是在同一显微镜下不能被同时观察到。更重要的是,生物素葡糖聚胺和DiI通常情况下不被未损伤神经摄取的特性决定使用两者作为标记物时必须先切断或损伤被标记神经。常用的几种荧光染料中,TB和FB能够标记细胞浆,NY和DY能够特异的结合被标记细胞的细胞核。

 由于荧光素分子量小,用于逆行追踪的共同问题是易于扩散,比HRP法更难于确定有效注射部位。与HRP法相似,荧光素示踪法也存在过路纤维摄入问题。褪色是荧光素的一大缺点,在激发光照射下较快褪色,因此允许观察的时间短。即使在低温、避光条件下,切片保存时间仍有限,不能长期保存。

  3 生物素葡糖聚胺(Biotindextran amine, BDA)

  BDA应用于轴浆运输的各种示踪剂,常用来研究神经元的分支投射,但很少有直接用于观察周围神经局部轴突的研究。BDA具有保存时间长,并可与多种荧光追踪剂及各种免疫组织化学技术相结合的优点[17],能满足光镜及电镜下观察的要求。相对于HRP与荧光素示踪剂,经处理的BDA标记组织标本可以保存6个月以上,不影响zui终显影结果。

  4病毒

  常用在神经通路示踪方面的两类病毒是腺病毒(Adenovirus)、腺病毒伴随病毒(Adenoassociatedvirus,rAAV)和疱疹病毒。

  腺病毒和腺病毒伴随病毒在神经示踪中的应用得益于绿色荧光蛋白(Greenfluorescenceprotein,GFP)基因的发现。日本科学家下村修、美国科学家马丁·沙尔菲和美籍华裔科学家钱永健正是因为在发现和研究绿色荧光蛋白方面做出的重大贡献摘取了2008年的诺贝尔化学奖。

  GFP来源于维多利亚水母(AequoreaVictoria),其荧光发射峰在509nm,zui大激发波长为395 nm,并在470 nm处有1个肩峰[18],其化学性质相当稳定[19]。荧光蛋白的显著优点是与生物相容性好,标记生物分子后不影响其生物活性,发光强度高,易于识别与检测。但是,目前荧光蛋白种类还比较少,而且大部分都是从生物体中提取,较难大批量生产[20] 。

  4.1腺病毒(Adenovirus)、腺病毒伴随病毒(Adenoassociatedvirus,rAAV)构建表达GFP的腺病毒和rAAV载体,用于神经细胞和神经通路的示踪,具有*的优点。GFP产生的荧光可以耐受光漂白和福尔马林的固定,能够制成长期保存的标本[21],可用于不同神经元的形态学分析和纤维的研究,尤其适用于某些特定功能的局部神经环路的研究。

  但是注入GFP 基因重组病毒的多少将影响GFP荧光的强弱。如果注入重组病毒过少时,荧光浅淡而不易观察,如果注入的GFP基因重组病毒较多,它在标记神经元及突起的同时,会增多对神经胶质细胞的标记,产生干扰[22]。

  4.2 疱疹病毒(Herper virus)疱疹病毒的主要特点是亲神经性和跨神经元传递。疱疹病毒是具有复制能力的病毒,作为神经通路的示踪剂,它能够对示踪信号进行放大,增加了示踪的灵敏度。在应用疱疹病毒作为神经示踪剂时,对病毒毒株的选择对实验成败具有重要的意义。

  5植物凝集素IB4

  凝集素(Lectins)是一类从各种植物种子和动物组织中提取的糖蛋白或结合糖的蛋白。凝集素zui大的特点是能识别细胞膜中复杂的碳水化合物结构,即细胞膜表面的糖基。

  作为初级伤害性感受器的小直径感觉神经元根据和IB4结合能力的不同可以分为植物凝集素阳性的非肽能神经元和植物凝集素阴性的肽能神经元,前者呈胶质源性营养因子依赖性,而后者则呈神经生长因子依赖性[23]。植物凝集素阳性的非肽能神经元的动作电位相对于植物凝集素阴性的肽能神经元而言,其持续时间较长、具有更高密度的河豚毒素不敏感的钠电流以及更小的热伤害刺激电流[24]。Belyantseva等[25]发现在遭受慢性损伤后,植物凝集素阴性的肽能神经元会大量的增生。

  综上所述,辣根过氧化物酶zui早应用于神经的逆行示踪,但由于使用方法较复杂且稳定性差、易扩散,限制了它的应用;荧光示踪剂使用方法简便易行、易观察,但存在荧光淬灭现象,仅适用于短期观察,而生物素葡聚糖胺则不存在这种现象,其结果可以保存较长时间;其他毒素或病毒鳌合物能良好地显示神经元链或网络,但目前在神经示踪方面应用较少;物凝集素IB4能特异地和脊神经节内与伤害性刺激相关的小型神经元结合,为脊髓背根神经节痛觉相关小直径细胞的研究提供了极大的方便。

【参考文献】
  1 Kamijo Y, Koyama J, Oikawa S, et al. Regenerative process of the facial nerve: rate of regeneration of fibers and their bifurcations[J]. Neurosci Res, 2003, 46(2): 135-143.

  2 Ranson RN, Motawei K, Pyner S, et al. The paraventricular nucleus of the hypothalamus sends efferents to the spinal cord of the rat that closely appose sympathetic preganglionic neurones projecting to the slate ganglion[J]. Experimental Brain Research, 1998, 120(2): 164-172.

  3 Sahni V, Qi Y and Frostick S. Peripheral nerve regeneration[J]. Eur Surg, 2005, 37(4): 187-192.

  4 SellesNavarro I, VillggasPerez MP, SalvadorSilva M, et al. Retinal ganglion cell death after different transient periods of pressureinduced ischemia and survival intervals. A quantitative in vivo study[J]. Invest Ophthalmol Vis, 1996, 37(10): 2002-2014.

  5 Chen Pei, Wang Peng, Chen Guangli and Gong Shusheng. Study on remodeling of astrocytes in facial neuclus after peripheral injury[J]. Journal of Huazhong University of Science and Technology, 2005, 25(6): 726-728.

  6 Takayuki N, Seiji O, Yamamoto S , et al. Differences in innervation and innervated neurons between hip and inguinal skin[J]. Clinical Orthopaedics and Related Research, 2008, 466(10): 2527-2532.

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  8 Honig NM, Hume RI. Fluorescent carbocyanine dyes allow livingneurons of identified origin to be studied in long term cultures[J]. Cell Biol, 1986, 103(1): 171-187.

  9 Mandado M , Molist P, Anadón R. A DiItracing study of the neural connections of the pineal organ in two elasmobranchs (Scyliorhinus canicula and Raja montagui) suggests a pineal projection to the midbrain GnRHimmunoreactive nucleus[J]. Cell and Tissue Research, 2001, 303(3): 391-401.

  10Fernandez B, Bellido D, Vilella E, et al. Lipoprotein lipasemediated uptake of lipoprotein in human fibroblasts: evidence for an LDL receptorindependent internalization pathway[J]. Journal of Lipid Research, 1996, 37(3): 464-481.

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  22常成, 高晓群. 病毒在神经通路示踪中的应用[J]. 中国组织化学与细胞化学杂志, 2004, 13(2): 250-254.

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CM-DiI活细胞示踪剂 DiI衍生物|Celltracker CM-DiI

CM-DiI活细胞示踪剂 DiI衍生物|Celltracker CM-DiI

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产品描述

CM-DilDiI的一种衍生物,通过与膜结构的脂质分子结合而标记细胞,适合监测细胞运动以及细胞定位分析。因具有良好的染料维持性,可用以追踪多次传代细胞的运动特性。其有着强而稳定的红色荧光(Ex/Em=553/570 nm),与绿色荧光染料以及蛋白具有良好的荧光分辨性,适合做多重指标染色。CM-Dil可自由穿透质膜进入细胞,从而产生不具有膜渗透性的反应产物。经过几次传代此染料还可完好的维持在活细胞内,染料随着细胞分裂传入子代细胞内,但不会进入相邻细胞。至少在72小时内保持荧光信号(一般可传3~6代)。工作浓度下,此染料无细胞毒性,不会影响细胞活力以及增殖能力。

Dil相比,CM-Dil水溶性更好一些,便于悬浮细胞和固定细胞染色溶液的制备;CM-Dil携带的CM基团(即氯甲基替代基团)能与多肽及蛋白上的巯基反应从而使该分子在醛类物质中保持稳定。与其他膜染料如DiIPKH26不同,一些细胞经CM-Dil染色后,可在后续的固定,透化和石蜡包埋处理中维持稳定的标记,因此特别适用于同时做细胞膜标记以及后续的免疫组化,荧光原位杂交或者电镜观察的实验。

研究证实,CM-DiI标记后荧光在胞内表达稳定,阳性标记率达98%以上,标记细胞形态良好,能有效地观察细胞在体外的诱导分化情况;或将标记的细胞注入体内,可以有效的显示移植细胞在活体组织中的迁移及分化。

 

产品性质

同义名(Synonym

3H-Indolium,5-[[[4-(chloromethyl)benzoyl]amino]methyl]-2-[3-(1,3-dihydro-3,3-dimethyl-1-octadecyl-2H-indol-2-ylidene)-1-propenyl]-3,3-dimethyl-1-octadecyl-, chloride/

CAS号(CAS NO.

180854-97-1

分子式(Molecular Formula

C68H105Cl2N3O

分子量(Molecular Weight

1051.5

外观(Appearance

红色固体

Ex/Em

553 nm/570 nm

推荐滤光器(Optical Filters

XF23-Omega, 31002-Chroma

结构式(Structure

CM-DiI活细胞示踪剂 DiI衍生物|Celltracker CM-DiI

 

运输与保存方法

室温运输。产品-20 ºC干燥避光保存,有效期一年

 

注意事项

1)荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。

2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

3本产品仅作科研用途!

 

使用方法

1. 染色液制备

1)配置DMFDMSOEtOH 储存液:储存液用DMFDMSOEtOH浓度1-2 mM

注:未使用的储存液保存在-20分装保存,避免反复冻融。

2)工作液制备:用合适的缓冲液(如:无血清培养基,HBSSD-PBS)稀释储存液,配浓度为12 μM的工作液。

注:最佳的工作液浓度根据不同细胞和自身的实验体系来调整

2. 细胞标记(悬浮细胞)

1)在标记前根据实验要求按照上述方法配制好工作液;

2)建议待标记细胞在染色工作液中于37℃孵育≤5 min,再于4℃孵育15 min(低温孵育可降低细胞对染料的内吞作用,有助于染料对质膜的标记,并且降低染料定位细胞质囊泡的可能性)。

【注】:细胞的染色时间依细胞类型的不同差异很大,一般细胞建议染色小于5 min;但有的细胞染色可能染色时间需要延长到20 min-1 h,最佳染色时间需要优化。

3)标记完成后,用PBS清洗细胞,并用新鲜培养基重悬细胞。

注:对于贴壁细胞,可直接就贴壁状态的细胞进行荧光标记,相较于消化处理后的细胞具有更高的活力。

2. 染色后处理

1CM-DiI染色后的细胞直接用3.7% 甲醛(溶于PBS),于37℃固定10 min

2)室温条件PBS清洗2次,每次5 min

3)于-20℃中,用丙酮透化处理10 min

4)室温条件PBS清洗2次,每次5 min;并根据自身的实验要求以及细胞类型,进行后续的实验如石蜡包埋免疫组化分析,电镜分析等。有报道提到,CM-DiI染色后的大鼠嗜铬细胞细胞可兼容2%(w/v)多聚甲醛和0.2%(w/v) Triton X-100的透化作用;从绵羊淋巴细胞内再次纯化的CM-DiI标记细胞,经甲醛固定,石蜡包埋,切片,二甲苯脱蜡,梯度乙醇,以及脱水后仍能维持荧光;

 

HB221116

 

Q:这些探针染细胞,有没有细胞特异性?会不会 293 细胞不好染, MSC 好染?

A:由于这些染料是亲脂性染料,是通过插入到脂质膜中进而被激光激发观察,对于动植物细胞没有特异性。

Q:这些探针荧光探针装载完多久后观察?

A:为减少各种可能的误差,尽量缩短探针装载后到仪器测定所用的时间(刺激时间除外)。 

Q:这些探针染色细胞后,对细胞有毒性吗?

A:荧光探针类产品对活细胞都会有一定的毒性,因此建议在染色处理完成后应尽快完成检测和观察。

Q:为什么染色后发现荧光颜色较浅,应怎么操作进行改进?

A:可以尝试增加染色的时间和浓度。

Q:要看几个小时过程中活细胞的形态变化,应该怎么选?

A:通常使用亲脂性花青染料,如 DiI,DiO,DiD DiR。

[1] Yao C, Zhang R, Tang J, Yang D. Rolling circle amplification (RCA)-based DNA hydrogel. Nat Protoc. 2021;16(12):5460-5483. doi:10.1038/s41596-021-00621-2(IF:13.491)
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[3] Xu H, Liao C, Liang S, Ye BC. A Novel Peptide-Equipped Exosomes Platform for Delivery of Antisense Oligonucleotides. ACS Appl Mater Interfaces. 2021;13(9):10760-10767. doi:10.1021/acsami.1c00016(IF:9.229)
[4] Li D, Zhou T, She Q, et al. Circulating Exosomal miR-493-3p Affects Melanocyte Survival and Function by Regulating Epidermal Dopamine Concentration in Segmental Vitiligo [published online ahead of print, 2022 Jun 9]. J Invest Dermatol. 2022;S0022-202X(22)01529-9. doi:10.1016/j.jid.2022.05.1086(IF:8.551)
[5] Mu J, Li L, Wu J, et al. Hypoxia-stimulated mesenchymal stem cell-derived exosomes loaded by adhesive hydrogel for effective angiogenic treatment of spinal cord injury. Biomater Sci. 2022;10(7):1803-1811. Published 2022 Mar 29. doi:10.1039/d1bm01722e(IF:6.843)
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[9] Li Y, Ma J, Song Z, et al. The Antitumor Activity and Mechanism of a Natural Diterpenoid From Casearia graveolens. Front Oncol. 2021;11:688195. Published 2021 Jun 25. doi:10.3389/fonc.2021.688195(IF:6.244)
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[15] Yan J, Wang WB, Fan YJ, et al. Cyclic Stretch Induces Vascular Smooth Muscle Cells to Secrete Connective Tissue Growth Factor and Promote Endothelial Progenitor Cell Differentiation and Angiogenesis. Front Cell Dev Biol. 2020;8:606989. Published 2020 Dec 9. doi:10.3389/fcell.2020.606989(IF:5.186)
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产品描述

CM-DilDiI的一种衍生物,通过与膜结构的脂质分子结合而标记细胞,适合监测细胞运动以及细胞定位分析。因具有良好的染料维持性,可用以追踪多次传代细胞的运动特性。其有着强而稳定的红色荧光(Ex/Em=553/570 nm),与绿色荧光染料以及蛋白具有良好的荧光分辨性,适合做多重指标染色。CM-Dil可自由穿透质膜进入细胞,从而产生不具有膜渗透性的反应产物。经过几次传代此染料还可完好的维持在活细胞内,染料随着细胞分裂传入子代细胞内,但不会进入相邻细胞。至少在72小时内保持荧光信号(一般可传3~6代)。工作浓度下,此染料无细胞毒性,不会影响细胞活力以及增殖能力。

Dil相比,CM-Dil水溶性更好一些,便于悬浮细胞和固定细胞染色溶液的制备;CM-Dil携带的CM基团(即氯甲基替代基团)能与多肽及蛋白上的巯基反应从而使该分子在醛类物质中保持稳定。与其他膜染料如DiIPKH26不同,一些细胞经CM-Dil染色后,可在后续的固定,透化和石蜡包埋处理中维持稳定的标记,因此特别适用于同时做细胞膜标记以及后续的免疫组化,荧光原位杂交或者电镜观察的实验。

研究证实,CM-DiI标记后荧光在胞内表达稳定,阳性标记率达98%以上,标记细胞形态良好,能有效地观察细胞在体外的诱导分化情况;或将标记的细胞注入体内,可以有效的显示移植细胞在活体组织中的迁移及分化。

 

产品性质

同义名(Synonym

3H-Indolium,5-[[[4-(chloromethyl)benzoyl]amino]methyl]-2-[3-(1,3-dihydro-3,3-dimethyl-1-octadecyl-2H-indol-2-ylidene)-1-propenyl]-3,3-dimethyl-1-octadecyl-, chloride/

CAS号(CAS NO.

180854-97-1

分子式(Molecular Formula

C68H105Cl2N3O

分子量(Molecular Weight

1051.5

外观(Appearance

红色固体

Ex/Em

553 nm/570 nm

推荐滤光器(Optical Filters

XF23-Omega, 31002-Chroma

结构式(Structure

CM-DiI活细胞示踪剂 DiI衍生物|Celltracker CM-DiI

 

运输与保存方法

室温运输。产品-20 ºC干燥避光保存,有效期一年

 

注意事项

1)荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。

2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

3本产品仅作科研用途!

 

使用方法

1. 染色液制备

1)配置DMFDMSOEtOH 储存液:储存液用DMFDMSOEtOH浓度1-2 mM

注:未使用的储存液保存在-20分装保存,避免反复冻融。

2)工作液制备:用合适的缓冲液(如:无血清培养基,HBSSD-PBS)稀释储存液,配浓度为12 μM的工作液。

注:最佳的工作液浓度根据不同细胞和自身的实验体系来调整

2. 细胞标记(悬浮细胞)

1)在标记前根据实验要求按照上述方法配制好工作液;

2)建议待标记细胞在染色工作液中于37℃孵育≤5 min,再于4℃孵育15 min(低温孵育可降低细胞对染料的内吞作用,有助于染料对质膜的标记,并且降低染料定位细胞质囊泡的可能性)。

【注】:细胞的染色时间依细胞类型的不同差异很大,一般细胞建议染色小于5 min;但有的细胞染色可能染色时间需要延长到20 min-1 h,最佳染色时间需要优化。

3)标记完成后,用PBS清洗细胞,并用新鲜培养基重悬细胞。

注:对于贴壁细胞,可直接就贴壁状态的细胞进行荧光标记,相较于消化处理后的细胞具有更高的活力。

2. 染色后处理

1CM-DiI染色后的细胞直接用3.7% 甲醛(溶于PBS),于37℃固定10 min

2)室温条件PBS清洗2次,每次5 min

3)于-20℃中,用丙酮透化处理10 min

4)室温条件PBS清洗2次,每次5 min;并根据自身的实验要求以及细胞类型,进行后续的实验如石蜡包埋免疫组化分析,电镜分析等。有报道提到,CM-DiI染色后的大鼠嗜铬细胞细胞可兼容2%(w/v)多聚甲醛和0.2%(w/v) Triton X-100的透化作用;从绵羊淋巴细胞内再次纯化的CM-DiI标记细胞,经甲醛固定,石蜡包埋,切片,二甲苯脱蜡,梯度乙醇,以及脱水后仍能维持荧光;

 

HB221116

 

Q:这些探针染细胞,有没有细胞特异性?会不会 293 细胞不好染, MSC 好染?

A:由于这些染料是亲脂性染料,是通过插入到脂质膜中进而被激光激发观察,对于动植物细胞没有特异性。

Q:这些探针荧光探针装载完多久后观察?

A:为减少各种可能的误差,尽量缩短探针装载后到仪器测定所用的时间(刺激时间除外)。 

Q:这些探针染色细胞后,对细胞有毒性吗?

A:荧光探针类产品对活细胞都会有一定的毒性,因此建议在染色处理完成后应尽快完成检测和观察。

Q:为什么染色后发现荧光颜色较浅,应怎么操作进行改进?

A:可以尝试增加染色的时间和浓度。

Q:要看几个小时过程中活细胞的形态变化,应该怎么选?

A:通常使用亲脂性花青染料,如 DiI,DiO,DiD DiR。

[1] Yao C, Zhang R, Tang J, Yang D. Rolling circle amplification (RCA)-based DNA hydrogel. Nat Protoc. 2021;16(12):5460-5483. doi:10.1038/s41596-021-00621-2(IF:13.491)
[2] Wang D, Zhang L, Hu A, et al. Loss of 4.1N in epithelial ovarian cancer results in EMT and matrix-detached cell death resistance. Protein Cell. 2021;12(2):107-127. doi:10.1007/s13238-020-00723-9(IF:10.164)
[3] Xu H, Liao C, Liang S, Ye BC. A Novel Peptide-Equipped Exosomes Platform for Delivery of Antisense Oligonucleotides. ACS Appl Mater Interfaces. 2021;13(9):10760-10767. doi:10.1021/acsami.1c00016(IF:9.229)
[4] Li D, Zhou T, She Q, et al. Circulating Exosomal miR-493-3p Affects Melanocyte Survival and Function by Regulating Epidermal Dopamine Concentration in Segmental Vitiligo [published online ahead of print, 2022 Jun 9]. J Invest Dermatol. 2022;S0022-202X(22)01529-9. doi:10.1016/j.jid.2022.05.1086(IF:8.551)
[5] Mu J, Li L, Wu J, et al. Hypoxia-stimulated mesenchymal stem cell-derived exosomes loaded by adhesive hydrogel for effective angiogenic treatment of spinal cord injury. Biomater Sci. 2022;10(7):1803-1811. Published 2022 Mar 29. doi:10.1039/d1bm01722e(IF:6.843)
[6] Mu J, Wu J, Cao J, et al. Rapid and effective treatment of traumatic spinal cord injury using stem cell derived exosomes. Asian J Pharm Sci. 2021;16(6):806-815. doi:10.1016/j.ajps.2021.10.002(IF:6.598)
[7] Bao J, Zhao Y, Xu J, Guo Y. Design and construction of IR780- and EGCG-based and mitochondrial targeting nanoparticles and their application in tumor chemo-phototherapy. J Mater Chem B. 2021;9(48):9932-9945. Published 2021 Dec 15. doi:10.1039/d1tb01899j(IF:6.331)
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[9] Li Y, Ma J, Song Z, et al. The Antitumor Activity and Mechanism of a Natural Diterpenoid From Casearia graveolens. Front Oncol. 2021;11:688195. Published 2021 Jun 25. doi:10.3389/fonc.2021.688195(IF:6.244)
[10] Huang T, Fan Q, Wang Y, et al. Schwann Cell-Derived CCL2 Promotes the Perineural Invasion of Cervical Cancer. Front Oncol. 2020;10:19. Published 2020 Jan 29. doi:10.3389/fonc.2020.00019(IF:6.244)
[11] Yang D, Liu A, Zhang Y, et al. Essential Role of CRIM1 on Endometrial Receptivity in Goat. Int J Mol Sci. 2021;22(10):5323. Published 2021 May 18. doi:10.3390/ijms22105323(IF:5.924)
[12] Wei J, Zhu K, Chen Z, et al. Triple-color fluorescence co-localization of PD-L1-overexpressing cancer exosomes. Mikrochim Acta. 2022;189(5):182. Published 2022 Apr 8. doi:10.1007/s00604-022-05278-6(IF:5.833)
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[16] Cheng X, Li W, Zhao R, et al. The role of hippocampal niche exosomes in rat hippocampal neurogenesis after fimbria-fornix transection. J Biol Chem. 2021;296:100188. doi:10.1074/jbc.RA120.015561(IF:5.157)
[17] Cai X, Shi Y, Dai Y, Wang F, Chen X, Li X. Baicalin clears inflammation by enhancing macrophage efferocytosis via inhibition of RhoA/ROCK signaling pathway and regulating macrophage polarization. Int Immunopharmacol. 2022;105:108532. doi:10.1016/j.intimp.2022.108532(IF:4.932)
[18] Yan J, Bao H, Fan YJ, Jiang ZL, Qi YX, Han Y. Platelet-derived microvesicles promote endothelial progenitor cell proliferation in intimal injury by delivering TGF-β1. FEBS J. 2020;287(23):5196-5217. doi:10.1111/febs.15293(IF:4.392)
[19] Cao HH, Liu DY, Lai YC, et al. Inhibition of the STAT3 Signaling Pathway Contributes to the Anti-Melanoma Activities of Shikonin. Front Pharmacol. 2020;11:748. Published 2020 May 27. doi:10.3389/fphar.2020.00748(IF:4.225)
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