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Wako 125-05061 赖氨酰肽链内切酶说明书

发表于由

Wako 125-05061 赖氨酰肽链内切酶，MS级

Lysyl Endopeptidase®, Mass Spectrometry Grade (Lys-C) 

赖氨酰肽链内切酶，MS级

品牌：Wako
CAS No.：
储存条件：-20℃

纯度：–

质谱级赖氨酰肽链内切酶
Lysyl Endopeptidase

质谱级赖氨酰肽链内切酶

Lysyl Endopeptidase

本产品是质谱分析前处理时常用的蛋白分解酶即赖氨酰肽链内切酶，该酶可以特异性切除赖氨酸基团C末端的多肽，可用于蛋白测序分析和Lys-X化合物的酶合成。若同时使用赖氨酰肽链内切酶和胰酶，可更好地切断赖氨酸 基团的多肽，增加多肽的数量。产品已按照使用习惯做成小包装，是方便使用的冷冻干燥品。

来源：细菌

外观：冻干粉（包含2mmol/L Tris-HCl缓冲液，pH8）

活性：0.03～0.07AU/vial

分子量：27,000(琼脂糖过滤)，30,000（SDS-PAGE）

溶解性：溶于水或缓冲液

稳定性：溶解于pH值5.0-12.0的Tris缓冲液中，可在4℃稳定保存2年；在pH值6.0-11.0 30℃时能稳定保存，但温度超过50℃时不稳定。

最适pH值:9.0~9.5

等电点：6.9~7.0 

底物特异性：

可水解底物——Tos-Lys-OMe,Bz-Lys-NH2,Bz-Lys-pNA,Lys-pNA

不可水解底物——Bz-Arg-NH2,Bz-Arg-pNA,Arg-pNA

抑制剂：DFP，PMSF，TLCK

◆特点

●  高特异性、高蛋白质消化率、适用于蛋白质谱分析

●  提高裂解效率、增加肽段数量

●  根据使用量特意制备小包装，方便使用

◆应用

分别采用胰蛋白酶(Tp)、赖氨酰肽链内切酶(Lep) 和Tp与Lep联用进行胶内酶切的效果比较。

牛血清蛋白BSA 的条带(100ng) 通过SDS-PAGE 获得，然后分别用Tp、Lep和Lep+Tp进行酶切，再用MALDI-TOFMS法进行分析。

这些蛋白酶的实验效果见下表。

表 1：Tp、Lep和Lep+Tp的结果对照

这些结果表明Lep酶解的错误裂解率低。Tp酶解时加入Lep后，错误裂解率有所降低，同时，可以鉴定出更多的多肽。

Tp  Lep  Lep +Tp
裂解位点 精氨酸和赖氨酸的C端  赖氨酸的C端  精氨酸和赖氨酸的C端
错误裂解率(  错误裂解所占比例  ) 多(8%) 很少(0%) 少(3%) 
鉴定出的多肽数量  17 19 22

胰蛋白酶 (Tp)( 图 a) 和赖氨酰肽链内切酶 (Lep)+Tp ( 图 b) 酶切后的质谱结果对照图。

Lep+Tp酶切后，可以在m/z=2000时得到吸收峰，而单独的Tp酶切在m/z=2000时没有吸收峰。该结果表明Lep可以提高测序覆盖度。

( 数据由大阪医疗中心和妇婴健康研究所Y. Wada博士提供 )

赖氨酰肽链内切酶

赖氨酰肽链内切酶，最初由Masaki 等人从土壤细菌中分离得到。该酶可以特异性剪切赖氨酸残基C 末端和S-氨乙基半胱氨酸残基的肽键，用于蛋白测序和Lys-X 化合物的酶催化合成。该酶稳定性高，在4M 尿素或0.1%SDS 溶液中30℃孵育6小时之后，仍然拥有完整的生物活性。

外观 冻干粉（包含ca. 10% Tris-HCl buffer，pH 8） 活性 见包装
分子量 27,000（凝胶过滤）；30,000 (SDS-PAGE) 溶解性 易溶于水或缓冲液
最佳pH 9.0-9.5（酰胺酶的最佳活性pH） 等电点 6.9-7.0
抑制剂 DFP、PMSF、TLCK 来源 细菌
稳定性 　溶于pH 值5.0-12.0 的缓冲液中，可于4℃稳定保存。溶于pH值6.0-11.0的缓冲液中，可于30℃稳定保存，但是50℃及以上不稳定。
单位定义 　一单位酰胺酶(AU) 指在30℃ pH9.5 时每分钟产生1μmol对硝基苯胺所需的酶量。
底物特异性 　水解底物：Tos-Lys-Ome、Bz-Lys-NH2、Bz-Lys-pNA、Lys-pNA
　非水解底物：Bz-Arg-NH2、Bz-Arg-pNa、Arg-pNA

实验方法：

1. 试剂：

A．0.2 mol/L AMP 缓冲液，pH值9.5

溶解4.2g的2-氨基-2-甲基-1，3-丙二醇于150 mL的水中，加入1 mol/L HCl调pH值至9.5，再加水使体积至200 mL。

B．2.5 mmol/L 底物溶液

溶解22.6 mg的N-苯甲酰基-DL-精氨酰-4-硝基苯胺盐酸盐于20 mL水中。

C.  2 mmol/L Tris-HCl缓冲液，pH8

溶解0.24 mg的2-氨基-2-羟甲基-1,3-丙二醇于900mL水中，加入0.1 mol/L HCl调pH值至8，再加水使体积至1L。

D. 酶溶液

溶解1vial的赖氨酰肽链内切酶于1 mL的溶剂C中，可直接加入。

E．终止溶液

将55 mL水和45 mL乙酸混合均匀。

2. 步骤

试剂 检测样品 空白对照
A 2.6 mL 2.6 mL
B 0.3 mL 0.3 mL
30℃预培养5分钟
D 0.1 mL –
C – 0.1 mL
立即混合均匀，30℃预培养25分钟
E 1.0 mL 1.0 mL

3. 单位的定义

酰胺酶单位是指30℃ pH9.5时，每分钟产生1 umol对硝基苯胺的酶量。

AU/vial = [(a-b) / 25] × (1 / 9.62) × (4.0 / 0.1)

a.    检测样品中的吸光度

b.    空白对照中的吸光度

胶内酶切的实验操作流程

用聚硅酮处理的微量离心管和吸管端防止捕获任何蛋白。使用质谱分析用凝胶染色试剂盒，例如银染剂MS试剂盒（产品编号：299-58901）和负凝胶染色MS试剂盒（产品编号：293-57701）

1.    电泳分离蛋白质样品；

2.    从凝胶中切割蛋白质片断并放入微量离心管；

3.    使凝胶脱色（可使用质谱分析用凝胶染色试剂盒中的脱色溶液）；

4.    加入300 uL乙腈到试管里，搅拌器振荡30分钟；

5.    去除乙腈，用Parafilm膜覆盖微量离心管。

6.    在Parafilm膜上打出针孔，真空干燥15分钟；

7.    100 uL 10 mmol/L DTT溶解于100 mmol/L 碳酸氢铵，56℃恒温1小时。

8.    室温冷却后，用等量的50mM碘乙酰胺溶解于100 mmol/L 碳酸氢铵，暗处恒温45分钟并涡旋；

9.    用100 uL 100 mmol/L碳酸氢铵洗涤凝胶片段10分钟；

10.  用300 uL乙腈干燥凝胶片段15分钟；

11.  用100 uL 100 mmol/L碳酸氢铵溶胀凝胶片段15分钟；

12.  用300 uL乙腈再次干燥凝胶片段15分钟；

13.  去除液相，真空干燥凝胶片段15分钟；

14.  用100 uL赖氨酸内切酶溶液*在冰水浴中溶胀凝胶片段45分钟；

*赖氨酸内切酶稀释于50 mmol/L Tris-HCl  pH 8.5；

15.  去除100 uL赖氨酸内切酶溶液，将凝胶片段放在37℃ 10 uL 50 mmol/L Tris-HCl pH 8.5中过夜；

16.  加入50 uL 20mmol/L碳酸氢铵20分钟内振荡凝胶片段3次抽提多肽；

17.  加入5%甲酸/50%乙腈20分钟内振荡凝胶片段3次抽提多肽；

18.  如果需要用Speed Vac.浓缩多肽；

19.  用ZipTip脱盐和纯化多肽；

20.  如果需要用弱真空浓缩多肽至2 uL；

21.  加入基质进行质谱分析。

注意：根据细菌的生理和形态特征分类，产品来源为水解无色杆菌，但是最近细菌分类学将这种细菌鉴定为产酶溶杆菌。

保存：暗处-20℃保存

规格：20 ug×5vial

相关产品

产品编号 产品名称 规格
202-15951 Trypsin, from Porcine Pancreas, Mass Spectrometry   Grade猪胰腺胰蛋白酶质谱级别 5×20 μg
056-05921 Endoproteinase Asp-N, Sequencing grade胞内蛋白酶 Asp-N（测序级别） 2 μg
050-05941 Endoproteinase Glu-C, Sequencing grade胞内蛋白酶 Glu-C（测序级别） 50 μg
164-13982 V8 Protease [Endoproteinase Glu-C]V8蛋白酶 2 mg

赖氨酰肽链内切酶，MS级

产品编号：125-05061

内切糖苷酶产品

发表于由

内切糖苷酶

– 内切
糖苷酶从清洁制剂中的糖蛋白 – 高度稳定的酶切割完整的聚糖 – 不含甘油，NaCl或其他添加剂，如EDTA。
– 测试所有酶不存在蛋白水解或意外的糖苷活性

内切糖苷酶是用于分析糖蛋白的广泛使用的酶。这些酶从糖蛋白释放完整的聚糖，而外切糖苷酶释放单个单糖（即唾液酸，半乳糖，β-N-乙酰基葡糖胺，甘露糖等）。

PNGase F通常包含在酶组中，因为其切割完整的N-连接聚糖的活性相似，尽管它实际上是酰胺酶。它在天冬酰胺氨基酸和N-连接聚糖的壳二糖核心的个β-N-乙酰葡糖胺糖（GlcNAc）之间切割。Endo F酶和Endo H在和第二GlcNAc之间切割N-连接的聚糖，留下带电荷的残基，其有助于增加去糖基化蛋白质的溶解度，降低蛋白质聚集体沉淀的可能性。PNGase F切割所有N-连接的聚糖，而Endo H和Endo F酶切除特定类型的N-连接聚糖。

酶的这种分类还包括O-糖苷酶，其从丝氨酸或苏氨酸氨基酸中除去核心1O-连接的聚糖（Galβ1,3GalNAcα）。O-连接的聚糖通常含有在分支和线性连接中与半乳糖连接的另外的单糖，需要使用外切糖苷酶如唾液酸酶和半乳糖苷酶来除去额外的糖。

内切糖苷酶有以下几个品牌产品：

（一）qa-bio E-PNG01

PNGase F.

PNGase F从糖蛋白切割N-连接（天冬酰胺连接的）寡糖。

产品编号 – 酶的量
E-PNG01 – 60μLs¹

E -PNG01-20 – 20μLs¹

E -PNG01-200 – 200μls²（以前的E-PNG05）
   ¹包括缓冲液，变性剂和Triton- 
   X²仅含酶

¥ 1,313.38 – ¥ 9,806.55

PNGase F，肽N糖苷酶F，N-糖苷酶，N-聚糖酶

PNGase F从糖蛋白切割N-连接（天冬酰胺连接的）寡糖。该酶将天冬酰胺脱氨基成天冬氨酸，使寡糖保持完整。变性增加了解理速率。大多数天然蛋白质仍然可以*N-去糖基化，但必须增加孵育时间。酶在反应条件（37℃）下保持*活性至少96小时。PNGase F不会去除通常在植物糖蛋白上发现的含有α-（1,3） – 连接的核心岩藻糖的寡糖; 为此目的，使用肽N-糖苷酶A.

有许多替代酶可用于去除N-聚糖，特别是Endo F家族的酶和Endo H.这些酶切割寡糖核心中的两个N-乙酰氨基葡萄糖残基，产生截短的糖在天冬酰胺上残留一个N-乙酰氨基葡萄糖残基的分子。这留下带电荷的糖，其可以帮助将蛋白质保持在溶液中，所述溶液在用PNGase F去糖基化后沉淀，其去除了完整的寡糖。Endo F1切割高甘露糖和一些杂合型N-聚糖。Endo F2将去除双触角和高甘露糖（降低40倍速率）。Endo F3释放出triantennarry和岩藻糖基化的双触角N-聚糖。远藤H. 去除杂交或高甘露糖聚糖。

来源 Elizabethkingia miricola（是Chryseobacterium meningosepticum）

EC 3.5.1.52 
PDB 1PGS 
UniProt Q9XBM8

内容
PNG酶的F的20mM的Tris-HCl，pH 7.5中

包含20μL和60μL包装尺寸：
5x反应缓冲液7.5 – 250 mM磷酸钠，pH 7.5 
变性溶液 – 2％SDS，1Mβ-巯基乙醇
Triton X-100 – 15％溶液

比活力 > 25 U / mg

活性 5U / ml

分子量 36,000道尔顿

pH范围 6-10，适7.5

方案
1.在Eppendorf管中加入高达200μg的糖蛋白。用去离子水调节至35μl终体积。
2.加入10μl5x反应缓冲液7.5和2.5μl变性溶液。在100°C加热5分钟。
很酷。加入2.5μlTritonX-100并混合。
4.向反应中加入2.0μl酶。在37°C孵育3小时。

特异性切除所有天冬酰胺连接的复合物，杂交或高甘露糖寡糖，除非α（1-3）核心岩藻糖基化; 天冬酰胺必须在两个末端肽结合，Endo F游离

比活性定义为在37℃，pH7.5下在1分钟内催化从1微摩尔变性的RNase B释放N-连接的寡糖所需的酶量。通过SDS-PAGE监测切割（切割的RNase B迁移更快）。

储存在4°C储存酶。

 

 

（二）ludger

酶（内切和外切糖苷酶）包括LudgerZyme™（LZ）产品

内切糖苷酶：

从糖蛋白切割聚糖的酶

  • PNGase F（肽N糖苷酶F）

    E-PNG01

    PNGase F（QABio）。足以进行多达60次反应。

    0.3 U /60μl。试剂盒包括酶加反应缓冲液。

    酶学委员会编号：EC 3.5.1.52

  • E-PNG05

    PNGase F（QABio）。足以达到200次反应。

    1 U /200μl。仅含酶。

    酶学委员会编号：EC 3.5.1.52

  • 重组PNGase F.

    E-rPNG01

    重组PNGase F（QABio）。足以进行多达60次反应。

    0.3 U /60μl。试剂盒包括酶加反应缓冲液。

    酶学委员会编号：EC 3.5.1.52

  • LZ-rPNGaseF-kit *新产品*

    LudgerZyme重组PNGase F试剂盒（New England BioLabs）。足以进行多达150次反应。

    150μl。试剂盒包括酶加反应缓冲液。

    酶学委员会编号：EC 3.5.1.52

 

 

（三）neb 

P0704S

浓度

500,000单位/毫升

尺寸

15,000个单位

价格表

$ 180.00

 

P0704L

浓度

500,000单位/毫升

尺寸

75,000个单位

价格表

$ 718.00

PNGase F.

PNGase F是从糖蛋白中去除几乎所有N-连接的寡糖的有效的酶促方法。PNGase F是酰胺酶，其在高甘露糖，杂合和复合寡糖的内部GlcNAc和天冬酰胺残基之间切割。 

  • 通过SDS-PAGE和完整的ESI-MS测定，纯度≥95％
  • 非重组，没有可检测的内切糖苷酶F1，F2或F3污染
  • 储存在50％甘油中; 适活动和稳定性长达24个月
  • 可在天然或变性条件下使用
  • 优化糖蛋白的去糖基化; 使N-聚糖核心寡糖保持完整，适合进一步分析

 

 

（四）promega

PNGase F

Catalog number selected: V4831

PNGase F( 肽N- 糖苷酶F) 是一个重组糖苷酶，从Elizabethkingia miricola 克隆

  • 用于测定蛋白糖基化状态和位置
  • 可在N- 连糖蛋白的高甘露糖、杂合和复合寡糖部分内侧的 N- 乙酰葡萄糖胺(GlcNAc) 和天冬酰氨残基之间进行切割。
  • 不会去除常见植物糖蛋白上含有核心α-(1,3)- 岩藻糖连接的寡糖。
  • 产品以10u/μl浓度提供

 

PNGase F, 重组糖苷酶

PNGase F（肽 N-糖苷酶 F）是一个重组糖苷酶，从 Elizabeth-kingia miricola 克隆，并在大肠杆菌中过表达获得。PNGase F 的分子量为 36kDa,  可以在 N-连糖蛋白的高甘露糖、杂合和复合寡糖部分内侧的 N- 乙酰葡萄糖胺（GlcNAc）和天冬酰氨残基之间进行切割（图1）。PNGase F 不会去除常见植物糖蛋白上含有核心α-(1,3)- 岩藻糖连接的寡糖。

单位定义：一单位 PNGase F 指在 37℃可以 1 分钟内催化 1nm 变性核糖核酸酶 B（RNase B）去糖基化所需 PNGase F 的量。1 Promega 单位等于 1 IUB 毫单位。

分子量：PNGase F 分子量约为 36kDa 。

物理形态：PNGase F 溶于 20mM Tris-HCl（pH 7.5，25℃），50mM NaCl和 5mM EDTA缓冲液中，浓度为10,000u/ml。

应用：

• 蛋白是否被糖基化的特征

• 确定蛋白的糖基化位点

• 聚糖结构特征

• 蛋白运输

Cleavage specificity of PNGase F on N-Glycans.

Cleavage specificity of PNGase F on N-Glycans.

Recombinant PNGase F deglycosylates multiple substrates.

Recombinant PNGase F deglycosylates multiple substrates.

Schematic illustrating the use of PNGase F and mass spec analysis of N-glycosylation.

Schematic illustrating the use of PNGase F and mass spec analysis of N-glycosylation.

 

项目 部分＃ 尺寸 浓度

PNGase F.

 V483A 1×500个单位 10U /μl的

 

Collagenase I 胶原酶I型 蛋白酶 肽链内切酶

发表于由

Collagenase I 胶原酶I型 蛋白酶 肽链内切酶

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品描述

胶原酶（Collagenase）是一种蛋白酶，一种肽链内切酶，能够特异性的识别Pro-X-Gly-Pro序列（该序列高频率出现在胶原中，很少发现于其他蛋白中）并切割该序列中性氨基酸（X）和甘氨酸（Gly）之间的肽键。许多蛋白酶都能水解单链且变性的胶原多肽，但胶原酶是唯一一种可以降解具有三股超螺旋结构的天然胶原纤维的蛋白酶，这种胶原纤维广泛存在结缔组织内。

本品来源于溶组织梭菌（Clostridium histolyticum），是一种酶粗提物，不仅含有胶原酶（更准确的称法为梭菌蛋白酶A（clostridiopeptidase A）），能够降解天然胶原和网状纤维。还含有其他的一些蛋白酶、多糖酶、脂酶等，分别能够有效水解结缔组织和上皮组织细胞外基质内的其他蛋白，多糖和脂质，使得本品非常适用于组织消化。

目前商业化提供的细菌胶原酶主要根据胶原酶活性的差异，分为四种类型：胶原酶I型，II型，III型和IV型。

在应用上有所偏向：

1）胶原酶I（Type I Collagenase）：含有比较均匀的各种酶活力（包括胶原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、胰蛋白酶活性）。通常用作上皮细胞、肝、肺、脂肪和肾上腺组织细胞的制备；

2）胶原酶II（Type II Collagenase）：含有更高的梭菌蛋白酶活性，通常用于心脏、骨、肌肉、胸腺和软骨等组织来源细胞的制备；

3）胶原酶III（Type III Collagenase）：含有较低的蛋白酶活性，常用于乳腺细胞的制备；

4）胶原酶IV（Type IV Collagenase）：含有低胰酶活性，通常用于胰岛细胞的制备，或者需要维持受体完整性的细胞制备实验。

本品为I型胶原酶，≥250 U/mg solid，可用于上皮、肝、肺、脂肪和肾上腺等组织和细胞的解离。

 

酶活力单位定义

在37℃，pH7.5 的条件下，5 h内水解胶原产生相当于1 µM L-亮氨酸的酶量定义为1个酶活力单位。

 

运输和保存方法

室温运输。4℃避光保存，2年有效。储存液-20℃避光冻存。

 

注意事项

  1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  2. 本产品仅作科研用途!

 

使用方法

1. 胶原酶储存液的配制

向每管100 mg的胶原酶中加入1 mL的含Ca2+、Mg2+的HBSS（Hank’s平衡盐溶液，含Ca2+、Mg2+），轻轻旋涡震荡使其充分溶解，制备成100 mg/mL（即100×）的储存液。然后用低蛋白结合性的0.22 μm的滤膜过滤除菌，分装成小份量，然后于-20℃避光冻存。

使用前于冰上解冻，避免反复冻融。其用于组织和细胞分散的常用浓度为：0.5-2.5 mg/mL，用于软骨消化的常用浓度为1-2 mg/mL，需要根据特定的实验条件或者参考相应的文献资料确定所需的最佳工作浓度。

2．组织的分离

1）使用无菌手术刀或剪刀将组织切成3-4 mm大小的组织块；

2）利用含Ca2+、Mg2+的HBSS洗涤组织块数次；

3）加入足量的含Ca2+、Mg2+的HBSS，使其浸没组织块，并加入胶原酶至需要工作浓度；

4）于37℃孵育4-18 h。消化时使用水平摇床以及用3 mM的CaCl2补充消化可以提高消化效率。

5） 已分散开的细胞可使用不锈钢或尼龙网筛筛得，收集备用。未完全解离的组织另外添加适量的新鲜胶原酶工作液于37℃继续孵育；

6）利用不含胶原酶的HBSS洗涤收集的细胞数次；

7）细胞培养液重悬上述细胞，利用自动细胞计数器或其他方法计算活细胞密度。

8）于细胞培养皿上利用合适细胞培养基接种细胞。

3． 器官灌注

1）向37℃预热的含Ca2+、Mg2+的HBSS中加入胶原酶，另添加3 mM的CaCl2有助于提高分离效率；

2）按照已优化的速率对相应的器官灌注胶原酶工作液；

3）将上述过程中回收的灌注液流经不锈钢或尼龙网筛，从而将已解离的细胞或小片段组织块与较大团块分离开来，未充分解离的组织需利用新鲜胶原酶工作液于37℃进一步孵育；

4）利用不含胶原酶的HBSS洗涤收集的细胞数次；

5）细胞培养液重悬上述细胞，利用自动细胞计数器或其他方法计算活细胞密度。

6）于细胞培养皿上利用合适细胞培养基接种细胞。

HB221202

 

Q：只用于分离细胞，选哪种胶原酶合适？

A：对于组织解离，常使用粗制胶原酶制剂，例如弹性蛋白酶，胰蛋白酶或木瓜蛋白酶等；对于胶原蛋白结构和生物合成研究，常使用更高纯度的胶原酶制剂，不含其他蛋白水解活性。

Q：要把肿瘤细胞分散成单个细胞做流式检测，选择哪一种胶原酶比较适合？需要区分肿瘤发生的部位吗？后续用来做流式，不同消化强度对细胞表面抗原的影响大吗？

A：会影响细胞表面抗原，可以选择对抗原影响较小的胶原酶Ⅲ、胶原酶Ⅳ。

Q：胶原酶使用会受到血清影响吗？

A：胶原不会受到培养细胞所用的血清影响。

Q：胶原酶的使用会受哪些抑制剂影响？

A：胶原酶的抑制剂有 EDTA  、EGTA 等；二是重金属离子（Hg2+,Pb2+,Cd2+）；还有一些化学试剂如 Cysteine、 histidine、DTT、2-mercaptoethanol、o-phenanthroline 等对胶原酶也有抑制作用。

Q：用 PBS 溶解可以吗？用什么工作液浓度溶解？

A：建议在 Hank’s，Earle’s 或者其他平衡盐溶液中溶解，推荐使用工作浓度 0.05 % ~0.5 % (w/v)。

Q：实验过程中消化作用不佳

A：(1)如果是酶活不强或钙离子不足导致，应在低温干燥条件下储存胶原酶，胶原酶溶液分装后冻存(2)如果是钙离子不足导致，应将胶原酶溶液中钙离子浓度设置为 5mM。

Q：使用过程中出现细胞死亡

A：（1）如果是蛋白酶过量，应减少蛋白酶接触时间或是加入白蛋白或灭活血清（2）如果是 pH 改变应使用缓冲液（如 HBSS）；经常检查并重新调节 pH（3）如果氧气太少，应给消化液通无菌空气

Q： 实验中出现细胞受损怎么办？

A： 如果是蛋白酶过多导致，应减少蛋白酶用量或是加入白蛋白或灭活血清

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[9] Zhan T, Cui S, Shou H, et al. Transcriptome aberration in mice uterus associated with steroid hormone response and inflammation induced by dioxybenzone and its metabolites. Environ Pollut. 2021;286:117294. doi:10.1016/j.envpol.2021.117294(IF:8.071)
[10] Zhang W, Wang H, Yuan Z, et al. Moderate mechanical stimulation rescues degenerative annulus fibrosus by suppressing caveolin-1 mediated pro-inflammatory signaling pathway. Int J Biol Sci. 2021;17(5):1395-1412. Published 2021 Apr 3. doi:10.7150/ijbs.57774(IF:6.582)
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[12] Zhao Z, Liang M, He H, et al. Ovalbumin-Induced Allergic Inflammation Diminishes Cross-Linked Collagen Structures in an Experimental Rabbit Model of Corneal Cross-Linking. Front Med (Lausanne). 2022;9:762730. Published 2022 May 26. doi:10.3389/fmed.2022.762730(IF:5.093)
[13] Tao X, Chen Q, Li N, et al. Serotonin-RhoA/ROCK axis promotes acinar-to-ductal metaplasia in caerulein-induced chronic pancreatitis. Biomed Pharmacother. 2020;125:109999. doi:10.1016/j.biopha.2020.109999(IF:4.545)
[14] Liu M, Yang Y, Kang W, et al. Berberine inhibits pancreatic intraepithelial neoplasia by inhibiting glycolysis via the adenosine monophosphate -activated protein kinase pathway. Eur J Pharmacol. 2022;915:174680. doi:10.1016/j.ejphar.2021.174680(IF:4.432)

产品描述

胶原酶（Collagenase）是一种蛋白酶，一种肽链内切酶，能够特异性的识别Pro-X-Gly-Pro序列（该序列高频率出现在胶原中，很少发现于其他蛋白中）并切割该序列中性氨基酸（X）和甘氨酸（Gly）之间的肽键。许多蛋白酶都能水解单链且变性的胶原多肽，但胶原酶是唯一一种可以降解具有三股超螺旋结构的天然胶原纤维的蛋白酶，这种胶原纤维广泛存在结缔组织内。

本品来源于溶组织梭菌（Clostridium histolyticum），是一种酶粗提物，不仅含有胶原酶（更准确的称法为梭菌蛋白酶A（clostridiopeptidase A）），能够降解天然胶原和网状纤维。还含有其他的一些蛋白酶、多糖酶、脂酶等，分别能够有效水解结缔组织和上皮组织细胞外基质内的其他蛋白，多糖和脂质，使得本品非常适用于组织消化。

目前商业化提供的细菌胶原酶主要根据胶原酶活性的差异，分为四种类型：胶原酶I型，II型，III型和IV型。

在应用上有所偏向：

1）胶原酶I（Type I Collagenase）：含有比较均匀的各种酶活力（包括胶原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、胰蛋白酶活性）。通常用作上皮细胞、肝、肺、脂肪和肾上腺组织细胞的制备；

2）胶原酶II（Type II Collagenase）：含有更高的梭菌蛋白酶活性，通常用于心脏、骨、肌肉、胸腺和软骨等组织来源细胞的制备；

3）胶原酶III（Type III Collagenase）：含有较低的蛋白酶活性，常用于乳腺细胞的制备；

4）胶原酶IV（Type IV Collagenase）：含有低胰酶活性，通常用于胰岛细胞的制备，或者需要维持受体完整性的细胞制备实验。

本品为I型胶原酶，≥250 U/mg solid，可用于上皮、肝、肺、脂肪和肾上腺等组织和细胞的解离。

 

酶活力单位定义

在37℃，pH7.5 的条件下，5 h内水解胶原产生相当于1 µM L-亮氨酸的酶量定义为1个酶活力单位。

 

运输和保存方法

室温运输。4℃避光保存，2年有效。储存液-20℃避光冻存。

 

注意事项

  1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  2. 本产品仅作科研用途!

 

使用方法

1. 胶原酶储存液的配制

向每管100 mg的胶原酶中加入1 mL的含Ca2+、Mg2+的HBSS（Hank’s平衡盐溶液，含Ca2+、Mg2+），轻轻旋涡震荡使其充分溶解，制备成100 mg/mL（即100×）的储存液。然后用低蛋白结合性的0.22 μm的滤膜过滤除菌，分装成小份量，然后于-20℃避光冻存。

使用前于冰上解冻，避免反复冻融。其用于组织和细胞分散的常用浓度为：0.5-2.5 mg/mL，用于软骨消化的常用浓度为1-2 mg/mL，需要根据特定的实验条件或者参考相应的文献资料确定所需的最佳工作浓度。

2．组织的分离

1）使用无菌手术刀或剪刀将组织切成3-4 mm大小的组织块；

2）利用含Ca2+、Mg2+的HBSS洗涤组织块数次；

3）加入足量的含Ca2+、Mg2+的HBSS，使其浸没组织块，并加入胶原酶至需要工作浓度；

4）于37℃孵育4-18 h。消化时使用水平摇床以及用3 mM的CaCl2补充消化可以提高消化效率。

5） 已分散开的细胞可使用不锈钢或尼龙网筛筛得，收集备用。未完全解离的组织另外添加适量的新鲜胶原酶工作液于37℃继续孵育；

6）利用不含胶原酶的HBSS洗涤收集的细胞数次；

7）细胞培养液重悬上述细胞，利用自动细胞计数器或其他方法计算活细胞密度。

8）于细胞培养皿上利用合适细胞培养基接种细胞。

3． 器官灌注

1）向37℃预热的含Ca2+、Mg2+的HBSS中加入胶原酶，另添加3 mM的CaCl2有助于提高分离效率；

2）按照已优化的速率对相应的器官灌注胶原酶工作液；

3）将上述过程中回收的灌注液流经不锈钢或尼龙网筛，从而将已解离的细胞或小片段组织块与较大团块分离开来，未充分解离的组织需利用新鲜胶原酶工作液于37℃进一步孵育；

4）利用不含胶原酶的HBSS洗涤收集的细胞数次；

5）细胞培养液重悬上述细胞，利用自动细胞计数器或其他方法计算活细胞密度。

6）于细胞培养皿上利用合适细胞培养基接种细胞。

HB221202

 

Q：只用于分离细胞，选哪种胶原酶合适？

A：对于组织解离，常使用粗制胶原酶制剂，例如弹性蛋白酶，胰蛋白酶或木瓜蛋白酶等；对于胶原蛋白结构和生物合成研究，常使用更高纯度的胶原酶制剂，不含其他蛋白水解活性。

Q：要把肿瘤细胞分散成单个细胞做流式检测，选择哪一种胶原酶比较适合？需要区分肿瘤发生的部位吗？后续用来做流式，不同消化强度对细胞表面抗原的影响大吗？

A：会影响细胞表面抗原，可以选择对抗原影响较小的胶原酶Ⅲ、胶原酶Ⅳ。

Q：胶原酶使用会受到血清影响吗？

A：胶原不会受到培养细胞所用的血清影响。

Q：胶原酶的使用会受哪些抑制剂影响？

A：胶原酶的抑制剂有 EDTA  、EGTA 等；二是重金属离子（Hg2+,Pb2+,Cd2+）；还有一些化学试剂如 Cysteine、 histidine、DTT、2-mercaptoethanol、o-phenanthroline 等对胶原酶也有抑制作用。

Q：用 PBS 溶解可以吗？用什么工作液浓度溶解？

A：建议在 Hank’s，Earle’s 或者其他平衡盐溶液中溶解，推荐使用工作浓度 0.05 % ~0.5 % (w/v)。

Q：实验过程中消化作用不佳

A：(1)如果是酶活不强或钙离子不足导致，应在低温干燥条件下储存胶原酶，胶原酶溶液分装后冻存(2)如果是钙离子不足导致，应将胶原酶溶液中钙离子浓度设置为 5mM。

Q：使用过程中出现细胞死亡

A：（1）如果是蛋白酶过量，应减少蛋白酶接触时间或是加入白蛋白或灭活血清（2）如果是 pH 改变应使用缓冲液（如 HBSS）；经常检查并重新调节 pH（3）如果氧气太少，应给消化液通无菌空气

Q： 实验中出现细胞受损怎么办？

A： 如果是蛋白酶过多导致，应减少蛋白酶用量或是加入白蛋白或灭活血清

[1] Sun X, He X, Zhang Y, et al. Inflammatory cell-derived CXCL3 promotes pancreatic cancer metastasis through a novel myofibroblast-hijacked cancer escape mechanism. Gut. 2022;71(1):129-147. doi:10.1136/gutjnl-2020-322744(IF:23.059)
[2] Tan T, Hu H, Wang H, et al. Bioinspired lipoproteins-mediated photothermia remodels tumor stroma to improve cancer cell accessibility of second nanoparticles. Nat Commun. 2019;10(1):3322. Published 2019 Jul 25. doi:10.1038/s41467-019-11235-4(IF:11.878)
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[4] Yu Q, Han F, Yuan Z, et al. Fucoidan-loaded nanofibrous scaffolds promote annulus fibrosus repair by ameliorating the inflammatory and oxidative microenvironments in degenerative intervertebral discs. Acta Biomater. 2022;148:73-89. doi:10.1016/j.actbio.2022.05.054(IF:8.947)
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[7] Zhang L, Shi J, Du D, et al. Ketogenesis acts as an endogenous protective programme to restrain inflammatory macrophage activation during acute pancreatitis. EBioMedicine. 2022;78:103959. doi:10.1016/j.ebiom.2022.103959(IF:8.143)
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[9] Zhan T, Cui S, Shou H, et al. Transcriptome aberration in mice uterus associated with steroid hormone response and inflammation induced by dioxybenzone and its metabolites. Environ Pollut. 2021;286:117294. doi:10.1016/j.envpol.2021.117294(IF:8.071)
[10] Zhang W, Wang H, Yuan Z, et al. Moderate mechanical stimulation rescues degenerative annulus fibrosus by suppressing caveolin-1 mediated pro-inflammatory signaling pathway. Int J Biol Sci. 2021;17(5):1395-1412. Published 2021 Apr 3. doi:10.7150/ijbs.57774(IF:6.582)
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[12] Zhao Z, Liang M, He H, et al. Ovalbumin-Induced Allergic Inflammation Diminishes Cross-Linked Collagen Structures in an Experimental Rabbit Model of Corneal Cross-Linking. Front Med (Lausanne). 2022;9:762730. Published 2022 May 26. doi:10.3389/fmed.2022.762730(IF:5.093)
[13] Tao X, Chen Q, Li N, et al. Serotonin-RhoA/ROCK axis promotes acinar-to-ductal metaplasia in caerulein-induced chronic pancreatitis. Biomed Pharmacother. 2020;125:109999. doi:10.1016/j.biopha.2020.109999(IF:4.545)
[14] Liu M, Yang Y, Kang W, et al. Berberine inhibits pancreatic intraepithelial neoplasia by inhibiting glycolysis via the adenosine monophosphate -activated protein kinase pathway. Eur J Pharmacol. 2022;915:174680. doi:10.1016/j.ejphar.2021.174680(IF:4.432)

ludger糖苷内切酶

发表于由

 

 

 

ludger糖苷内切酶

Endoglycosidases:

糖苷内切酶是从糖蛋白上切割完整聚糖的酶。这些酶在不含甘油，NaCl或其他添加剂（如EDTA）的清洁制剂中高度稳定。测试所有酶是否没有蛋白水解或意外的糖苷活性。

糖苷内切酶是糖蛋白分析中使用广泛的酶。这些酶从糖蛋白中释放出完整的聚糖，而糖苷外切酶则释放出单个的单糖（即唾液酸，半乳糖，β-N-乙酰氨基葡糖胺，甘露糖等）。

尽管PNGase F实际上是酰胺酶，但由于其裂解完整的N-连接聚糖的相似活性，通常将其包括在酶组中。它在天冬酰胺氨基酸和N-连接聚糖的壳二糖核心的一个β-N-乙酰氨基葡萄糖胺糖（GlcNAc）之间裂解。Endo F酶和Endo H在一个和第二个GlcNAc之间裂解N-连接的聚糖，留下带电荷的残基，这有助于增加去糖基化蛋白质的溶解度，从而降低蛋白质聚集体沉淀的可能性。PNGase F裂解所有N-连接的聚糖，而Endo H和Endo F酶则去除特定类型的N-连接的聚糖。

O-糖苷酶也包括在这种酶的分类中，其从丝氨酸或苏氨酸氨基酸中去除了核心1 O-连接的聚糖（Gal-β（1-3）GalNAc- α）。通常，O-连接的聚糖含有在分支和线性连接中均与半乳糖连接的另外的单糖，需要使用外切糖苷酶，例如唾液酸酶和半乳糖苷酶来除去另外的糖。

 

  • PNGase F（肽N糖苷酶F）和重组PNGase F

     

    PNGase F适用于从糖蛋白和糖肽中释放所有类型（高甘露糖，杂合和复杂）的N-连接聚糖。PNGase F不会去除植物糖蛋白上常见的含有α（1-3）连接的核心岩藻糖的寡糖。

     

    下表列出并比较了Ludger提供的PNGase F酶试剂盒。

    LZ-rPNGaseF-试剂盒

    LudgerZyme重组PNGase F试剂盒（新英格兰生物实验室）。

    从Elizabethkingia miricola在大肠杆菌

    产品指南

    • 零件号
    • LZ-rPNGaseF-试剂盒
    • 酶量
    • 150微升

     

    试剂盒包括酶加反应缓冲液。

    足以进行多达150个反应。

     

    E-PNG01

    从伊丽莎白女王脑膜炎病菌

    查看产品文档：规格表/ CofA / MSDS

    • 零件号
    • E-PNG01
    • 酶量
    • 0.3 U / 60微升

     

    试剂盒包括酶加反应缓冲液。

    足以进行多达60个反应。

     

    E-PNG01-200     *以前为E-PNG05

    从伊丽莎白女王脑膜炎病菌

    查看产品文档：规格表/ CofA / MSDS

    • 零件号
    • E-PNG01-200
    • 酶量
    • 1 U / 200微升

     

    仅包含酶。

    足以进行多达200个反应。

     

    E-rPNG01

    重组PNG酶f起Elizabethkingia miricola。

    查看产品文档：规格表/ CofA / MSDS

    • 零件号
    • E-rPNG01
    • 酶量
    • 0.3 U / 60微升

     

    试剂盒包括酶加反应缓冲液。

    足以进行多达60个反应。

  • 糖苷内切酶F1

    E-EF01

    Endo F1从肽和蛋白质中裂解出高甘露糖和一些杂合型N-聚糖。

    从重组基因Elizabethkingia miricola在大肠杆菌

     

    查看产品文档：规格表/ CofA / MSDS

    • 零件号
    • E-EF01
    • 酶量
    • 1 U / 60微升

     

    试剂盒包括酶加反应缓冲液。

    足以进行多达60个反应。

  • 糖苷内切酶F2

    E-EF02

    从肽和蛋白质中选择性释放双天线和高甘露糖（以40倍的降低速率）聚糖。

    从重组基因Elizabethkingia miricola在大肠杆菌

     

    查看产品文档：规格表/ CofA / MSDS

    • 零件号
    • E-EF02
    • 酶量
    • 0.3 U / 60微升

     

    试剂盒包括酶加反应缓冲液。

    足以进行多达60个反应。

  • 糖苷内切酶F3

    E-EF03

    从肽和蛋白质中选择性释放triantennarry和α（1-6）岩藻糖基化双触角N-聚糖。

    从重组基因Elizabethkingia miricola在大肠杆菌

     

    查看产品文档：规格表/ CofA / MSDS

    • 零件号
    • E-EF03
    • 酶量
    • 0.33 U / 60微升

     

    试剂盒包括酶加反应缓冲液。

    足以进行多达60个反应。

  • 糖苷内切酶H

    E-EHO2

    Endo H裂解天冬酰胺连接的或高甘露糖寡糖，但不裂解复杂寡糖。

    从重组基因链霉菌plicatus的在大肠杆菌

     

    查看产品文档：规格表/ CofA / MSDS

    • 零件号
    • E-EH02
    • 酶量
    • 0.3 U / 60微升

     

    试剂盒包括酶加反应缓冲液。

    足以进行多达60个反应。

  • O-糖苷酶

    E-G001

    仅切割连接至糖蛋白或糖肽丝氨酸或苏氨酸残基的未取代的Gal-β（1-3）GalNAc- α二糖。

    重组肺炎链球菌在大肠杆菌中。

     

    查看产品文档：规格表/ CofA / MSDS

    • 零件号
    • E-G001
    • 酶量
    • 75 mU / 60 µL

     

    试剂盒包括酶加反应缓冲液。

    足以进行多达60个反应。

  • 酶促碳释放试剂盒

    KE-DG01

    该试剂盒包括使糖蛋白去糖基化，去除所有N-连接的寡糖和许多O-连接的糖所需的酶和缓冲液。

    这些酶分别包装在20微升的小瓶中。与我们的酶混合物KE-DGMX相比，这使研究人员可以灵活地更充分地表征与其糖蛋白相连的聚糖。

     

    查看产品文档：规格表/ CofA / MSDS

    • 零件号
    • KE-DG01
    • 酶量
    • 每种酶20 µL

     

    20微升的各在分开的小瓶下列酶的：PNG酶F（Elizabethkingia脑膜），O糖苷酶（肺炎链球菌），唾液酸酶（节杆菌），β半乳糖苷酶（肺炎链球菌），葡萄糖苷酶（肺炎链球菌）。

     

    试剂盒包括酶，反应缓冲液和牛胎球蛋白（对照）。

    每种酶多可进行20个反应。

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  • 酶促DeGlycoMx试剂盒

    KE-DGMX

    此用于蛋白质脱糖基化的试剂盒包括我们的DeGlycoMx，它是酶的预混混合物，可通过10次反应（多每次反应50微克蛋白质）从0.5 mg糖蛋白中去除所有N-连接的寡糖和大多数O-连接的糖。

    该试剂盒易于使用且有效：将2 µL DeGlycoMx酶添加到变性样品和随附的缓冲液中，并在37°C孵育3小时。

     

    查看产品文档：规格表/ CofA / MSDS

    • 零件号
    • KE-DGMX
    • 酶量
    • 20 µL预混料

     

    酶可以被设置为一个20μL预混鸡尾酒包括：PNG酶F（Elizabethkingia脑膜），O糖苷酶（肺炎链球菌），唾液酸酶（节杆菌），β半乳糖苷酶（肺炎链球菌），葡萄糖苷酶（肺炎链球菌）。

     

    试剂盒包括酶加反应缓冲液。

    足以进行多达20个反应。

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  • 内β-半乳糖苷酶

    E-XBG01

    内-β-半乳糖苷酶在无支链，重复的聚-N-乙酰基乳糖胺结构中裂解内部β（1-4）半乳糖键。

    从重组基因脆弱拟杆菌在大肠杆菌。

     

    查看产品文档：规格表/ CofA / MSDS

    • 零件号
    • E-XBG01
    • 酶量
    • 0.9 U / 60微升

     

    试剂盒包括酶加反应缓冲液。

    足以进行多达60个反应。

  • LudgerZyme神经酰胺糖苷酶试剂盒

    LZ-CER-HM-KIT

    神经酰胺聚糖酶通过切割ß-糖基键来使多种糖鞘脂去糖基化。

    从广ir

     

    产品总览

    产品指南

    稳定性证书

    • 零件号
    • LZ-CER-HM-KIT
    • 酶量
    • 55微升

     

    试剂盒包括酶，反应缓冲液和GM1标准品。

    多可进行25次反应。

 

Endo S 糖苷内切酶S

发表于由

Endo S 糖苷内切酶S

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

Endo S，中文名是糖苷内切酶S， 基因来源酿脓链球菌（Streptococcus pyogenes），是一种高度特异性糖苷内切酶，可以从野生型 IgG 重链的壳二糖核心结构之间切除N-连接糖。本产品纯度在95%以上，活性高，稳定性好，无糖苷外切酶污染，无蛋白水解活性。为方便后续操作，带有组氨酸（His）标签，易于从反应中去除。

 

产品组分

组分编号

组分名称

产品编号/规格

20413JP80

20413JP90

20413-A

Endo S

1000 U

5×1000 U

20413-B

10×Buffer

1 mL

5×1 mL

 

产品性质

中文别名（Chinese synonym）

糖苷内切酶S

英文别名（English synonym）

Endo S

来源（Source）

大肠杆菌表达

纯度（Purity）

经SDS-PAGE检测，纯度> 95%

储存溶液（Buffer）

比活性（Specific activity）

PBS pH 7.5

8,000 U/mg

酶活单位定义（Unit Definition）

一个单位的定义是在总反应体积为10 μL的情况下，在37 °C反应1小时，能将5 μg天然小鼠IgG中的95%的N-连接糖去除。

 

运输与保存方法

冰袋运输；-20 ℃保存；有效期 12个月。

 

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2）本产品仅作科研用途！

 

反应体系

组分

体积 (μL)

IgG

V

Endo S

1

10×Buffer

1

H2O

to 10

【注】：37 ℃孵育1 h后跑胶，上样量为2-3 μg，对照组为原蛋白。

实验示例

Endo S 糖苷内切酶S 

IgG在Endo S酶条件下的酶切电泳图

泳道-：对照，未加Endo S酶；泳道+：加Endo S酶。

 

HB220128

Endo S 糖苷内切酶S

暂无内容

Endo S 糖苷内切酶S

暂无内容

Endo S，中文名是糖苷内切酶S， 基因来源酿脓链球菌（Streptococcus pyogenes），是一种高度特异性糖苷内切酶，可以从野生型 IgG 重链的壳二糖核心结构之间切除N-连接糖。本产品纯度在95%以上，活性高，稳定性好，无糖苷外切酶污染，无蛋白水解活性。为方便后续操作，带有组氨酸（His）标签，易于从反应中去除。

 

产品组分

组分编号

组分名称

产品编号/规格

20413JP80

20413JP90

20413-A

Endo S

1000 U

5×1000 U

20413-B

10×Buffer

1 mL

5×1 mL

 

产品性质

中文别名（Chinese synonym）

糖苷内切酶S

英文别名（English synonym）

Endo S

来源（Source）

大肠杆菌表达

纯度（Purity）

经SDS-PAGE检测，纯度> 95%

储存溶液（Buffer）

比活性（Specific activity）

PBS pH 7.5

8,000 U/mg

酶活单位定义（Unit Definition）

一个单位的定义是在总反应体积为10 μL的情况下，在37 °C反应1小时，能将5 μg天然小鼠IgG中的95%的N-连接糖去除。

 

运输与保存方法

冰袋运输；-20 ℃保存；有效期 12个月。

 

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2）本产品仅作科研用途！

 

反应体系

组分

体积 (μL)

IgG

V

Endo S

1

10×Buffer

1

H2O

to 10

【注】：37 ℃孵育1 h后跑胶，上样量为2-3 μg，对照组为原蛋白。

实验示例

Endo S 糖苷内切酶S 

IgG在Endo S酶条件下的酶切电泳图

泳道-：对照，未加Endo S酶；泳道+：加Endo S酶。

 

HB220128

Endo S 糖苷内切酶S

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Endo S 糖苷内切酶S

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AapCas12b核酸酶内切酶(AapCas12b Nuclease)(10 μM) C2c1内切酶

发表于由

AapCas12b核酸酶内切酶(AapCas12b Nuclease)(10 μM) C2c1内切酶

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品简介

AapCas12b核酸酶（又名C2c1）是由tracrRNA:crRNA（或sgRNA）介导的DNA核酸内切酶，来源于嗜酸耐热菌Alicyclobacillus acidophilus，在靶标双链DNA存在PAM（TTN）序列的情况下，特异地剪切靶标双链DNA，使DNA双链断裂并生成粘性末端。AapCas12b可不依赖PAM序列特异地剪切单链DNA靶标。双链或单链DNA靶标均能激活AapCas12b的反式剪切活性（即旁路剪切活性/附属剪切活性），即当AapCas12b酶与sgRNA、靶标DNA结合形成三元复合物后，便会被激活针对非特异序列ssDNA的反式剪切活性，将体系中的任意序列ssDNA切碎。AapCas12b最佳剪切反应温度为60℃，比AacCas12b更耐高温，适用于与LAMP联用，开发恒温扩增/CRISPR-Cas检测体系。

 

产品信息

货号

14808ES65/14808ES80

规格

100 pmol/1,000 pmol

活性定义

在总体积为20 μL含有1×反应Buffer的反应体系中，60℃下，1 min内剪切1 pmol ssDNA探针所需的Cas12b酶量定义为1 U。

 

组分信息

组分编号

产品名称

14808ES65

14808ES80

14808-A

AapCas12b Nuclease (10 μM)

10 μL

100 μL

14808-B

10×Reaction buffer

1 mL

1 mL

 

储存条件

-25~-15℃保存，有效期2年。

 

使用说明

1.在RNase free离心管中配制如下混合液：

组分

体积 (μL)

10×Reaction buffer

2

AapCas12b Nuclease (10 μM)

0.5

sgRNA (10 μM)

0.5

Target DNA (1 μM)*

0.5

DEPC水

Up to 20

*：顺式剪切体系中Target DNA可为ssDNA或带PAM序列的dsDNA。

2.60℃反应 30 min~1 h，85℃灭活5 min，核酸电泳分析顺式剪切产物。

 

注意事项

1. 本产品仅作科研用途。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

 

Ver.CN20231127

 

AapCas12b核酸酶内切酶(AapCas12b Nuclease)(10 μM) C2c1内切酶

暂无内容

AapCas12b核酸酶内切酶(AapCas12b Nuclease)(10 μM) C2c1内切酶

暂无内容

产品简介

AapCas12b核酸酶（又名C2c1）是由tracrRNA:crRNA（或sgRNA）介导的DNA核酸内切酶，来源于嗜酸耐热菌Alicyclobacillus acidophilus，在靶标双链DNA存在PAM（TTN）序列的情况下，特异地剪切靶标双链DNA，使DNA双链断裂并生成粘性末端。AapCas12b可不依赖PAM序列特异地剪切单链DNA靶标。双链或单链DNA靶标均能激活AapCas12b的反式剪切活性（即旁路剪切活性/附属剪切活性），即当AapCas12b酶与sgRNA、靶标DNA结合形成三元复合物后，便会被激活针对非特异序列ssDNA的反式剪切活性，将体系中的任意序列ssDNA切碎。AapCas12b最佳剪切反应温度为60℃，比AacCas12b更耐高温，适用于与LAMP联用，开发恒温扩增/CRISPR-Cas检测体系。

 

产品信息

货号

14808ES65/14808ES80

规格

100 pmol/1,000 pmol

活性定义

在总体积为20 μL含有1×反应Buffer的反应体系中，60℃下，1 min内剪切1 pmol ssDNA探针所需的Cas12b酶量定义为1 U。

 

组分信息

组分编号

产品名称

14808ES65

14808ES80

14808-A

AapCas12b Nuclease (10 μM)

10 μL

100 μL

14808-B

10×Reaction buffer

1 mL

1 mL

 

储存条件

-25~-15℃保存，有效期2年。

 

使用说明

1.在RNase free离心管中配制如下混合液：

组分

体积 (μL)

10×Reaction buffer

2

AapCas12b Nuclease (10 μM)

0.5

sgRNA (10 μM)

0.5

Target DNA (1 μM)*

0.5

DEPC水

Up to 20

*：顺式剪切体系中Target DNA可为ssDNA或带PAM序列的dsDNA。

2.60℃反应 30 min~1 h，85℃灭活5 min，核酸电泳分析顺式剪切产物。

 

注意事项

1. 本产品仅作科研用途。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

 

Ver.CN20231127

 

AapCas12b核酸酶内切酶(AapCas12b Nuclease)(10 μM) C2c1内切酶

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AapCas12b核酸酶内切酶(AapCas12b Nuclease)(10 μM) C2c1内切酶

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Cas9核酸内切酶 Cas9 Nuclease CRISPR/Cas9基因编辑

发表于由

Cas9核酸内切酶 Cas9 Nuclease CRISPR/Cas9基因编辑

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品简介

 

Cas9 Nuclease来源于野生型酿脓链球菌S. pyogenes，是依赖RNA介导的内切核酸酶，可以特异地切割双链DNA（在DNA PAM存在的情况下，也可以切割单链DNA或单链RNA）。Cas9切割位点位于目标序列（target sequence）内，离PAM（NGG）区3个碱基。本产品经过密码子优化及核定位信号（NLS）设计，由大肠杆菌重组表达而来，编辑效率高，可用于细胞（造血干细胞、T细胞等）的基因修饰，也可用于分子诊断，检测病原体等。

 

产品信息

 

货号

14701ES60 / 14701ES76 / 14701ES03

规格

100 μg / 500 μg / 1 mg

来源

大肠杆菌重组表达来源于Streptococcus pyogenes的Cas9基因

酶保存液

30 mM Tris-HCl, 300 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 50% Glycerol, pH 7.4

浓度

10 mg/mL

纯度

≥95%

标签

His

 

组分信息

 

组分名称

14701ES60

14701ES76

14701ES03

Cas9 Nuclease（10 mg/mL）

10 μL

50 μL

100 μL

 

产品应用

 

基于CRISPR/Cas9技术的基因组编辑；

细胞与基因治疗药物（造血干细胞、T细胞等）的基因修饰；

体外筛选有效sgRNA；

体外剪切靶DNA。

 

储存条件

 

-25~-15℃储存，有效期1年。

 

使用说明

 

RNP制备：

1. 用1×TE Buffer（pH 7.5）溶解sgRNA粉末至终浓度为100 μM，充分震荡混匀。

2. 配制以下体系并充分混匀：

组分

体积（μL）

Cas9 Nuclease (10 mg/mL)

1.28

sgRNA (100 μM)

2.34

PBS

1.38

Total

5

注：Cas9 Nuclease与sgRNA的摩尔比约为1：3。

3. 室温孵育20min。

 

注意事项

 

1. 为防止RNase污染，请保持实验区干净整洁，操作时需穿戴干净的手套、口罩，实验所用枪头、离心管等耗材均为 RNase-free。

2. 避免反复冻融。首次溶解之后，建议按照使用量分装保存。

3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

4. 本产品仅作科研用途。

Ver.CN20240222

Cas9核酸内切酶 Cas9 Nuclease CRISPR/Cas9基因编辑

暂无内容

Cas9核酸内切酶 Cas9 Nuclease CRISPR/Cas9基因编辑

暂无内容

产品简介

 

Cas9 Nuclease来源于野生型酿脓链球菌S. pyogenes，是依赖RNA介导的内切核酸酶，可以特异地切割双链DNA（在DNA PAM存在的情况下，也可以切割单链DNA或单链RNA）。Cas9切割位点位于目标序列（target sequence）内，离PAM（NGG）区3个碱基。本产品经过密码子优化及核定位信号（NLS）设计，由大肠杆菌重组表达而来，编辑效率高，可用于细胞（造血干细胞、T细胞等）的基因修饰，也可用于分子诊断，检测病原体等。

 

产品信息

 

货号

14701ES60 / 14701ES76 / 14701ES03

规格

100 μg / 500 μg / 1 mg

来源

大肠杆菌重组表达来源于Streptococcus pyogenes的Cas9基因

酶保存液

30 mM Tris-HCl, 300 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 50% Glycerol, pH 7.4

浓度

10 mg/mL

纯度

≥95%

标签

His

 

组分信息

 

组分名称

14701ES60

14701ES76

14701ES03

Cas9 Nuclease（10 mg/mL）

10 μL

50 μL

100 μL

 

产品应用

 

基于CRISPR/Cas9技术的基因组编辑；

细胞与基因治疗药物（造血干细胞、T细胞等）的基因修饰；

体外筛选有效sgRNA；

体外剪切靶DNA。

 

储存条件

 

-25~-15℃储存，有效期1年。

 

使用说明

 

RNP制备：

1. 用1×TE Buffer（pH 7.5）溶解sgRNA粉末至终浓度为100 μM，充分震荡混匀。

2. 配制以下体系并充分混匀：

组分

体积（μL）

Cas9 Nuclease (10 mg/mL)

1.28

sgRNA (100 μM)

2.34

PBS

1.38

Total

5

注：Cas9 Nuclease与sgRNA的摩尔比约为1：3。

3. 室温孵育20min。

 

注意事项

 

1. 为防止RNase污染，请保持实验区干净整洁，操作时需穿戴干净的手套、口罩，实验所用枪头、离心管等耗材均为 RNase-free。

2. 避免反复冻融。首次溶解之后，建议按照使用量分装保存。

3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

4. 本产品仅作科研用途。

Ver.CN20240222

Cas9核酸内切酶 Cas9 Nuclease CRISPR/Cas9基因编辑

暂无内容

Cas9核酸内切酶 Cas9 Nuclease CRISPR/Cas9基因编辑

暂无内容

Cas9内切核酸酶|Cas9 Nuclease

发表于由

Cas9内切核酸酶|Cas9 Nuclease

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品简介

 

翌圣生产的Cas9核酸酶来源于S. pyogenes，是依赖于RNA介导的内切核酸酶，可以特异地切割双链DNA（在DNA PAM存在的情况下，也可以切割单链DNA或单链RNA）。Cas9切割位点位于目标序列（target sequence）内，离PAM（NGG）区3个碱基。PAM对于Cas9的识别和切割都是必需的。因为反应需要添加RNA（sgRNA或者crRNA:tracrRNA），整个体系，包括Cas9酶都必需不含任何核酸酶。

 

组分信息

 

组分编号

组分名称

11350ES65

11350ES80

11350-A

Cas9 Nuclease（10 μM*）

100 pmol

1000 pmol

11350-B

10× Cas9 Nuclease Reaction Buffer

1 mL

1 mL

*：Cas9 Nuclease浓度为10 μM，即10 pmol/μL，100 pmol规格总体积为10 μL，1000 pmol总体积为100 μL。

 

储存条件

 

-25~-15℃储存，有效期2年。

 

使用说明

 

在无菌微量离心管中配制以下反应体系：

组分

30 μL反应体系

Nuclease-free water

20 μL

10 X Cas9 Nuclease Reaction Buffer

3 μL

300 nM sgRNA

3 μL (30 nM final)

1 μM Cas9 Nuclease

1 μL (~30 nM final)

Reaction volume

27 μL

Pre-incubate for 10 minutes at 25⁰C

30 nM substrate DNA

3 μL (3 nM final)

Total reaction volume

30 μL

Incubate at 37 °C for 1 hour and proceed with fragment analysis

 

 

注意事项

 

  1. 为防止RNase污染，请保持实验区干净整洁，操作时需穿戴干净的手套、口罩，实验所用枪头、离心管等耗材均为 RNase-free。
  2.  因反应需添加RNA(sgRNA或者crRNA : tracrRNA)，整个体系，包括Cas9酶都必需不含任何RNase活性。本产品经过严格质控，无任何其它核酸酶污染。
  3. Cas9酶对热敏感，容易失活，应全程冰上配置反应体系，使用后立即置于-20℃保存。
  4. 本产品仅作科研用途。
  5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

 

 

Ver.CN20240105

Q：这个cas9 蛋白是什么来源的？是重组表达的吗？

A：目前的 Cas9 蛋白都分离自嗜温细菌。

 

Q：Cas9 蛋白切割的是哪部分序列？

A：Cas9 本质是一种核酸内切酶，被sgRNA 带到靶点位置时，切割带有PAM 结构的且与sgRNA互补的 20 个 DNA 碱基。

 

Q：Cas9蛋白的浓度是多少呢？100pmol有多少微升？

​A：浓度是1uM，100pmol是100ul

 

Q：11350ES65产品，CAS9蛋白有没有修饰？

A：带有His标签

 

Q：溶剂是什么？

A： 甘油，水，tris

 

Q：cas9向导RNA的长度是多少呢？

A：crRNA的最佳长度是36个核苷酸，tracrRNA的最佳长度是67bp，sgRNA的最佳长度是100个核苷酸

 

Q：阳性对照的DNA片段是多长呢？切割后是多大的片段？

A：2.2kb，切割后分别是1.3和0.9kb

 

Q：cas9酶可以用什么稀释呢？

A：PBS/OPTI-MEM/电转液等稀释蛋白，注意现配现用，选用无污染的稀释buffer

Cas9内切核酸酶|Cas9 Nuclease

暂无内容

产品简介

 

翌圣生产的Cas9核酸酶来源于S. pyogenes，是依赖于RNA介导的内切核酸酶，可以特异地切割双链DNA（在DNA PAM存在的情况下，也可以切割单链DNA或单链RNA）。Cas9切割位点位于目标序列（target sequence）内，离PAM（NGG）区3个碱基。PAM对于Cas9的识别和切割都是必需的。因为反应需要添加RNA（sgRNA或者crRNA:tracrRNA），整个体系，包括Cas9酶都必需不含任何核酸酶。

 

组分信息

 

组分编号

组分名称

11350ES65

11350ES80

11350-A

Cas9 Nuclease（10 μM*）

100 pmol

1000 pmol

11350-B

10× Cas9 Nuclease Reaction Buffer

1 mL

1 mL

*：Cas9 Nuclease浓度为10 μM，即10 pmol/μL，100 pmol规格总体积为10 μL，1000 pmol总体积为100 μL。

 

储存条件

 

-25~-15℃储存，有效期2年。

 

使用说明

 

在无菌微量离心管中配制以下反应体系：

组分

30 μL反应体系

Nuclease-free water

20 μL

10 X Cas9 Nuclease Reaction Buffer

3 μL

300 nM sgRNA

3 μL (30 nM final)

1 μM Cas9 Nuclease

1 μL (~30 nM final)

Reaction volume

27 μL

Pre-incubate for 10 minutes at 25⁰C

30 nM substrate DNA

3 μL (3 nM final)

Total reaction volume

30 μL

Incubate at 37 °C for 1 hour and proceed with fragment analysis

 

 

注意事项

 

  1. 为防止RNase污染，请保持实验区干净整洁，操作时需穿戴干净的手套、口罩，实验所用枪头、离心管等耗材均为 RNase-free。
  2.  因反应需添加RNA(sgRNA或者crRNA : tracrRNA)，整个体系，包括Cas9酶都必需不含任何RNase活性。本产品经过严格质控，无任何其它核酸酶污染。
  3. Cas9酶对热敏感，容易失活，应全程冰上配置反应体系，使用后立即置于-20℃保存。
  4. 本产品仅作科研用途。
  5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

 

 

Ver.CN20240105

Q：这个cas9 蛋白是什么来源的？是重组表达的吗？

A：目前的 Cas9 蛋白都分离自嗜温细菌。

 

Q：Cas9 蛋白切割的是哪部分序列？

A：Cas9 本质是一种核酸内切酶，被sgRNA 带到靶点位置时，切割带有PAM 结构的且与sgRNA互补的 20 个 DNA 碱基。

 

Q：Cas9蛋白的浓度是多少呢？100pmol有多少微升？

​A：浓度是1uM，100pmol是100ul

 

Q：11350ES65产品，CAS9蛋白有没有修饰？

A：带有His标签

 

Q：溶剂是什么？

A： 甘油，水，tris

 

Q：cas9向导RNA的长度是多少呢？

A：crRNA的最佳长度是36个核苷酸，tracrRNA的最佳长度是67bp，sgRNA的最佳长度是100个核苷酸

 

Q：阳性对照的DNA片段是多长呢？切割后是多大的片段？

A：2.2kb，切割后分别是1.3和0.9kb

 

Q：cas9酶可以用什么稀释呢？

A：PBS/OPTI-MEM/电转液等稀释蛋白，注意现配现用，选用无污染的稀释buffer

Cas9内切核酸酶|Cas9 Nuclease

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牛胰腺脱氧核糖核酸酶I Dnase I核酸内切酶|Deoxyribonuclease I from bovine pancreas

发表于由

牛胰腺脱氧核糖核酸酶I Dnase I核酸内切酶|Deoxyribonuclease I from bovine pancreas

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品描述

脱氧核糖核酸酶I（DNase I），即Deoxyribonuclease I，一种发现于多种细胞和组织的核酸内切酶，靶向切割邻近嘧啶的磷酸二酯键，产生5’端为磷酸基团、3’端为羟基的多聚核苷酸，平均消化产物最小为多聚四核苷酸。DNase可催化多种形式DNA，如单链DNA、双链DNA，甚至染色质（其切割速率受组蛋白影响）。最佳的工作范围是pH7-8，DNase的活性依赖于Ca2+，并可被二价金属离子如Co 2+，Mn2+，Zn2+等激活。5 mM Ca2+可保护酶使其不被水解。在Mg2+存在下，该酶可随机识别和切断DNA任一条链上的任意位点；而在Mn2+存在的条件下，可同时识别DNA的两条链并在几乎相同的位点进行切割。DNase I最早从胰腺中分离而来，至今哺乳动物胰腺也是该酶的最主要的来源之一。
本品来自牛胰腺，由四种色谱区分的组分A，B，C，D构成，摩尔比为4:1:1，而D组分非常少。分子生物学实验中常用于清除蛋白中的DNA，或者用于向DNA中引入缺口使标记碱基插入DNA。本品以含氯化钙的冻干粉形式供应，酶活力≥2000 Kunitz Units/mg蛋白。

 

产品性质

CAS号（CAS NO.）

9003-98-9

分子量（Molecular Weight）

~31 kDa

孔尼茨单位（Kunitz Units）

≥2000 Kunitz Units/mg protein

类型（Type）

Type IV

最佳PH（Optimal pH）

7～8

外观（Appearance）

白色至浅褐色冻干粉

纯度（Purity）

Protein:≥80% by Biuret

溶解性（Solubility）

0.15 M NaCl：5 mg/mL，无色透明溶液

激活剂（Activators）

多种二价金属离子如Mg2+、Mn2+, Ca2+, Co2+, and Zn2+

抑制剂（Inhibitors）

β-巯基乙醇；螯合剂；SDS；肌动蛋白

活力单位定义（Unit   Definition）

25℃，pH5.0条件下DNase催化底物DNA，使每毫升每分钟ΔA260增加0.001的变化定义为一个酶活力单位（Kunitz unit）。

 

运输和保存方法 

冰袋运输。冻干粉末于-20℃保存，有效期2年。

 

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）本产品仅作科研用途！

 

DNase Ⅰ储存溶液

20 mM sodium acetate（pH 6.5），5 mM CaCl2，0.1 mM PMSF，50%甘油。

 

DNase Ⅰ失活或抑制

加入EDTA至终浓度为2.5 mM后，65℃加热10 min可使DNase Ⅰ失活。酚氯仿抽提也可以使DNase I失活。金属离子螯合剂，达到毫摩尔/升浓度的锌离子，0.1%的SDS，DTT、巯基乙醇等还原剂，50-100 mM以上盐浓度均对DNase Ⅰ有显著抑制作用。

 

使用方法（应用于蛋白提取实验，仅供参考）

1）反应体系：蛋白提取液中按照1/100体积加入DNase I储存液（使其终浓度为20 U/mL），1/100体积加入1 M MgCl2。

2）反应条件：37℃，30-60 min。继续后续蛋白提取实验即可。

【注】由于EDTA能螯合酶活性需要的Ca2+和Mg2+，蛋白初始裂解液中要去除EDTA，否则会降低DNase I的消化能力。

HB210811

 Q：DNase Ⅰ储存溶液配置后可保存多久？保存温度是多少？

A：最好快速用完，或者现配现用。-20℃保存。

Q：主要用途是什么？

A：常用于清除蛋白中的DNA，或者用于向DNA 中引入缺口使标记碱基插入DNA。

 

[1] Xu Y, Hu Y, Xu T, et al. RNF8-mediated regulation of Akt promotes lung cancer cell survival and resistance to DNA damage. Cell Rep. 2021;37(3):109854. doi:10.1016/j.celrep.2021.109854(IF:9.423)
[2] Jain S, Hu C, Kluza J, et al. Metabolic targeting of cancer by a ubiquinone uncompetitive inhibitor of mitochondrial complex I. Cell Chem Biol. 2022;29(3):436-450.e15. doi:10.1016/j.chembiol.2021.11.002(IF:8.116)
[3] Sun H, Chen D, Zhan S, et al. Design and Discovery of Natural Cyclopeptide Skeleton Based Programmed Death Ligand 1 Inhibitor as Immune Modulator for Cancer Therapy. J Med Chem. 2020;63(19):11286-11301. doi:10.1021/acs.jmedchem.0c01262(IF:6.205)
[4] Zhao X, Hu S, Zeng L, et al. Irradiation combined with PD-L1-/- and autophagy inhibition enhances the antitumor effect of lung cancer via cGAS-STING-mediated T cell activation. iScience. 2022;25(8):104690. Published 2022 Jun 30. doi:10.1016/j.isci.2022.104690(IF:6.107)

产品描述

脱氧核糖核酸酶I（DNase I），即Deoxyribonuclease I，一种发现于多种细胞和组织的核酸内切酶，靶向切割邻近嘧啶的磷酸二酯键，产生5’端为磷酸基团、3’端为羟基的多聚核苷酸，平均消化产物最小为多聚四核苷酸。DNase可催化多种形式DNA，如单链DNA、双链DNA，甚至染色质（其切割速率受组蛋白影响）。最佳的工作范围是pH7-8，DNase的活性依赖于Ca2+，并可被二价金属离子如Co 2+，Mn2+，Zn2+等激活。5 mM Ca2+可保护酶使其不被水解。在Mg2+存在下，该酶可随机识别和切断DNA任一条链上的任意位点；而在Mn2+存在的条件下，可同时识别DNA的两条链并在几乎相同的位点进行切割。DNase I最早从胰腺中分离而来，至今哺乳动物胰腺也是该酶的最主要的来源之一。
本品来自牛胰腺，由四种色谱区分的组分A，B，C，D构成，摩尔比为4:1:1，而D组分非常少。分子生物学实验中常用于清除蛋白中的DNA，或者用于向DNA中引入缺口使标记碱基插入DNA。本品以含氯化钙的冻干粉形式供应，酶活力≥2000 Kunitz Units/mg蛋白。

 

产品性质

CAS号（CAS NO.）

9003-98-9

分子量（Molecular Weight）

~31 kDa

孔尼茨单位（Kunitz Units）

≥2000 Kunitz Units/mg protein

类型（Type）

Type IV

最佳PH（Optimal pH）

7～8

外观（Appearance）

白色至浅褐色冻干粉

纯度（Purity）

Protein:≥80% by Biuret

溶解性（Solubility）

0.15 M NaCl：5 mg/mL，无色透明溶液

激活剂（Activators）

多种二价金属离子如Mg2+、Mn2+, Ca2+, Co2+, and Zn2+

抑制剂（Inhibitors）

β-巯基乙醇；螯合剂；SDS；肌动蛋白

活力单位定义（Unit   Definition）

25℃，pH5.0条件下DNase催化底物DNA，使每毫升每分钟ΔA260增加0.001的变化定义为一个酶活力单位（Kunitz unit）。

 

运输和保存方法 

冰袋运输。冻干粉末于-20℃保存，有效期2年。

 

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）本产品仅作科研用途！

 

DNase Ⅰ储存溶液

20 mM sodium acetate（pH 6.5），5 mM CaCl2，0.1 mM PMSF，50%甘油。

 

DNase Ⅰ失活或抑制

加入EDTA至终浓度为2.5 mM后，65℃加热10 min可使DNase Ⅰ失活。酚氯仿抽提也可以使DNase I失活。金属离子螯合剂，达到毫摩尔/升浓度的锌离子，0.1%的SDS，DTT、巯基乙醇等还原剂，50-100 mM以上盐浓度均对DNase Ⅰ有显著抑制作用。

 

使用方法（应用于蛋白提取实验，仅供参考）

1）反应体系：蛋白提取液中按照1/100体积加入DNase I储存液（使其终浓度为20 U/mL），1/100体积加入1 M MgCl2。

2）反应条件：37℃，30-60 min。继续后续蛋白提取实验即可。

【注】由于EDTA能螯合酶活性需要的Ca2+和Mg2+，蛋白初始裂解液中要去除EDTA，否则会降低DNase I的消化能力。

HB210811

 Q：DNase Ⅰ储存溶液配置后可保存多久？保存温度是多少？

A：最好快速用完，或者现配现用。-20℃保存。

Q：主要用途是什么？

A：常用于清除蛋白中的DNA，或者用于向DNA 中引入缺口使标记碱基插入DNA。

 

[1] Xu Y, Hu Y, Xu T, et al. RNF8-mediated regulation of Akt promotes lung cancer cell survival and resistance to DNA damage. Cell Rep. 2021;37(3):109854. doi:10.1016/j.celrep.2021.109854(IF:9.423)
[2] Jain S, Hu C, Kluza J, et al. Metabolic targeting of cancer by a ubiquinone uncompetitive inhibitor of mitochondrial complex I. Cell Chem Biol. 2022;29(3):436-450.e15. doi:10.1016/j.chembiol.2021.11.002(IF:8.116)
[3] Sun H, Chen D, Zhan S, et al. Design and Discovery of Natural Cyclopeptide Skeleton Based Programmed Death Ligand 1 Inhibitor as Immune Modulator for Cancer Therapy. J Med Chem. 2020;63(19):11286-11301. doi:10.1021/acs.jmedchem.0c01262(IF:6.205)
[4] Zhao X, Hu S, Zeng L, et al. Irradiation combined with PD-L1-/- and autophagy inhibition enhances the antitumor effect of lung cancer via cGAS-STING-mediated T cell activation. iScience. 2022;25(8):104690. Published 2022 Jun 30. doi:10.1016/j.isci.2022.104690(IF:6.107)

牛胰腺脱氧核糖核酸酶I DNase I核酸内切酶|Deoxyribonuclease I from bovine pancreas

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牛胰腺脱氧核糖核酸酶I DNase I核酸内切酶|Deoxyribonuclease I from bovine pancreas

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品描述

脱氧核糖核酸酶I（DNase I），即Deoxyribonuclease I，一种发现于多种细胞和组织的核酸酶，属核酸内切酶，靶向切割邻近嘧啶的磷酸二酯键，产生5’端为磷酸基团、3’端为羟基的多聚核苷酸，平均消化产物最小为多聚四核苷酸。DNase可催化多种形式DNA，如单链DNA、双链DNA，甚至染色质（其切割速率受组蛋白影响）。最佳的工作范围是pH7-8，DNase的活性依赖于Ca2+，并可被二价金属离子如Co2+，Mn2+，Zn2+等激活。5 mM Ca2+可保护酶使其不被水解。在Mg2+存在下，该酶可随机识别和切断DNA任一条链上的任意位点；而在Mn2+存在的条件下，可同时识别DNA的两条链并在几乎相同的位点进行切割。DNase I最早从胰腺中分离而来，至今哺乳动物胰腺也是该酶的最主要的来源之一。
本品来自牛胰腺，分子生物学实验中常用于清除蛋白中的DNA，或者用于向DNA中引入缺口使标记碱基插入DNA。本品以粉末形式供应，酶活力≥2000 Kunitz Units/mg蛋白。

 

产品性质

CAS号（CAS NO.）

9003-98-9

分子量（Molecular Weight）

~31 kDa

孔尼茨单位（Kunitz   Units）

≥2000Kunitz Units/mg protein

类型（Type）

Type IV

最佳PH（Optimal pH）

7～8

外观（Appearance）

白色至浅黄色粉末

纯度（Purity）

Protein: ≥80% by Biuret

激活剂（Activators）

多种二价金属离子如Mg2+、Mn2+,   Ca2+, Co2+, and Zn2+

抑制剂（Inhibitors）

β-巯基乙醇；螯合剂；SDS；肌动蛋白

活力单位定义（Unit Definition）

25℃，pH5.0条件下DNase催化底物DNA，使每毫升每分钟ΔA260增加0.001的变化定义为一个酶活力单位（Kunitz unit）。

 

运输和保存方法

冰袋运输。冻干粉末于-20℃保存，有效期2年。

 

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
2）本产品仅作科研用途！

 

DNase Ⅰ储存溶液

20 mM sodium acetate（pH 6.5），5 mM CaCl2，0.1 mM PMSF，50%甘油。

 

DNase Ⅰ失活或抑制

加入EDTA至终浓度为2.5 mM后，65℃加热10 min可使DNase Ⅰ失活。酚氯仿抽提也可以使DNase I失活。金属离子螯合剂，达到毫摩尔/升浓度的锌离子，0.1%的SDS，DTT、巯基乙醇等还原剂，50-100 mM以上盐浓度均对DNase Ⅰ有显著抑制作用。

 

使用方法（应用于蛋白提取实验，仅供参考）

1）反应体系：蛋白提取液中按照1/100体积加入DNase I储存液（使其终浓度为20 U/mL），1/100体积加入1 M MgCl2。

2）反应条件：37℃，30-60 min。继续后续蛋白提取实验即可。

【注】：由于EDTA能螯合酶活性需要的Ca2+和Mg2+，蛋白初始裂解液中要去除EDTA，否则会降低DNase I的消化能力。

HB210721

 

Q：10607ES 和 10608ES 的区别？

A：10607 以含氯化钙的冻干粉形式供应；10608 以粉末形式供应。两者用途一样，用于清除蛋白中的 DNA。

Q: 我想问一下这个Kunitz跟u如何换算呢？那如果说反应体系中需要加入150U，那我该怎么换算呀?

A: Kunitz Units和U是不同的单位，不能直接换算，它的酶活就是Kunitz Units不是U，是孔尼茨单位，不能换算的。

如果是要要加入150U是没法计算的，但如果是要150 Kunitz Units，可以根据每个批次的COA上的测试的酶活情况计算。比如，某批次酶活是2500Kunitz Units/mg，那就是加入150/2500=0.06mg。

[1] Wang Z, Gong X, Li J, et al. Oxygen-Delivering Polyfluorocarbon Nanovehicles Improve Tumor Oxygenation and Potentiate Photodynamic-Mediated Antitumor Immunity. ACS Nano. 2021;15(3):5405-5419. doi:10.1021/acsnano.1c00033(IF:15.881)
[2] Huang Y, Chen Y, Zhou S, et al. Dual-mechanism based CTLs infiltration enhancement initiated by Nano-sapper potentiates immunotherapy against immune-excluded tumors. Nat Commun. 2020;11(1):622. Published 2020 Jan 30. doi:10.1038/s41467-020-14425-7(IF:12.121)
[3] Wang Y, Gong X, Li J, et al. M2 macrophage microvesicle-inspired nanovehicles improve accessibility to cancer cells and cancer stem cells in tumors. J Nanobiotechnology. 2021;19(1):397. Published 2021 Nov 27. doi:10.1186/s12951-021-01143-5(IF:10.435)
[4] Liu J, Shen Z, Tang J, et al. Extracellular DNA released by glycine-auxotrophic Staphylococcus epidermidis small colony variant facilitates catheter-related infections. Commun Biol. 2021;4(1):904. Published 2021 Jul 22. doi:10.1038/s42003-021-02423-4(IF:6.268)

产品描述

脱氧核糖核酸酶I（DNase I），即Deoxyribonuclease I，一种发现于多种细胞和组织的核酸酶，属核酸内切酶，靶向切割邻近嘧啶的磷酸二酯键，产生5’端为磷酸基团、3’端为羟基的多聚核苷酸，平均消化产物最小为多聚四核苷酸。DNase可催化多种形式DNA，如单链DNA、双链DNA，甚至染色质（其切割速率受组蛋白影响）。最佳的工作范围是pH7-8，DNase的活性依赖于Ca2+，并可被二价金属离子如Co2+，Mn2+，Zn2+等激活。5 mM Ca2+可保护酶使其不被水解。在Mg2+存在下，该酶可随机识别和切断DNA任一条链上的任意位点；而在Mn2+存在的条件下，可同时识别DNA的两条链并在几乎相同的位点进行切割。DNase I最早从胰腺中分离而来，至今哺乳动物胰腺也是该酶的最主要的来源之一。
本品来自牛胰腺，分子生物学实验中常用于清除蛋白中的DNA，或者用于向DNA中引入缺口使标记碱基插入DNA。本品以粉末形式供应，酶活力≥2000 Kunitz Units/mg蛋白。

 

产品性质

CAS号（CAS NO.）

9003-98-9

分子量（Molecular Weight）

~31 kDa

孔尼茨单位（Kunitz   Units）

≥2000Kunitz Units/mg protein

类型（Type）

Type IV

最佳PH（Optimal pH）

7～8

外观（Appearance）

白色至浅黄色粉末

纯度（Purity）

Protein: ≥80% by Biuret

激活剂（Activators）

多种二价金属离子如Mg2+、Mn2+,   Ca2+, Co2+, and Zn2+

抑制剂（Inhibitors）

β-巯基乙醇；螯合剂；SDS；肌动蛋白

活力单位定义（Unit Definition）

25℃，pH5.0条件下DNase催化底物DNA，使每毫升每分钟ΔA260增加0.001的变化定义为一个酶活力单位（Kunitz unit）。

 

运输和保存方法

冰袋运输。冻干粉末于-20℃保存，有效期2年。

 

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
2）本产品仅作科研用途！

 

DNase Ⅰ储存溶液

20 mM sodium acetate（pH 6.5），5 mM CaCl2，0.1 mM PMSF，50%甘油。

 

DNase Ⅰ失活或抑制

加入EDTA至终浓度为2.5 mM后，65℃加热10 min可使DNase Ⅰ失活。酚氯仿抽提也可以使DNase I失活。金属离子螯合剂，达到毫摩尔/升浓度的锌离子，0.1%的SDS，DTT、巯基乙醇等还原剂，50-100 mM以上盐浓度均对DNase Ⅰ有显著抑制作用。

 

使用方法（应用于蛋白提取实验，仅供参考）

1）反应体系：蛋白提取液中按照1/100体积加入DNase I储存液（使其终浓度为20 U/mL），1/100体积加入1 M MgCl2。

2）反应条件：37℃，30-60 min。继续后续蛋白提取实验即可。

【注】：由于EDTA能螯合酶活性需要的Ca2+和Mg2+，蛋白初始裂解液中要去除EDTA，否则会降低DNase I的消化能力。

HB210721

 

Q：10607ES 和 10608ES 的区别？

A：10607 以含氯化钙的冻干粉形式供应；10608 以粉末形式供应。两者用途一样，用于清除蛋白中的 DNA。

Q: 我想问一下这个Kunitz跟u如何换算呢？那如果说反应体系中需要加入150U，那我该怎么换算呀?

A: Kunitz Units和U是不同的单位，不能直接换算，它的酶活就是Kunitz Units不是U，是孔尼茨单位，不能换算的。

如果是要要加入150U是没法计算的，但如果是要150 Kunitz Units，可以根据每个批次的COA上的测试的酶活情况计算。比如，某批次酶活是2500Kunitz Units/mg，那就是加入150/2500=0.06mg。

[1] Wang Z, Gong X, Li J, et al. Oxygen-Delivering Polyfluorocarbon Nanovehicles Improve Tumor Oxygenation and Potentiate Photodynamic-Mediated Antitumor Immunity. ACS Nano. 2021;15(3):5405-5419. doi:10.1021/acsnano.1c00033(IF:15.881)
[2] Huang Y, Chen Y, Zhou S, et al. Dual-mechanism based CTLs infiltration enhancement initiated by Nano-sapper potentiates immunotherapy against immune-excluded tumors. Nat Commun. 2020;11(1):622. Published 2020 Jan 30. doi:10.1038/s41467-020-14425-7(IF:12.121)
[3] Wang Y, Gong X, Li J, et al. M2 macrophage microvesicle-inspired nanovehicles improve accessibility to cancer cells and cancer stem cells in tumors. J Nanobiotechnology. 2021;19(1):397. Published 2021 Nov 27. doi:10.1186/s12951-021-01143-5(IF:10.435)
[4] Liu J, Shen Z, Tang J, et al. Extracellular DNA released by glycine-auxotrophic Staphylococcus epidermidis small colony variant facilitates catheter-related infections. Commun Biol. 2021;4(1):904. Published 2021 Jul 22. doi:10.1038/s42003-021-02423-4(IF:6.268)