Cas9内切核酸酶|Cas9 Nuclease
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产品简介
翌圣生产的Cas9核酸酶来源于S. pyogenes，是依赖于RNA介导的内切核酸酶，可以特异地切割双链DNA（在DNA PAM存在的情况下，也可以切割单链DNA或单链RNA）。Cas9切割位点位于目标序列（target sequence）内，离PAM（NGG）区3个碱基。PAM对于Cas9的识别和切割都是必需的。因为反应需要添加RNA（sgRNA或者crRNA:tracrRNA），整个体系，包括Cas9酶都必需不含任何核酸酶。
组分信息
|
组分编号 |
组分名称 |
11350ES65 |
11350ES80 |
|
11350-A |
Cas9 Nuclease（10 μM*） |
100 pmol |
1000 pmol |
|
11350-B |
10× Cas9 Nuclease Reaction Buffer |
1 mL |
1 mL |
*：Cas9 Nuclease浓度为10 μM，即10 pmol/μL，100 pmol规格总体积为10 μL，1000 pmol总体积为100 μL。
储存条件
-25~-15℃储存，有效期2年。
使用说明
在无菌微量离心管中配制以下反应体系：
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组分 |
30 μL反应体系 |
|
Nuclease-free water |
20 μL |
|
10 X Cas9 Nuclease Reaction Buffer |
3 μL |
|
300 nM sgRNA |
3 μL (30 nM final) |
|
1 μM Cas9 Nuclease |
1 μL (~30 nM final) |
|
Reaction volume |
27 μL |
|
Pre-incubate for 10 minutes at 25⁰C |
|
|
30 nM substrate DNA |
3 μL (3 nM final) |
|
Total reaction volume |
30 μL |
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Incubate at 37 °C for 1 hour and proceed with fragment analysis |
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注意事项
- 为防止RNase污染，请保持实验区干净整洁，操作时需穿戴干净的手套、口罩，实验所用枪头、离心管等耗材均为 RNase-free。
- 因反应需添加RNA(sgRNA或者crRNA : tracrRNA)，整个体系，包括Cas9酶都必需不含任何RNase活性。本产品经过严格质控，无任何其它核酸酶污染。
- Cas9酶对热敏感，容易失活，应全程冰上配置反应体系，使用后立即置于-20℃保存。
- 本产品仅作科研用途。
- 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
Ver.CN20240105
产品简介
翌圣生产的Cas9核酸酶来源于S. pyogenes，是依赖于RNA介导的内切核酸酶，可以特异地切割双链DNA（在DNA PAM存在的情况下，也可以切割单链DNA或单链RNA）。Cas9切割位点位于目标序列（target sequence）内，离PAM（NGG）区3个碱基。PAM对于Cas9的识别和切割都是必需的。因为反应需要添加RNA（sgRNA或者crRNA:tracrRNA），整个体系，包括Cas9酶都必需不含任何核酸酶。
组分信息
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组分编号 |
组分名称 |
11350ES65 |
11350ES80 |
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11350-A |
Cas9 Nuclease（10 μM*） |
100 pmol |
1000 pmol |
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11350-B |
10× Cas9 Nuclease Reaction Buffer |
1 mL |
1 mL |
*：Cas9 Nuclease浓度为10 μM，即10 pmol/μL，100 pmol规格总体积为10 μL，1000 pmol总体积为100 μL。
储存条件
-25~-15℃储存，有效期2年。
使用说明
在无菌微量离心管中配制以下反应体系：
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组分 |
30 μL反应体系 |
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Nuclease-free water |
20 μL |
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10 X Cas9 Nuclease Reaction Buffer |
3 μL |
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300 nM sgRNA |
3 μL (30 nM final) |
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1 μM Cas9 Nuclease |
1 μL (~30 nM final) |
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Reaction volume |
27 μL |
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Pre-incubate for 10 minutes at 25⁰C |
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30 nM substrate DNA |
3 μL (3 nM final) |
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Total reaction volume |
30 μL |
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Incubate at 37 °C for 1 hour and proceed with fragment analysis |
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注意事项
- 为防止RNase污染，请保持实验区干净整洁，操作时需穿戴干净的手套、口罩，实验所用枪头、离心管等耗材均为 RNase-free。
- 因反应需添加RNA(sgRNA或者crRNA : tracrRNA)，整个体系，包括Cas9酶都必需不含任何RNase活性。本产品经过严格质控，无任何其它核酸酶污染。
- Cas9酶对热敏感，容易失活，应全程冰上配置反应体系，使用后立即置于-20℃保存。
- 本产品仅作科研用途。
- 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
Ver.CN20240105
Q：这个cas9 蛋白是什么来源的？是重组表达的吗？
A：目前的 Cas9 蛋白都分离自嗜温细菌。
Q：Cas9 蛋白切割的是哪部分序列？
A：Cas9 本质是一种核酸内切酶，被sgRNA 带到靶点位置时，切割带有PAM 结构的且与sgRNA互补的 20 个 DNA 碱基。
Q：Cas9蛋白的浓度是多少呢？100pmol有多少微升？
A：浓度是1uM，100pmol是100ul
Q：11350ES65产品，CAS9蛋白有没有修饰？
A：带有His标签
Q：溶剂是什么？
A： 甘油，水，tris
Q：cas9向导RNA的长度是多少呢？
A：crRNA的最佳长度是36个核苷酸，tracrRNA的最佳长度是67bp，sgRNA的最佳长度是100个核苷酸
Q：阳性对照的DNA片段是多长呢？切割后是多大的片段？
A：2.2kb，切割后分别是1.3和0.9kb
Q：cas9酶可以用什么稀释呢？
A：PBS/OPTI-MEM/电转液等稀释蛋白，注意现配现用，选用无污染的稀释buffer
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