cfPure™血清/血浆游离  DNA（cfDNA） 提取试剂盒

（磁珠法）

 

目录号：K5011610, K5011625

 

产品内容

产品号：K5011610（100ml 血清/血浆样本提取试剂盒）

组分	产品号	规格
1.  裂解/结合液 Lysis/Binding Buffer	K5011610-1	1 x 115 ml
2.  洗涤液 Wash Buffer	K5011610-2	2 x 55 ml
3.  洗脱液 Elution Buffer	K5011610-3	1 x 6 ml
4.  磁珠溶液 Magnetic Bead Solution	K5011610-4	2 x 1.33 ml

产品号：K5011625（250ml 血清/血浆样本提取试剂盒）

组分	产品号	规格
1.  裂解/结合液 Lysis/Binding Buffer	K5011625-1	3 x 95 ml
2.  洗涤液 Wash Buffer	K5011625-2	5 x 55 ml
3.  洗脱液 Elution Buffer	K5011625-3	1 x 15 ml
4.  磁珠溶液 Magnetic Bead Solution	K5011625-4	5 x 1.33 ml

 

储存条件

该试剂盒置于室温（15-25℃）干燥条件下，可保存 12 个月。

特点

l 无毒。

l 高回收率。

l 操作灵活的实验程序。

l 纯化的 DNA 可用于二代测序(NGS), 荧光定量 PCR 和亚硫酸氢盐测序等。

产品简介

本试剂盒可率从血清/血浆中提取游离 DNA，磁珠法程序适用于多种核酸自动化提取 仪，所得游离 DNA 可直接用于 PCR 模  板、qPCR、二代测序（NGS）和其他应用程序。 规格

100ml 血清/血浆样本提取试剂盒

250ml 血清/血浆样本提取试剂盒 质量控制 所有试剂均经过纯度和有效性测试。

注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项

样本：新鲜和冻存血清/血浆均可使用，新鲜样本会有较高的得率。

量化：每毫升血清/血浆游离 DNA 得率为 1-100 微克。用分光光度法定量（例如. Nanodrop）

可能无法准确地测定得率。可使用 Qubit™  dsDNA High Sensitivity Assay。

聚合酶链反应(PCR)的建议：由于血清/血浆中提取 DNA 多数为小片段特性，设计引物时需谨

慎。游离 DNA 往往为小片段 170bp 左右，因此，PCR 引物设计应该生成的产物为小于 150 bp

范围。健康人血浆游离 DNA 浓度低，PCR 的循环次数在某些情况下需达到 40 个循环。

treck Cell-Free DNA BCT Tube(s) 基因检测无创采血管:  无创管经蛋白酶 K 处理可分离高质

量的无细胞 DNA，否则 DNA 得率会减少 50%。

自备设备和试剂

l     移液管

l     涡流混合器

l     磁力架

l     1.5 ml 不黏离心管

l     无水乙醇

使用前：裂解/结合液 Lysis/Binding Buffer 及 Wash Buffer 洗涤液为浓缩液。若溶液发生 沉淀，放置 37°C 水浴中预热 30 分钟，以溶解沉淀。*次使用试剂盒时，请按照提示在裂 解/结合液 Lysis/Binding Buffer 及洗涤液 Wash Buffer 加入无水乙醇，储存 2–8°C 有效期一年， 盖紧瓶盖以确保长期存储。

产品号：K5011610

l    加入 23ml 无水乙醇至裂解/结合液 Lysis/Binding Buffer 中，轻轻颠倒混匀。

l     加入 51 ml 无水乙醇至每个洗涤液 Wash Buffer 中，轻轻颠倒混匀。

l     每次提取前配制新鲜 80%乙醇。

产品号：K5011625

l    加入 19ml 无水乙醇至每个裂解/结合液 Lysis/Binding Buffer 中，轻轻颠倒混匀。

l 加入 51 ml 无水乙醇至每个洗涤液 Wash Buffer 中，轻轻颠倒混匀。

l 每次提取前配制新鲜 80%乙醇。

实验前确定要提取的血清/血浆量（100µl~10ml  均可），按下表计算所需裂解/结合液

Lysis/Binding Buffer 和 Magnetic Bead Solution 磁珠溶液使用量。

 

血清/血浆	裂解/结合液   Lysis/Binding Buffer	磁珠溶液 Magnetic   Bead Solution	离心管尺寸
x (x=ml of 血清/血浆)	1.25x	0.025x	N/A
500 µl	750 µl	12.5 µl	2 ml
1 ml	1.25 ml	25 µl	15 ml
5 ml	6.25 ml	125 µl	15 ml or 或 50ml*
10 ml	12.50 ml	250 µl	50 ml

 

*5ml 或以上血清/血浆建议使用 50ml 离心管，使用 15ml 离心管造成泄露会造成得率降低。

蛋白酶 K 处理

如果样品使用基因检测无创采血管 Streck Cell-Free DNA BCT Tube(s)采集，蛋白酶 K 处理可

确保高回收率。非该采血管采集的样本可直接进行裂解/结合 Lysis/Binding 步骤。

 

血清/血浆	蛋白酶 K	20% SDS 溶液
x (x=ml of 血清/血浆)	0.015 x	0.050 x
500 µl	7.5 µl	25 µl
1 ml	15 µl	50 µl

5 ml	75 µl	250 µl
10 ml	150 µl	500 µl

 

1. 加入适量血清/血浆到适合的离心管中。

2. 每 1ml 血清/血浆加入 15 µl 蛋白酶 K（20 mg/ml）。

3. 每 1ml 血清/血浆加入 50 µl SDS（20%）溶液。

4. 颠倒混匀 5 次。

5. 60°C 孵育 20 分钟。

6. 冰上预冷 5 分钟，放置室温。

7. 放置室温后可进行裂解/结合 Lysis/Binding 第二步

裂解/结合 Lysis/Binding

1. 加入适量血清/血浆到适合离心管中。

2. 每 1ml 血清/血浆加入 1.25ml 裂解/结合液 Lysis/Binding Buffer。

3. 每 1ml 血清/血浆加入 25µl 磁珠溶液 Magnetic Bead Solution。 注意：加入之前混匀磁珠溶液，确保溶液无磁珠沉淀。磁珠会迅速下沉所以每次加样前都 要混匀磁珠，以免造成 DNA 得率不一致。

4. 室温涡流混合或用力摇动离心管 10 分钟。*为获得高产量，确保血样本/缓冲溶液在管内混 合，推荐使用旋涡混合器。

5. 将离心管置于磁力架磁分离 2~5 分钟或直至溶液清透。

6. 保持离心管置于磁力架上小心去除上清，不要触碰磁珠。

7. 保持离心管置于磁力架上 1 分钟，去除残液。

*次洗涤

8. 加入 1000µl 洗涤液 Wash Buffer 至第 7 步裂解/结合 Lysis/Binding 管中。 9. 涡流混合 10 秒或移液管吹打 6 次重悬磁珠。

10.  将重悬液移至 1.5ml 离心管置于磁力架。

11.  置于磁力架 10~30 秒。

12.  移液管抽取上清至裂解/结合 Lysis/Bindin 管。

13. 将裂解/结合 Lysis/Bindin 管中剩余磁珠全部移至 1.5ml 离心管。

14.  1.5ml 离心管置于磁力架磁分离 10~30 秒至液体清澈。

15.  用 1000µl 移液枪头尽量去除上清。

16. 用装有离心管的磁力架轻轻敲击实验台 5 次，用 200µl 移液枪头去除废液。

17.  离心管移至试管架上加入 1000µl 洗涤液 Wash Buffer。

18.  涡流混合 20 秒或移液管吹打 6 次重悬磁珠。

19.  短暂离心。*离心仅用于涡流混合之重悬磁珠，短暂离心仅为去除离心管盖上的吸附液体。

20.  离心管置于磁力架磁分离 10~30 秒。

21.  用 1000µl 移液枪头尽量去除上清。

22. 用装有离心管的磁力架轻轻敲击实验台 5 次，用 200µl 移液枪头去除废液。

第二次洗涤

23.  离心管移至试管架上加入 1000µl 乙醇（80%）。

24.  涡流混合 20 秒或移液管吹打 6 次重悬磁珠。

25. 短暂离心。

26.  离心管置于磁力架磁分离 10~30 秒至溶液清澈。

27.  用 1000µl 移液枪头尽量去除上清。

28. 用装有离心管的磁力架轻轻敲击实验台 5 次，用 200µl 移液枪头去除废液。

29.  离心管移至试管架上加入 1000µl 乙醇（80%）。

30. 涡流混合 20 秒或移液管吹打 6 次重悬磁珠。

31. 短暂离心。

32.  离心管置于磁力架磁分离 10~20 秒。

33.  用 1000µl 移液枪头尽量去除上清并保持管盖打开。

34.  用装有离心管的磁力架轻轻敲击实验台 5 次。

35.  用 200µl 移液枪头去除废液。

36. 保持管盖打开 2 分钟，磁力架轻轻敲击实验台 5 次，用 200µl 移液枪头去除废液。

37.  继续干燥 1-3 分钟。*注意不要过分干燥以免磁珠粘在管壁上。

洗脱

38.  离心管移至试管架上加入适量洗脱液 Elution Buffer。注意：建议每毫升血清/血浆加入 12.5

µl 洗脱液 Elution Buffer 以确保*得率。 39.  涡流混合或用力摇动离心管 5 分钟。

40. 短暂离心。

41.  置于磁力架 10~30 秒。

42.  上清移至新 1.5ml 离心管。