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标签归档：western
荧光western blot注意事项
随着荧光检测的普及，许多研究人员正考虑将western blot的检测方法从化学发光转到多重荧光。这一趋势背后有多个推动力。zui重要的是，荧光检测能够实现多重western blot分析，每次能够同时检测几个目标蛋白，而不再需要剥离和重新杂交。荧光的其他好处在于动态范围更宽、信号稳定性更好。
荧光blotting的小贴士
• 抗体浓度应当优化，在几种不同稀释度的抗体中孵育膜。选择信噪比zui高的稀释度。
• 从化学发光转到荧光检测时，一抗浓度应当增加；通常来说是增加2-5倍。二抗浓度可能也需要优化；1:5,000稀释是个不错的起点。在使用特定抗体时，可以参照生产商的建议。
• 为了让信噪比zui高，应使用自发荧光低的膜，如 Immun-Blot® low fluorescence （LF） PVDF membrane。
• 许多封闭液都成功用于荧光检测。我们建议使用0.5-5% 酪蛋白、zui多5%的脱脂奶粉，或zui多3% BSA，溶于TTBS中。
• 缓冲液中的颗粒可能停留在膜上，并造成荧光假象。只使用高质量的试剂，并对所有缓冲液过滤灭菌。
• 使用钝的镊子从边缘操作。避免划破膜或弄皱，这会在荧光检测时造成假象。
• 使用铅笔来标记膜，因为许多墨水都会发出荧光。
• 溴酚蓝会发出荧光。确保染料与样品已分开，切掉凝胶上包含染料的部分，或省掉样品缓冲液中的溴酚蓝。
• 无需在暗处开展免疫检测；正常的室内灯光不会使荧光标记的抗体发生光漂白。不过，荧光标记抗体的储液应保存在暗处。
• 在处理膜时，使用无粉末的手套，以避免膜上出现假象或指纹。
多重分析的小贴士
• 使用来自不同宿主的一抗（如小鼠和兔）。两个亲缘关系相近物种的抗体（如大鼠和小鼠）通常会造成交叉反应，即使抗体已经过交叉吸附。
• 使用经过交叉吸附的二抗，以避免交叉反应。
• 使用光谱上不同的荧光基团偶联物，避免交叉通道荧光。
• 在同时检测多个目标之前，单独优化每个目标的检测。由于一些一抗并非很特异，在膜上会产生多条带，故多重实验之前的单目标检测将有助于确定每个抗体的条带模式。
• 大部分膜在波长较短的激发光下会显示出较高的背景。记住，在蓝色通道检测zui强的目标，在绿色通道检测中等目标，而保留红色通道来检测zui弱的目标。
OneMinute Western印迹剥离缓冲液
gmbiosciences OneMinute Western印迹剥离缓冲液
| OneMinute ® Western印迹剥离缓冲液在一分钟内，你的膜是准备重新探测 |
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| 一分钟：在室温下30秒，洗涤3次10秒，无重新阻塞。 竞争者：在50℃下15分钟，洗涤3x 10min，重新封闭1小时，洗涤3x 15min |
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| 订购信息 | |||||||||||||||
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virusys HHV-6B Western Strips简介
virusys H6G309说明书
virusys HHV-6B Western Strips (ICE) – 10/tube + MW Marker
HHV-6B西部带（ICE）-10 /管+ MW标记
这些试条旨在用于筛选抗体对病毒蛋白的反应性。该测定法仅用于研究目的，并不打算用于人类或动物的诊断。
提供的材料
十（10）条含有电泳的灭活抗原的硝酸纤维素条
来自同一电泳的一（1）个分子量指示条与测试条一起运行
储存和稳定性
条带应存储在-20°C或更低的温度下，以获得稳定性。在标签上打印的有效期之前使用。
所需材料但未提供
识别病毒抗原的一抗。
洗涤缓冲液（通常为磷酸盐缓冲盐水– 0.05％Tween-20 pH 7.4 – PBST20）
二抗识别一抗的种类/同种型
抗体稀释剂（通常为PBST20加5％的二抗正常血清。例如，在5％的PBST20正常山羊血清中稀释的山羊抗小鼠IgG-AP）
二抗酶底物
转换后的基材检测系统
适用于3毫米x 62毫米西方条的容器（15毫升离心管或多通道托盘）
H6G309 HHV-6B西部带（ICE）-10 /管+ MW标记 $ 225.00
WB快速封闭液 Western封闭液|Fast Blocking Western
WB快速封闭液 Western封闭液|Fast Blocking Western
产品说明书
FAQ
COA
已发表文献
Fast Blocking Western （快速封闭液）是新一代的即用型、高效快速Western封闭液。封闭时间仅需 10 分钟，效果优于脱脂奶粉、BSA、酪蛋白等传统封闭液，简化了 Western 印迹方案。使用快速封闭液封闭可阻止抗体检测期间的非特异性结合，但允许进行特异性检测。与传统封闭液相比，有更高的信号，更低的背景值，信噪比更高。
该试剂不含有哺乳动物来源的蛋白成分，避免与抗体发生交叉反应。该缓冲液可与磷酸化的抗体以及NC膜和 PVDF 膜兼容。但不适用于生物素标记的抗体。
产品特点
1）即用型封闭液，无需配制，使用便捷；
2）封闭时间短，仅需10 min，快速高效；
3）背景低、信噪比高，优于常规奶粉、BSA、酪蛋白等封闭效果；
4）不含哺乳动物来源的蛋白，确保低背景和高信噪比，可兼容磷酸化的抗体。
运输与保存方法
冰袋（wet ice）运输。产品4ºC保存，有效期至少1年。
操作方法
1) 完成转膜后，将膜移入到平皿或者其他适合的容器中（可以不洗涤膜）。
2) 根据膜的大小，加入适量体积的 Fast Blocking Western 封闭液，确保充分浸没覆盖膜，对于 7.5x
8 cm 的膜推荐使用量 5-10 mL。
3) 置于水平摇床上，室温条件下振荡孵育10分钟。
4) 取出封闭完成的膜，用洗涤液冲洗膜2-3次，即可用于一抗孵育等后续 Western blot 实验。
注意事项
1）通常用于 PVDF 膜或 NC 膜的封闭时间为10分钟。对于背景低的抗体，可以缩短到5分钟，而对于一些背景非常高的抗体，可以尝试将封闭时间延长为30-60分钟。
2）由于没有任何一种封闭液是适用于所有实验体系的，因此对于一些特殊的实验或抗体，可能需要根据具体情况考虑使用其它更合适的封闭液。
3）信号弱或者无信号：有可能是上样量不足；转膜效率低；抗体效价低，特异性差等原因造成，需要根据实验情况优化实验条件。
4）背景高：有可能是抗体使用量过多；膜洗涤时间不足；抗体和封闭液发生交叉反应；试剂或仪器设备被污染等原因造成，需要根据实验具体情况进行调整。
5）为了您的安全和健康，实验时请穿实验服并戴一次性手套操作。
6）本产品仅作科研用途！
HB210917
Fast Blocking Western （快速封闭液）是新一代的即用型、高效快速Western封闭液。封闭时间仅需 10 分钟，效果优于脱脂奶粉、BSA、酪蛋白等传统封闭液，简化了 Western 印迹方案。使用快速封闭液封闭可阻止抗体检测期间的非特异性结合，但允许进行特异性检测。与传统封闭液相比，有更高的信号，更低的背景值，信噪比更高。
该试剂不含有哺乳动物来源的蛋白成分，避免与抗体发生交叉反应。该缓冲液可与磷酸化的抗体以及NC膜和 PVDF 膜兼容。但不适用于生物素标记的抗体。
产品特点
1）即用型封闭液，无需配制，使用便捷；
2）封闭时间短，仅需10 min，快速高效；
3）背景低、信噪比高，优于常规奶粉、BSA、酪蛋白等封闭效果；
4）不含哺乳动物来源的蛋白，确保低背景和高信噪比，可兼容磷酸化的抗体。
运输与保存方法
冰袋（wet ice）运输。产品4ºC保存，有效期至少1年。
操作方法
1) 完成转膜后，将膜移入到平皿或者其他适合的容器中（可以不洗涤膜）。
2) 根据膜的大小，加入适量体积的 Fast Blocking Western 封闭液，确保充分浸没覆盖膜，对于 7.5x
8 cm 的膜推荐使用量 5-10 mL。
3) 置于水平摇床上，室温条件下振荡孵育10分钟。
4) 取出封闭完成的膜，用洗涤液冲洗膜2-3次，即可用于一抗孵育等后续 Western blot 实验。
注意事项
1）通常用于 PVDF 膜或 NC 膜的封闭时间为10分钟。对于背景低的抗体，可以缩短到5分钟，而对于一些背景非常高的抗体，可以尝试将封闭时间延长为30-60分钟。
2）由于没有任何一种封闭液是适用于所有实验体系的，因此对于一些特殊的实验或抗体，可能需要根据具体情况考虑使用其它更合适的封闭液。
3）信号弱或者无信号：有可能是上样量不足；转膜效率低；抗体效价低，特异性差等原因造成，需要根据实验情况优化实验条件。
4）背景高：有可能是抗体使用量过多；膜洗涤时间不足；抗体和封闭液发生交叉反应；试剂或仪器设备被污染等原因造成，需要根据实验具体情况进行调整。
5）为了您的安全和健康，实验时请穿实验服并戴一次性手套操作。
6）本产品仅作科研用途！
HB210917
暂无内容
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Western blot电泳电转通用缓冲液 WB电泳电转缓冲液|Universal Eectrophoresis and Transfer buffer(for Western blot)
Western blot电泳电转通用缓冲液 WB电泳电转缓冲液|Universal Eectrophoresis and Transfer buffer(for Western blot)
产品说明书
FAQ
COA
已发表文献
产品简介
Western blot实验首先需要进行电泳分离目的蛋白，然后将分开的蛋白从凝胶转移到固相基质如硝化纤维素膜或PVDF膜上，从而进行随后的免疫印迹检测。Tris-甘氨酸是最通用的电泳和转膜缓冲液，本品是经改进的缓冲液配方，以干粉的形式提供，使用时只需要用去离子水溶解即可。
产品信息
|
货号 |
20329ES10/20329ES50 |
|
规格 |
10×1 L /50×1 L |
储存条件
室温密封保存。有效期2年。
使用说明
将本品1包溶解于1 L去离子水中，混匀，即形成1×电泳缓冲液（1×电泳缓冲液中含有25 mM Tris、192 mM Glycine、0.1% SDS）；取800 mL的1×电泳缓冲液加入200 mL乙醇即得到湿转及半干转通用电转缓冲液。
注意事项
1.不建议反复使用或长期放置缓冲液，否则会降低电泳及转膜效果。
2. 本产品仅作科研用途！
3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
Ver.CN20230921
产品简介
Western blot实验首先需要进行电泳分离目的蛋白，然后将分开的蛋白从凝胶转移到固相基质如硝化纤维素膜或PVDF膜上，从而进行随后的免疫印迹检测。Tris-甘氨酸是最通用的电泳和转膜缓冲液，本品是经改进的缓冲液配方，以干粉的形式提供，使用时只需要用去离子水溶解即可。
产品信息
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货号 |
20329ES10/20329ES50 |
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规格 |
10×1 L /50×1 L |
储存条件
室温密封保存。有效期2年。
使用说明
将本品1包溶解于1 L去离子水中，混匀，即形成1×电泳缓冲液（1×电泳缓冲液中含有25 mM Tris、192 mM Glycine、0.1% SDS）；取800 mL的1×电泳缓冲液加入200 mL乙醇即得到湿转及半干转通用电转缓冲液。
注意事项
1.不建议反复使用或长期放置缓冲液，否则会降低电泳及转膜效果。
2. 本产品仅作科研用途！
3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
Ver.CN20230921
Q：该产品如何配置工作液？
A：用去离子水溶解即可。
Q：配置的电泳或电转缓冲液如何贮存？
A：室温运输，低温保存。
Q：配置好的电泳或电转缓冲液可以储存多久？
A：不建议反复使用或长期放置缓冲液，否则会降低电泳及转膜效果。
Q：大分子蛋白在转膜过程中容易形成沉淀，怎么办？
A：对于大蛋白>100KD 而言，其在凝胶电泳分离迁移较慢，从凝胶中转出也非常慢， 大蛋白易在凝胶中形成沉淀，从而影响转膜，在转膜时在转膜缓冲液中加入 SDS 至终浓度为 0.1%可以避免这种情况的发生；同时由于甲醇易使 SDS 从蛋白上脱失，因此应降低甲醇的浓度至 10%或者更低。
Q：电泳液适合什么体系？配成的电转液适合什么体系？
A: 本产品配置的电泳液是甘氨酸体系的，可以用于甘氨酸体系的自配胶和hepes体系的预制胶（建议分离30kD以上的蛋白）。加甲醇或乙醇配成转膜液后，适用于所有体系的胶（甘氨酸体系的自配胶、hepes体系和Bis tris的预制胶）。
暂无内容