Hifair^® AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis Kit是基于Hifair^® III 1st Strand cDNA Synthesis Kit开发的快速逆转录试剂盒，适用于PCR扩增以及RT-qPCR实验。与Hifair^® III 1st Strand cDNA Synthesis Kit相比，具有稳定的检出率、特异性、产量保证，且反转录总时长最快可低于6分钟，大大缩短了实验时间。

该试剂盒包含gDNA Digester Mix，可去除RNA模板中残留的基因组DNA污染，保证后续结果更加可靠。该试剂盒提供两种cDNA合成引物：Random Primers N6和Oligo (dT)₁₈，用户可根据需要，选择Random Primers N6，Oligo (dT)₁₈或Gene Specific Primers作为逆转录引物，合成的单链cDNA产物可直接用来进行后续PCR或者qPCR反应。

 

产品组分

组分编号	组分名称	产品编号/规格
		11149ES10（10 T）	11149ES60（100 T）
11149-A	4× Hifair®AdvanceFast SuperMix	50 μL	500 μL
11149-B	5×gDNA Digester Mix	20 μL	200 μL
11149-C	Random Primers（50μM）	20 μL	200 μL
11149-D	Oligo d(T)18 Primers（50μM）	20 μL	200 μL
11149-E	RNase-free Water	200 μL	1 mL* 2

 

运输和保存方法

冰袋运输。-20℃保存，有效期12个月。逆转录产物可立即用于后续反应，也可-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。

第一链cDNA合成操作步骤

一、若实验需要去除残留基因组DNA

1. gDNA消化

在RNase-free离心管中配制如下混合液，用移液器轻轻吹打混匀。42℃孵育2 min。

组分	使用量
RNase-free H2O	To 10 μL
5×gDNA Digester Mix	2 μL
Total RNA	10 pg -5 μg*
or mRNA	10 pg-500 ng*

 

2. 逆转录反应体系配制（20 μL体系）

组分	使用量
上一步的反应液	10 μL
4×Hifair®AdvanceFast SuperMix	5 μL
Oligo d(T)18 Primers（50μM）	2 μL
or Random Primers (* for qPCR)（50μM）	or 2 μL
or Gene Specific Primer (2 μM)	or 1 μL
RNase-free Water	To 20 μL

【注】：1）引物投入量可根据模板投入量调整，如果逆转录产物用于qPCR实验，推荐Oligo (dT)₁₈与Random Primers 1:1混合使用。

2）建议先加入4×Hifair^®AdvanceFast SuperMix 混匀后再加入逆转录引物，以保证引物不受gDNA Digester影响。

3）体系配制完成后，请用移液器轻轻吹打混匀。

 

3. 逆转录程序设置

温度	时间
55℃	5 min
85℃	5 s

 

二、若实验无需去除基因组DNA

1. 逆转录反应体系配制（20 μL体系）

组分	使用量
4×Hifair®AdvanceFast SuperMix	5 μL
Oligo d(T)18 Primers（50μM）	2 μL
or Random Primers (* for qPCR) （50μM）	or 2 μL
or Gene Specific Primer (2 μM)	or 1 μL
Total RNA	10 pg -5 μg
or mRNA	10 pg – 500 ng
RNase-free Water	To 20 μL

 

2. 逆转录程序设置

温度	时间
55℃	5 min
85℃	5 s

【注】： 1）建议Total RNA的投入量不超过2 μg。如果目的基因的表达丰度低，可增加投入量至最多5μg Total RNA。

2）对于高GC含量模板或者复杂模板，可将逆转录温度提高到60℃。

3）本产品可合成14 kb以下的cDNA序列，如需得到更长的cDNA产物，可适当延长逆转录时间。

 

注意事项

1）所有操作均应在冰上进行，且操作过程应避免RNase污染。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

3）本产品仅作科研用途！

 

HB221108