耐高盐全能核酸酶(Salt Active UltraNuclease)同Benzonase Nuclease

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FAQ

COA

已发表文献

Salt Active UltraNuclease GMP-grade(耐高盐全能核酸酶)是一种来源于海洋微生物重组非特异性核酸内切酶,UltraNuclease相比在0.5M NaCl条件下具有最佳活性,广泛应用于生产工艺流程中,有效去除核酸污染。

本品经基因工程改造在Escherichia coli (E. coli)表达纯化,不仅可在科学研究中降低细胞上清和细胞裂解液粘度提高蛋白纯化效率及功能研究;还可以应用在病毒纯化、疫苗生产、蛋白和多糖类制药工业作为宿主残留核酸去除试剂,将宿主残留核酸至皮克(pg)级别从而提高生物制品功效和安全性;并且可以有效防止细胞治疗和疫苗研究中人外周血单核细胞(PBMC)的结团。

本品以无菌液体酶的形式提供,储存于缓冲液(25 mM Tris-HCl5 mM MgCl2500 mM NaCl50% GlycerolpH 7.5)中,无色透明液体。

产品性质

来源

E. coli

分子量(Molecular Weight

24.7 kDa

等电点

9.61

纯度(Purity

99%

酶活(Enzyme Activity

250-300 U/μL

温度(Optimum Temperature

37℃(工作范围0-42℃

辅助因子(Cofactor

1-10 mM Mg2+

储存缓冲液(Storage Buffer

25 mM Tris-HCl5 mM MgCl2500 mM NaCl50% GlycerolpH 7.5

活性单位定义(Unit Definition

一定条件下,在底物过量时 37 30 min 260 nm 处吸光值变化 1.0 所需要的酶量定义为一个活性单位U)。

 

运输和保存方法

干冰运输。-15℃ ~ -25℃保存,有效期2年。若是打开包装后并4℃放置超过一周,建议过滤除菌防止微生物污染。

注意事项

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

使用方法

1样本准备

贴壁细胞:去除培养基,用PBS细胞,去除上清。

悬浮细胞:离心收集细胞,用PBS清洗细胞,6,000 rpm 离心10 min,收集沉淀。

大肠杆菌:离心收集菌体,用PBS清洗1次,8,000 rpm 离心5 min,收集沉淀。

2、样品处理

将收集到的细胞沉淀按照质量(g)与体积(mL)比1(10~20) 的比例进行裂解处理,也可通过在冰上或室温通过机械或化学方法裂解细胞(1 g细胞约为109个)

3、酶的添加

1. 添加适量MgCl2将反应体系中的Mg2+ 浓度调整在1-5 mM范围内,将pH调整成7.5-9

2按照250 Units消化1 g细胞沉淀的比例添加Salt Active UltraNuclease37孵育30min以上。也可以自行选定添加方案,在一定范围内增加酶量,消化所需时间相应减少。

】耐高盐全能核酸酶的酶活受离子浓度、反应温度及pH等因素的影响,初次使用时建议摸索最适浓度。

4、上清获取

12,000 rpm的转速离心30min获得细胞裂解液上清,进行后续相关实验。

若溶液偏酸性或者偏碱性,含有较高浓度的去垢剂、变性剂,应适当增加酶的用量或延长孵育时间。

HB220922

 

Q:你们有FDA的备案吗?(你们能提供备案凭证吗?提供申报材料?)

A:我们有DMF的备案证,如果后面后申报需求,我们可以提供全套的申报材料也可以协助申报。

Q:全能核酸酶残留检测的检测下限是多少?

A:检测下限 23 pg/mL,采用的是ELISA的方式,标曲范围:0.047~3 ng/mL

Q:这个酶的稳定性怎么样?

A:酶稳定性这块我们做过温度、ph、磷酸根离子、sds、反复冻融,运输等测试,均有不错的结果,具体实验数据老师如果有需要我们可以提供。

耐高盐全能核酸酶(Salt Active UltraNuclease)同Benzonase Nuclease

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Salt Active UltraNuclease GMP-grade(耐高盐全能核酸酶)是一种来源于海洋微生物重组非特异性核酸内切酶,UltraNuclease相比在0.5M NaCl条件下具有最佳活性,广泛应用于生产工艺流程中,有效去除核酸污染。

本品经基因工程改造在Escherichia coli (E. coli)表达纯化,不仅可在科学研究中降低细胞上清和细胞裂解液粘度提高蛋白纯化效率及功能研究;还可以应用在病毒纯化、疫苗生产、蛋白和多糖类制药工业作为宿主残留核酸去除试剂,将宿主残留核酸至皮克(pg)级别从而提高生物制品功效和安全性;并且可以有效防止细胞治疗和疫苗研究中人外周血单核细胞(PBMC)的结团。

本品以无菌液体酶的形式提供,储存于缓冲液(25 mM Tris-HCl5 mM MgCl2500 mM NaCl50% GlycerolpH 7.5)中,无色透明液体。

产品性质

来源

E. coli

分子量(Molecular Weight

24.7 kDa

等电点

9.61

纯度(Purity

99%

酶活(Enzyme Activity

250-300 U/μL

温度(Optimum Temperature

37℃(工作范围0-42℃

辅助因子(Cofactor

1-10 mM Mg2+

储存缓冲液(Storage Buffer

25 mM Tris-HCl5 mM MgCl2500 mM NaCl50% GlycerolpH 7.5

活性单位定义(Unit Definition

一定条件下,在底物过量时 37 30 min 260 nm 处吸光值变化 1.0 所需要的酶量定义为一个活性单位U)。

 

运输和保存方法

干冰运输。-15℃ ~ -25℃保存,有效期2年。若是打开包装后并4℃放置超过一周,建议过滤除菌防止微生物污染。

注意事项

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

使用方法

1样本准备

贴壁细胞:去除培养基,用PBS细胞,去除上清。

悬浮细胞:离心收集细胞,用PBS清洗细胞,6,000 rpm 离心10 min,收集沉淀。

大肠杆菌:离心收集菌体,用PBS清洗1次,8,000 rpm 离心5 min,收集沉淀。

2、样品处理

将收集到的细胞沉淀按照质量(g)与体积(mL)比1(10~20) 的比例进行裂解处理,也可通过在冰上或室温通过机械或化学方法裂解细胞(1 g细胞约为109个)

3、酶的添加

1. 添加适量MgCl2将反应体系中的Mg2+ 浓度调整在1-5 mM范围内,将pH调整成7.5-9

2按照250 Units消化1 g细胞沉淀的比例添加Salt Active UltraNuclease37孵育30min以上。也可以自行选定添加方案,在一定范围内增加酶量,消化所需时间相应减少。

】耐高盐全能核酸酶的酶活受离子浓度、反应温度及pH等因素的影响,初次使用时建议摸索最适浓度。

4、上清获取

12,000 rpm的转速离心30min获得细胞裂解液上清,进行后续相关实验。

若溶液偏酸性或者偏碱性,含有较高浓度的去垢剂、变性剂,应适当增加酶的用量或延长孵育时间。

HB220922

 

Q:你们有FDA的备案吗?(你们能提供备案凭证吗?提供申报材料?)

A:我们有DMF的备案证,如果后面后申报需求,我们可以提供全套的申报材料也可以协助申报。

Q:全能核酸酶残留检测的检测下限是多少?

A:检测下限 23 pg/mL,采用的是ELISA的方式,标曲范围:0.047~3 ng/mL

Q:这个酶的稳定性怎么样?

A:酶稳定性这块我们做过温度、ph、磷酸根离子、sds、反复冻融,运输等测试,均有不错的结果,具体实验数据老师如果有需要我们可以提供。

耐高盐全能核酸酶(Salt Active UltraNuclease)同Benzonase Nuclease

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热不稳定性耐高盐核酸酶(HL-SAN) 说明书

热不稳定性耐高盐核酸酶(HL-SAN) 说明书


产品货号

货号

规格

价格

78BEA10011-25000U

25000U

3,000.00

78BEA10011-5000U

5000U

1,000.00

产品详情

无论是实验室规模样品制备、还是生产规模工艺过程,去除核酸都可以改善工艺流程,如蛋白纯化、病毒载体制备、mNGS中样品处理等过程。而核酸酶的选择,就显得特别重要。Heat Labile-Salt Active Nuclease (热不稳定性耐高盐核酸酶,HL-SAN) 是一种非特异性内切酶,在高盐浓度下具有最佳活性;且该酶在多种缓冲液中都有活性,很容易通过还原剂处理而失活。这些特性使HL-SAN在需要去除DNA和RNA的应用中,更为适合。

核酸污染,特别是宿主基因组DNA污染,在几乎所有工艺流程及生物制品的生产中,都是需要重点解决的问题。一方面,宿主DNA的存在,影响目标产物的纯化及下游质量分析等。另一方面,宿主DNA残留能引起机体严重的免疫反应,是生物制品的关键质量参数之一,FDA及NMPA等对Host Cell DNA (HCD)有严格的质控要求。宿主基因组DNA中,组蛋白与DNA形成核小体,核小体紧密折叠形成结构复杂的染色质。组蛋白与DNA间存在强烈的离子作用及疏水作用,再加上特殊的结构,导致宿主DNA很难被准确检测并清除。已有文献表明,高盐浓度下组蛋白与DNA解离相对che底,这有利于宿主DNA的检测及去除。但市售的绝大多数核酸酶在高盐浓度下活性很弱,甚至wan全失活。而耐高盐的HL-SAN成了这类应用的理想选择。

特点

高盐条件下,DNA清除效率更高,宿主DNA残留更少;

pI为9.6,容易跟绝大多数蛋白分离;

还原剂存在时,酶易失活,减少对后续流程的影响。

活性测定条件

1:高盐度溶液中的最佳活性。HL-SAN 在约 0.5 M NaCl 下具有最佳活性,但在 [NaCl] 和 [KCl] 的广泛范围内运行。HL-SAN 的活性在 25 mM Tris-HCl 缓冲液、pH 8.5、5 mM MgCl 2 和不同的 [NaCl] 或 [KCl] 中测试。最大活性设置为 100%。

图 2:温度和活动。HL-SAN 在 ~35°C 时具有最佳活性,但在很宽的温度范围内起作用(10°C 和 50°C 下的活性为 20%)。在含有 5 mM MgCl 2 和 0.5 M NaCl 的pH 8.5 的 25 mM Tris-HCl 缓冲液中测试 HL-SAN 的活性。

3: MgCl 2 和 MnCl 2 浓度对 HL-SAN 活性的影响。

25 mM Tris-HCl 缓冲液、pH 8.5、0.5 M NaCl 和不同浓度的 MgCl 2 或 MnCl 2 中测试 HL-SAN 的活性。将含有 5 mM MgCl 2的样品的活性 设为 100%。

4: HL-SAN 将 ssDNA 消化为 ~5-13 nt,将 dsDNA 消化为 ~5-7 nt。ssDNA 最终产物的大小从 ~5-13 nt 不等,而 dsDNA 被消化到大约 ~5-7 nt。最终产物的大小似乎取决于 DNA 序列。底物 1 和 2 是具有不同序列的 ssDNA,底物 3 和 4 是具有相似序列但在不同末端具有 FAM 标记的 dsDNA。底物 5 是 dsDNA,其序列与底物 3 和 4 相同,但两端带有 FAM 标记。

适用范围

病原微生物检测应用,如宏基因组测序(mNGS)样品去除宿主DNA;

蛋白纯化,特别是DNA结合蛋白;

病毒载体制备,如腺相关病毒(AAV)、腺病毒(AdV)等;

其他需要去除宿主DNA的应用等。

应用举例

1、Nanopore metagenomics enables rapid clinical diagnosis of bacterial lower respiratory infection.

Charalampous T, Kay GL, Richardson H, Aydin A, Baldan R., Jeanes C, Rae D, Grundy S, Turner DJ, Wain J, Leggett RM, Livermore DM, O’Grady J.

Nature Biotechnology. 2019; 37: 783–792.

2、A Structured Workflow for Mapping Human Sin3 Histone Deacetylase Complex Interactions Using Halo-MudPIT Affinity-Purification Mass Spectrometry.

Banks CAS, Thornton JL, Eubanks CG, Adams MK, Miah S, Boanca G, Liu X, Katt M, Parmely T, Florens LA, Washburn MP.

Molecular & Cellular Proteomics. 2018; 17 (7): 1432-1447.

3、Biochemical characterization of ParI, an orphan C5-DNA methyltransferase from Psychrobacter arcticus 273-4.

Grgic M, Williamson A, Kjaereng Bjerga GE, Altermark B, Leiros I.

Protein Expr Purif. 2018; 150: 100-108.

4、Biochemical Characterization of a Family 15 Carbohydrate Esterase from a Bacterial Marine Arctic Metagenome.

De Santi C, Willassen NP, Williamson A.

PLoS ONE. 2016; 11(7): e0159345.

5、Recombinant expression and purification of an ATP-dependent DNA ligase from Aliivibrio salmonicida.

Williamson A, Pedersen H.

Protein Expr Purif. 2014; 97: 29-36.

注意事项

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作!

本产品主要用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。

质量控制

来源:在毕赤酵母中重组生产。

活性:HL-SAN在10-50°C的温度范围内具有高活性。 活动的最佳 NaCl 浓度为 0.5 M,工作范围为 0.25–1 M。活动需要 Mg2+ (>1 mM)。 工作 pH 范围为 7.5-9.5,最佳 pH 值为 9.0。

比活度:≥ 175 000 Units/mg。

单位定义:一个单位定义为在 37°C 下 30 分钟内 1 A 在 260 nm 处的吸光度增加,使用 50 μg/ml 小牛胸腺 DNA(D-1501,Sigma)在由 25 mM Tris-组成的缓冲液中 HCl,pH 8.5 (25°C),5 mM MgCl2,500 mM NaCl。

热不稳定性耐高盐核酸酶(HL-SAN)说明书

热不稳定性耐高盐核酸酶(HL-SAN)说明书

产品详情

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价格

78BEA10011-25000U

25000U

4000.00

78BEA10011-5000U

5000U

1500.00

产品详情

无论是实验室规模样品制备、还是生产规模工艺过程,去除核酸都可以改善工艺流程,如蛋白纯化、病毒载体制备、mNGS中样品处理等过程。而核酸酶的选择,就显得特别重要。Heat Labile-Salt Active Nuclease (热不稳定性耐高盐核酸酶,HL-SAN) 是一种非特异性内切酶,在高盐浓度下具有最佳活性;且该酶在多种缓冲液中都有活性,很容易通过还原剂处理而失活。这些特性使HL-SAN在需要去除DNA和RNA的应用中,更为适合。

核酸污染,特别是宿主基因组DNA污染,在几乎所有工艺流程及生物制品的生产中,都是需要重点解决的问题。一方面,宿主DNA的存在,影响目标产物的纯化及下游质量分析等。另一方面,宿主DNA残留能引起机体严重的免疫反应,是生物制品的关键质量参数之一,FDA及NMPA等对Host Cell DNA (HCD)有严格的质控要求。宿主基因组DNA中,组蛋白与DNA形成核小体,核小体紧密折叠形成结构复杂的染色质。组蛋白与DNA间存在强烈的离子作用及疏水作用,再加上特殊的结构,导致宿主DNA很难被准确检测并清除。已有文献表明,高盐浓度下组蛋白与DNA解离相对容易,这有利于宿主DNA的检测及去除。但市售的绝大多数核酸酶在高盐浓度下活性很弱,甚至失活。而耐高盐的HL-SAN成了这类应用的理想选择。

特点

高盐条件下,DNA清除效率更高,宿主DNA残留更少;

pI为9.6,容易跟绝大多数蛋白分离;

还原剂存在时,酶易失活,减少对后续流程的影响。

活性测定条件

 

1:高盐度溶液中的最佳活性。HL-SAN 在约 0.5 M NaCl 下具有最佳活性,但在 [NaCl] 和 [KCl] 的广泛范围内运行。HL-SAN 的活性在 25 mM Tris-HCl 缓冲液、pH 8.5、5 mM MgCl 2 和不同的 [NaCl] 或 [KCl] 中测试。最大活性设置为 100%。

 

2:温度和活动。HL-SAN 在 ~35°C 时具有最佳活性,但在很宽的温度范围内起作用(10°C 和 50°C 下的活性为 20%)。在含有 5 mM MgCl 2 和 0.5 M NaCl 的pH 8.5 的 25 mM Tris-HCl 缓冲液中测试 HL-SAN 的活性。

 

3: MgCl 2 和 MnCl 2 浓度对 HL-SAN 活性的影响。

25 mM Tris-HCl 缓冲液、pH 8.5、0.5 M NaCl 和不同浓度的 MgCl 2 或 MnCl 2 中测试 HL-SAN 的活性。将含有 5 mM MgCl 2的样品的活性 设为 100%。

 

4: HL-SAN 将 ssDNA 消化为 ~5-13 nt,将 dsDNA 消化为 ~5-7 nt。ssDNA 最终产物的大小从 ~5-13 nt 不等,而 dsDNA 被消化到大约 ~5-7 nt。最终产物的大小似乎取决于 DNA 序列。底物 1 和 2 是具有不同序列的 ssDNA,底物 3 和 4 是具有相似序列但在不同末端具有 FAM 标记的 dsDNA。底物 5 是 dsDNA,其序列与底物 3 和 4 相同,但两端带有 FAM 标记。

 

适用范围

病原微生物检测应用,如宏基因组测序(mNGS)样品去除宿主DNA;

蛋白纯化,特别是DNA结合蛋白;

病毒载体制备,如腺相关病毒(AAV)、腺病毒(AdV)等;

其他需要去除宿主DNA的应用等。

应用举例

1、Nanopore metagenomics enables rapid clinical diagnosis of bacterial lower respiratory infection.

Charalampous T, Kay GL, Richardson H, Aydin A, Baldan R., Jeanes C, Rae D, Grundy S, Turner DJ, Wain J, Leggett RM, Livermore DM, O’Grady J.

Nature Biotechnology. 2019; 37: 783–792.

2、A Structured Workflow for Mapping Human Sin3 Histone Deacetylase Complex Interactions Using Halo-MudPIT Affinity-Purification Mass Spectrometry.

Banks CAS, Thornton JL, Eubanks CG, Adams MK, Miah S, Boanca G, Liu X, Katt M, Parmely T, Florens LA, Washburn MP.

Molecular & Cellular Proteomics. 2018; 17 (7): 1432-1447.

3、Biochemical characterization of ParI, an orphan C5-DNA methyltransferase from Psychrobacter arcticus 273-4.

Grgic M, Williamson A, Kjaereng Bjerga GE, Altermark B, Leiros I.

Protein Expr Purif. 2018; 150: 100-108.

4、Biochemical Characterization of a Family 15 Carbohydrate Esterase from a Bacterial Marine Arctic Metagenome.

De Santi C, Willassen NP, Williamson A.

PLoS ONE. 2016; 11(7): e0159345.

5、Recombinant expression and purification of an ATP-dependent DNA ligase from Aliivibrio salmonicida.

Williamson A, Pedersen H.

Protein Expr Purif. 2014; 97: 29-36.

注意事项

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作!

本产品主要用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。

质量控制

来源:在毕赤酵母中重组生产。

活性:HL-SAN在10-50°C的温度范围内具有高活性。 活动的最佳 NaCl 浓度为 0.5 M,工作范围为 0.25–1 M。活动需要 Mg2+ (>1 mM)。 工作 pH 范围为 7.5-9.5,最佳 pH 值为 9.0。

比活度:≥ 175 000 Units/mg。

单位定义:一个单位定义为在 37°C 下 30 分钟内 1 A 在 260 nm 处的吸光度增加,使用 50 μg/ml 小牛胸腺 DNA(D-1501,Sigma)在由 25 mM Tris-组成的缓冲液中 HCl,pH 8.5 (25°C),5 mM MgCl2,500 mM NaCl。