点突变试剂盒1.0说明书

点突变试剂盒1.0说明书

产品详情  

货号

规格

价格

78BDA10006-10次

10次

560.00

78BDA10006-20次

20次

896.00

78BDA10006-50次

50次

1820.00

产品描述

本试剂盒可以在质粒DNA序列中任意位点引入特定的定突变,包括碱基插入、碱基deletion、碱基变换等。

首先用高保真DNA聚合酶与带有突变碱基与硫代修饰的引物,PCR扩增野生型质粒,将质粒线性化并引入突变位点,然后用化学重组试剂将质粒重组成环状质粒。扩增质粒的一对引物各自5'末端的10-12个碱基互补配对,用于重组环化质粒。将带有突变碱基的线性化质粒PCR产物用化学重组试剂处理环化质粒,然后进行DH5a转化,完成基因定点突变。

本公司化学法突变试剂盒含有高保真DNA聚合酶2XPCR Mix、化学重组试剂,可以从头到尾完成整个实验,极大的方便了实验操作。另有无高保真DNA聚合酶2XPCR Mix的化学法突变试剂盒。

产品特点

DNA定点突变,包括碱基插入、碱基deletion、碱基变换等。

产品组分

组分

78BDA10004

78BDA10004

78BDA10004

2×PCR Mix

250 μl

500 μl

1250 μl

化学重组试剂

20 μl

40 μl

100ul

10X化学重组buffer

20 μl

40 μl

100ul

突变线性质粒DNA

50ul

100ul

250ul

使用方法

使用方法

01. 设计突变引物

引物设计总原则:在正反向扩增引物的5'端引入末端互补同源序列,使扩增后的线性化质粒片段5'3'末端带有10-12个碱基的同源序列,用于重组环化质粒。

正向扩增引物设计原则:5'-末端同源序列+突变位点+硫代修饰位点+目标序列特异性正向配对序列-3'

反向扩增引物设计原则:5'-末端同源序列+突变位点+硫代修饰位点+目标序列特异性反向配对序列-3'

正/反向扩增引物与质粒模板的特异性配对序列Tm55-65℃为佳,末端同源区序列长度为10-12 个碱基(一般情况同源区10个碱基足以)。

一般引物不需PAGE纯化,如果最终引物长度超过40 bp,推荐合成时选用PAGE纯化,有助于提高PCR与点突变成功率。

02. 反向PCR扩增线性化质粒,并引入突变位点

为了防止突变位点之外的碱基额外突变,确保使用高保真聚合酶进行反向PCR50ulPCR体系中,推荐使用1-5ng 环状质粒模板。限制性内切酶DpnI处理PCR产物,可以降低野生型质粒形成的克隆数。由于本突变试剂盒效率高,可省略DpnI消化处理,对突变成功率影响不大。

03. 重组环化反应的线性化质粒使用量

无需精确计算化学法重组反应的线性化质粒PCR产物加入量,一般使用3-5ul

04. 质粒重组环化反应

1)室温配制以下反应体系:

组分            重组反应a     阴性对照b       阳性对照c

线性化质粒       X μl           X μl              5 μl

化学重组试剂     2 μl           0 μl              2 μl

ddH20         to 10 μl        to 10 μl           to 10 μl

a. 割胶纯化的PCR产物进行重组反应时,一定在重组反应体系中加入1/10体积的化学重组Buffer

b. 用来确认野生型环状质粒残留,推荐进行。

c. 突变线性质粒DNA阳性对照反应可用来排除其他实验材料及操作因素的影响。

2)轻柔混匀后,在70℃反应8-10 min,置于室温或冰上冷却。

PCR仪及其它加热仪器上进行反应,重组环化效率在反应8-10 min左右达到最高。

重组环化产物可于-20℃存放1个月,待需要时解冻转化即可。

05.重组环化质粒产物转化

在冰上解冻克隆感受态细胞,冰上放置15min

5ul重组环化产物加入到50ul感受态细胞中,轻弹管壁混匀(请勿振荡混匀),冰上静置15-20 min重组产物转化体积最多不应超过所用感受态细胞体积的1/5

42℃水浴热激1-2min后,立即置于冰上冷却1- 2 min

加入450 μl SOCLB培养基(不添加抗生素)37℃摇菌30min-1h (转速200 – 250 rpm)

将相应抗性的LB平板固体培养基在37℃培养箱中预热30min(可省略)。

直接吸取20-100ul菌液到含有正确抗性的平板上,用无菌涂布棒涂匀。

37℃培养箱中倒置培养12 – 16 h

06.点突变测序鉴定

过夜培养后,重组环化反应转化平板上形成数百个单克隆,而不加化学重组试剂的阴性对照反应转化平板上的克隆数应显著少于前者。

挑取重组反应转化平板上2-3个克隆进行DNA序列测定,验证是否突变成功。

注意事项

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作!

本产品主要用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。

运输及保存方法

干冰运输。-20℃保存,有效期2年。

现货供应Agilent定点突变试剂盒

现货供应Agilent定点突变试剂盒

体外定点突变技术是研究蛋白质结构和功能之间复杂关系的有力工具,也是实验室中改造和优化基因常用的手段,对某个已知基因的特定碱基进行定点改变、缺失或者插入可以改变对应氨基酸序列和蛋白质结构,可以进一步了解蛋白质结构和功能之间的关系,探讨蛋白质的结构域。上海金畔生物常备品牌Agilent的各种定点突变检测试剂盒,并提供专业的技术支持,使您科研无忧! 您只需要3个简单步骤即可在一天时间内,采用任何双链质粒、按设计要求获得(插入、删除、置换)突变体。

名称

QuikChange® Multi

Site-Directed Mutagenesis Kit

200514,30次反应

200515,10次反应

QuikChange® Site-Directed Mutagenesis Kit

200519,30次反应

200518,10次反应

QuikChange® II Site-Directed

Mutagenesis Kit

200524,30次反应

200523,10次反应

QuikChange® XL Site-Directed

Mutagenesis Kit

200516,30次反应

200517,10次反应

QuikChange® II XL Site-Directed

Mutagenesis Kit

200522,30次反应

200521,10次反应

DNA多聚酶

QuikChange® Multi enzyme blend

Pfuturbo DNA polymerase

PfuUltra high-fidelity DNA polymerase,更加高保真,(见注解1)

Pfuturbo DNA polymerase,

PfuUltra high-fidelity DNA polymerase,更加高保真,(见注解1)

DpnI限制内切酶

用于消化模板质粒,识别序列是甲基化的GATC,可以识别绝大多数E.Coli来源的质粒,JM110和SCS110以及其它dcm-或dam-除外

反应缓冲液

Quicksolution reagent

含有Quicksolution reagent,确保反应顺利进行

感受态细胞

XL10-Gold®(见注解2)

XL1-Blue

XL10-Gold®(见注解2)

应用选择

<8Kb的质粒,多点突变

常用型,适用于<8Kb的质粒突变

适用于>8Kb或是突变困难的质粒

注解1:PfuUltra™高保真DNA聚合酶,Agilent货号:600380
由Pfu DNA聚合酶经基因工程改造而来,具有更佳的校验活力。数据显示PfuUltra™高保真DNA聚合酶的平均错配率为Pfu turbo DNA聚合酶的三分之一,为普通Taq DNA聚合酶的十八分之一,是目前保真度高的PCR酶。该酶添加ArchaeMaxx聚合酶增强因子,显著提高产量、减少扩增时间,并可扩增更长的模板。

注解2:XL10-Gold超级感受态细胞具有Hte基因型,因此提高了连接DNA的转化效率。该细胞具有*的转化效率,尤适用于大质粒转化。这种细胞也比XL 1-Blue长得快,因此可以获得更大的克隆。

新品推荐:

QuikChange® Lightning Site-Directed Mutagenesis Kits    210518  单点突变试剂盒

该试剂盒的优点主要包括:适用于各种大小的质粒(<14kb);高保真PCR酶和Dpnl酶同时升级;节约反应时间2/3,仅需半天;包含超级应感受态 细胞,物超所值;、的突变,决无意外突变。是200518/200519升级产品,您在选择购买的时候200518/200519,可以考虑选用该试剂盒,具体情况请直接咨询上海金畔生物

 

QuikChange Lightning Multi Site-Directed Mutagenesis Kit  210515 多点突变试剂盒

该试剂盒的优点主要包括:适用于各种大小的质粒(<14kb);5个点以内的突变;高保真PCR酶和Dpnl酶同时升级;节约反应时间2/3,仅需半天;包含超级应感受态 细胞,物超所值;、的突变,决无意外突变。是200514/200515升级产品,您在选择购买的时候200514/200515,可以考虑选用该试剂盒,具体情况请直接咨询上海金畔生物。

 

 

 

 

Agilent中国代理,​ Agilent上海代理,​ Agilent北京代理,​ Agilent广东代理,​ Agilent江苏代理​ Agilent湖北代理,​ Agilent天津代理,​ Agilent黑龙江代理,​ Agilent湖南代理​ Agilent内蒙古代理,​ Agilent吉林代理,​ Agilent福建代理,​ Agilent江苏代理,​ Agilent浙江代理,​ Agilent四川代理,​ Agilent代理,

 

上海金畔生物科技有限公司是实验试剂一站式采购服务商

1:强大的进口辐射能力,血清、抗体、耗材、大部分限制进口品等。

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3:提供加急服务,货品一般1-2周到货。

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6:我们还是Santa,Advanced Biotechnologies Inc,Athens Research & Technology,bangs,BBInternational,chemsaver,dianova,FD Neurotechnologies,Inc. FormuMax Scientific,Inc, AgilentnebrideAgilent, Glycotope Biotechnology GmbH; iduron,Innovative Research of America, LudAgilentr, neuroprobe,omicronbio, Polysciences,prospecbi, QA-BIO,quickzyme,RESEARCH DIETS,INC,sterlitech;sysy,TriLink BioTechnologies,Inc;Agilent-biochem,zyaAgilentn等几十家国外公司代理。

7:我们还是invitroAgilentn,qiaAgilentn,MiraiBioam,sigma;neb,roche,merck, chemsaver,BD, Agilent,pierce,BioLeAgilentnd等*批发,欢迎合作。

 

 

 

 

panagene PNAClamp突变检测试剂盒JAK2

 

Oncology – Tissue biopsy

panagene PNAClamp突变检测试剂盒JAK2

JAK2 V617F突变在血液相关疾病患者中发现,例如真性红细胞增多症,原发性血小板增多症和骨髓纤维化。鲁索替尼作为JAK抑制剂有效,因此它是确定药物反应的预后因素。
JAK2 V617F突变检测可轻松将MPD(骨髓增生性疾病)患者分类为诊断确定性的三个级别(可能,可能和确定),并确定哪种信号转导疗法适合每个患者。另外,WHO(世界卫生组织)已建议对JAK2 V617F突变进行测试作为临床测试。

货号

panagene PNAC-6001(大小:25个测试)

细节

 

 


 

可以通过PNAClamp ™  JAK2突变检测试剂盒检测JAK2 V617F突变 

 

 变异

尺寸 

 外显子14

25项测试 

 V617F(1849G> T)

 

特征

  • 01即使DNA量少也具有高灵敏度和特异性(10%野生/突变型混合DNA的LOD为1%)
  • 02基于实时PCR的即用型试剂盒
  • 03运行时间短(3小时内)

程序

  • 样品制备

  • 总DNA提取

  • 通过实时PCR扩增靶DNA

  • 结果分析

兼容样品类型

– 血液

兼容的实时PCR机

  • CFX96 
    (Bio-Rad)

  • LightCycler 480II 
    (罗氏)

  • ABI7500 
    (Thermo Fisher Scientific)

  • ABI7900HT 
    (Thermo Fisher Scientific)

  • 转子基因Q 
    (Qiagen)