PNGase F高纯度,高稳定性,高比活性详细信息

PNGase F(Glycerolfree)是种高度纯化和非常稳定的糖苷内切酶,具有稳定性高、比活性高等特点。适用于蛋白质组学 及糖生物学研究中糖蛋白上N连寡糖链的有效释放。

PNGase F高纯度,高稳定性,高比活性详细信息

 

 

酵母重组表达N-糖苷酶 F(PNGase F,Recombinant)

酵母重组表达N-糖苷酶 F(PNGase F,Recombinant)

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品简介

 

        N-糖苷酶 F (PNGase F)是一种酰胺水解酶,经过和平空间站伊丽莎菌克隆,主要由脑膜炎脓杆菌等革兰氏阴性菌分泌。翌圣酵母重组表达N-糖苷酶 F比活性:750000 U/mL可以裂解由天冬酰胺连接的高甘露糖、杂合和复杂的寡糖糖蛋白。PNGase F的切割位点为糖蛋白内侧N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)和天冬酰氨残基之间的酰胺键,同时将酶解后蛋白上的天冬氨酰转化为天冬氨酸。本产品带his标签,常应用于抗体及其相关蛋白完全去糖基化。

  另外,我司还提供其他类型的糖苷酶,包括酵母重组表达的N-糖苷酶 F(Cat#20407JP比活性:100000 U/mL糖苷内切酶HCat#20414JP)糖苷内切酶S(Cat#20413JP)

 

产品信息

 

编号

组分名称

20415JP01

20415JP02

20415-A

PNGase F

15 KU

75 KU

20415-B1

Buffer 110×)

150 μL

750 μL

20415B2

Buffer 210×)

300 μL

1500 μL

20415B3

10% NP-40

300 μL

1500 μL

 

产品性质

 

中文别名(Chinese synonym)

N-糖酰胺酶F;N-糖苷酶 F

英文别名(English synonym)

PNGase F

来源(Source)

酵母重组表达

分子量(Molecular weight)

36 kDa

比活性(Specific activity)

750000 U/mL

缓冲液组分(Buffer)

20 mM Tris-HCl pH 7.5, 50 mM NaCl, 5 mM EDTA,50% Glycerol

酶活定义(Unit Definition)

1个酶活力单位指在10 μL的反应体系中,37℃条件下1小时从10 μg变性RNase B中除去超过95%的碳水化合物所需要的酶量。

 

储存条件

 

-15~-25℃保存,有效期1年。

 

使用说明

 

  1. 变性条件下蛋白质去糖基化

1)在水中加入1 μL Buffer 1和目标糖蛋白(1-20 μg),至终体积10 μL;

2)100℃温度下煮沸10 min使其变性,冰上冷却,离心10秒;

3)加入2 μL的Buffer 2、2 μL的10%NP-40、6 μL去离子水,总反应体积20 μL

4)加入0.2~0.5 μL的PNGase,轻轻混匀。在37℃孵育1-3 h。

  1. 非变性条件下蛋白质去糖基化

1)在水中加入2 μL的Buffer 2和目标糖蛋白(1-20 μg)至最终体积为 20 μL。

2)加入 0.5~1 μL 的PNGase F, 轻轻混匀。

3)37°C 孵育 4-24 h。

注意:在变性条件下大多数底物能够更好的去糖基化,在非变性条件下可能需要增加PNGase F的量和延长孵育时间。

 

注意事项

 

1. 本产品仅作科研用途。

2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

Ver.CN20230205

酵母重组表达N-糖苷酶 F(PNGase F,Recombinant)

暂无内容

酵母重组表达N-糖苷酶 F(PNGase F,Recombinant)

暂无内容

产品简介

 

        N-糖苷酶 F (PNGase F)是一种酰胺水解酶,经过和平空间站伊丽莎菌克隆,主要由脑膜炎脓杆菌等革兰氏阴性菌分泌。翌圣酵母重组表达N-糖苷酶 F比活性:750000 U/mL可以裂解由天冬酰胺连接的高甘露糖、杂合和复杂的寡糖糖蛋白。PNGase F的切割位点为糖蛋白内侧N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)和天冬酰氨残基之间的酰胺键,同时将酶解后蛋白上的天冬氨酰转化为天冬氨酸。本产品带his标签,常应用于抗体及其相关蛋白完全去糖基化。

  另外,我司还提供其他类型的糖苷酶,包括酵母重组表达的N-糖苷酶 F(Cat#20407JP比活性:100000 U/mL糖苷内切酶HCat#20414JP)糖苷内切酶S(Cat#20413JP)

 

产品信息

 

编号

组分名称

20415JP01

20415JP02

20415-A

PNGase F

15 KU

75 KU

20415-B1

Buffer 110×)

150 μL

750 μL

20415B2

Buffer 210×)

300 μL

1500 μL

20415B3

10% NP-40

300 μL

1500 μL

 

产品性质

 

中文别名(Chinese synonym)

N-糖酰胺酶F;N-糖苷酶 F

英文别名(English synonym)

PNGase F

来源(Source)

酵母重组表达

分子量(Molecular weight)

36 kDa

比活性(Specific activity)

750000 U/mL

缓冲液组分(Buffer)

20 mM Tris-HCl pH 7.5, 50 mM NaCl, 5 mM EDTA,50% Glycerol

酶活定义(Unit Definition)

1个酶活力单位指在10 μL的反应体系中,37℃条件下1小时从10 μg变性RNase B中除去超过95%的碳水化合物所需要的酶量。

 

储存条件

 

-15~-25℃保存,有效期1年。

 

使用说明

 

  1. 变性条件下蛋白质去糖基化

1)在水中加入1 μL Buffer 1和目标糖蛋白(1-20 μg),至终体积10 μL;

2)100℃温度下煮沸10 min使其变性,冰上冷却,离心10秒;

3)加入2 μL的Buffer 2、2 μL的10%NP-40、6 μL去离子水,总反应体积20 μL

4)加入0.2~0.5 μL的PNGase,轻轻混匀。在37℃孵育1-3 h。

  1. 非变性条件下蛋白质去糖基化

1)在水中加入2 μL的Buffer 2和目标糖蛋白(1-20 μg)至最终体积为 20 μL。

2)加入 0.5~1 μL 的PNGase F, 轻轻混匀。

3)37°C 孵育 4-24 h。

注意:在变性条件下大多数底物能够更好的去糖基化,在非变性条件下可能需要增加PNGase F的量和延长孵育时间。

 

注意事项

 

1. 本产品仅作科研用途。

2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

Ver.CN20230205

酵母重组表达N-糖苷酶 F(PNGase F,Recombinant)

暂无内容

酵母重组表达N-糖苷酶 F(PNGase F,Recombinant)

暂无内容

PNGase F(N-糖酰胺酶F/肽N-糖苷酶 F) 去糖基化酶

PNGase F(N-糖酰胺酶F/肽N-糖苷酶 F) 去糖基化酶

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品简介

 

  1. 糖苷酶 F (PNGase F)是一种酰胺水解酶,经过和平空间站伊丽莎菌克隆主要由脑膜炎脓杆菌等革兰氏阴性菌分泌。翌圣N-糖苷酶 F (PNGase F)酵母中重组表达比活性:100000 U/mL,可以裂解由天冬酰胺连接的高甘露糖、杂合和复杂的寡糖糖蛋白。PNGase F的切割位点为糖蛋白内侧N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)和天冬酰氨残基之间的酰胺键,同时将酶解后蛋白上的天冬氨酰转化为天冬氨酸。本产品his标签,常应用于抗体及其相关蛋白完全去糖基化

   另外,我司还提供其他类型糖苷酶,包括酵母重组表达的N-糖苷酶 FCat#20415JP比活性:750000 U/mL),内切糖苷酶HCat#20414JP),内切糖苷酶SCat#20413JP)。

 

产品信息

 

编号

组分名称

组分成分

20407JP01

20407JP02

20407-A

PNGase F

PNGase F

15000 U

75000 U

20407-B1

Buffer 110×)

5% SDS; 400 mM DTT

150 μL

750 μL

20407B2

Buffer 210×)

200 mM Tris, PH 7.5

300 μL

1500 μL

20407B3

10% NP-40

10% NP-40 in MilliQ-H2O

300 μL

1500 μL

 

产品性质

 

中文别名Chinese synonym)

N-糖酰胺酶F;N-糖苷酶 F

英文别名(English synonym)

PNGase F

来源(Source)

酵母重组表达

分子量(Molecular weight)

36 kDa

比活性(Specific activity)

100000 U/mL

缓冲液组分(Buffer)

20 mM Tris-HCl pH 7.5, 50 mM NaCl, 5 mM EDTA, 50% Glycerol

酶活定义(Unit Definition)

1个酶活力单位指在10 μL的反应体系中,37℃条件下1小时从10 μg变性RNase B中除去超过95%的碳水化合物所需要的酶量。

 

储存条件

 

-25~-15℃保存,有效期1年。

 

使用方法

 

1、变性条件下蛋白质去糖基化:

1)在水中加入1 μL Buffer 1目标糖蛋白(1-20 μg),至终体积10 μL;

2)100℃温度下煮沸10 min使其变性,冰上冷却离心10秒

  1. 加入2 μL的Buffer 22 μL的10%NP-406 μL去离子水,总反应体积20 μL
  2. 加入1-2 μL的PNGase,轻轻混匀。37℃孵育1-3 h。

 

2、非变性条件下蛋白质去糖基化:

1)在水中加入2 μL的Buffer 2和目标糖蛋白(1-20 μg)至最终体积为 20 μL。

2)加入 2~5 μL 的 PNGase F, 轻轻混匀。

3)37°C 孵育 4-24 h。

注意:在变性条件下大多数底物能够更好的去糖基化,在非变性条件下可能需要增加PNGase F的量和延长孵育时间。

 

注意事项

 

1. PNGase F建议搭配我司提供的配套缓冲液使用,按我司说明书建议的操作量配套缓冲液足够。如您由于使用体系造成配套缓冲液不足,可咨询当地销售进行购买(Cat#20407-B, 包含20407-B1(750 μL)、20407-B2(1500 μL)、20407-B3(1500 μL))

2. 本产品仅作科研用途

3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

Ver.CN20240119

 

PNGase F(N-糖酰胺酶F/肽N-糖苷酶 F) 去糖基化酶

暂无内容

PNGase F(N-糖酰胺酶F/肽N-糖苷酶 F) 去糖基化酶

暂无内容

产品简介

 

  1. 糖苷酶 F (PNGase F)是一种酰胺水解酶,经过和平空间站伊丽莎菌克隆主要由脑膜炎脓杆菌等革兰氏阴性菌分泌。翌圣N-糖苷酶 F (PNGase F)酵母中重组表达比活性:100000 U/mL,可以裂解由天冬酰胺连接的高甘露糖、杂合和复杂的寡糖糖蛋白。PNGase F的切割位点为糖蛋白内侧N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)和天冬酰氨残基之间的酰胺键,同时将酶解后蛋白上的天冬氨酰转化为天冬氨酸。本产品his标签,常应用于抗体及其相关蛋白完全去糖基化

   另外,我司还提供其他类型糖苷酶,包括酵母重组表达的N-糖苷酶 FCat#20415JP比活性:750000 U/mL),内切糖苷酶HCat#20414JP),内切糖苷酶SCat#20413JP)。

 

产品信息

 

编号

组分名称

组分成分

20407JP01

20407JP02

20407-A

PNGase F

PNGase F

15000 U

75000 U

20407-B1

Buffer 110×)

5% SDS; 400 mM DTT

150 μL

750 μL

20407B2

Buffer 210×)

200 mM Tris, PH 7.5

300 μL

1500 μL

20407B3

10% NP-40

10% NP-40 in MilliQ-H2O

300 μL

1500 μL

 

产品性质

 

中文别名Chinese synonym)

N-糖酰胺酶F;N-糖苷酶 F

英文别名(English synonym)

PNGase F

来源(Source)

酵母重组表达

分子量(Molecular weight)

36 kDa

比活性(Specific activity)

100000 U/mL

缓冲液组分(Buffer)

20 mM Tris-HCl pH 7.5, 50 mM NaCl, 5 mM EDTA, 50% Glycerol

酶活定义(Unit Definition)

1个酶活力单位指在10 μL的反应体系中,37℃条件下1小时从10 μg变性RNase B中除去超过95%的碳水化合物所需要的酶量。

 

储存条件

 

-25~-15℃保存,有效期1年。

 

使用方法

 

1、变性条件下蛋白质去糖基化:

1)在水中加入1 μL Buffer 1目标糖蛋白(1-20 μg),至终体积10 μL;

2)100℃温度下煮沸10 min使其变性,冰上冷却离心10秒

  1. 加入2 μL的Buffer 22 μL的10%NP-406 μL去离子水,总反应体积20 μL
  2. 加入1-2 μL的PNGase,轻轻混匀。37℃孵育1-3 h。

 

2、非变性条件下蛋白质去糖基化:

1)在水中加入2 μL的Buffer 2和目标糖蛋白(1-20 μg)至最终体积为 20 μL。

2)加入 2~5 μL 的 PNGase F, 轻轻混匀。

3)37°C 孵育 4-24 h。

注意:在变性条件下大多数底物能够更好的去糖基化,在非变性条件下可能需要增加PNGase F的量和延长孵育时间。

 

注意事项

 

1. PNGase F建议搭配我司提供的配套缓冲液使用,按我司说明书建议的操作量配套缓冲液足够。如您由于使用体系造成配套缓冲液不足,可咨询当地销售进行购买(Cat#20407-B, 包含20407-B1(750 μL)、20407-B2(1500 μL)、20407-B3(1500 μL))

2. 本产品仅作科研用途

3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

Ver.CN20240119

 

PNGase F(N-糖酰胺酶F/肽N-糖苷酶 F) 去糖基化酶

暂无内容

PNGase F(N-糖酰胺酶F/肽N-糖苷酶 F) 去糖基化酶

暂无内容

PNGase F去糖基化试剂盒(P2318M)

PNGase F去糖基化试剂盒
PNGase F去糖基化试剂盒(P2318M) 一键复制产品信息

产品编号: P2318M

产品包装:100次
选择包装

25次 100次 500次

说明书下载

1668.00 1968.00 10

价格: ¥ 1668.00

促销价: ¥ 1668.00

促销价: ¥ 1668.00 1968.00

产品简介
使用说明
产品文件
相关产品
相关论文
产品问答
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
P2318S PNGase F去糖基化试剂盒 25次 498.00元
P2318M PNGase F去糖基化试剂盒 100次 1668.00元
P2318L PNGase F去糖基化试剂盒 500次 6698.00元

碧云天生产的PNGase F去糖基化试剂盒(PNGase F Deglycosylation Kit),又称PNGase F聚糖切割试剂盒(PNGase F Glycan Cleavage Kit)或PNGase F释放试剂盒(PNGase F Releasing Kit),是一种去糖基化试剂盒,可在天然或变性条件下从糖蛋白或糖多肽中切割N-糖苷键,从而去除N-聚糖链。

PNGase F,即Peptide N-Glycosidase F,中文名称为N-糖酰胺水解酶F,简称糖基肽酶F,是一种通过E.coli重组表达来源于Elizabethkingia miricola(formerly Flavobacterium meningosepticum)的糖基肽酶。糖基肽酶F可以在几乎所有类型的N-多糖如高甘露糖(High mannose)、混合型和复杂寡聚糖(Hybrid and complex oligosaccharides)的最内端N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc, N-acetylglucosamine)和天冬酰胺(Asn)残基的连接处切割,从而移除N-寡聚糖(N-linked oligosaccharides),将蛋白和糖链修饰分开(图1) [1],可用于抗体、免疫球蛋白融合蛋白或其它糖蛋白的体外去除N-糖基化修饰反应。另外Concanavalin A磁珠分离细胞或膜蛋白后,可使用PNGase F酶进行糖基的切除,从而使糖蛋白从Concanavalin A磁珠上解离下来,对于后续膜蛋白的质谱分析有很大帮助[2]。本糖基肽酶F的N端带有His-tag,可以通过相应的His抗体琼脂糖凝胶、磁珠或镍柱吸附去除。

PNGase F去糖基化试剂盒(P2318M)

图1. 碧云天PNGase F去糖基化试剂盒(P2318)移除N-糖苷(N-linked oligosaccharides)的示意图。糖链可以在图中戊糖(pentasaccharide)的R1、R2和R3位置延伸。R1位置只能是空缺或α-6 fucose,不能是α-3 fucose,否则就不能被PNGase F切割。R2和R3位置可以是任意的单糖或多糖。

糖基化修饰(Glycosylation)是一种蛋白质翻译后修饰(Post-translational modification, PTM),几乎存在于所有生物体中,包括真核生物、真细菌(Eubacteria)和古细菌(Archaea)。糖基化修饰的多样性会改变蛋白的质量和电荷,在蛋白质分类、免疫识别、受体结合、炎症、致病性和许多其他过程中发挥着关键的生物功能[3-5]。最新的研究表明,核酸也存在糖基化修饰。

本试剂盒中PNGase F的基本信息如下表:

蛋白信息(About this protein)
名称(Name) Peptide N-Glycosidase F (PNGase F),糖基肽酶F
别名(Synonyms) N-糖酰胺水解酶F,N-糖苷酶 F,Peptide-N(4)-(N-acetyl-beta-D-glucosaminyl) asparagine amidase F, Glycopeptide N-glycosidase, N-glycanase
CAS号(CAS No.) 83534-39-8
分子量(MW) 36kDa
外观(Physical appearance) Liquid
活性(Biological activity) 500U/μl
活力单位(Unit definition) One unit is defined as the amount of enzyme required to remove >95% of the carbohydrate from 10μg of denatured RNase B in 1 hour at 37℃ in a total reaction volume of 10μl.
纯度(Purity) ≥95% by SDS-PAGE, protease-free.
产品用途(Applications) 1. 抗体、免疫球蛋白融合蛋白或其它糖蛋白的体外去N-糖基化修饰;
2. 表征蛋白是否存在N-糖基化修饰。

PNGase F最佳酶切温度为37℃,在较宽的pH范围(6.0-10.0),在较宽的温度范围(4-50℃),较宽的离子强度范围(0-1M NaCl)内均具有较高的酶活性。本产品与国外同类产品Competitor N相比,去除蛋白糖基的效果基本一致(图2)。

PNGase F储存液: 10mM Tris (pH7.4), 50mM NaCl, 5mM EDTA。储存液不含甘油,便于HPLC方法优化色谱条件。

Reaction Buffer (10X): 500mM Sodium Phosphate (pH7.5)。

本试剂盒用于去除糖蛋白或糖肽的N-糖苷(N-linked oligosaccharides)的酶切反应时,如果按照每100μg糖蛋白使用1μl (500U/μl)在37℃反应1小时,本产品小、中、大包装分别可以用于2.5mg、5mg和25mg糖蛋白的N-糖苷移除,相当于25、100和500次反应。

包装清单:

产品编号 产品名称 包装
P2318S-1 PNGase F (500U/μl) 25μl
P2318S-2 Reaction Buffer (10X) 100μl
P2318S-3 Denaturing Buffer (10X) 50μl
P2318S-4 Renaturing Buffer (10X) 100μl
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
P2318M-1 PNGase F (500U/μl) 100μl
P2318M-2 Reaction Buffer (10X) 400μl
P2318M-3 Denaturing Buffer (10X) 200μl
P2318M-4 Renaturing Buffer (10X) 400μl
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
P2318L-1 PNGase F (500U/μl) 500μl
P2318L-2 Reaction Buffer (10X) 2ml
P2318L-3 Denaturing Buffer (10X) 1ml
P2318L-4 Renaturing Buffer (10X) 2ml
说明书 1份

保存条件:

-20℃保存,一年有效。

注意事项:

PNGase F不能水解含有core α1-3 Fucose的N-糖苷(常见于植物及昆虫糖蛋白,此时需要使用PNGase A)。

超纯水推荐选购ST876 BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile)。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
体外酶解去糖基化修饰反应根据对糖蛋白或糖肽的处理方式不同,可分为变性去糖基化修饰反应(Denaturing deglycosylation)和非变性去糖基化修饰反应(Non-denaturing deglycosylation)。变性去糖基化修饰反应:蛋白质变性导致三级结构被破坏,内部序列暴露可以去除所有糖基化修饰;非变性去糖基化修饰反应:蛋白原始构象被保留,三级结构中暴露在外的糖苷被移除,但是处于内部的糖苷被保留,蛋白的酶活性或抗原性很可能不受影响。用户可根据实验目的选择相应的去糖基化修饰反应。本试剂盒去除变性和非变性蛋白的N-糖基化修饰的效果如图3所示。
PNGase F去糖基化试剂盒(P2318M) 图3. 碧云天PNGase F去糖基化试剂盒(P2318)去除蛋白N-糖基化修饰效果图。在20μl反应体系中,加入10µg变性(Denaturing)或非变性(Non-Denaturing)的N-糖基化修饰蛋白(含有4个N-linked糖基化修饰)及相应量的PNGase F,37℃孵育1小时后,加入4μl SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(6X) (P0289),混匀后95℃加热5分钟,经BeyoGel™ Plus PAGE预制胶(Tris-Gly, 4-20%, 10孔) (P0468)电泳,Marker为BeyoColor™彩色预染蛋白分子量标准(6.5-270kD) (P0071/P0072),并经BeyoBlue™考马斯亮蓝超快染色液(P0017F)染色。实际效果会因样品种类、检测条件等的不同而存在差异,图中效果仅供参考。
1.变性去N-糖基化修饰反应(Denaturing deglycosylation):
a.按下表在1.5ml离心管中配制反应体系,并充分混匀。

Component Volume (μl)
Protein (10-100μg) X
Denaturing Buffer (10X) 1
Ultrapure Water To 10

注:因不同蛋白质所带有的N-linked糖基化修饰数目不同,可视情况调整蛋白加入量,以获得最佳的实验方案。
b.100℃加热10分钟,使蛋白充分变性。
c.置于冰浴,冷却至少10秒,10,000g离心3-5秒,确保所有溶液聚集于管底。
d.向上述10μl变性体系中,加入2μl Reaction Buffer (10X),2μl Renaturing Buffer (10X)和6μl H2O,充分混匀。
e.加入1μl PNGase F (500U/μl),充分混匀,37℃孵育1-4小时。
注1:如果蛋白量比较少,也可以用1X Reaction Buffer对PNGase F进行适当稀释后使用。
注2:因蛋白质本身以及糖基化修饰的不同,N-糖苷移除效率可能存在差异,可视情况适当调整PNGase F用量和反应时间,以获得最佳的实验效果。
f.加入4μl SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(6X) (P0289),混匀后95℃加热5分钟,使用BeyoGel™ Plus PAGE预制胶(P0468)进行电泳检测和考马斯亮蓝(P0017F)染色。
g.观察考马斯亮蓝染色的SDS-PAGE胶,对比PNGase F处理前后蛋白样品分子量变化,观察蛋白样品去N-糖基化修饰效果。后续大量蛋白去糖基化修饰时,可以等比例放大酶切反应体系。
2.非变性去N-糖基化修饰反应(Non-denaturing deglycosylation):
进行非变性去N-糖基化修饰反应时,建议平行做一组变性去N-糖基化修饰反应,以便提供完全去除N-糖基化修饰蛋白的阳性对照。可以通过比较非变性反应与变性反应,以确定非变性反应的去N-糖基化程度。
a.按下表在1.5ml离心管中配制反应体系,并充分混匀。

Component Volume (μl)
Protein (10-100μg) X
Reaction Buffer (10X) 2
PNGase F (500U/μl) 1
Ultrapure Water To 20

注:因不同蛋白质所带有的N-linked糖基化修饰数目不同,可视情况调整蛋白加入量,以获得最佳的实验方案。
b.37℃孵育4-24小时。
注:因蛋白质本身以及糖基化修饰的不同,N-糖苷移除效率可能存在差异,可视情况适当调整PNGase F用量和反应时间,以获得最佳的实验效果。
c.加入4μl SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(6X) (P0289),混匀后95℃加热5分钟,使用 BeyoGel™ Plus PAGE预制胶(P0468)进行电泳检测和考马斯亮蓝(P0017F)染色。
d.观察考马斯亮蓝染色的SDS-PAGE胶,对比PNGase F处理前后蛋白样品分子量变化,观察蛋白样品去N-糖基化修饰效果。后续大量蛋白去糖基化修饰时,可以等比例放大酶切反应体系。
参考文献:
1.Elder JH, Alexander S. Proc Natl Acad Sci U S A. 1982. 79(15):4540-4.
2.Lee YC, Srajer Gajdosik M, Josic D, Lin SH. Methods Mol Biol. 2012. 909:29-41.
3.Drickamer K, Taylor ME. Introduction to Glycobiology (2nd ed.). Oxford University Press, USA. 2006, ISBN: 978-0-19-928278-4.
4.Lechner J, Wieland F. Annu Rev Biochem. 1989. 58:173-94.
5.Messner P. Glycoconj J. 1997. 14(1):3-11.
相关产品:

产品编号 产品名称 包装
P2318S PNGase F去糖基化试剂盒 25次
P2318M PNGase F去糖基化试剂盒 100次
P2318L PNGase F去糖基化试剂盒 500次

PNGase F去糖基化试剂盒(P2318M)
PNGase F去糖基化试剂盒(P2318M)

物质安全数据单
输入右侧验证码点击下载:

PNGase F去糖基化试剂盒(P2318M)

PNGase F去糖基化试剂盒(P2318M)
质检证书
输入批号搜寻COA

搜索

相关产品请点击如下按钮:
蛋白修饰与去修饰
抗体分析

使用本产品的文献:

PNGase F去糖基化试剂盒(P2318S)

PNGase F去糖基化试剂盒
PNGase F去糖基化试剂盒(P2318S) 一键复制产品信息

产品编号: P2318S

产品包装:25次
选择包装

25次 100次 500次

说明书下载

498.00 598.00 10

价格: ¥ 498.00

促销价: ¥ 498.00

促销价: ¥ 498.00 598.00

产品简介
使用说明
产品文件
相关产品
相关论文
产品问答
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
P2318S PNGase F去糖基化试剂盒 25次 498.00元
P2318M PNGase F去糖基化试剂盒 100次 1668.00元
P2318L PNGase F去糖基化试剂盒 500次 6698.00元

碧云天生产的PNGase F去糖基化试剂盒(PNGase F Deglycosylation Kit),又称PNGase F聚糖切割试剂盒(PNGase F Glycan Cleavage Kit)或PNGase F释放试剂盒(PNGase F Releasing Kit),是一种去糖基化试剂盒,可在天然或变性条件下从糖蛋白或糖多肽中切割N-糖苷键,从而去除N-聚糖链。

PNGase F,即Peptide N-Glycosidase F,中文名称为N-糖酰胺水解酶F,简称糖基肽酶F,是一种通过E.coli重组表达来源于Elizabethkingia miricola(formerly Flavobacterium meningosepticum)的糖基肽酶。糖基肽酶F可以在几乎所有类型的N-多糖如高甘露糖(High mannose)、混合型和复杂寡聚糖(Hybrid and complex oligosaccharides)的最内端N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc, N-acetylglucosamine)和天冬酰胺(Asn)残基的连接处切割,从而移除N-寡聚糖(N-linked oligosaccharides),将蛋白和糖链修饰分开(图1) [1],可用于抗体、免疫球蛋白融合蛋白或其它糖蛋白的体外去除N-糖基化修饰反应。另外Concanavalin A磁珠分离细胞或膜蛋白后,可使用PNGase F酶进行糖基的切除,从而使糖蛋白从Concanavalin A磁珠上解离下来,对于后续膜蛋白的质谱分析有很大帮助[2]。本糖基肽酶F的N端带有His-tag,可以通过相应的His抗体琼脂糖凝胶、磁珠或镍柱吸附去除。

PNGase F去糖基化试剂盒(P2318S)

图1. 碧云天PNGase F去糖基化试剂盒(P2318)移除N-糖苷(N-linked oligosaccharides)的示意图。糖链可以在图中戊糖(pentasaccharide)的R1、R2和R3位置延伸。R1位置只能是空缺或α-6 fucose,不能是α-3 fucose,否则就不能被PNGase F切割。R2和R3位置可以是任意的单糖或多糖。

糖基化修饰(Glycosylation)是一种蛋白质翻译后修饰(Post-translational modification, PTM),几乎存在于所有生物体中,包括真核生物、真细菌(Eubacteria)和古细菌(Archaea)。糖基化修饰的多样性会改变蛋白的质量和电荷,在蛋白质分类、免疫识别、受体结合、炎症、致病性和许多其他过程中发挥着关键的生物功能[3-5]。最新的研究表明,核酸也存在糖基化修饰。

本试剂盒中PNGase F的基本信息如下表:

蛋白信息(About this protein)
名称(Name) Peptide N-Glycosidase F (PNGase F),糖基肽酶F
别名(Synonyms) N-糖酰胺水解酶F,N-糖苷酶 F,Peptide-N(4)-(N-acetyl-beta-D-glucosaminyl) asparagine amidase F, Glycopeptide N-glycosidase, N-glycanase
CAS号(CAS No.) 83534-39-8
分子量(MW) 36kDa
外观(Physical appearance) Liquid
活性(Biological activity) 500U/μl
活力单位(Unit definition) One unit is defined as the amount of enzyme required to remove >95% of the carbohydrate from 10μg of denatured RNase B in 1 hour at 37℃ in a total reaction volume of 10μl.
纯度(Purity) ≥95% by SDS-PAGE, protease-free.
产品用途(Applications) 1. 抗体、免疫球蛋白融合蛋白或其它糖蛋白的体外去N-糖基化修饰;
2. 表征蛋白是否存在N-糖基化修饰。

PNGase F最佳酶切温度为37℃,在较宽的pH范围(6.0-10.0),在较宽的温度范围(4-50℃),较宽的离子强度范围(0-1M NaCl)内均具有较高的酶活性。本产品与国外同类产品Competitor N相比,去除蛋白糖基的效果基本一致(图2)。

PNGase F储存液: 10mM Tris (pH7.4), 50mM NaCl, 5mM EDTA。储存液不含甘油,便于HPLC方法优化色谱条件。

Reaction Buffer (10X): 500mM Sodium Phosphate (pH7.5)。

本试剂盒用于去除糖蛋白或糖肽的N-糖苷(N-linked oligosaccharides)的酶切反应时,如果按照每100μg糖蛋白使用1μl (500U/μl)在37℃反应1小时,本产品小、中、大包装分别可以用于2.5mg、5mg和25mg糖蛋白的N-糖苷移除,相当于25、100和500次反应。

包装清单:

产品编号 产品名称 包装
P2318S-1 PNGase F (500U/μl) 25μl
P2318S-2 Reaction Buffer (10X) 100μl
P2318S-3 Denaturing Buffer (10X) 50μl
P2318S-4 Renaturing Buffer (10X) 100μl
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
P2318M-1 PNGase F (500U/μl) 100μl
P2318M-2 Reaction Buffer (10X) 400μl
P2318M-3 Denaturing Buffer (10X) 200μl
P2318M-4 Renaturing Buffer (10X) 400μl
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
P2318L-1 PNGase F (500U/μl) 500μl
P2318L-2 Reaction Buffer (10X) 2ml
P2318L-3 Denaturing Buffer (10X) 1ml
P2318L-4 Renaturing Buffer (10X) 2ml
说明书 1份

保存条件:

-20℃保存,一年有效。

注意事项:

PNGase F不能水解含有core α1-3 Fucose的N-糖苷(常见于植物及昆虫糖蛋白,此时需要使用PNGase A)。

超纯水推荐选购ST876 BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile)。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
体外酶解去糖基化修饰反应根据对糖蛋白或糖肽的处理方式不同,可分为变性去糖基化修饰反应(Denaturing deglycosylation)和非变性去糖基化修饰反应(Non-denaturing deglycosylation)。变性去糖基化修饰反应:蛋白质变性导致三级结构被破坏,内部序列暴露可以去除所有糖基化修饰;非变性去糖基化修饰反应:蛋白原始构象被保留,三级结构中暴露在外的糖苷被移除,但是处于内部的糖苷被保留,蛋白的酶活性或抗原性很可能不受影响。用户可根据实验目的选择相应的去糖基化修饰反应。本试剂盒去除变性和非变性蛋白的N-糖基化修饰的效果如图3所示。
PNGase F去糖基化试剂盒(P2318S) 图3. 碧云天PNGase F去糖基化试剂盒(P2318)去除蛋白N-糖基化修饰效果图。在20μl反应体系中,加入10µg变性(Denaturing)或非变性(Non-Denaturing)的N-糖基化修饰蛋白(含有4个N-linked糖基化修饰)及相应量的PNGase F,37℃孵育1小时后,加入4μl SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(6X) (P0289),混匀后95℃加热5分钟,经BeyoGel™ Plus PAGE预制胶(Tris-Gly, 4-20%, 10孔) (P0468)电泳,Marker为BeyoColor™彩色预染蛋白分子量标准(6.5-270kD) (P0071/P0072),并经BeyoBlue™考马斯亮蓝超快染色液(P0017F)染色。实际效果会因样品种类、检测条件等的不同而存在差异,图中效果仅供参考。
1.变性去N-糖基化修饰反应(Denaturing deglycosylation):
a.按下表在1.5ml离心管中配制反应体系,并充分混匀。

Component Volume (μl)
Protein (10-100μg) X
Denaturing Buffer (10X) 1
Ultrapure Water To 10

注:因不同蛋白质所带有的N-linked糖基化修饰数目不同,可视情况调整蛋白加入量,以获得最佳的实验方案。
b.100℃加热10分钟,使蛋白充分变性。
c.置于冰浴,冷却至少10秒,10,000g离心3-5秒,确保所有溶液聚集于管底。
d.向上述10μl变性体系中,加入2μl Reaction Buffer (10X),2μl Renaturing Buffer (10X)和6μl H2O,充分混匀。
e.加入1μl PNGase F (500U/μl),充分混匀,37℃孵育1-4小时。
注1:如果蛋白量比较少,也可以用1X Reaction Buffer对PNGase F进行适当稀释后使用。
注2:因蛋白质本身以及糖基化修饰的不同,N-糖苷移除效率可能存在差异,可视情况适当调整PNGase F用量和反应时间,以获得最佳的实验效果。
f.加入4μl SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(6X) (P0289),混匀后95℃加热5分钟,使用BeyoGel™ Plus PAGE预制胶(P0468)进行电泳检测和考马斯亮蓝(P0017F)染色。
g.观察考马斯亮蓝染色的SDS-PAGE胶,对比PNGase F处理前后蛋白样品分子量变化,观察蛋白样品去N-糖基化修饰效果。后续大量蛋白去糖基化修饰时,可以等比例放大酶切反应体系。
2.非变性去N-糖基化修饰反应(Non-denaturing deglycosylation):
进行非变性去N-糖基化修饰反应时,建议平行做一组变性去N-糖基化修饰反应,以便提供完全去除N-糖基化修饰蛋白的阳性对照。可以通过比较非变性反应与变性反应,以确定非变性反应的去N-糖基化程度。
a.按下表在1.5ml离心管中配制反应体系,并充分混匀。

Component Volume (μl)
Protein (10-100μg) X
Reaction Buffer (10X) 2
PNGase F (500U/μl) 1
Ultrapure Water To 20

注:因不同蛋白质所带有的N-linked糖基化修饰数目不同,可视情况调整蛋白加入量,以获得最佳的实验方案。
b.37℃孵育4-24小时。
注:因蛋白质本身以及糖基化修饰的不同,N-糖苷移除效率可能存在差异,可视情况适当调整PNGase F用量和反应时间,以获得最佳的实验效果。
c.加入4μl SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(6X) (P0289),混匀后95℃加热5分钟,使用 BeyoGel™ Plus PAGE预制胶(P0468)进行电泳检测和考马斯亮蓝(P0017F)染色。
d.观察考马斯亮蓝染色的SDS-PAGE胶,对比PNGase F处理前后蛋白样品分子量变化,观察蛋白样品去N-糖基化修饰效果。后续大量蛋白去糖基化修饰时,可以等比例放大酶切反应体系。
参考文献:
1.Elder JH, Alexander S. Proc Natl Acad Sci U S A. 1982. 79(15):4540-4.
2.Lee YC, Srajer Gajdosik M, Josic D, Lin SH. Methods Mol Biol. 2012. 909:29-41.
3.Drickamer K, Taylor ME. Introduction to Glycobiology (2nd ed.). Oxford University Press, USA. 2006, ISBN: 978-0-19-928278-4.
4.Lechner J, Wieland F. Annu Rev Biochem. 1989. 58:173-94.
5.Messner P. Glycoconj J. 1997. 14(1):3-11.
相关产品:

产品编号 产品名称 包装
P2318S PNGase F去糖基化试剂盒 25次
P2318M PNGase F去糖基化试剂盒 100次
P2318L PNGase F去糖基化试剂盒 500次

PNGase F去糖基化试剂盒(P2318S)
PNGase F去糖基化试剂盒(P2318S)

物质安全数据单
输入右侧验证码点击下载:

PNGase F去糖基化试剂盒(P2318S)

PNGase F去糖基化试剂盒(P2318S)
质检证书
输入批号搜寻COA

搜索

相关产品请点击如下按钮:
蛋白修饰与去修饰
抗体分析

使用本产品的文献:

PNGase F去糖基化试剂盒(P2318L)

PNGase F去糖基化试剂盒
PNGase F去糖基化试剂盒(P2318L) 一键复制产品信息

产品编号: P2318L

产品包装:500次
选择包装

25次 100次 500次

说明书下载

6698.00 7799.00 10

价格: ¥ 6698.00

促销价: ¥ 6698.00

促销价: ¥ 6698.00 7799.00

产品简介
使用说明
产品文件
相关产品
相关论文
产品问答
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
P2318S PNGase F去糖基化试剂盒 25次 498.00元
P2318M PNGase F去糖基化试剂盒 100次 1668.00元
P2318L PNGase F去糖基化试剂盒 500次 6698.00元

碧云天生产的PNGase F去糖基化试剂盒(PNGase F Deglycosylation Kit),又称PNGase F聚糖切割试剂盒(PNGase F Glycan Cleavage Kit)或PNGase F释放试剂盒(PNGase F Releasing Kit),是一种去糖基化试剂盒,可在天然或变性条件下从糖蛋白或糖多肽中切割N-糖苷键,从而去除N-聚糖链。

PNGase F,即Peptide N-Glycosidase F,中文名称为N-糖酰胺水解酶F,简称糖基肽酶F,是一种通过E.coli重组表达来源于Elizabethkingia miricola(formerly Flavobacterium meningosepticum)的糖基肽酶。糖基肽酶F可以在几乎所有类型的N-多糖如高甘露糖(High mannose)、混合型和复杂寡聚糖(Hybrid and complex oligosaccharides)的最内端N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc, N-acetylglucosamine)和天冬酰胺(Asn)残基的连接处切割,从而移除N-寡聚糖(N-linked oligosaccharides),将蛋白和糖链修饰分开(图1) [1],可用于抗体、免疫球蛋白融合蛋白或其它糖蛋白的体外去除N-糖基化修饰反应。另外Concanavalin A磁珠分离细胞或膜蛋白后,可使用PNGase F酶进行糖基的切除,从而使糖蛋白从Concanavalin A磁珠上解离下来,对于后续膜蛋白的质谱分析有很大帮助[2]。本糖基肽酶F的N端带有His-tag,可以通过相应的His抗体琼脂糖凝胶、磁珠或镍柱吸附去除。

PNGase F去糖基化试剂盒(P2318L)

图1. 碧云天PNGase F去糖基化试剂盒(P2318)移除N-糖苷(N-linked oligosaccharides)的示意图。糖链可以在图中戊糖(pentasaccharide)的R1、R2和R3位置延伸。R1位置只能是空缺或α-6 fucose,不能是α-3 fucose,否则就不能被PNGase F切割。R2和R3位置可以是任意的单糖或多糖。

糖基化修饰(Glycosylation)是一种蛋白质翻译后修饰(Post-translational modification, PTM),几乎存在于所有生物体中,包括真核生物、真细菌(Eubacteria)和古细菌(Archaea)。糖基化修饰的多样性会改变蛋白的质量和电荷,在蛋白质分类、免疫识别、受体结合、炎症、致病性和许多其他过程中发挥着关键的生物功能[3-5]。最新的研究表明,核酸也存在糖基化修饰。

本试剂盒中PNGase F的基本信息如下表:

蛋白信息(About this protein)
名称(Name) Peptide N-Glycosidase F (PNGase F),糖基肽酶F
别名(Synonyms) N-糖酰胺水解酶F,N-糖苷酶 F,Peptide-N(4)-(N-acetyl-beta-D-glucosaminyl) asparagine amidase F, Glycopeptide N-glycosidase, N-glycanase
CAS号(CAS No.) 83534-39-8
分子量(MW) 36kDa
外观(Physical appearance) Liquid
活性(Biological activity) 500U/μl
活力单位(Unit definition) One unit is defined as the amount of enzyme required to remove >95% of the carbohydrate from 10μg of denatured RNase B in 1 hour at 37℃ in a total reaction volume of 10μl.
纯度(Purity) ≥95% by SDS-PAGE, protease-free.
产品用途(Applications) 1. 抗体、免疫球蛋白融合蛋白或其它糖蛋白的体外去N-糖基化修饰;
2. 表征蛋白是否存在N-糖基化修饰。

PNGase F最佳酶切温度为37℃,在较宽的pH范围(6.0-10.0),在较宽的温度范围(4-50℃),较宽的离子强度范围(0-1M NaCl)内均具有较高的酶活性。本产品与国外同类产品Competitor N相比,去除蛋白糖基的效果基本一致(图2)。

PNGase F储存液: 10mM Tris (pH7.4), 50mM NaCl, 5mM EDTA。储存液不含甘油,便于HPLC方法优化色谱条件。

Reaction Buffer (10X): 500mM Sodium Phosphate (pH7.5)。

本试剂盒用于去除糖蛋白或糖肽的N-糖苷(N-linked oligosaccharides)的酶切反应时,如果按照每100μg糖蛋白使用1μl (500U/μl)在37℃反应1小时,本产品小、中、大包装分别可以用于2.5mg、5mg和25mg糖蛋白的N-糖苷移除,相当于25、100和500次反应。

包装清单:

产品编号 产品名称 包装
P2318S-1 PNGase F (500U/μl) 25μl
P2318S-2 Reaction Buffer (10X) 100μl
P2318S-3 Denaturing Buffer (10X) 50μl
P2318S-4 Renaturing Buffer (10X) 100μl
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
P2318M-1 PNGase F (500U/μl) 100μl
P2318M-2 Reaction Buffer (10X) 400μl
P2318M-3 Denaturing Buffer (10X) 200μl
P2318M-4 Renaturing Buffer (10X) 400μl
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
P2318L-1 PNGase F (500U/μl) 500μl
P2318L-2 Reaction Buffer (10X) 2ml
P2318L-3 Denaturing Buffer (10X) 1ml
P2318L-4 Renaturing Buffer (10X) 2ml
说明书 1份

保存条件:

-20℃保存,一年有效。

注意事项:

PNGase F不能水解含有core α1-3 Fucose的N-糖苷(常见于植物及昆虫糖蛋白,此时需要使用PNGase A)。

超纯水推荐选购ST876 BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile)。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
体外酶解去糖基化修饰反应根据对糖蛋白或糖肽的处理方式不同,可分为变性去糖基化修饰反应(Denaturing deglycosylation)和非变性去糖基化修饰反应(Non-denaturing deglycosylation)。变性去糖基化修饰反应:蛋白质变性导致三级结构被破坏,内部序列暴露可以去除所有糖基化修饰;非变性去糖基化修饰反应:蛋白原始构象被保留,三级结构中暴露在外的糖苷被移除,但是处于内部的糖苷被保留,蛋白的酶活性或抗原性很可能不受影响。用户可根据实验目的选择相应的去糖基化修饰反应。本试剂盒去除变性和非变性蛋白的N-糖基化修饰的效果如图3所示。
PNGase F去糖基化试剂盒(P2318L) 图3. 碧云天PNGase F去糖基化试剂盒(P2318)去除蛋白N-糖基化修饰效果图。在20μl反应体系中,加入10µg变性(Denaturing)或非变性(Non-Denaturing)的N-糖基化修饰蛋白(含有4个N-linked糖基化修饰)及相应量的PNGase F,37℃孵育1小时后,加入4μl SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(6X) (P0289),混匀后95℃加热5分钟,经BeyoGel™ Plus PAGE预制胶(Tris-Gly, 4-20%, 10孔) (P0468)电泳,Marker为BeyoColor™彩色预染蛋白分子量标准(6.5-270kD) (P0071/P0072),并经BeyoBlue™考马斯亮蓝超快染色液(P0017F)染色。实际效果会因样品种类、检测条件等的不同而存在差异,图中效果仅供参考。
1.变性去N-糖基化修饰反应(Denaturing deglycosylation):
a.按下表在1.5ml离心管中配制反应体系,并充分混匀。

Component Volume (μl)
Protein (10-100μg) X
Denaturing Buffer (10X) 1
Ultrapure Water To 10

注:因不同蛋白质所带有的N-linked糖基化修饰数目不同,可视情况调整蛋白加入量,以获得最佳的实验方案。
b.100℃加热10分钟,使蛋白充分变性。
c.置于冰浴,冷却至少10秒,10,000g离心3-5秒,确保所有溶液聚集于管底。
d.向上述10μl变性体系中,加入2μl Reaction Buffer (10X),2μl Renaturing Buffer (10X)和6μl H2O,充分混匀。
e.加入1μl PNGase F (500U/μl),充分混匀,37℃孵育1-4小时。
注1:如果蛋白量比较少,也可以用1X Reaction Buffer对PNGase F进行适当稀释后使用。
注2:因蛋白质本身以及糖基化修饰的不同,N-糖苷移除效率可能存在差异,可视情况适当调整PNGase F用量和反应时间,以获得最佳的实验效果。
f.加入4μl SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(6X) (P0289),混匀后95℃加热5分钟,使用BeyoGel™ Plus PAGE预制胶(P0468)进行电泳检测和考马斯亮蓝(P0017F)染色。
g.观察考马斯亮蓝染色的SDS-PAGE胶,对比PNGase F处理前后蛋白样品分子量变化,观察蛋白样品去N-糖基化修饰效果。后续大量蛋白去糖基化修饰时,可以等比例放大酶切反应体系。
2.非变性去N-糖基化修饰反应(Non-denaturing deglycosylation):
进行非变性去N-糖基化修饰反应时,建议平行做一组变性去N-糖基化修饰反应,以便提供完全去除N-糖基化修饰蛋白的阳性对照。可以通过比较非变性反应与变性反应,以确定非变性反应的去N-糖基化程度。
a.按下表在1.5ml离心管中配制反应体系,并充分混匀。

Component Volume (μl)
Protein (10-100μg) X
Reaction Buffer (10X) 2
PNGase F (500U/μl) 1
Ultrapure Water To 20

注:因不同蛋白质所带有的N-linked糖基化修饰数目不同,可视情况调整蛋白加入量,以获得最佳的实验方案。
b.37℃孵育4-24小时。
注:因蛋白质本身以及糖基化修饰的不同,N-糖苷移除效率可能存在差异,可视情况适当调整PNGase F用量和反应时间,以获得最佳的实验效果。
c.加入4μl SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(6X) (P0289),混匀后95℃加热5分钟,使用 BeyoGel™ Plus PAGE预制胶(P0468)进行电泳检测和考马斯亮蓝(P0017F)染色。
d.观察考马斯亮蓝染色的SDS-PAGE胶,对比PNGase F处理前后蛋白样品分子量变化,观察蛋白样品去N-糖基化修饰效果。后续大量蛋白去糖基化修饰时,可以等比例放大酶切反应体系。
参考文献:
1.Elder JH, Alexander S. Proc Natl Acad Sci U S A. 1982. 79(15):4540-4.
2.Lee YC, Srajer Gajdosik M, Josic D, Lin SH. Methods Mol Biol. 2012. 909:29-41.
3.Drickamer K, Taylor ME. Introduction to Glycobiology (2nd ed.). Oxford University Press, USA. 2006, ISBN: 978-0-19-928278-4.
4.Lechner J, Wieland F. Annu Rev Biochem. 1989. 58:173-94.
5.Messner P. Glycoconj J. 1997. 14(1):3-11.
相关产品:

产品编号 产品名称 包装
P2318S PNGase F去糖基化试剂盒 25次
P2318M PNGase F去糖基化试剂盒 100次
P2318L PNGase F去糖基化试剂盒 500次

PNGase F去糖基化试剂盒(P2318L)
PNGase F去糖基化试剂盒(P2318L)

物质安全数据单
输入右侧验证码点击下载:

PNGase F去糖基化试剂盒(P2318L)

PNGase F去糖基化试剂盒(P2318L)
质检证书
输入批号搜寻COA

搜索

相关产品请点击如下按钮:
蛋白修饰与去修饰
抗体分析

使用本产品的文献: