Lyo-nCoV一步法逆转录多重定量PCR(RT-qPCR)试剂盒(含MgCl2)

发表于2024年3月12日由上海金畔生物科技有限公司

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

Hieff Unicon^® V Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Kit (with MgCl₂) 是以 RNA 为模板进行多重定量 PCR 反应的试剂盒。在实验的过程中，逆转录和定量 PCR 在同一反应管中进行，简化了实验操作，降低了污染的风险。独特的 Buffer 和酶的设计，可用于一步法 RT-qPCR 冻干反应体系的配制和产品设计。

本试剂盒利用耐热Hifair^® V Reverse Transcriptase高效合成第一链cDNA，并利用UNICON^® HotStart Taq DNA Polymerase进行定量扩增。本试剂盒主要包含优化的冻干 Buffer，Enzymes Mix 等，并添加了有效抑制非特异性 PCR 扩增的因子和提升多重 qPCR 反应扩增效率的因子，能够在保证引物扩增效率的同时，进行多重荧光定量扩增反应。

本试剂盒酶 mix 中匹配冻干保护剂，可以直接用于冻干。

产品信息

货号	13775ES60 / 13775ES80 / 13775ES92
规格	100 T / 1000 T / 10000 T

组分信息

组分编号	组分名称	13775ES60 (100 T)	13775ES80 (1000 T)	13775ES92 (10000 T)
13775-A	4×Hifair^® V Lyo-Buffer	600 μL	6 mL	60 mL
13775-B	MgCl₂ (25 mM)	500 μL	5 mL	50 mL
13775–C	10×Hifair^® V Lyo-Enzyme Mix	240 μL	2.4 mL	24 mL

【注】1. 4×Hifair^® V Lyo-Buffer 为 Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Probe Buffer 的简写。

2. 10×Hifair^® V Lyo-Enzyme Mix 主要包含有耐热 Hifair^® V Reverse Transcriptase 和 UNICON^® HotStart Taq DNA Polymerase。

储存条件

-25~-15℃保存，有效期1年。

使用说明

反应体系（以25 μL为例）

组分	体积（μL）	终浓度
4×Hifair^® V Lyo-Buffer	6	1×
10×Hifair^® V Lyo-Enzyme Mix	2.4	–
MgCl₂ (25 mM)	3	–
Primer Mix (10 μM)	各0.4	0.16 μM
Probe Mix (10 μM)	各0.2	0.08 μM
模板RNA	1-5	–
RNase Free H2O	to 25	–

【注】使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。

引物浓度：Primer Mix 中包含多对引物，通常每条引物终浓度可以根据情况在 0.1-1.0 μM 间进行调整。
探针浓度：Probe Mix中包含多条不同荧光信号的探针，每条探针的浓度可根据具体情况在50-300 nM间调整。。

3. 模板稀释：qPCR灵敏度极高，建议将模板进行稀释使用，控制Ct值在20-35之间适宜。

4. 反应体系：推荐使用25 – 50 μL，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

5. 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头；避免交叉污染和气溶胶污染。

参考扩增程序

循环步骤	温度	时间	循环数
逆转录	50℃^a	10 min	1
预变性	95℃	5 min	1
扩增反应	95℃	15 sec	45
扩增反应	60℃^b	30 sec^c	45

【注】a. 逆转录：42℃或者55℃均可，时间 10-15 min。

b. 扩增反应：扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整。

c. 荧光信号采集：不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同，请根据最短时间限制进行设置。

适用机型

ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™，ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex；

Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™；

Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™；

Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000；

Roche Applied Science LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96；

Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler®; Illumina Eco qPCR

注意事项

1. 实验过程中请使用RNase free耗材。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

Ver.CN20230731

本试剂盒酶 mix 中匹配冻干保护剂，可以直接用于冻干。

产品信息

货号	13775ES60 / 13775ES80 / 13775ES92
规格	100 T / 1000 T / 10000 T

组分信息

组分编号	组分名称	13775ES60 (100 T)	13775ES80 (1000 T)	13775ES92 (10000 T)
13775-A	4×Hifair^® V Lyo-Buffer	600 μL	6 mL	60 mL
13775-B	MgCl₂ (25 mM)	500 μL	5 mL	50 mL
13775–C	10×Hifair^® V Lyo-Enzyme Mix	240 μL	2.4 mL	24 mL

【注】1. 4×Hifair^® V Lyo-Buffer 为 Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Probe Buffer 的简写。

2. 10×Hifair^® V Lyo-Enzyme Mix 主要包含有耐热 Hifair^® V Reverse Transcriptase 和 UNICON^® HotStart Taq DNA Polymerase。

储存条件

-25~-15℃保存，有效期1年。

使用说明

反应体系（以25 μL为例）

组分	体积（μL）	终浓度
4×Hifair^® V Lyo-Buffer	6	1×
10×Hifair^® V Lyo-Enzyme Mix	2.4	–
MgCl₂ (25 mM)	3	–
Primer Mix (10 μM)	各0.4	0.16 μM
Probe Mix (10 μM)	各0.2	0.08 μM
模板RNA	1-5	–
RNase Free H2O	to 25	–

【注】使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。

引物浓度：Primer Mix 中包含多对引物，通常每条引物终浓度可以根据情况在 0.1-1.0 μM 间进行调整。
探针浓度：Probe Mix中包含多条不同荧光信号的探针，每条探针的浓度可根据具体情况在50-300 nM间调整。。

3. 模板稀释：qPCR灵敏度极高，建议将模板进行稀释使用，控制Ct值在20-35之间适宜。

4. 反应体系：推荐使用25 – 50 μL，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

5. 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头；避免交叉污染和气溶胶污染。

参考扩增程序

循环步骤	温度	时间	循环数
逆转录	50℃^a	10 min	1
预变性	95℃	5 min	1
扩增反应	95℃	15 sec	45
扩增反应	60℃^b	30 sec^c	45

【注】a. 逆转录：42℃或者55℃均可，时间 10-15 min。

b. 扩增反应：扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整。

c. 荧光信号采集：不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同，请根据最短时间限制进行设置。

适用机型

ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™，ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex；

Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™；

Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™；

Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000；

Roche Applied Science LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96；

Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler®; Illumina Eco qPCR

注意事项

1. 实验过程中请使用RNase free耗材。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

Ver.CN20230731

Lyo-nCoV一步法逆转录多重定量PCR(RT-qPCR)试剂盒(含MgCl2)

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Hifair® Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Kit

发表于2024年3月12日由上海金畔生物科技有限公司

Hifair® Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Kit

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

Hifair^® Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Kit是以RNA为模板进行多重定量PCR反应的试剂盒。在实验的过程中，逆转录和定量PCR在同一反应管中进行，简化了实验操作，降低了污染的风险。独特的Buffer设计，在体系中不包含影响冻干工艺的化学试剂，可用于一步法RT-qPCR冻干反应体系的配制和产品设计。

本试剂盒利用耐热Hifair^® V Reverse Transcriptase高效合成第一链cDNA，并利用UNICON^® HotStart Taq DNA Polymerase进行定量扩增。本试剂盒主要包含优化的冻干Buffer，Enzymes Mix等，缓冲液中已含有Mg²⁺和dNTP等，并添加了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升多重qPCR反应扩增效率的因子，能够在保证引物扩增效率的同时，进行多重荧光定量扩增反应。

产品组分

组分编号	组分名称	产品编号/规格
组分编号	组分名称	13800ES60 (100 T)	13800ES80 (1000 T)	13800ES92 (10000 T)
13800-A	4×Hifair^®Lyo-Buffer	625 μL	6.25 mL	62.5 mL
13800-B	Hifair^®Lyo-Enzyme Mix	100 μL	1 mL	10 mL
13800-C	DEPC-treated Water (DNase、RNase free)	1.5 mL	15 mL	150 mL

【注】1) 4×Hifair^®Lyo-Buffer为Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Probe Buffer的简写。

Hifair^®Lyo-Enzyme Mix主要包含有耐热Hifair^® V Reverse Transcriptase和UNICON^® HotStart Taq DNA Polymerase。

适用机型

ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™，ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex，Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™，Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon^®,Opticon^® 2, Chromo4™，Eppendorf Mastercycler^® ep realplex, realplex 2 s; Qiagen Corbett Rotor-Gene^® Q, Rotor-Gene^® 3000, Rotor-Gene^® 6000，Roche Applied Science LightCycler^® 480, LightCycler^® 2.0; Lightcycler^®96，Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler^®; Illumina Eco qPCR

运输与保存方式

运输方式：冰袋运输。
保存方式：

Part 1： 13800-A【4×Hifair^® Lyo-Buffer 】-20°C保存，有效期1年。

13800-C【DEPC-treated Water (DNase、RNase free)】-20°C保存，有效期1年。

Part 2： 13800-B【Hifair^® Lyo-Enzyme Mix 】4°C保存，有效期6个月。

本品避免反复冻融。建议分装保存。

注意事项

1. 实验过程中请使用RNase free耗材。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

反应体系（以25 μL为例）

组分	体积（μL）	终浓度
4×Hifair^®Lyo-Buffer	6.25	1×
Hifair^®Lyo-Enzyme Mix	1	–
Primer Mix (10 μM)	各0.4	0.16 μM
Probe Mix (10 μM)	各0.2	0.08 μM
模板RNA	1-5	–
RNase Free H₂O	to 25	–

【注】：使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。

a) 引物浓度：Primer Mix中包含多对引物，通常每条引物终浓度可以根据情况在0.1-1.0 μM间进行调整。

b) 探针浓度：Probe Mix中包含多条不同荧光信号的探针，每条探针的浓度可根据具体情况在50-300 nM间调整。

c) 模板稀释：qPCR灵敏度极高，建议将模板进行稀释使用，控制Ct值在20-35之间适宜。

d) 反应体系：推荐使用25 μL或50 μL，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

e) 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。

标准扩增程序

	反应阶段	温度	时间	循环数
1	逆转录	50°C^a	10 min	1
2	预变性	95°C	5 min	1
3	扩增反应	95°C	15 sec	45
3	扩增反应	60°C^b	30 sec^c	45

【注】：

a) 逆转录：42°C或者50°C均可，时间 10-15 min。

b) 扩增反应：扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整。CDC官方推荐的ORF1ab和N引物，退火温度建议≥60°C。

c) 荧光信号采集：不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同，请根据最短时间限制进行设置。

HB211220

产品组分

组分编号	组分名称	产品编号/规格
组分编号	组分名称	13800ES60 (100 T)	13800ES80 (1000 T)	13800ES92 (10000 T)
13800-A	4×Hifair^®Lyo-Buffer	625 μL	6.25 mL	62.5 mL
13800-B	Hifair^®Lyo-Enzyme Mix	100 μL	1 mL	10 mL
13800-C	DEPC-treated Water (DNase、RNase free)	1.5 mL	15 mL	150 mL

【注】1) 4×Hifair^®Lyo-Buffer为Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Probe Buffer的简写。

Hifair^®Lyo-Enzyme Mix主要包含有耐热Hifair^® V Reverse Transcriptase和UNICON^® HotStart Taq DNA Polymerase。

适用机型

运输与保存方式

运输方式：冰袋运输。
保存方式：

Part 1： 13800-A【4×Hifair^® Lyo-Buffer 】-20°C保存，有效期1年。

13800-C【DEPC-treated Water (DNase、RNase free)】-20°C保存，有效期1年。

Part 2： 13800-B【Hifair^® Lyo-Enzyme Mix 】4°C保存，有效期6个月。

本品避免反复冻融。建议分装保存。

注意事项

1. 实验过程中请使用RNase free耗材。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

反应体系（以25 μL为例）

组分	体积（μL）	终浓度
4×Hifair^®Lyo-Buffer	6.25	1×
Hifair^®Lyo-Enzyme Mix	1	–
Primer Mix (10 μM)	各0.4	0.16 μM
Probe Mix (10 μM)	各0.2	0.08 μM
模板RNA	1-5	–
RNase Free H₂O	to 25	–

【注】：使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。

a) 引物浓度：Primer Mix中包含多对引物，通常每条引物终浓度可以根据情况在0.1-1.0 μM间进行调整。

b) 探针浓度：Probe Mix中包含多条不同荧光信号的探针，每条探针的浓度可根据具体情况在50-300 nM间调整。

c) 模板稀释：qPCR灵敏度极高，建议将模板进行稀释使用，控制Ct值在20-35之间适宜。

d) 反应体系：推荐使用25 μL或50 μL，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

e) 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。

标准扩增程序

	反应阶段	温度	时间	循环数
1	逆转录	50°C^a	10 min	1
2	预变性	95°C	5 min	1
3	扩增反应	95°C	15 sec	45
3	扩增反应	60°C^b	30 sec^c	45

【注】：

a) 逆转录：42°C或者50°C均可，时间 10-15 min。

b) 扩增反应：扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整。CDC官方推荐的ORF1ab和N引物，退火温度建议≥60°C。

c) 荧光信号采集：不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同，请根据最短时间限制进行设置。

HB211220

Hifair® Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Kit

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新型冠状病毒（2019-nCoV）S糖蛋白（S2）

发表于2024年2月23日由上海金畔生物科技有限公司

Native Antigen Company专业从事天然和重组病毒和细菌抗原，抗体和免疫测定的开发和生产，以及定制产品的开发和定制生产。该公司通过其专有的哺乳动物细胞表达系统在生产高质量蛋白质方面拥有数十年的经验，可确保正确的糖基化和正确的折叠。Native Antigen Company的高质量试剂已被*的制药，体外诊断测定制造商和前沿疫苗研究和血清学领域的学术团体广泛采用，在这些领域中正确的折叠和糖基化至关重要。

thenativeantigencompany目前为新的冠状病毒（2019 NCOV，Covid-19）提供S1和S2刺蛋白.

Novel Coronavirus Antigens
本机抗原公司目前提供了Spike 1和2蛋白质的2019新型冠状病毒。这些蛋白质在哺乳动物HEK293细胞确保proper folding满满的糖基化它们适用于基础研究、诊断和疫苗的开发。

Our S1 antigen 包括2019 ncovspike蛋白的N-末端（残基685-1211）这个抗原包含一个单体羊FC标签为了方便表达和净化。

Novel Coronavirus (2019-nCoV) Spike Glycoprotein (S2), Sheep Fc-Tag (HEK293)

新型冠状病毒（2019-nCoV）S糖蛋白（S2），绵羊Fc标签（HEK293）

新型冠状病毒2019-nCoV（SARS-CoV-2）S糖蛋白（S2）是一种重组抗原，其中包含S2蛋白，氨基酸685-1211。Spike S2在哺乳动物的HEK293细胞中生产，以确保可靠的翻译后修饰。

SKU：REC31807 分类：抗原和抗体，人类冠状病毒抗原标签：新型冠状病毒2019-nCoV

SDS-PAGE：考马斯染色的SDS-PAGE显示纯化的2019-nCoV Spike S2蛋白。

新型冠状病毒（2019-NCOV）S糖蛋白（S2）

新型冠状病毒（2019-nCoV）S糖蛋白（S2）是一种重组抗原，其中包含S蛋白氨基酸685-1211。Spike S2在哺乳动物的HEK293细胞中生产，以确保可靠的翻译后修饰。

产品详细信息–新冠状病毒（2019-NCOV）S糖蛋白（S2）

新型冠状病毒（2019-nCoV）穗糖蛋白（S2），武汉-Hu-1株。
在HEK293细胞中表达的重组蛋白。
包含Spike蛋白氨基酸685-1211的N端，C端标有绵羊Fc。
通过蛋白质G色谱法从培养上清液中纯化。
在Dulbecco的磷酸盐缓冲液（DPBS）pH 7.4中提供。

背景

在2019年12月下旬，发现许多病毒性肺炎（现称为2019-nCoV急性呼吸系统疾病）患者在流行病学上与中国湖北省武汉市的华南海鲜市场有关。通过基因组测序鉴定了一种新型的感染人的冠状病毒，临时命名为2019年的新型冠状病毒（2019-nCoV），并自此命名为SARS-CoV-2（Lu等，2020）。2019-nCoV与2018年在中国东部舟山采集的两种蝙蝠衍生的严重急性呼吸综合征（SARS）样冠状病毒密切相关（同一性为88％），但与SARS-CoV距离较远（同一性为79％）和MERS-CoV（约50％身份）。但是，尽管蝙蝠可能是这种病毒的原始宿主，但武汉海鲜市场上出售的一种动物可能充当了中间宿主（Lu等人，2020）。相对同义密码子使用（RSCU）分析表明，2019-nCoV是蝙蝠冠状病毒与未知来源的冠状病毒之间的重组体，有人提出蛇可能充当了宿主。重组事件发生在病毒刺突糖蛋白内（Ji等，2020）。同源性建模显示，2019-nCoV具有与SARS-CoV相似的受体结合结构域结构，尽管某些关键残基处存在氨基酸差异。因此，2019-nCoV可能能够与人类血管紧张素转化酶2（ACE2）受体结合（Lu等人，2020）。

2019-nCoV是一种呼吸道病毒，主要通过与被感染者的接触，通过人咳嗽或打喷嚏时产生的呼吸道飞沫，唾液飞沫或从鼻子排出而传播。潜伏期被认为是2-11天。感染2019-nCoV可引起轻度症状，包括流鼻涕，喉咙痛，咳嗽和发烧。但是，对于某些人来说，可能情况更严重，并可能导致肺炎或呼吸困难。老年人和患有先前疾病（例如糖尿病和心脏病）的人似乎更容易感染该病毒。目前有来自24个国家的40,000例确诊病例，尽管绝大多数仍在中国境内，迄今为止已有900多例死亡（世卫组织，2020年）。

冠状病毒刺突是病毒体外壳上的I类病毒融合蛋白，通过识别宿主细胞受体并介导病毒和细胞膜融合来在病毒感染中发挥关键作用（Li，2016）。S糖蛋白被合成为前体蛋白，由约1,300个氨基酸组成，然后被切割成一个氨基（N）端S1亚基（〜700个氨基酸）和一个羧基（C）端S2亚基（〜600个氨基酸））。三个S1 / S2异二聚体组装形成一个三聚体尖峰，从病毒包膜突出。S1亚基包含受体结合结构域（RBD），而S2亚基包含疏水融合肽和两个七肽重复区。由受体结合，蛋白水解过程和/或细胞室中的酸性pH触发，I类病毒融合蛋白在感染过程中经历了从亚稳态的预融合状态到稳定的融合后状态的转变，其中受体结合亚基被裂解，Belouzard等人，2012年）。由三个S1-S2异二聚体组成的三聚体SARS冠状病毒（SARS-CoV）S糖蛋白与细胞受体血管紧张素转化酶2（ACE2）结合，并通过融合前到融合后的构象转换介导病毒膜和细胞膜的融合（Song等等，2018）。

参考资料

Gallagher和Buchmeier（2001）。冠状病毒会在病毒进入和发病机理中刺入蛋白质。病毒学。279（2）：371-4。
Ji等。（2020）。新发现的冠状病毒的突触糖蛋白内的同源重组可能会促进跨物种从蛇到人的传播。J Med Virol。2020; 10.1002 / jmv.25682。doi：10.1002 / jmv.25682.Li F.（2016）。冠状病毒刺突蛋白的结构，功能和进化。Annu Rev Virol。3（1）：237-261。
Lu等。（2015）。蝙蝠对人：尖峰特征决定了冠状病毒SARS-CoV，MERS-CoV等的“宿主跳跃”。趋势微生物。23（8）：468–78。
陆荣，赵鑫，李健，等。（2020）。2019年新型冠状病毒的基因组表征和流行病学：对病毒起源和受体结合的影响。柳叶刀。S0140-6736（20）30251-8。doi：10.1016 / S0140-6736（20）30251-8。
宋等。（2018）。SARS冠状病毒的冷冻EM结构将糖蛋白与其宿主细胞受体ACE2结合在一起。PLoS Pathog。2018年8月; 14（8）。
Su等。（2016）。冠状病毒的流行病学，遗传重组和发病机理。趋势微生物。2016年6月; 24（6）：490-502。
新型冠状病毒（2019-nCoV），世界卫生组织（WHO），2020。

新型冠状病毒（2019-nCoV）S糖蛋白（S1）

发表于2024年2月23日由上海金畔生物科技有限公司

thenativeantigencompany目前为新的冠状病毒（2019 NCOV，Covid-19）提供S1和S2刺蛋白.

我们的S1抗原包括2019 NCOV尖峰蛋白（残基1-674）的C-末端这个抗原包含一个单体羊FC标签为了方便表达和净化。

Novel Coronavirus (2019-nCoV) Spike Glycoprotein (S1), Sheep Fc-Tag (HEK293)

新型冠状病毒（2019-nCoV）S糖蛋白（S1），绵羊Fc-标签（HEK293）

新型冠状病毒2019-nCoV（SARS-CoV-2）S糖蛋白（S1）是一种重组抗原，其中包含S蛋白氨基酸1-674。Spike S1蛋白在HEK293哺乳动物细胞中生产，可确保可靠的翻译后修饰。

SKU：REC31806 分类：抗原和抗体，人类冠状病毒抗原标签：新型冠状病毒2019-nCoV

SDS-PAGE：考马斯染色的SDS-PAGE显示纯化的2019-nCoV Spike S1蛋白。

新型冠状病毒（2019-NCOV）S糖蛋白（S1）

新型冠状病毒2019-nCoV S糖蛋白（S1）是一种重组抗原，其中包含S蛋白氨基酸1-674。Spike S1蛋白在HEK293哺乳动物细胞中生产，可确保可靠的翻译后修饰。

产品详细信息–新冠状病毒（2019-NCOV）S糖蛋白（S1）

新型冠状病毒2019-nCoV S糖蛋白（S1），武汉-Hu-1株。
重组蛋白在HEK293细胞中生产，并通过蛋白G色谱法从培养上清液中纯化。
包含S蛋白11-674，C端标有绵羊Fc。
在Dulbecco的磷酸盐缓冲液（DPBS）pH 7.4中提供。

背景

冠状病毒刺突（S）糖蛋白是病毒体外壳上的I类病毒融合蛋白，通过识别宿主细胞受体并介导病毒和细胞膜融合来在病毒感染中发挥关键作用（Li，2016）。S糖蛋白被合成为前体蛋白，由约1,300个氨基酸组成，然后被切割成一个氨基（N）端S1亚基（〜700个氨基酸）和一个羧基（C）端S2亚基（〜600个氨基酸））。三个S1 / S2异二聚体组装形成一个三聚体尖峰，从病毒包膜突出。S1亚基包含受体结合结构域（RBD），而S2亚基包含疏水融合肽和两个七肽重复区。由受体结合，蛋白水解过程和/或细胞室中的酸性pH触发，I类病毒融合蛋白在感染过程中经历了从亚稳态的预融合状态到稳定的融合后状态的转变，其中受体结合亚基被裂解，Belouzard等人，2012年）。由三个S1-S2异二聚体组成的三聚体SARS冠状病毒（SARS-CoV）S糖蛋白与细胞受体血管紧张素转化酶2（ACE2）结合，并通过融合前到融合后的构象转换介导病毒膜和细胞膜的融合（Song等等，2018）。

参考资料

Gallagher和Buchmeier（2001）。冠状病毒会在病毒进入和发病机理中刺入蛋白质。病毒学。279（2）：371-4。
Ji等。（2020）。新发现的冠状病毒的突触糖蛋白内的同源重组可能会促进跨物种从蛇到人的传播。J Med Virol。2020; 10.1002 / jmv.25682。doi：10.1002 / jmv.25682.Li F.（2016）。冠状病毒刺突蛋白的结构，功能和进化。Annu Rev Virol。3（1）：237-261。
Lu等。（2015）。蝙蝠对人：尖峰特征决定了冠状病毒SARS-CoV，MERS-CoV等的“宿主跳跃”。趋势微生物。23（8）：468–78。
陆荣，赵鑫，李健，等。（2020）。2019年新型冠状病毒的基因组表征和流行病学：对病毒起源和受体结合的影响。柳叶刀。S0140-6736（20）30251-8。doi：10.1016 / S0140-6736（20）30251-8。
宋等。（2018）。SARS冠状病毒的冷冻EM结构将糖蛋白与其宿主细胞受体ACE2结合在一起。PLoS Pathog。2018年8月; 14（8）。
Su等。（2016）。冠状病毒的流行病学，遗传重组和发病机理。趋势微生物。2016年6月; 24（6）：490-502。
新型冠状病毒（2019-nCoV），世界卫生组织（WHO），2020。

Hifair® V nCov多重一步法RT-qPCR探针试剂盒|Hifair® V nCov Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit

发表于2024年2月22日由上海金畔生物科技有限公司

Hifair® V nCov多重一步法RT-qPCR探针试剂盒|Hifair® V nCov Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

Hifair^® V nCov Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit是以RNA为模板进行多重定量PCR反应的试剂盒。在实验的过程中，逆转录和定量PCR在同一反应管中进行，简化了实验操作，降低了污染的风险。

本试剂盒利用耐热Hifair^® V Reverse Transcriptase高效合成第一链cDNA，并利用UNICON^® HotStart Taq DNA Polymerase进行定量扩增。本试剂盒主要包含优化的MP Buffer，Enzymes Mix等，缓冲液中已含有Mg²⁺和dNTP等，并添加了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升多重qPCR反应扩增效率的因子，能够保证引物扩增效率的同时，进行多达四重的反应。

产品组分

组分编号	组分名称	产品编号/规格
组分编号	组分名称	13110ES60 (100 T)	13110ES80 (1000 T)	13110ES92 (10000 T)
13110-A	2×Hifair^®V MP Buffer^a^,b	1.2 mL	12 mL	120 mL
13110-B	Hifair^®V Enzyme Mix^c	100 μL	1 mL	5 mL×2
13110-C	RNase Free H₂O	1.2 mL	12 mL	120 mL

【注】a) 2×Hifair^®V MP Buffer为Multiplex One Step RT-qPCR Probe Buffer的简写。

b) 不含Rox reference dye。如需，推荐使用货号10200ES产品。

c) Hifair^®V Enzyme Mix主要包含有耐热Hifair^® V Reverse Transcriptase、RNase inhibitor和UNICON^® HotStart Taq DNA Polymerase。

适用机型

ABI系列：ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne, StepOne Plus; 7500, 7500 Fast, ViiA7, QuantStudio 3 and 5, QuantStudio 6, 7, 12k Flex;

Bio-Rad系列：Bio-Rad CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon,Opticon 2, Chromo4;

Roche系列：Roche Applied Science LightCycler 480, LightCycler 2.0; Lightcycler96;

其他系列：Stratagene MX3000P, MX3005P, MX4000P;

Eppendorf Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;

Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler; Illumina Eco qPCR.

运输与保存方式

冰袋运输。-20℃保存，有效期1年。本品避免反复冻融。建议分装保存。

注意事项
1. 实验过程中请使用RNase free耗材。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
3. 本产品仅作科研用途！

反应体系

组分	体积（μL）		体积（μL）	终浓度
2×Hifair^®V MP Buffer	12	15		1×
Hifair^®V Enzyme Mix	1	1.5		–
Primer/Probe Mix (10 μM)	1-4	1-4		0.4 μM
模板 RNA	1-5	1-10		–
RNase Free H₂O	To 25	To 30		–

【注】：使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。

a) 引物浓度：Primer Mix中包含多对引物，通常每条引物终浓度为0.4 μM，也可以根据情况在0.1-1.0 μM间进行调整。

b) 探针浓度：Probe Mix中包含多条不同荧光信号的探针，每条探针的浓度可根据具体情况在50-300 nM间调整。

c) 模板稀释：qPCR灵敏度极高，建议将模板进行稀释使用，控制Ct值在20-35之间适宜。

d) 反应体系：推荐使用25 μL、30 μL或50 μL，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

e) 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。

标准扩增程序

	反应阶段	温度	时间	循环数
1	逆转录	50℃^a	10 min	1
2	预变性	95℃	5 min	1
3	扩增反应	95℃	15 sec	45
3	扩增反应	60℃^b	30 sec^c	45

【注】

a) 逆转录：42℃或者50℃均可，时间10-15 min。

b) 扩增反应：扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整。CDC官方推荐的ORF1ab和N引物，退火温度建议≥60℃。

c) 荧光信号采集：不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同，请根据最短时间限制进行设置。

相关产品

新冠状病毒检测相关的试剂盒和组分，批间差小，无污染；
每一个酶都经过工艺放大到百升，在十万级净化车间生产和包装，过30家客户在使用我们的产品。

原料应用类型	产品名称	货号
假病毒	COVID-19-pseudovirus（2019-nCOV假病毒）	11900ES
一步法RT-PCR	Hifair® V nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit	13110ES
一步法RT-PCR	Hifair® V nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG防污染)	13111ES
逆转录用酶	Hifair® V Reverse Transcriptase 第五代耐热逆转录酶	11300ES
	Murine RNase inhibitor (40U/μL) 鼠源RNase抑制剂	10603ES
	Murine RNase Inhibitor (200 U/μL, Glycerol-free)（无甘油版）	10703ES
定量检测用酶	Hieff Unicon® HotStartTaq DNA Polymerase（抗体法热启动Taq酶）	13086ES
防污染系统	Uracil DNA Glycosylase (UDG), heat-labile 热敏UDG酶	10303ES
防污染系统	dUTP, 100mM Solution 脱氧尿苷三磷酸溶液（100 mM）	10128ES
dNTP	dNTP Mix (25 mM each)	10125ES
等温扩增用酶	Bst II DNA polymerase	12908ES

HB200219

产品组分

组分编号	组分名称	产品编号/规格
组分编号	组分名称	13110ES60 (100 T)	13110ES80 (1000 T)	13110ES92 (10000 T)
13110-A	2×Hifair^®V MP Buffer^a^,b	1.2 mL	12 mL	120 mL
13110-B	Hifair^®V Enzyme Mix^c	100 μL	1 mL	5 mL×2
13110-C	RNase Free H₂O	1.2 mL	12 mL	120 mL

【注】a) 2×Hifair^®V MP Buffer为Multiplex One Step RT-qPCR Probe Buffer的简写。

b) 不含Rox reference dye。如需，推荐使用货号10200ES产品。

c) Hifair^®V Enzyme Mix主要包含有耐热Hifair^® V Reverse Transcriptase、RNase inhibitor和UNICON^® HotStart Taq DNA Polymerase。

适用机型

ABI系列：ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne, StepOne Plus; 7500, 7500 Fast, ViiA7, QuantStudio 3 and 5, QuantStudio 6, 7, 12k Flex;

Bio-Rad系列：Bio-Rad CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon,Opticon 2, Chromo4;

Roche系列：Roche Applied Science LightCycler 480, LightCycler 2.0; Lightcycler96;

其他系列：Stratagene MX3000P, MX3005P, MX4000P;

Eppendorf Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;

Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler; Illumina Eco qPCR.

运输与保存方式

冰袋运输。-20℃保存，有效期1年。本品避免反复冻融。建议分装保存。

注意事项
1. 实验过程中请使用RNase free耗材。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
3. 本产品仅作科研用途！

反应体系

组分	体积（μL）		体积（μL）	终浓度
2×Hifair^®V MP Buffer	12	15		1×
Hifair^®V Enzyme Mix	1	1.5		–
Primer/Probe Mix (10 μM)	1-4	1-4		0.4 μM
模板 RNA	1-5	1-10		–
RNase Free H₂O	To 25	To 30		–

【注】：使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。

a) 引物浓度：Primer Mix中包含多对引物，通常每条引物终浓度为0.4 μM，也可以根据情况在0.1-1.0 μM间进行调整。

b) 探针浓度：Probe Mix中包含多条不同荧光信号的探针，每条探针的浓度可根据具体情况在50-300 nM间调整。

c) 模板稀释：qPCR灵敏度极高，建议将模板进行稀释使用，控制Ct值在20-35之间适宜。

d) 反应体系：推荐使用25 μL、30 μL或50 μL，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

e) 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。

标准扩增程序

	反应阶段	温度	时间	循环数
1	逆转录	50℃^a	10 min	1
2	预变性	95℃	5 min	1
3	扩增反应	95℃	15 sec	45
3	扩增反应	60℃^b	30 sec^c	45

【注】

a) 逆转录：42℃或者50℃均可，时间10-15 min。

b) 扩增反应：扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整。CDC官方推荐的ORF1ab和N引物，退火温度建议≥60℃。

c) 荧光信号采集：不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同，请根据最短时间限制进行设置。

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原料应用类型	产品名称	货号
假病毒	COVID-19-pseudovirus（2019-nCOV假病毒）	11900ES
一步法RT-PCR	Hifair® V nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit	13110ES
一步法RT-PCR	Hifair® V nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG防污染)	13111ES
逆转录用酶	Hifair® V Reverse Transcriptase 第五代耐热逆转录酶	11300ES
	Murine RNase inhibitor (40U/μL) 鼠源RNase抑制剂	10603ES
	Murine RNase Inhibitor (200 U/μL, Glycerol-free)（无甘油版）	10703ES
定量检测用酶	Hieff Unicon® HotStartTaq DNA Polymerase（抗体法热启动Taq酶）	13086ES
防污染系统	Uracil DNA Glycosylase (UDG), heat-labile 热敏UDG酶	10303ES
防污染系统	dUTP, 100mM Solution 脱氧尿苷三磷酸溶液（100 mM）	10128ES
dNTP	dNTP Mix (25 mM each)	10125ES
等温扩增用酶	Bst II DNA polymerase	12908ES

HB200219

Hifair® V nCov多重一步法RT-qPCR探针试剂盒|Hifair® V nCov Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit

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2019-nCOV-S蛋白假病毒|COVID-19-Spike Protein Pseudovirus

发表于2024年2月22日由上海金畔生物科技有限公司

2019-nCOV-S蛋白假病毒|COVID-19-Spike Protein Pseudovirus

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

本品采用了逆转录病毒载体，使用SARS-CoV-2 Spike蛋白基因替换逆转录病毒的包膜蛋白基因，与逆转录病毒包装质粒和CMV-GFP-T2A-Luciferase质粒共转染293T细胞，包装含Spike蛋白基因的假病毒，假病毒表面能表达SARS-CoV-2 Spike蛋白，并且病毒同时携带GFP和Luciferase荧光素酶报告基因，可通过观察荧光信号和检测荧光素酶活性评价假病毒感染细胞的活性，该假病毒无自主复制能力，安全性好，可用于SARS-CoV-2受体和药物筛选、中和抗体检测及疫苗效果评价等试验。

产品组分

组分编号

组分名称

产品编号/规格

11906ES50

11906ES70

11906ES80

11906

COVID-19-Spike Protein Pseudovirus

50 μL

4×50 μL

20×50 μL

产品检测结果

2019-nCOV-S蛋白假病毒|COVID-19-Spike Protein Pseudovirus

图1：不同体积SARS-CoV-2 Spike蛋白假病毒侵染HEK293T与HEK293T-ACE2荧光图片

2019-nCOV-S蛋白假病毒|COVID-19-Spike Protein Pseudovirus

图2：SARS-CoV-2 Spike蛋白假病毒侵染HEK293T与HEK293T-ACE2测定Luciferase的读值

2019-nCOV-S蛋白假病毒|COVID-19-Spike Protein Pseudovirus

图3：SARS-CoV-2 Spike蛋白假病毒用于中和抗体效果的评价

使用方法

1、细胞铺板：

实验前一天，将待感染HEK293T-ACE2细胞接种于96孔细胞培养板中，接种量约为1×10⁴个细胞/孔，第二日，待细胞密度在30%左右时进行病毒感染。

2、假病毒感染：

取出冻存的假病毒置于冰上融化或4℃条件下待其完全融化后，设计浓度梯度（一般需要设计3个浓度梯度），加入细胞培养体系中感染目的细胞。以HEK293T- ACE2细胞为例，加入病毒量约为0.1-1 μL/孔，病毒感染后6 h后更换新鲜培养基继续培养。

3、感染检测：

细胞感染假病毒换液后48 h，通过荧光显微镜或共聚焦显微镜观察绿色荧光蛋白表达和检测荧光素酶的活性判定感染效率。（假病毒对不同细胞的感染效率不同，正式实验前建议进行预实验，以确定最合适病毒添加量）

运输与保存方式

干冰运输。-80℃保存，有效期6个月。本品应避免反复冻融，建议分装保存。

注意事项

1、每批次病毒滴度均达到1×10⁶TU/mL（HEK293T- ACE2）及以上，具体病毒滴度请参考具体批次号COA。

2、冻融会导致假病毒稳定性降低，从而影响核酸抽提效果和QPCR检测结果，使用时应避免反复冻融。

3、病毒操作时必须应在二级或以上生物安全实验室或生物安全柜中进行，不可使用普通超净工作台操作病毒。

4、病毒操作时请穿好实验服，戴口罩和乳胶手套。

5、如果使用时本品不慎溅到眼睛、皮肤或其他身体部位请立即使用大量清水冲洗。

6、使用本品所产生的实验废弃物需要通过高压灭菌处理后按照医疗废弃物处理要求进行处理。

7、本产品仅作科研用途！

HB210706

产品组分

组分编号

组分名称

产品编号/规格

11906ES50

11906ES70

11906ES80

11906

COVID-19-Spike Protein Pseudovirus

50 μL

4×50 μL

20×50 μL

产品检测结果

2019-nCOV-S蛋白假病毒|COVID-19-Spike Protein Pseudovirus

图1：不同体积SARS-CoV-2 Spike蛋白假病毒侵染HEK293T与HEK293T-ACE2荧光图片

2019-nCOV-S蛋白假病毒|COVID-19-Spike Protein Pseudovirus

图2：SARS-CoV-2 Spike蛋白假病毒侵染HEK293T与HEK293T-ACE2测定Luciferase的读值

2019-nCOV-S蛋白假病毒|COVID-19-Spike Protein Pseudovirus

图3：SARS-CoV-2 Spike蛋白假病毒用于中和抗体效果的评价

使用方法

1、细胞铺板：

实验前一天，将待感染HEK293T-ACE2细胞接种于96孔细胞培养板中，接种量约为1×10⁴个细胞/孔，第二日，待细胞密度在30%左右时进行病毒感染。

2、假病毒感染：

3、感染检测：

运输与保存方式

干冰运输。-80℃保存，有效期6个月。本品应避免反复冻融，建议分装保存。

注意事项

1、每批次病毒滴度均达到1×10⁶TU/mL（HEK293T- ACE2）及以上，具体病毒滴度请参考具体批次号COA。

2、冻融会导致假病毒稳定性降低，从而影响核酸抽提效果和QPCR检测结果，使用时应避免反复冻融。

3、病毒操作时必须应在二级或以上生物安全实验室或生物安全柜中进行，不可使用普通超净工作台操作病毒。

4、病毒操作时请穿好实验服，戴口罩和乳胶手套。

5、如果使用时本品不慎溅到眼睛、皮肤或其他身体部位请立即使用大量清水冲洗。

6、使用本品所产生的实验废弃物需要通过高压灭菌处理后按照医疗废弃物处理要求进行处理。

7、本产品仅作科研用途！

HB210706

Q：对操作环境有没有要求？

A：病毒操作时必须应在二级或以上生物安全实验室或生物安全柜中进行，不可使用普通超净工作台操作病毒

Q：病毒滴度是多少？

A：病毒滴度均达到1×106TU/mL及以上，具体病毒滴度请参考具体批次号COA。

Q：可用于哪些实验？

A：SARS-CoV-2受体和药物筛选、中和抗体检测及疫苗效果评价等试验

Q：COVID-19-Spike Protein Pseudovirus（2019-nCOV-S蛋白假病毒）有完成的基因序列吗？想用现有引物做个测序？

A：这个产品是假病毒表面有Spike蛋白，病毒里面包裹的是GFP和Luciferase基因，感染目的细胞之后可以通过荧光显微镜观察荧光或者通过双荧光素酶实验检测感染效率，假病毒不能通过引物进行测序

[1] Zhang RY, Zhou SH, He CB, et al. Adjuvant-Protein Conjugate Vaccine with Built-In TLR7 Agonist on S1 Induces Potent Immunity against SARS-CoV-2 and Variants of Concern. ACS Infect Dis. 2022;8(7):1367-1375. doi:10.1021/acsinfecdis.2c00259(IF:5.084)
[2] Liu J, Chen X, Liu Y, et al. Characterization of SARS-CoV-2 worldwide transmission based on evolutionary dynamics and specific viral mutations in the spike protein. Infect Dis Poverty. 2021;10(1):112. Published 2021 Aug 21. doi:10.1186/s40249-021-00895-4(IF:4.388)

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三博特日本ATTO电泳槽日本东洋advantec滤纸中国代理商

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Lyo-nCoV一步法逆转录多重定量PCR(RT-qPCR)试剂盒(含MgCl2)

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已发表文献

Hifair® Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Kit

产品说明书

FAQ

COA

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新型冠状病毒（2019-nCoV）S糖蛋白（S2）

新型冠状病毒（2019-nCoV）S糖蛋白（S2），绵羊Fc标签（HEK293）

新型冠状病毒（2019-NCOV）S糖蛋白（S2）

产品详细信息–新冠状病毒（2019-NCOV）S糖蛋白（S2）

背景

新型冠状病毒（2019-nCoV）S糖蛋白（S1）

新型冠状病毒（2019-nCoV）S糖蛋白（S1），绵羊Fc-标签（HEK293）

新型冠状病毒（2019-NCOV）S糖蛋白（S1）

产品详细信息–新冠状病毒（2019-NCOV）S糖蛋白（S1）

背景

Hifair® V nCov多重一步法RT-qPCR探针试剂盒|Hifair® V nCov Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit

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2019-nCOV-S蛋白假病毒|COVID-19-Spike Protein Pseudovirus

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