UltraPolymer Goat anti-Rabbit IgG (H&L) conjug


UltraPolymer Goat anti-Rabbit IgG (H&L) conjug

简要描述:mmunoReagents致力于为生命科学界生产高质量、低成本的试剂。我们的承诺是我们的客户和他们的研究的成功。

详细介绍

产品咨询

偶联物:辣根过氧化物酶

形态:液体

净化:固相兔IgG亲和纯化

纯度:基于SDS-PAGE亲和纯化抗体大于95%

主持人:山羊

免疫原:纯化兔LGG,全分子

缓冲液:PBS,1%BSA和01% proclin 150

储存温度:2-8摄氏度

保质期:自收到之日起1年。使用前准备工作稀释液,然后丢弃

特异性:基于IEP,该免疫多聚体抗体与兔lg G上的重()链反应,所有免免疫球蛋白上的轻链

交叉反应性:基于IEP,与非免疫球蛋白兔血清蛋白、人血清蛋白、小鼠血清蛋白、大鼠血清蛋白无交叉反应。

原产地:

应用程序:

山羊血清从美国来源的健康动物和注册兽医的照顾下获得。

免疫组织化学

协议和手册:

免责声明:仅供体外实验室使用。不用于诊断或治疗用途。不供人或动物食用。我们建议的产品申请并不是违反任何使用我们的产品的建议,也不是作为任何许可的建议,未经ImmunoReagents,Inc.事先书面批准,不得转售或修改产品以供转售。

FITC标记山羊抗兔IgG抗体 FITC山羊抗兔IgG抗体|FITC Goat Anti-Rabbit IgG

FITC标记山羊抗兔IgG抗体 FITC山羊抗兔IgG抗体|FITC Goat Anti-Rabbit IgG

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品描述

 

本品是由FITC标记的山羊抗兔IgG(H+L),使用抗原偶联的琼脂糖微珠从山羊抗血清内亲和色谱纯化所得。免疫电泳和/或ELISA法检测显示本品特异性结合完整的兔IgG分子,也会与其他兔免疫球蛋白的轻链结合。可能会与其他物种免疫球蛋白发生交叉反应,但不会识别非免疫球蛋白类的血清蛋白。该荧光基团光谱性质同Alexa Fluor 488,Amax(最大激发波长)为492nm,Emax(最大发射波长)为520nm。

本品适合做单标实验,广泛应用于多种免疫学实验如免疫细胞化学(ICC),流式细胞术(FC)以及免疫组化(IHC)等。要做多标(multiple-labeling)实验,建议使用与相近物种的血清蛋白或者免疫球蛋白预先经过亲和吸附处理的二抗。

产品应用

建议稀释浓度:1:25-1:100(For most application)

产品性质 

抗体浓度(Antibody Concentration)

100µl (0.75mg/ml)

缓冲液(Buffer)

0.005M 磷酸钠,0.125M 氯化钠, pH 7.6

稳定剂(Stabilizer)

7.5mg/ml BSA(无IgG,蛋白酶),50% 甘油

荧光素(Fluorophore)

FITC-isomer 1, Amax =492nm, Emax=520nm

防腐剂(Preservative)

0.025% 叠氮化钠

原料来源(Source of Material)

Jackson Immunoresearch 111-095-003

运输与保存方法

冰袋运输。-20℃分装保存,尽量避免反复冻融。有效期1年。

注意事项

1)本品含叠氮化钠,对人体有害,请注意适当防护。

2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

3)本产品仅作科研用途!

 

FITC标记山羊抗兔IgG抗体 FITC山羊抗兔IgG抗体|FITC Goat Anti-Rabbit IgG

暂无内容

[1] Wang Z, Gong X, Li J, et al. Oxygen-Delivering Polyfluorocarbon Nanovehicles Improve Tumor Oxygenation and Potentiate Photodynamic-Mediated Antitumor Immunity. ACS Nano. 2021;15(3):5405-5419. doi:10.1021/acsnano.1c00033(IF:15.881)
[2] Bao L, Dou G, Tian R, et al. Engineered neutrophil apoptotic bodies ameliorate myocardial infarction by promoting macrophage efferocytosis and inflammation resolution. Bioact Mater. 2021;9:183-197. Published 2021 Aug 27. doi:10.1016/j.bioactmat.2021.08.008(IF:14.593)
[3] Shi X, Cheng Y, Wang J, et al. 3D printed intelligent scaffold prevents recurrence and distal metastasis of breast cancer. Theranostics. 2020;10(23):10652-10664. Published 2020 Aug 29. doi:10.7150/thno.47933(IF:11.556)
[4] Li Z, Wu M, Liu S, et al. Apoptotic vesicles activate autophagy in recipient cells to induce angiogenesis and dental pulp regeneration [published online ahead of print, 2022 May 10]. Mol Ther. 2022;S1525-0016(22)00304-5. doi:10.1016/j.ymthe.2022.05.006(IF:11.454)
[5] Chen H, Wang X, Wang J, et al. In vitroadipogenesis and long-term adipocyte culture in adipose tissue-derived cell banks. Biofabrication. 2021;13(3):10.1088/1758-5090/ac0610. Published 2021 Jul 5. doi:10.1088/1758-5090/ac0610(IF:10.020)
[6] Wang Y, Lin YX, Qiao SL, et al. Polymeric nanoparticles promote macrophage reversal from M2 to M1 phenotypes in the tumor microenvironment. Biomaterials. 2017;112:153-163. doi:10.1016/j.biomaterials.2016.09.034(IF:8.387)
[7] Yuan J, Jiang X, Lan H, et al. Multi-Omics Analysis of the Therapeutic Value of MAL2 Based on Data Mining in Human Cancers. Front Cell Dev Biol. 2022;9:736649. Published 2022 Jan 17. doi:10.3389/fcell.2021.736649(IF:6.684)
[8] Tao Y, Qiao SM, Lv CJ, et al. Phytoestrogen arctigenin preserves the mucus barrier in inflammatory bowel diseases by inhibiting goblet cell apoptosis via the ERβ/TRIM21/PHB1 pathway [published online ahead of print, 2022 May 22]. Phytother Res. 2022;10.1002/ptr.7495. doi:10.1002/ptr.7495(IF:5.882)
[9] Li Z, You L, Yan D, James AA, Huang Y, Tan A. Bombyx mori histone methyltransferase BmAsh2 is essential for silkworm piRNA-mediated sex determination. PLoS Genet. 2018;14(2):e1007245. Published 2018 Feb 23. doi:10.1371/journal.pgen.1007245(IF:5.540)
[10] Tao Y, Yue M, Lv C, et al. Pharmacological activation of ERβ by arctigenin maintains the integrity of intestinal epithelial barrier in inflammatory bowel diseases. FASEB J. 2020;34(2):3069-3090. doi:10.1096/fj.201901638RR(IF:5.391)
[11] Li Z, Liu S, Fu T, Peng Y, Zhang J. Microtubule destabilization caused by silicate via HDAC6 activation contributes to autophagic dysfunction in bone mesenchymal stem cells. Stem Cell Res Ther. 2019;10(1):351. Published 2019 Nov 27. doi:10.1186/s13287-019-1441-4(IF:4.627)
[12] Li Z, You L, Zhang Q, Yu Y, Tan A. A Targeted In-Fusion Expression System for Recombinant Protein Production in Bombyx mori. Front Genet. 2022;12:816075. Published 2022 Jan 4. doi:10.3389/fgene.2021.816075(IF:4.599)
[13] Zheng C, Wu SM, Lian H, et al. Low-intensity pulsed ultrasound attenuates cardiac inflammation of CVB3-induced viral myocarditis via regulation of caveolin-1 and MAPK pathways. J Cell Mol Med. 2019;23(3):1963-1975. doi:10.1111/jcmm.14098(IF:4.302)
[14] Wang H, Zhang Z, Guan J, Lu W, Zhan C. Unraveling GLUT-mediated transcytosis pathway of glycosylated nanodisks. Asian J Pharm Sci. 2021;16(1):120-128. doi:10.1016/j.ajps.2020.07.001(IF:3.968)
[15] Chen L, Lv L, Zhang L, et al. Metformin ameliorates bladder dysfunction in a rat model of partial bladder outlet obstruction. Am J Physiol Renal Physiol. 2021;320(5):F838-F858. doi:10.1152/ajprenal.00625.2020(IF:3.377)
[16] Yang LY, Liu XF, Yang Y, et al. Biochemical features of the adhesion G protein-coupled receptor CD97 related to its auto-proteolysis and HeLa cell attachment activities. Acta Pharmacol Sin. 2017;38(1):56-68. doi:10.1038/aps.2016.89(IF:3.166)
[17] Wang Y, Jiang C, Cong S, Guo C, Yan Z. Extracellular matrix deposited by Wharton's jelly mesenchymal stem cells enhances cell expansion and tissue specific lineage potential. Am J Transl Res. 2018;10(11):3465-3480. Published 2018 Nov 15. (IF:3.061)
[18] Xue Z, Zhuang J, Bai H, et al. VDR mediated HSD3B1 to regulate lipid metabolism and promoted testosterone synthesis in mouse Leydig cells. Genes Genomics. 2022;44(5):583-592. doi:10.1007/s13258-022-01232-1(IF:1.839)

产品描述

 

本品是由FITC标记的山羊抗兔IgG(H+L),使用抗原偶联的琼脂糖微珠从山羊抗血清内亲和色谱纯化所得。免疫电泳和/或ELISA法检测显示本品特异性结合完整的兔IgG分子,也会与其他兔免疫球蛋白的轻链结合。可能会与其他物种免疫球蛋白发生交叉反应,但不会识别非免疫球蛋白类的血清蛋白。该荧光基团光谱性质同Alexa Fluor 488,Amax(最大激发波长)为492nm,Emax(最大发射波长)为520nm。

本品适合做单标实验,广泛应用于多种免疫学实验如免疫细胞化学(ICC),流式细胞术(FC)以及免疫组化(IHC)等。要做多标(multiple-labeling)实验,建议使用与相近物种的血清蛋白或者免疫球蛋白预先经过亲和吸附处理的二抗。

产品应用

建议稀释浓度:1:25-1:100(For most application)

产品性质 

抗体浓度(Antibody Concentration)

100µl (0.75mg/ml)

缓冲液(Buffer)

0.005M 磷酸钠,0.125M 氯化钠, pH 7.6

稳定剂(Stabilizer)

7.5mg/ml BSA(无IgG,蛋白酶),50% 甘油

荧光素(Fluorophore)

FITC-isomer 1, Amax =492nm, Emax=520nm

防腐剂(Preservative)

0.025% 叠氮化钠

原料来源(Source of Material)

Jackson Immunoresearch 111-095-003

运输与保存方法

冰袋运输。-20℃分装保存,尽量避免反复冻融。有效期1年。

注意事项

1)本品含叠氮化钠,对人体有害,请注意适当防护。

2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

3)本产品仅作科研用途!

 

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[1] Wang Z, Gong X, Li J, et al. Oxygen-Delivering Polyfluorocarbon Nanovehicles Improve Tumor Oxygenation and Potentiate Photodynamic-Mediated Antitumor Immunity. ACS Nano. 2021;15(3):5405-5419. doi:10.1021/acsnano.1c00033(IF:15.881)
[2] Bao L, Dou G, Tian R, et al. Engineered neutrophil apoptotic bodies ameliorate myocardial infarction by promoting macrophage efferocytosis and inflammation resolution. Bioact Mater. 2021;9:183-197. Published 2021 Aug 27. doi:10.1016/j.bioactmat.2021.08.008(IF:14.593)
[3] Shi X, Cheng Y, Wang J, et al. 3D printed intelligent scaffold prevents recurrence and distal metastasis of breast cancer. Theranostics. 2020;10(23):10652-10664. Published 2020 Aug 29. doi:10.7150/thno.47933(IF:11.556)
[4] Li Z, Wu M, Liu S, et al. Apoptotic vesicles activate autophagy in recipient cells to induce angiogenesis and dental pulp regeneration [published online ahead of print, 2022 May 10]. Mol Ther. 2022;S1525-0016(22)00304-5. doi:10.1016/j.ymthe.2022.05.006(IF:11.454)
[5] Chen H, Wang X, Wang J, et al. In vitroadipogenesis and long-term adipocyte culture in adipose tissue-derived cell banks. Biofabrication. 2021;13(3):10.1088/1758-5090/ac0610. Published 2021 Jul 5. doi:10.1088/1758-5090/ac0610(IF:10.020)
[6] Wang Y, Lin YX, Qiao SL, et al. Polymeric nanoparticles promote macrophage reversal from M2 to M1 phenotypes in the tumor microenvironment. Biomaterials. 2017;112:153-163. doi:10.1016/j.biomaterials.2016.09.034(IF:8.387)
[7] Yuan J, Jiang X, Lan H, et al. Multi-Omics Analysis of the Therapeutic Value of MAL2 Based on Data Mining in Human Cancers. Front Cell Dev Biol. 2022;9:736649. Published 2022 Jan 17. doi:10.3389/fcell.2021.736649(IF:6.684)
[8] Tao Y, Qiao SM, Lv CJ, et al. Phytoestrogen arctigenin preserves the mucus barrier in inflammatory bowel diseases by inhibiting goblet cell apoptosis via the ERβ/TRIM21/PHB1 pathway [published online ahead of print, 2022 May 22]. Phytother Res. 2022;10.1002/ptr.7495. doi:10.1002/ptr.7495(IF:5.882)
[9] Li Z, You L, Yan D, James AA, Huang Y, Tan A. Bombyx mori histone methyltransferase BmAsh2 is essential for silkworm piRNA-mediated sex determination. PLoS Genet. 2018;14(2):e1007245. Published 2018 Feb 23. doi:10.1371/journal.pgen.1007245(IF:5.540)
[10] Tao Y, Yue M, Lv C, et al. Pharmacological activation of ERβ by arctigenin maintains the integrity of intestinal epithelial barrier in inflammatory bowel diseases. FASEB J. 2020;34(2):3069-3090. doi:10.1096/fj.201901638RR(IF:5.391)
[11] Li Z, Liu S, Fu T, Peng Y, Zhang J. Microtubule destabilization caused by silicate via HDAC6 activation contributes to autophagic dysfunction in bone mesenchymal stem cells. Stem Cell Res Ther. 2019;10(1):351. Published 2019 Nov 27. doi:10.1186/s13287-019-1441-4(IF:4.627)
[12] Li Z, You L, Zhang Q, Yu Y, Tan A. A Targeted In-Fusion Expression System for Recombinant Protein Production in Bombyx mori. Front Genet. 2022;12:816075. Published 2022 Jan 4. doi:10.3389/fgene.2021.816075(IF:4.599)
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[18] Xue Z, Zhuang J, Bai H, et al. VDR mediated HSD3B1 to regulate lipid metabolism and promoted testosterone synthesis in mouse Leydig cells. Genes Genomics. 2022;44(5):583-592. doi:10.1007/s13258-022-01232-1(IF:1.839)

ibms Hu-6.3-IgG说明书

Anti-PEG为了对聚乙二醇化化合物进行敏感的检测,我们于1999年开发了个对聚乙二醇具有特异性的单克隆抗体(AGP3和E11)。这些抗体可用于ELISA法测定PEG修饰蛋白。
从那时起,我们产生了额外的高亲和力抗聚乙二醇单克隆抗体。
AGP4和rAGP6是高亲和力的IgM抗体,能有效捕获聚乙二醇化物,用于ELISA的敏感检测。
3.3是与含有吐温20洗涤剂的洗涤缓冲液相容的IgG抗PEG抗体。
6.3和r33G是高亲和力IgG抗体,可敏感检测聚乙二醇化化合物。
15-2b是与甲氧基聚乙二醇结合的高亲和力抗体。
我们最近还开发了一种温度敏感的抗PEG抗体(2B5),它可以通过热循环可逆地结合和释放PEG。

ibms Hu-6.3-IgG说明书

 

Hu-6.3 IgG

 产品编号Hu-6.3-IgG
产品详细信息
Hu-6.3是一种高亲和力6.3抗PEG抗体的人性化形式。
这种抗体与PEG的骨架结合,可以用抗人的二级抗体来检测。
Hu-6.3可作为抗PEG抗体的IgG参考标准。
本产品含有足够的Hu-6.3,在推荐稀释液下产生约300条标准曲线。
Hu-6.3数据表说明:人体抗PEG
特异性:聚乙二醇
格式:纯化
产品类型:重组抗体
克隆:Hu-6.3
同型:人IgG1
物种:人类
价格:1150美元
数量:50µg

 

 

Hu-6.3标准曲线
条形图,SD。
聚乙二醇化蛋白质和纳米粒的夹心ELISA结果在应用中可用
使用抗PEG抗体的文献可在出版物中找到

 

Confirmed applications
Use Yes No      Not determined
ELISA    
Western blots    
Flow cytometer    
Immunohistochemistry    
PEG-proteins    
PEG-liposomes    
PEG-nanoparticles

Cy3标记驴抗山羊IgG(H+L)(A0502)

Cy3标记驴抗山羊IgG(H+L)
Cy3标记驴抗山羊IgG(H+L)(A0502) 一键复制产品信息

产品编号: A0502

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A0502 Cy3标记驴抗山羊IgG(H+L) 50μl 462.00元

本Cy3标记驴抗山羊IgG(H+L)(Cy3-labeled Donkey Anti-Goat IgG(H+L))为进口分装,用于免疫荧光染色。
Cy3是近年新开发的一种红色荧光探针。它比绝大部分其它的红色荧光探针更加明亮,更加不容易淬灭,而且背景更低。Cy3的吸收(激发)和发射峰参见下表。

Fluorophore Absorption Peak (nm) Emission Peak (nm)
Cy3 550 570

本抗体为用纯化的山羊IgG免疫驴,然后用亲和纯化柱对获得的抗血清进行纯化,并经过小鼠、大鼠、兔、牛和人等多种IgG反复吸附纯化的高品质二抗。对于经过吸附的这些物种的IgG几乎没有结合能力。
本Cy3标记驴抗山羊IgG(H+L)用于免疫荧光染色时的推荐稀释比例为1:500。实际实验操作过程中需根据抗原和抗体的具体情况适当调节荧光标记二抗的稀释比例,推荐的调节范围为1:200-1000。
本抗体如果用于常规的免疫染色,以每次检测需1毫升1:500稀释的荧光标记二抗计,至少可以检测25次。如果适当重复使用已经使用过的荧光标记二抗,至少可以多检测75-125次。
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
A0502 Cy3标记驴抗山羊IgG (H+L) 50μl
说明书 1份

保存条件:
-20℃避光保存,一年有效。
注意事项:
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 免疫荧光染色请参考相关实验步骤进行。起始稀释浓度按照产品简介中推荐的稀释比例进行稀释。
2. 如果希望重复使用稀释的荧光标记二抗,稀释的荧光标记二抗4℃保存。

Cy3标记驴抗山羊IgG(H+L)(A0502)
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使用本产品的文献:

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IdeZ Protease (IgG-specific, Powder)(免疫球蛋白特异性IdeZ蛋白酶)(P2528L)

IdeZ Protease (IgG-specific, Powder)
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
P2528S IdeZ Protease (IgG-specific, Powder) 1KU 528.00元
P2528M IdeZ Protease (IgG-specific, Powder) 5KU 1898.00元
P2528L IdeZ Protease (IgG-specific, Powder) 20KU 5998.00元

碧云天生产的IdeZ Protease (IgG-specific),即Immunoglobulin-degrading Enzyme from Streptococcus Equi Subspecies Zooepidemicus Protease,也称免疫球蛋白特异性IdeZ蛋白酶,是由碧云天自主研发的PerfectProtein™技术平台表达、纯化获得的一种免疫球蛋白IgG降解酶(Immunoglubulin G-degrading enzyme)。

IdeZ Protease具有极高的底物特异性,仅能识别人等特定种属和特定类型的IgG,并在抗体铰链区下方的特定位点进行酶切,使IgG水解为完整的F(ab’)2片段和Fc片段(参考图1)。IdeZ Protease作为工具酶主要应用于抗体类药物或抗体融合蛋白药物的结构表征分析,制备仅包含F(ab’)2片段的抗体或抗体的Fc片段,也可用于免疫沉淀后Western检测时去除重链对于目标蛋白检测的干扰等用途。

IdeZ Protease (IgG-specific, Powder)(免疫球蛋白特异性IdeZ蛋白酶)(P2528L)

图1. IdeZ Protease (IgG-specific)用于切割人IgG的效果示意图。IdeZ Protease酶切后,在非还原性和非变性条件下可以产生100kD的F(ab’)2和50kD的Fc;如果在变性和还原性条件下会产生2个25kD的Fd’片段,2个25kD的LC片段和2个25kD的Fc/2片段。酶切过程中或非酶切过程中都可使用PNGase F (P2318)对抗体进行去糖基化。

IdeZ Protease可有效切割人IgG1、IgG2、IgG3和IgG4,还可以切割兔、大鼠、猴、绵羊(Sheep)、人源化和嵌合的IgG以及Fc融合蛋白,如Enbrel [1]。但IdeZ Protease不能切割小鼠IgG1/IgG2b,猪、牛或山羊IgG,以及非IgG同种型免疫球蛋白,包括IgA、IgM、IgD和IgE。与IdeS Protease相比,IdeZ Protease对大鼠、小鼠IgG2a和IgG3的酶切活性显著提高。

碧云天生产的IdeZ Protease (IgG-specific)用于切割人、兔和驴IgG的效果参考图2。

IdeZ Protease (IgG-specific, Powder)(免疫球蛋白特异性IdeZ蛋白酶)(P2528L)

图2. 碧云天生产的IdeZ Protease (IgG-specific, Powder) (P2528)用于切割人、兔和驴IgG的效果图。在25µl反应体系(50mM Sodium Phosphate (pH7.5 @25℃))中,加入10μg人、兔和驴IgG (A7001/A7016/A7039),再加入2.5µl的10X Reaction Buffer以及图中指定量的本产品,然后用超纯水补至25µl,37℃孵育30分钟进行酶切。反应结束后,立即65℃孵育10分钟以终止反应。取出10μl反应产物,加入2μl SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(6X) (P0015F),进行12%聚丙烯酰胺凝胶电泳和考马斯亮蓝染色(P0017F BeyoBlue™考马斯亮蓝超快染色液),拍照观察结果。实验结果表明,本产品对人和兔IgG具有明显的切割效果,并且对于兔IgG有非常高的酶活性,但不能特异性识别与切割驴IgG。实际使用效果会因实验条件、实验材料等的不同而存在差异,图中效果仅供参考。

碧云天生产的IdeZ Protease (IgG-specific)用于切割大鼠IgG的效果参考图3。

IdeZ Protease (IgG-specific, Powder)(免疫球蛋白特异性IdeZ蛋白酶)(P2528L)

图3. 碧云天生产的IdeZ Protease (IgG-specific, Powder) (P2528)用于切割大鼠IgG的效果图。在25µl反应体系(50mM Sodium Phosphate (pH7.5 @25℃))中,加入10μg大鼠IgG (A7031),再加入2.5µl的10X Reaction Buffer以及图中指定量的本产品,然后用超纯水补至25µl,37℃孵育120分钟进行酶切。反应结束后,立即65℃孵育10分钟以终止反应。取出10μl反应产物,加入2μl SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(6X) (P0015F),进行12%聚丙烯酰胺凝胶电泳和考马斯亮蓝染色(P0017F BeyoBlue™考马斯亮蓝超快染色液),拍照观察结果。实验结果表明,本产品能识别并切割大鼠IgG,但酶切效率相对较低,需要增加使用酶量或延长反应时间才能达到充分切割的目的。实际使用效果会因实验条件、实验材料等的不同而存在差异,图中效果仅供参考。

本产品具有良好的酶切活性并含有His标签,在酶切完成后可以使用镍柱很容易地从酶切反应体系中分离去除含有His标签的IdeZ Protease。

分子量:约为33kDa。

用途:抗体类药物或抗体融合蛋白药物的结构表征分析,酶切产生制备仅包含F(ab’)2片段的抗体或抗体的Fc片段,也可以用于免疫沉淀后Western检测时去除重链对于目标蛋白检测的干扰等用途。

来源:纯化自携带编码IdeZ Protease基因的E.coli重组菌株。

酶活性:IdeZ Protease (IgG-specific) is a recombinant antibody specific protease that recognizes all human, rabbit, rat, sheep and monkey IgG subclasses, cleaving specifically at a single recognition site below the hinge region, to yield a homogenous pool of F(ab’)2 and Fc fragments. IdeZ Protease (IgG-specific) more effectively cleaves murine IgG2a than IdeS Protease.

活性定义:One unit is defined as the amount of enzyme required to cleave >95% of 1µg of human IgG, in 15 minutes at 37℃ in a total reaction volume of 10µl.

纯度:经SDS-PAGE检测,纯度大于95%;且不含除IdeZ Protease之外的其它种类蛋白酶,不含DNA内切酶和外切酶,不含RNA酶,不含磷酸酯酶。

酶储存液:Lyophilized from 50mM Sodium Phosphate, 150mM NaCl (pH6.6 @25℃)。

IdeZ Protease Dilution Buffer: 50mM Sodium Phosphate, 150mM NaCl (pH6.6 @25℃)。

10X Reaction Buffer: 500mM Sodium Phosphate (pH7.5 @25℃)。

失活或抑制:65℃孵育10分钟,可使IdeZ Protease失活。

包装清单:

产品编号 产品名称 包装
P2528S-1 IdeZ Protease (Powder) 1KU
P2528S-2 IdeZ Protease Dilution Buffer 0.2ml
P2528S-3 10X Reaction Buffer 0.2ml
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
P2528M-1 IdeZ Protease (Powder) 5KU
P2528M-2 IdeZ Protease Dilution Buffer 1ml
P2528M-3 10X Reaction Buffer 1ml
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
P2528L-1 IdeZ Protease (Powder) 5KUx4
P2528L-2 IdeZ Protease Dilution Buffer 4ml
P2528L-3 10X Reaction Buffer 4ml
说明书 1份

保存条件:

-20℃保存,两年有效。避免反复冻融,建议首次使用时适当分装后冻存使用。

注意事项:

IdeZ Protease使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。

IdeZ Protease对不同物种IgG的酶切效率存在较大差异,酶切特定物种的IgG时,建议适当摸索反应孵育时间和使用酶量。IdeZ Protease对小鼠IgG2a和IgG3的切割效率偏低,建议增加IdeZ Protease的使用量(建议5倍至10倍作为起点)或延长反应孵育时间(2小时至过夜)以实现对小鼠IgG2a和IgG3的充分酶切。

IdeZ Protease在中性pH或接近中性pH的缓冲体系中活性最强,且酶切体系中盐浓度不宜过高,推荐使用本产品提供的10X Reaction Buffer进行酶切反应。在使用pH6-8范围以外的缓冲液(例如醋酸盐缓冲液)时,孵育时间或酶量需要根据实际情况进行优化。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.首次打开管盖前,建议8,000-12,000×g离心约10秒,使附着在管盖或管壁上的蛋白聚集于管底。随后取IdeZ Protease (Powder),加入适量超纯水(ST876)配制成终浓度为10U/μl的工作液,按照20μl/管分装到1.5ml的离心管中,-20℃保存,以避免反复冻融影响酶活。
2.室温解冻IdeZ Protease,并参考下表在冰浴中配制反应体系(以25μl体系为例)。

Reagent Volume
10X Reaction Buffer 2.5µl
Ultrapure water (16.5-x) μl
Substrate (IgG) xμl (up to 10μg)
IdeZ Protease (10U/μl) 1μl (10units)
Total Volume 25µl

注1:建议最后添加IdeZ Protease。
注2:酶切不同物种的IgG,建议适当摸索最佳孵育时间和酶浓度。对于小鼠IgG2a和IgG3的酶切,建议增加酶量(建议5倍至10倍作为起点)或延长反应孵育时间(2小时至过夜)以实现充分酶切。
注3:如需减少酶量,建议使用本产品提供的IdeZ Protease Dilution Buffer对IdeZ Protease进行稀释,稀释过程中请勿使用Vortex剧烈振荡,以免蛋白变性而失活。
注4:在使用pH6-8范围以外的缓冲液(例如醋酸盐缓冲液)时,孵育时间和酶量需要根据实际情况进行优化。
3.用移液器轻轻吹打混匀或轻微Vortex混匀,随后低速离心以使粘附在管壁上的液体聚集于管底。
4.反应条件:37℃孵育30-60分钟。
5.终止反应:65℃孵育10分钟。
6.将反应后的产物进行变性或非变性PAGE凝胶电泳,考马斯亮蓝染色后拍照观察并分析酶切效果。
7.其它用途请自行参考IdeZ Protease的相关文献资料进行。
常见问题:
1.与IdeS Protease相比,IdeZ Protease的优势是什么?
IdeZ Protease与IdeS Protease具有相同的特异性,两者都是在IgG铰链区域下方完全相同的单个位点进行切割。但IdeZ Protease的酶切效率高于IdeS Protease,能够更有效地切割小鼠IgG2a。因此,IdeZ Protease比IdeS Protease更通用。
2.IdeZ Protease在磷酸盐缓冲液(PBS)中具有活性吗?
是的,IdeZ Protease在磷酸盐缓冲液(PBS)中具有活性。IdeZ Protease能够在pH范围为6-9的缓冲体系中发挥酶切活性,但是在pH5.5以下,其活性显著降低。推荐使用本产品提供的10X Reaction Buffer进行酶切反应。
3.IgG经IdeZ Protease酶切后,能否使用Protein A磁珠或Protein A Agarose纯化富集Fab和Fc片段?
可以。在用IdeZ Protease切割后,可使用protein A磁珠或Protein A Agarose富集Fc和Fab片段。Fc片段会与磁珠或Agarose结合,Fab片段仍保留在上清中。注明仅和Fc片段结合的Protein G磁珠或Protein G Agarose,也可用于分离Fc和Fab片段。
4.IdeZ Protease能否切割除人以外其他物种的IgGs?
IdeZ Protease可有效切割人、人源化、嵌合、绵羊、兔、大鼠和猴IgG;延长孵育时间也可切割小鼠IgG2a和IgG3;还可以切割许多Fc融合蛋白以及抗体药物偶联物(ADC)。但IdeZ Protease不可用于切割山羊、牛、猪IgG,以及小鼠IgG1或IgG2b。
5.IdeZ Protease能否切割除IgG以外的其它类型Ig?
不能,IdeZ Protease仅能有效切割IgG,对于IgA、IgD、IgE或IgM没有切割活性。
6.IdeZ Protease对IgG的特异性切割位点是什么?
IdeZ Protease对人和小鼠的特异性识别与切割位点如下表所示:

Subclass Hinge/CH2 sequence IdeZ Activity
Human IgG1 CPPCPAPELLG^GPSVF + + +
Human IgG2 CPPCPAPP_VA^GPSVF + + +
Human IgG3 CPRCPAPELLG^GPSVF + + +
Human IgG4 AHHAQAPEFLG^GPSVF + + +
Mouse IgG1 PCICTVPEV_SSVF
Mouse IgG2a CPPCAAPNLLG^GPSVF + + +
Mouse IgG2b CHKCPAPNLEGGPSVF
Mouse IgG3 GSSCPAGNILG^GPSVF + + +

7.在同一反应体系中,PNGase F能否和IdeZ Protease一起使用,以便对抗体的Fc部分进行去糖基化?
可以。PNGase F可以与IdeZ Protease在同一个步骤中一起使用,实现对IgG的酶切片段化,同时去除Fc的聚糖。推荐使用碧云天生产的PNGase F (P2318)对抗体进行去糖基化处理。
参考文献:
1.Lannergård J, Guss B. FEMS Microbiol Lett. 2006. 262(2):230-5.
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P2310M TEV Protease (GST/His-tag) 10000U
P2312S SUMO Protease 200U
P2312M SUMO Protease 1000U
P2312L SUMO Protease 5000U
P2313-500U 重组SENP2蛋白酶(His-tag) 500U
P2313-2KU 重组SENP2蛋白酶(His-tag) 2KU
P2313-10KU 重组SENP2蛋白酶(His-tag) 10KU
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IdeZ Protease (IgG-specific, Powder)(免疫球蛋白特异性IdeZ蛋白酶)(P2528L)
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碧云天生产的IdeZ Protease (IgG-specific),即Immunoglobulin-degrading Enzyme from Streptococcus Equi Subspecies Zooepidemicus Protease,也称免疫球蛋白特异性IdeZ蛋白酶,是由碧云天自主研发的PerfectProtein™技术平台表达、纯化获得的一种免疫球蛋白IgG降解酶(Immunoglubulin G-degrading enzyme)。

IdeZ Protease具有极高的底物特异性,仅能识别人等特定种属和特定类型的IgG,并在抗体铰链区下方的特定位点进行酶切,使IgG水解为完整的F(ab’)2片段和Fc片段(参考图1)。IdeZ Protease作为工具酶主要应用于抗体类药物或抗体融合蛋白药物的结构表征分析,制备仅包含F(ab’)2片段的抗体或抗体的Fc片段,也可用于免疫沉淀后Western检测时去除重链对于目标蛋白检测的干扰等用途。

IdeZ Protease (IgG-specific)(免疫球蛋白特异性IdeZ蛋白酶)(P2526L)

图1. IdeZ Protease (IgG-specific)用于切割人IgG的效果示意图。IdeZ Protease酶切后,在非还原性和非变性条件下可以产生100kD的F(ab’)2和50kD的Fc;如果在变性和还原性条件下会产生2个25kD的Fd’片段,2个25kD的LC片段和2个25kD的Fc/2片段。酶切过程中或非酶切过程中都可使用PNGase F (P2318)对抗体进行去糖基化。

IdeZ Protease可有效切割人IgG1、IgG2、IgG3和IgG4,还可以切割兔、大鼠、猴、绵羊(Sheep)、人源化和嵌合的IgG以及Fc融合蛋白,如Enbrel [1]。但IdeZ Protease不能切割小鼠IgG1/IgG2b,猪、牛或山羊IgG,以及非IgG同种型免疫球蛋白,包括IgA、IgM、IgD和IgE。与IdeS Protease相比,IdeZ Protease对大鼠、小鼠IgG2a和IgG3的酶切活性显著提高。

碧云天生产的IdeZ Protease (IgG-specific)用于切割人、兔和驴IgG的效果参考图2。

IdeZ Protease (IgG-specific)(免疫球蛋白特异性IdeZ蛋白酶)(P2526L)

图2. 碧云天生产的IdeZ Protease (IgG-specific) (P2526)用于切割人、兔和驴IgG的效果图。在25µl反应体系(50mM Sodium Phosphate (pH7.5 @25℃))中,加入10μg人、兔和驴IgG (A7001/A7016/A7039),再加入2.5µl的10X Reaction Buffer以及图中指定量的本产品,然后用超纯水补至25µl,37℃孵育30分钟进行酶切。反应结束后,立即65℃孵育10分钟以终止反应。取出10μl反应产物,加入2μl SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(6X) (P0015F),进行12%聚丙烯酰胺凝胶电泳和考马斯亮蓝染色(P0017F BeyoBlue™考马斯亮蓝超快染色液),拍照观察结果。实验结果表明,本产品对人和兔IgG具有明显的切割效果,并且对于兔IgG有非常高的酶活性,但不能特异性识别与切割驴IgG。实际使用效果会因实验条件、实验材料等的不同而存在差异,图中效果仅供参考。

碧云天生产的IdeZ Protease (IgG-specific)用于切割大鼠IgG的效果参考图3。

IdeZ Protease (IgG-specific)(免疫球蛋白特异性IdeZ蛋白酶)(P2526L)

图3. 碧云天生产的IdeZ Protease (IgG-specific) (P2526)用于切割大鼠IgG的效果图。在25µl反应体系(50mM Sodium Phosphate (pH7.5 @25℃))中,加入10μg大鼠IgG (A7031),再加入2.5µl的10X Reaction Buffer以及图中指定量的本产品,然后用超纯水补至25µl,37℃孵育120分钟进行酶切。反应结束后,立即65℃孵育10分钟以终止反应。取出10μl反应产物,加入2μl SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(6X) (P0015F),进行12%聚丙烯酰胺凝胶电泳和考马斯亮蓝染色(P0017F BeyoBlue™考马斯亮蓝超快染色液),拍照观察结果。实验结果表明,本产品能识别并切割大鼠IgG,但酶切效率相对较低,需要增加使用酶量或延长反应时间才能达到充分切割的目的。实际使用效果会因实验条件、实验材料等的不同而存在差异,图中效果仅供参考。

本产品具有良好的酶切活性并含有His标签,在酶切完成后可以使用镍柱很容易地从酶切反应体系中分离去除含有His标签的IdeZ Protease。

分子量:约为33kDa。

用途:抗体类药物或抗体融合蛋白药物的结构表征分析,酶切产生制备仅包含F(ab’)2片段的抗体或抗体的Fc片段,也可以用于免疫沉淀后Western检测时去除重链对于目标蛋白检测的干扰等用途。

来源:纯化自携带编码IdeZ Protease基因的E.coli重组菌株。

酶活性:IdeZ Protease (IgG-specific) is a recombinant antibody specific protease that recognizes all human, rabbit, rat, sheep and monkey IgG subclasses, cleaving specifically at a single recognition site below the hinge region, to yield a homogenous pool of F(ab’)2 and Fc fragments. IdeZ Protease (IgG-specific) more effectively cleaves murine IgG2a than IdeS Protease.

活性定义:One unit is defined as the amount of enzyme required to cleave >95% of 1µg of human IgG, in 15 minutes at 37℃ in a total reaction volume of 10µl.

纯度:经SDS-PAGE检测,纯度大于95%;且不含除IdeZ Protease之外的其它种类蛋白酶,不含DNA内切酶和外切酶,不含RNA酶,不含磷酸酯酶。

酶储存液:20mM Tris-HCl, 50mM NaCl, 1mM EDTA (pH7.5 @25℃)。

IdeZ Protease Dilution Buffer: 20mM Tris-HCl, 50mM NaCl, 1mM EDTA (pH7.5 @25℃)。

10X Reaction Buffer: 500mM Sodium Phosphate (pH7.5 @25℃)。

失活或抑制:65℃孵育10分钟,可使IdeZ Protease失活。

包装清单:

产品编号 产品名称 包装
P2526S-1 IdeZ Protease (10U/μl) 0.1ml
P2526S-2 IdeZ Protease Dilution Buffer 0.2ml
P2526S-3 10X Reaction Buffer 0.2ml
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
P2526M-1 IdeZ Protease (10U/μl) 0.5ml
P2526M-2 IdeZ Protease Dilution Buffer 1ml
P2526M-3 10X Reaction Buffer 1ml
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
P2526L-1 IdeZ Protease (10U/μl) 2ml
P2526L-2 IdeZ Protease Dilution Buffer 4ml
P2526L-3 10X Reaction Buffer 4ml
说明书 1份

保存条件:

-20℃保存,两年有效。避免反复冻融,建议首次使用时适当分装后冻存使用。

注意事项:

IdeZ Protease使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。

IdeZ Protease对不同物种IgG的酶切效率存在较大差异,酶切特定物种的IgG时,建议适当摸索反应孵育时间和使用酶量。IdeZ Protease对小鼠IgG2a和IgG3的切割效率偏低,建议增加IdeZ Protease的使用量(建议5倍至10倍作为起点)或延长反应孵育时间(2小时至过夜)以实现对小鼠IgG2a和IgG3的充分酶切。

IdeZ Protease在中性pH或接近中性pH的缓冲体系中活性最强,且酶切体系中盐浓度不宜过高,推荐使用本产品提供的10X Reaction Buffer进行酶切反应。在使用pH6-8范围以外的缓冲液(例如醋酸盐缓冲液)时,孵育时间或酶量需要根据实际情况进行优化。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.首次打开管盖前,建议8,000-12,000×g离心约10秒,使附着在管盖或管壁上的蛋白聚集于管底。随后取IdeZ Protease液体产品,按照20μl/管分装到1.5ml的离心管中,-20℃保存,以避免反复冻融影响酶活。
2.室温解冻IdeZ Protease,并参考下表在冰浴中配制反应体系(以25μl体系为例)。

Reagent Volume
10X Reaction Buffer 2.5µl
Ultrapure water (16.5-x) μl
Substrate (IgG) xμl (up to 10μg)
IdeZ Protease (10U/μl) 1μl (10 units)
Total Volume 25µl

注1:建议最后添加IdeZ Protease。
注2:酶切不同物种的IgG,建议适当摸索最佳孵育时间和酶浓度。对于小鼠IgG2a和IgG3的酶切,建议增加酶量(建议5倍至10倍作为起点)或延长反应孵育时间(2小时至过夜)以实现充分酶切。
注3:如需减少酶量,建议使用本产品提供的IdeZ Protease Dilution Buffer对IdeZ Protease进行稀释,稀释过程中请勿使用Vortex剧烈振荡,以免蛋白变性而失活。
注4:在使用pH6-8范围以外的缓冲液(例如醋酸盐缓冲液)时,孵育时间和酶量需要根据实际情况进行优化。
3.用移液器轻轻吹打混匀或轻微Vortex混匀,随后低速离心以使粘附在管壁上的液体聚集于管底。
4.反应条件:37℃孵育30-60分钟。
5.终止反应:65℃孵育10分钟。
6.将反应后的产物进行变性或非变性PAGE凝胶电泳,考马斯亮蓝染色后拍照观察并分析酶切效果。
7.其它用途请自行参考IdeZ Protease的相关文献资料进行。
常见问题:
1.与IdeS Protease相比,IdeZ Protease的优势是什么?
IdeZ Protease与IdeS Protease具有相同的特异性,两者都是在IgG铰链区域下方完全相同的单个位点进行切割。但IdeZ Protease的酶切效率高于IdeS Protease,能够更有效地切割小鼠IgG2a。因此,IdeZ Protease比IdeS Protease更通用。
2.IdeZ Protease在磷酸盐缓冲液(PBS)中具有活性吗?
是的,IdeZ Protease在磷酸盐缓冲液(PBS)中具有活性。IdeZ Protease能够在pH范围为6-9的缓冲体系中发挥酶切活性,但是在pH5.5以下,其活性显著降低。推荐使用本产品提供的10X Reaction Buffer进行酶切反应。
3.IgG经IdeZ Protease酶切后,能否使用Protein A磁珠或Protein A Agarose纯化富集Fab和Fc片段?
可以。在用IdeZ Protease切割后,可使用protein A磁珠或Protein A Agarose富集Fc和Fab片段。Fc片段会与磁珠或Agarose结合,Fab片段仍保留在上清中。注明仅和Fc片段结合的Protein G磁珠或Protein G Agarose,也可用于分离Fc和Fab片段。
4.IdeZ Protease能否切割除人以外其他物种的IgGs?
IdeZ Protease可有效切割人、人源化、嵌合、绵羊、兔、大鼠和猴IgG;延长孵育时间也可切割小鼠IgG2a和IgG3;还可以切割许多Fc融合蛋白以及抗体药物偶联物(ADC)。但IdeZ Protease不可用于切割山羊、牛、猪IgG,以及小鼠IgG1或IgG2b。
5.IdeZ Protease能否切割除IgG以外的其它类型Ig?
不能,IdeZ Protease仅能有效切割IgG,对于IgA、IgD、IgE或IgM没有切割活性。
6.IdeZ Protease对IgG的特异性切割位点是什么?
IdeZ Protease对人和小鼠的特异性识别与切割位点如下表所示:

Subclass Hinge/CH2 sequence IdeZ Activity
Human IgG1 CPPCPAPELLG^GPSVF + + +
Human IgG2 CPPCPAPP_VA^GPSVF + + +
Human IgG3 CPRCPAPELLG^GPSVF + + +
Human IgG4 AHHAQAPEFLG^GPSVF + + +
Mouse IgG1 PCICTVPEV_SSVF
Mouse IgG2a CPPCAAPNLLG^GPSVF + + +
Mouse IgG2b CHKCPAPNLEGGPSVF
Mouse IgG3 GSSCPAGNILG^GPSVF + + +

7.在同一反应体系中,PNGase F能否和IdeZ Protease一起使用,以便对抗体的Fc部分进行去糖基化?
可以。PNGase F可以与IdeZ Protease在同一个步骤中一起使用,实现对IgG的酶切片段化,同时去除Fc上的聚糖。推荐使用碧云天生产的PNGase F (P2318)对抗体进行去糖基化处理。
参考文献:
1.Lannergård J, Guss B. FEMS Microbiol Lett. 2006. 262(2):230-5.
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IdeZ Protease (IgG-specific)(免疫球蛋白特异性IdeZ蛋白酶)(P2526L)
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自身免疫性周围神经病

 

自身免疫性神经病具有许多临床症状,仅仅通过临床症状难以与其它周围神经疾病进行鉴别诊断。因此,自身免疫性周围

神经病(约占周围神经病13%)有很高的概率被误诊,从而接受错误的治疗。抗神经节苷脂抗体的测定不仅可以作为诊断自身免疫性神经病的依据,还可提供相关亚型的治疗信息:

 

 

AIDP :急性炎性脱鞘性多发周围神经病,GBS :格林巴利综合征,AMAN :急性运动性轴索型神经病,AMSAN : 急性运动感觉轴索神经病,CMV

Infection :巨细胞病毒感染,GBS with ataxia GBS伴有共济失调,GBS with ONS GBS伴有口咽颈部和肩部肌肉急性麻痹,GBS with

Ophthalmoplegia GBS伴有眼肌麻痹,MFS Miller-Fisher综合征,Bickerstaff encephalitis :脑干脑炎,CANOMAD CANOMAD 综合征,MMN :多

灶性运动神经病,CIDP:慢性炎性脱鞘性多发周围神经病,MN :运动神经病伴有丙种球蛋白。

 

 

GBS/AMAN发病的免疫机理

 

神经节苷脂GM1GD1a在郎飞结处分布非常丰富。而郎飞结处轴突膜中的电压门控钠离子通道非 常 密 集 。 人 体 产 生 的 抗GM1抗 体IgG型 和 抗GD1a抗体会与郎飞结处的轴膜结合,形成膜攻击复合物。这将导致钠通道聚集簇的消失、并引发髓鞘的脱失。终可能导致神经传导的失败,出现肌无力的症状。随后,可能会引起轴突损伤暴露。巨噬细胞则会从损伤部位进入到轴索内部,清除受伤的轴突。

 

抗神经节苷脂谱抗体(IgG/IgM)检测

酶链接物: 抗-IgG-HRP,抗-IgM-HRP

类 型: 包埋12种不同神经节苷脂抗原的免疫斑点膜条 (纯化人重组抗原)

反应时间: 3 h 10 min (4 °C,室温)

样本体积: 10 µl 血清

酶促底物: TMB

 

Genovis品牌代理

Genovis 品牌介绍

简要描述:

Genovis开发出一系列*的智能酶(SmartEnzymes),包括IgG 蛋白酶 (IgG Proteases,可以对IgG进行精确位置酶切)、IgG糖苷酶 (IgG Glycosidases,特异性地水解抗体Fc段上的糖链)、蛋白酶 (Protease,特异酶切蛋白C末端的精氨酸)、抗体偶联试剂盒 (Conjugation Kit,将偶联物精确地偶联在抗体Fc段特定位点,偶联后抗体不影响其

Genovis开发出一系列*的智能酶(SmartEnzymes),包括IgG 蛋白酶 (IgG Proteases,可以对IgG进行精确位置酶切)、IgG糖苷酶 (IgG Glycosidases,特异性地水解抗体Fc段上的糖链)、蛋白酶 (Protease,特异酶切蛋白C末端的精氨酸)、抗体偶联试剂盒 (Conjugation Kit,将偶联物精确地偶联在抗体Fc段特定位点,偶联后抗体不影响其生物学功能,目前可以提供Alexa Fluor®488、Biotin、DFO、反应性叠氮基4种标签)和聚糖特异性内切蛋白酶 (Enzymes for O-glycans,可以对糖蛋白进行聚糖特异性酶切)。

 

Genovis的产品包括:

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本产品具有良好的酶切活性并含有His标签,在酶切完成后可以使用镍柱很容易地从酶切反应体系中分离去除含有His标签的IdeZ Protease。

分子量:约为33kDa。

用途:抗体类药物或抗体融合蛋白药物的结构表征分析,酶切产生制备仅包含F(ab’)2片段的抗体或抗体的Fc片段,也可以用于免疫沉淀后Western检测时去除重链对于目标蛋白检测的干扰等用途。

来源:纯化自携带编码IdeZ Protease基因的E.coli重组菌株。

酶活性:IdeZ Protease (IgG-specific) is a recombinant antibody specific protease that recognizes all human, rabbit, rat, sheep and monkey IgG subclasses, cleaving specifically at a single recognition site below the hinge region, to yield a homogenous pool of F(ab’)2 and Fc fragments. IdeZ Protease (IgG-specific) more effectively cleaves murine IgG2a than IdeS Protease.

活性定义:One unit is defined as the amount of enzyme required to cleave >95% of 1µg of human IgG, in 15 minutes at 37℃ in a total reaction volume of 10µl.

纯度:经SDS-PAGE检测,纯度大于95%;且不含除IdeZ Protease之外的其它种类蛋白酶,不含DNA内切酶和外切酶,不含RNA酶,不含磷酸酯酶。

酶储存液:20mM Tris-HCl, 50mM NaCl, 1mM EDTA (pH7.5 @25℃)。

IdeZ Protease Dilution Buffer: 20mM Tris-HCl, 50mM NaCl, 1mM EDTA (pH7.5 @25℃)。

10X Reaction Buffer: 500mM Sodium Phosphate (pH7.5 @25℃)。

失活或抑制:65℃孵育10分钟,可使IdeZ Protease失活。

包装清单:

产品编号 产品名称 包装
P2526S-1 IdeZ Protease (10U/μl) 0.1ml
P2526S-2 IdeZ Protease Dilution Buffer 0.2ml
P2526S-3 10X Reaction Buffer 0.2ml
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
P2526M-1 IdeZ Protease (10U/μl) 0.5ml
P2526M-2 IdeZ Protease Dilution Buffer 1ml
P2526M-3 10X Reaction Buffer 1ml
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
P2526L-1 IdeZ Protease (10U/μl) 2ml
P2526L-2 IdeZ Protease Dilution Buffer 4ml
P2526L-3 10X Reaction Buffer 4ml
说明书 1份

保存条件:

-20℃保存,两年有效。避免反复冻融,建议首次使用时适当分装后冻存使用。

注意事项:

IdeZ Protease使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。

IdeZ Protease对不同物种IgG的酶切效率存在较大差异,酶切特定物种的IgG时,建议适当摸索反应孵育时间和使用酶量。IdeZ Protease对小鼠IgG2a和IgG3的切割效率偏低,建议增加IdeZ Protease的使用量(建议5倍至10倍作为起点)或延长反应孵育时间(2小时至过夜)以实现对小鼠IgG2a和IgG3的充分酶切。

IdeZ Protease在中性pH或接近中性pH的缓冲体系中活性最强,且酶切体系中盐浓度不宜过高,推荐使用本产品提供的10X Reaction Buffer进行酶切反应。在使用pH6-8范围以外的缓冲液(例如醋酸盐缓冲液)时,孵育时间或酶量需要根据实际情况进行优化。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.首次打开管盖前,建议8,000-12,000×g离心约10秒,使附着在管盖或管壁上的蛋白聚集于管底。随后取IdeZ Protease液体产品,按照20μl/管分装到1.5ml的离心管中,-20℃保存,以避免反复冻融影响酶活。
2.室温解冻IdeZ Protease,并参考下表在冰浴中配制反应体系(以25μl体系为例)。

Reagent Volume
10X Reaction Buffer 2.5µl
Ultrapure water (16.5-x) μl
Substrate (IgG) xμl (up to 10μg)
IdeZ Protease (10U/μl) 1μl (10 units)
Total Volume 25µl

注1:建议最后添加IdeZ Protease。
注2:酶切不同物种的IgG,建议适当摸索最佳孵育时间和酶浓度。对于小鼠IgG2a和IgG3的酶切,建议增加酶量(建议5倍至10倍作为起点)或延长反应孵育时间(2小时至过夜)以实现充分酶切。
注3:如需减少酶量,建议使用本产品提供的IdeZ Protease Dilution Buffer对IdeZ Protease进行稀释,稀释过程中请勿使用Vortex剧烈振荡,以免蛋白变性而失活。
注4:在使用pH6-8范围以外的缓冲液(例如醋酸盐缓冲液)时,孵育时间和酶量需要根据实际情况进行优化。
3.用移液器轻轻吹打混匀或轻微Vortex混匀,随后低速离心以使粘附在管壁上的液体聚集于管底。
4.反应条件:37℃孵育30-60分钟。
5.终止反应:65℃孵育10分钟。
6.将反应后的产物进行变性或非变性PAGE凝胶电泳,考马斯亮蓝染色后拍照观察并分析酶切效果。
7.其它用途请自行参考IdeZ Protease的相关文献资料进行。
常见问题:
1.与IdeS Protease相比,IdeZ Protease的优势是什么?
IdeZ Protease与IdeS Protease具有相同的特异性,两者都是在IgG铰链区域下方完全相同的单个位点进行切割。但IdeZ Protease的酶切效率高于IdeS Protease,能够更有效地切割小鼠IgG2a。因此,IdeZ Protease比IdeS Protease更通用。
2.IdeZ Protease在磷酸盐缓冲液(PBS)中具有活性吗?
是的,IdeZ Protease在磷酸盐缓冲液(PBS)中具有活性。IdeZ Protease能够在pH范围为6-9的缓冲体系中发挥酶切活性,但是在pH5.5以下,其活性显著降低。推荐使用本产品提供的10X Reaction Buffer进行酶切反应。
3.IgG经IdeZ Protease酶切后,能否使用Protein A磁珠或Protein A Agarose纯化富集Fab和Fc片段?
可以。在用IdeZ Protease切割后,可使用protein A磁珠或Protein A Agarose富集Fc和Fab片段。Fc片段会与磁珠或Agarose结合,Fab片段仍保留在上清中。注明仅和Fc片段结合的Protein G磁珠或Protein G Agarose,也可用于分离Fc和Fab片段。
4.IdeZ Protease能否切割除人以外其他物种的IgGs?
IdeZ Protease可有效切割人、人源化、嵌合、绵羊、兔、大鼠和猴IgG;延长孵育时间也可切割小鼠IgG2a和IgG3;还可以切割许多Fc融合蛋白以及抗体药物偶联物(ADC)。但IdeZ Protease不可用于切割山羊、牛、猪IgG,以及小鼠IgG1或IgG2b。
5.IdeZ Protease能否切割除IgG以外的其它类型Ig?
不能,IdeZ Protease仅能有效切割IgG,对于IgA、IgD、IgE或IgM没有切割活性。
6.IdeZ Protease对IgG的特异性切割位点是什么?
IdeZ Protease对人和小鼠的特异性识别与切割位点如下表所示:

Subclass Hinge/CH2 sequence IdeZ Activity
Human IgG1 CPPCPAPELLG^GPSVF + + +
Human IgG2 CPPCPAPP_VA^GPSVF + + +
Human IgG3 CPRCPAPELLG^GPSVF + + +
Human IgG4 AHHAQAPEFLG^GPSVF + + +
Mouse IgG1 PCICTVPEV_SSVF
Mouse IgG2a CPPCAAPNLLG^GPSVF + + +
Mouse IgG2b CHKCPAPNLEGGPSVF
Mouse IgG3 GSSCPAGNILG^GPSVF + + +

7.在同一反应体系中,PNGase F能否和IdeZ Protease一起使用,以便对抗体的Fc部分进行去糖基化?
可以。PNGase F可以与IdeZ Protease在同一个步骤中一起使用,实现对IgG的酶切片段化,同时去除Fc上的聚糖。推荐使用碧云天生产的PNGase F (P2318)对抗体进行去糖基化处理。
参考文献:
1.Lannergård J, Guss B. FEMS Microbiol Lett. 2006. 262(2):230-5.
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A0266 碱性磷酸酯酶标记驴抗山羊IgG(H+L) 0.5ml 469.00元

来源 用途 WB ELISA IHC
Donkey WB, ELISA, IHC 1:500-5000 1:500-5000 1:500-2000

WB, Western blot; IHC, Immunohistochemistry.
本碱性磷酸酯酶标记驴抗山羊IgG(H+L)(AP-labeled Donkey Anti-Goat IgG(H+L))为进口分装,用于Western、ELISA和IHC等的二抗。
碱性磷酸酯酶(Alkaline Phosphatase, AP/ALP/AKP/ALKP/ALPase/Alk Phos)常被称作碱性磷酸酶(EC 3.1.3.1),是一类水解酶,通过水解磷酸单酯将底物分子上的磷酸基团除去,并生成磷酸根离子和自由的羟基,其去磷酸化作用的底物包括蛋白质、核苷酸和生物碱等,并在碱性条件下最为有效。该酶是一组同功酶的统称。常见的小牛肠碱性磷酸酶(Calf Intestinal Alkaline Phosphatase, CIAP/CIP)被广泛用于二抗等的标记最终用于蛋白和核酸等的检测,例如在Western、ELISA、IHC、ICC、Northern、Southern等时,催化BCIP/NBT等显色试剂显色或催化适当的化学发光试剂产生化学发光。本产品标记的就是小牛肠碱性磷酸酶。
本碱性磷酸酯酶标记驴抗山羊IgG(H+L)用于WB、ELISA和IHC的推荐稀释比例参考上表,实际实验操作过程中需根据抗原和抗体的具体情况适当调节二抗的稀释比例。
本抗体为用纯化的山羊IgG免疫驴,然后用亲和纯化柱对获得的抗血清进行纯化,并经过人、兔、小鼠、大鼠、豚鼠、仓鼠、马、鸡血清吸附纯化的优质二抗。对人、兔、小鼠、大鼠、豚鼠、仓鼠、马、鸡血清蛋白几乎没有结合能力(Minimal Cross-reaction to Human, Rabbit, Mice, Rat, Guinea Pig, Syrian Hamster, Horse and Chicken Serum Proteins)。
本抗体如果用于常规的Western检测,以每次检测需10毫升1:1000稀释的二抗计,可以检测50次。
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产品编号 产品名称 包装
A0266 碱性磷酸酯酶标记驴抗山羊IgG (H+L) 0.5ml
说明书 1份

保存条件:
-20℃保存,一年有效。4℃保存,2个月有效。
注意事项:
BSA或脱脂奶粉可以和anti-Goat IgG产生轻微的交叉反应,因此BSA或脱脂奶粉作为封闭试剂或用于抗体的稀释时,会导致背景升高或二抗的效价有所下降。使用anti-Goat IgG时,总体上还是可以用BSA或脱脂奶粉作为封闭试剂或抗体的稀释试剂,但如果使用其它合适的试剂则效果更佳。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. Western、ELISA或IHC请参考相关实验步骤进行。起始稀释浓度按照产品简介中推荐的稀释比例进行稀释。

碱性磷酸酯酶标记驴抗山羊IgG(H+L)(A0266)
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