荧光二抗的选择——Dylight荧光与传统荧光标记的比较

顾名思义,荧光二抗通常指代的就是带荧光团标记的二抗,这样的二抗可以通过观察其在不同波长下荧光的强度来确定其二抗的含量。常见的荧光团包括FITC、Rhodamine、Texas Red、PE、Cy系列等。比如FITC即异硫氰酸荧光素,是目前应用zui广泛的荧光素。zui大吸收光波长为490~495nm,zui大发射光波长为 520~530nm,呈现明亮的黄绿色荧光。其优势是分子量较小为389.4,每一个抗体可标记几个FITC分子,而且人眼对黄绿色较为敏感,因此具有很好的对比度其缺点是淬灭快。罗丹明(Rhodamin)及其衍生物则是一群带黄红色荧光的荧光素,包括TRITC、Texas Red等。罗丹明及其衍生物与FITC的绿色荧光对比鲜明,可配合用于双重标记或对比染色。因其荧光淬灭慢,也可用于单独标记染色,但是其荧光强度偏弱,其中Rhodamin比Texas Red荧光又要偏弱。艾美捷能为客户提供全系列的各种*荧光二抗,包括Jackson的大包装粉末形式的荧光二抗,另外,也提供EarthOx的小包装液体形式荧光二抗,均具有很高的性价比。更多二抗产品,请查看:艾美捷二抗产品。

 

花箐素Cy是另一类荧光团,包括绿色的Cy2、黄红色的Cy3、红色的Cy5、近红外的Cy5.5等荧光染料,由于结构的稍微区别,其吸收和发射波长也有所区别。比如Cy2耦联基团激发波长为492nm,发光为波长510nm的绿色可见光。Cy2和FITC使用相同的滤波片,但是要避免使用含有磷酸化的苯二胺的封片剂,因为这种抗淬灭剂和Cy2反应,在染色片储存后会导致荧光微弱和扩散。Cy3和Cy5比其他的荧光团探针要更亮,更稳定,背景更弱。Cy3耦联基团激发光的zui大波长为550nm,zui强发射光为570nm。因为激发光和发射光波长很接近TRITC, 在荧光显微镜中,可使用和TRITC一样的滤波片。Cy5可以和很多其他的荧光基团一起用在多标记的实验中。由于它的zui大发射波长在670nm,Cy5很难用裸眼观察,而且不能用汞灯作理想的激发。通常观察Cy5时采用具有合适激发光和远红外检测器的共聚焦显微镜。下面我们看一组荧光二抗的比照图片:

 

     

 

我们知道,FITC的绿色荧光强度肉眼观察已经很亮了,但是从左上面的图可见,与Cy2相比还是偏弱,而Dylight 488则更胜*;右上图是不同荧光团在含有90%甘油的PBS里的荧光淬灭情况,由图可见。FITC的淬灭都很快,Cy2其次,而Dylight 488和Alexa 488都具有很好的光稳定性。下面再看另一组有关于红色荧光的数据:

 

 

由左上图可见,Dylight 594比Alexa 594和Texas Red的荧光强度都要强,Dylight 594的特异性也很好;同样,右上图显示Dylight 594的光稳定性也很优异。那么Dylight到底是一种什么样的荧光团?不管在结构以及功能和应用上,Dylight都是一种新的荧光团,与传统的荧光团相比,其分子量相对较小,因此一个大分子上可以标记更多的Dylight,同时单个的Dylight荧光团,其荧光强度更强,特异性更好;Dylight对光更稳定,这意味着其具有更高的抗淬灭性,不像FITC因为快速发生淬灭而无法及时捕捉到荧光图像。Dylight还有一个优势是种类很全,比如做三标的时候,除了常见的红色和绿色荧光,蓝色荧光应该是第三选择,Dylight 405就是蓝色的。Dylight 488是绿色的,可*替代FITC;*替代Cy3和Rhodamin的Dylight 549;替代Texas Red的Dylight 594;Dylight 633和Dylight 649则是更强的红色荧光;另外,Dylight还有适配Odyssey系统的近红外和远红外二抗,分别是Dylight 680和Dylight 800。

 

可能还需要考虑的一个问题是价格的问题,其实Dylight的荧光二抗与常规荧光二抗相比,具有更高的性价比,一般来说,Dylight的价格比常规二抗只高20%左右,但是Dylight的效价通常是常规荧光二抗的2-4倍左右,因此就zui终的性价比,Dylight更胜*。举例来说,EarthOx的FITC标记的山羊抗小鼠IgG二抗(货号为E031210),100μl是¥160;而相应的EarthOx的Dylight 488标记的山羊抗小鼠IgG二抗(货号为E032210),100μl报价是¥240,但是在具体使用时,比如免疫荧光实验,其推荐稀释比率分别为1:100和1:400,即100μl的FITC标记山羊抗小鼠IgG二抗(货号为E031210)zui终使用液是10ml,而100μl的Dylight 488标记山羊抗小鼠IgG二抗(货号为E032210)zui终使用液是40ml,可见,即使不考虑Dylight更高的荧光强度、更好的光学稳定性和特异性,但就价格来说,Dylight荧光二抗也具有更高的性价比。

 

作为多家的中国或区域代理,起福生物能为您提供全系列的Dylight*荧光二抗,包括Jackson、KPL的大包装粉末形式的Dylight荧光二抗,另外,也提供EarthOx的小包装液体形式Dylight荧光二抗,均具有很高的性价比。针对荧光标记二抗,有FITC、TRITC、Rhodamine、PE、Cy3/5、AMCA、Dylight等多种荧光标记二抗;按照检测物种分,有抗 人、大鼠、小鼠、猪、驴、绵羊、山羊、小鸡、马、兔、仓鼠、狗、牛,以及多种细菌类二抗;另外,还有IgG、IgA、IgM以及IgG(Fc)、 IgG(ab’)2等不同类型抗体。

Jackson公司Dylight抗体的应用实例:DyLight 594

 

DyLightTM 594
DyLight594标记的抗体荧光亮度明显强于Alexa 594标记抗体。相比较Texas Red而言,不仅更亮,而且具有更好的水溶性(图12)。另外,ProLong Gold 封片的细胞经DyLight 594标记显色,耐光性强于Texas Red,与Alexa 594相当(图13左)。Vectashield封片的细胞用DyLight 594Alexa 594标记,耐光性弱于Texas Red(图13中)。然而含N-propyl gallatePBS-90%甘油封片的细胞DyLight 594标记抗体,耐光性稍弱于其他标记抗体(图13右)。
12. HEp-2细胞使用ANA一抗(BIO-RAD)与亮度相当的二抗标记.荧光显微镜下观察ProLong Gold (Invitrogen)封片的细胞。Nikon LABOPHOTNikon 荧光显微镜连接D-70 DSLR 摄像机,100×曝光拍摄的图片。图中AlexaDyLight标记的细胞1s曝光所拍,Texas Red标记的细胞2s曝光所拍。其他封片剂处理的细胞获得类似的结果。
13.以时间为横坐标,初始荧光强度的百分比为纵坐标绘制的图谱,HEp-2细胞以ANABio-Rad)和各种山羊抗人IgGH+L)的二抗标记。细胞分别用ProLong Gold(左)、Vectashield(中)、含N-propyl gallate PBS-90%甘油封片(右)
JIR公司DyLight 594标记的二抗明显亮于其它红色染料标记的抗体。与 DyLight 549Cy3TRITC标记物相比,它与绿色标记染料表现出更大的色差。在可见光谱的深红色
区域内,DyLight 594标记二抗是所有免疫荧光实验中的选择。

 

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Jackson公司Dylight抗体的应用实例:DyLight 649

 

DyLightTM 649
DyLight 649标记的二抗亮于Cy5 (14) Alexa 647标记15),背景可能会低于Alexa 647标记(图15)。
 
14. 人空肠相邻区间用PGP一抗连接,之后分别用DyLight 649二抗(红色,左图)和Cy5二抗(红色,右图)标记。可以看到DyLight 649标记的红色荧光更密集。
 
15. 使用FACSCalibur流式细胞仪(Becton Dickinson),以抗-CD3和各种荧光素连接二抗标记的人外周血淋巴细胞图谱。DyLight 649 (绿色APC (黄色Cy5 (蓝色标记的二抗都来自JIR公司。Alexa Fluor 647购自Molecular Probes, Inc.。箭头所指处显示Alexa Fluor 647在这个实验中有轻微的背景。
 
 
 
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在适当的波段范围内,JIR公司DyLight 649APC标记的二抗是流式细胞分析的选择。除此之外,共聚焦显微镜做多重标记检测时DyLight 649标记的二抗是远红外线发射光谱范围内的选择。

405标记链霉亲和素|DyLight 405 Streptavidin

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已发表文献

链霉亲和素是一种来源于阿维丁链霉菌(streptomyces avidinii)的生物素结合蛋白,其非特异性结合远比亲和素低,且与蛋清亲和素在中性pH值具有净正电荷和包含大约7%的碳水化合物相比,链霉亲和素蛋白具有在中性pH值几乎没有净电荷,不含有碳水化合物等更有利的化学性质,所以它被广泛用来作为抗生物素蛋白的替代品。

本品是DyLight 405™标记的链霉亲和素,该荧光基团Amax(最大激发波长)为400 nm,Emax(最大发射波长)为420 nm。建议工作液浓度:0.5-2 µg/mL(For most applications)。

产品性质

链霉亲和素浓度(Streptavidin Concentration)

缓冲液(Buffer)

0.9 mg/mL

0.005 M磷酸钠,0.125 M氯化钠,pH 7.6

稳定剂(Stabilizer)

7.5 mg/mL BSA(无IgG,蛋白酶)

荧光基团(Fluorophore)

DyLight 405™,Ex/Em=400 nm/420 nm

防腐剂(Preservative)

0.025% 叠氮化钠

运输与保存方法

冰袋运输。-20℃保存,有效期1年。避免反复冻融。

注意事项

1)本品含叠氮化钠,对人体有害,请注意适当防护。

2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

3)本产品仅作科研用途!

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本品是DyLight 405™标记的链霉亲和素,该荧光基团Amax(最大激发波长)为400 nm,Emax(最大发射波长)为420 nm。建议工作液浓度:0.5-2 µg/mL(For most applications)。

产品性质

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0.025% 叠氮化钠

运输与保存方法

冰袋运输。-20℃保存,有效期1年。避免反复冻融。

注意事项

1)本品含叠氮化钠,对人体有害,请注意适当防护。

2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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Dylight 405标记山羊抗兔IgG(H+L)(A0605)

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A0605 Dylight 405标记山羊抗兔IgG(H+L) 100μl 492.00元

本DyLight 405标记山羊抗兔IgG(H+L)(DyLight 405-labeled Goat Anti-Rabbit IgG(H+L))为进口分装,用于免疫荧光染色。
DyLight 405是一种常用的非常明亮的蓝色荧光探针。它比绝大部分常用的蓝色荧光探针更加明亮,更加不容易淬灭,而且背景更低。由于很多荧光检测仪器缺少400nm左右的激发波长,DyLight 405常局限于激光共聚焦显微镜下观察。DyLight 405的吸收(激发)和发射峰参见下表。

Fluorophore Absorption Peak (nm) Emission Peak (nm)
DyLight 405 400 421

本抗体为用纯化的兔IgG免疫山羊,然后用亲和纯化柱对获得的抗血清进行纯化,并经过人IgG、小鼠IgG和大鼠IgG吸附纯化的优质二抗。对人IgG、小鼠IgG和大鼠IgG几乎没有结合能力。特别适合于对于二抗种属特异性要求比较高的荧光染色实验。
本DyLight 405标记山羊抗兔IgG(H+L)用于免疫荧光染色时的推荐稀释比例为1:200。实际实验操作过程中需根据抗原和抗体的具体情况适当调节荧光标记二抗的稀释比例,推荐的调节范围为1:50-200。
本抗体如果用于常规的免疫染色,以每次检测需1毫升1:200稀释的荧光标记二抗计,至少可以检测20次。如果适当重复使用已经使用过的荧光标记二抗,至少可以多检测60-100次。
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
A0605 DyLight 405标记山羊抗兔IgG (H+L) 100μl
说明书 1份

保存条件:
-20℃避光保存,一年有效。
注意事项:
蓝色荧光标记二抗的检测效果,比常见的红色和绿色荧光标记二抗的检测效果差很多,如果不是用于三种或四种荧光的共标记,不推荐使用。三种荧光的共标记,如果检测条件许可,优先推荐使用远红外荧光标记二抗,例如碧云天生产的Alexa Fluor 647标记山羊抗小鼠IgG(H+L) (A0473)和Alexa Fluor 647标记山羊抗兔IgG(H+L) (A0468)。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 免疫荧光染色请参考相关实验步骤进行。起始稀释浓度按照产品简介中推荐的稀释比例进行稀释。
2. 如果希望重复使用稀释的荧光标记二抗,稀释的荧光标记二抗4℃保存。

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1. Yan Zeng, Shuai Xu, Yanli Wei, Xuegang Zhang, Qian Wang, Yane Jia, Wanbing Wang, Lu Han, Zhaoshan Chen, Zhengxiang Wang, Bo Zhang, Hualan Chen, Cao-Qi Lei, Qiyun Zhu
The PB1 protein of influenza A virus inhibits the innate immune response by targeting MAVS for NBR1-mediated selective autophagic degradation
PLoS Pathog. 2021 Feb 12;17(2):e1009300.;doi: 10.1371/journal.ppat.1009300. (IF 6.218)

2. Hu J, Mo Y, Wang X, Gu M, Hu Z, Zhong L, Wu Q, Hao X, Hu S, Liu W, Liu H, Liu X, Liu X.
PA-X decreases the pathogenicity of highly pathogenic H5N1 influenza A virus in avian species by inhibiting virus replication and host response.
J Virol. 2015 Apr;89(8):4126-42. (IF 4.501)

3. Shen-Bao Zhao, Neta Dean, Xiao-Dong Gao, Morihisa Fujita
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Cell Struct Funct. 2020 Jun 13;45(1):77-92.;doi: 10.1247/csf.20012. (IF 2.429)

Dylight 405标记山羊抗小鼠IgG(H+L)(A0609)

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A0609 Dylight 405标记山羊抗小鼠IgG(H+L) 100μl 490.00元

本DyLight 405标记山羊抗小鼠IgG(H+L)(DyLight 405-labeled Goat Anti-Mouse IgG(H+L))为进口分装,用于免疫荧光染色。
DyLight 405是一种常用的非常明亮的蓝色荧光探针。它比绝大部分常用的蓝色荧光探针更加明亮,更加不容易淬灭,而且背景更低。由于很多荧光检测仪器缺少400nm左右的激发波长,DyLight 405常局限于激光共聚焦显微镜下观察。DyLight 405的吸收(激发)和发射峰参见下表。

Fluorophore Absorption Peak (nm) Emission Peak (nm)
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本抗体为用纯化的小鼠IgG免疫山羊,然后用亲和纯化柱对获得的抗血清进行纯化,并经过人IgG、牛IgG(bovine IgG)、马IgG(horse IgG)、兔IgG、猪IgG(swine IgG)吸附纯化的优质二抗。对人IgG、牛IgG(bovine IgG)、马IgG(horse IgG)、兔IgG、猪IgG(swine IgG)几乎没有结合能力。特别适合于对于二抗种属特异性要求比较高的荧光染色实验。
本DyLight 405标记山羊抗小鼠IgG(H+L)用于免疫荧光染色时的推荐稀释比例为1:200。实际实验操作过程中需根据抗原和抗体的具体情况适当调节荧光标记二抗的稀释比例,推荐的调节范围为1:50-200。
本抗体如果用于常规的免疫染色,以每次检测需1毫升1:200稀释的荧光标记二抗计,至少可以检测20次。如果适当重复使用已经使用过的荧光标记二抗,至少可以多检测60-100次。
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1. Yan Zeng, Shuai Xu, Yanli Wei, Xuegang Zhang, Qian Wang, Yane Jia, Wanbing Wang, Lu Han, Zhaoshan Chen, Zhengxiang Wang, Bo Zhang, Hualan Chen, Cao-Qi Lei, Qiyun Zhu
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