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PureBind 血液基因组 DNA 分离试剂盒说明书

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oceannanotech PureBind 血液基因组 DNA 分离试剂盒说明书

PureBind Blood gDNA Isolation Kit 专门设计用于从全血中以高产量和纯度分离基因组 DNA。特殊包被的磁珠可实现高 DNA 结合能力并将来自各种样品的污染降至低。该试剂盒具有适用于不同检测形式（试管、96 孔形式、自动化）以及各种血样体积（10 μL-10 mL）的灵活性。从全血中获得的 DNA 纯度高（A260/280 ≥ 1.8，A260/230 ≥ 1.4），适用于各种下游应用。该套件与各种商业血液稳定剂管和抗凝剂兼容。

 

oceannanotech B0711

 
 

高分子量基因组 DNA：使用 Ocean NanoTech 的 Blood gDNA 试剂盒从全血中分离出高分子量的高分子量基因组 DNA。3 x 350 µL 全血/供体通过 Ocean NanoTech 试剂盒进行处理，并以 100 µL 洗脱。500 纳克纯化的 DNA 在 1% 琼脂糖凝胶/TAE 上与 GeneRuler™1kb Plus 阶梯（Thermo Scientific）一起电泳；最上面的 DNA 梯带是 20,000 bp。

来自全血的高纯度基因组 DNA，不含 RNase：使用 Ocean NanoTech 的 Blood gDNA 试剂盒从全血中分离的高纯度基因组 DNA。3 x 350 µL 全血/供体通过 Ocean NanoTech 试剂盒进行处理，并以 100 µL 洗脱。通过分光光度法分析洗脱的DNA以确定纯度比和DNA浓度。

来自全血的无抑制剂基因组 DNA：分离的基因组 DNA 的 SPUD 分析表明不存在共纯化的抑制剂。3 x 350 µL 全血/供体通过 Ocean NanoTech 试剂盒进行处理，并以 100 µL 洗脱。如 Analytical Biochemistry, 2006 Apr 15;351(2):308-10 中详述的，对 100 ng 洗脱的 DNA 进行了抑制 SPUD 扩增子扩增的能力分析。观察到的 Cq 与分离的 DNA 模板相对于 SPUD 阳性对照的均匀性表明分离的 DNA 不含 PCR/qPCR 抑制剂。

 

基因组靶标的成功qPCR扩增：对分离的基因组DNA的qPCR分析表明，基因组靶标的成功扩增和检测。3 x 350 µL 全血/供体通过 Ocean NanoTech 试剂盒进行处理，并以 100 µL 洗脱。使用 ABI TaqMan™ β-肌动蛋白 qPCR 测定法测定标称 20 ng 洗脱的 DNA（基于 Nanodrop 分析）。标准曲线跨越了 100 – 0.032 ng（27,600 – 8.8 个基因组当量）的人类 DNA。测定效率计算为 102%。

分离的基因组 DNA 的酶促修饰：使用 Ocean NanoTech 的 Blood gDNA 试剂盒对从全血中分离的基因组 DNA 进行限制性消化。3 x 350 µL 全血/供体通过 Ocean NanoTech 试剂盒进行处理，并以 100 µL 洗脱。1 µg 纯化的 DNA 在 37°C 下用 BamHI、BglII 和 BamHI+BglII 消化 30 分钟。此后限制性产物在1％琼脂糖凝胶/TAE上电泳1小时。

 

从分离的基因组和线粒体 DNA 进行长距离 PCR ：使用 Ocean NanoTech 的 Blood gDNA 试剂盒对从全血中分离的基因组 DNA 进行长距离 PCR。3 x 350 µL 全血/供体通过 Ocean NanoTech 试剂盒进行处理，并以 100 µL 洗脱。使用 TaKaRa LA Taq® 和 (A) 7.3 kb 人葡糖脑苷脂酶片段和 (B) 8.2 kb 线粒体 NADH-泛醌氧化还原酶链 1 (MT-ND1) 片段的引物，通过 PCR 扩增 20 ng 纯化 DNA。 PCR 产物在 1% 琼脂糖凝胶/TAE 上电泳 1 小时。这些高分子量目标的成功 PCR 扩增突出了分离 DNA 的结构完整性和我们的试剂盒分离线粒体 DNA 的能力。

与商业血液稳定剂管的兼容性： 血液基因组 DNA 试剂盒可用于从商业血液稳定剂管中分离不含抑制剂的 gDNA。将捐献者血液抽取到 3 种市售血液稳定产品中，并在室温下储存 4 天。使用标准方案通过 Ocean NanoTech 试剂盒处理来自试管的 350 µL 等分试样。作为稳定过程的一部分，DNA/RNA Shield™ 管也没有使用 Ocean NanoTech 裂解缓冲液进行处理，因为 DNA/RNA Shield™ 裂解细胞。如分析生物化学，2006 年 4 月 15 日；351(2)：308-10 中详述的，测定了从每次分离中洗脱的 100 ng DNA 抑制 SPUD 扩增子扩增的能力。观察到的 Cq 与分离的 DNA 模板相对于 SPUD 阳性对照的均匀性表明分离的 DNA 不含 PCR/qPCR 抑制剂。

性能与其他商用产品的对比： Ocean NanoTech的Blood gDNA试剂盒大大优于其他基于磁珠的血液gDNA分离试剂盒。来自同一供体的血液被吸入 K2-EDTA 管中，并使用试剂盒所需的输入血量通过每个试剂盒处理。分离的 DNA 以 100 µL 洗脱，并通过 NanoDrop 分析和 Qubit 分析评估纯度。计算每个试剂盒的总产量（基于 Qubit 测量）和作为血液输入量函数的产量。所有值均来自三个生物学重复。

 

    特征：

    • 无RNA污染。
    • 来自全血的高分子量 gDNA，不需要 RBC 和 WBC 的差异裂解。
    • 分离 > 9 微克 DNA/350μL 输入血样。
    • 与商业稳定剂管（例如 PAXgene Blood DNA 管、BioMatrica DNAgard Blood）兼容。
    • 自动化友好的 KingFisher（Duo、Duo Primer 和 Flex）脚本可用。

目录＃ 产品 单元尺寸 单价
B0711-096 PureBind血液基因组DNA分离试剂盒 1微米 199.00 美元
B0711-384 PureBind血液基因组DNA分离试剂盒 10纳米 $ 677.00
产品描述 PureBind血液基因组DNA分离试剂盒
应用 从全血中分离核酸

 

 

支原体基因组DNA提取试剂盒（离心柱法）说明书

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支原体基因组DNA提取试剂盒（离心柱法）说明书

产品详情

货号

规格

价格

78EA10019-50T

50T

￥1200.00

产品描述

《支原体基因组 DNA 提取试剂盒》（离心柱法）（Mycoplasma Genomic DNA Extraction Kit with Columns）的操作方法和试剂配方已经针对支原体的特点做了优化，专门用于从体外培养的细胞、细胞上 清、血清、血浆、全血、生物制品等样品中提取支原体基因组 DNA。提取的支原体基因组 DNA 可用于《一 步法恒温支原体检测试剂盒》、《PCR 法支原体检测试剂盒》和《探针法支原体检测试剂盒》。

支原体基因组 DNA 的提取有两个作用：

（1）可以去除所有可能抑制 PCR 扩增的成分或者干扰《一步法 恒温支原体检测试剂盒》显色的成分，保证后续 PCR 扩增的正常进行或者《一步法恒温支原体检测试剂盒》 的显色不被干扰；

（2）具有浓缩支原体 DNA 的作用，可以提高相对检测灵敏度 10-100 倍。

产品组分

蛋白酶 K 溶液：Proteinase K（20 mg/mL） 1 mL

溶液 GR：Buffer GR 15 mL

溶液 GL：Buffer GL 15 mL

清洗液 GW1：Buffer GW1(Concentrate) 13 mL

清洗液 GW2：Buffer GW2(Concentrate) 15 mL

洗脱液 EB：Elution Buffer EB 15 mL

吸附柱：Spin Columns DM 50 个

收集管：Collection Tube 50 个

使用方法

使用方法

1.实验前准备及重要注意事项

1) Buffer GW1 和 Buffer GW2 的配制：第一次使用前，应按照试剂瓶标签的说明先在 Buffer GW1 和 Buffer GW2 中加入无水乙醇，并在试剂瓶标签中做好标记。

2) 使用前请检查 Buffer GL 是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将 Buffer GL 于 56˚C 水 浴孵育重新溶解。

2. 样品处理：本试剂盒优选体外培养的细胞上清（贴壁细胞直接取细胞培养上清、悬浮培养细胞取低速 离心后的离心上清）、血清、血浆、溶液型生物制品作为提取支原体基因组 DNA 的样品。如果是粉末 型样品，需用水溶解后，再进行后续操作。

注 1：体外培养的贴壁细胞培养上清或悬浮细胞，经 1200 rpm（约 150 g）低速离心 5 分钟后（切 记：此步骤离心力不能太大，否则支原体会被离心去除了！），取离心后上清进行检测。

注 2：如果初始样品是加了抗凝剂的全血，经 1200 rpm（约 150 g）低速离心 10 分钟后（切记： 此步骤离心力不能太大，否则支原体会被离心去除了！），取上层血浆进行检测。

注 3：如果初始样品是未加抗凝剂的全血，待血液凝固后，取血清进行检测。

3. 取上述细胞上清、血清、血浆、生物制品等样品 200 μL，用移液枪吹吸均匀后，进行后续操作。

注 1：当样品量小于 200 μL 时，加入 Buffer GR 补足至 200 μl，再进行下一步实验。

注 2：如果预期待测样品支原体含量较少（比如长期低温保存的血清、血浆、胰酶、生物制品等）， 可以取上述样品 1 mL，加入 1.5 mL 离心管内，13000 rpm（约 16000 g）高速离心 5 分钟。吸走 离心后的上清 800 μL，剩余 200 μL 用移液枪吹吸均匀后，进行后续操作。此步骤起浓缩支原体的 作用，从而提高支原体检测的相对灵敏度。如果需要，上述样品的体积可以进一步放大，经过多 次高速离心后，剩余 200 μL 用于后续操作（比如，如果初始体积是 5 mL，经 5 次高速离心，取剩 余的 200 μL 进行后续操作，最终用 50 μL 洗脱液进行洗脱，则支原体 DNA 大约浓缩了 100 倍，支 原体检测的相对灵敏度也大约提高了 100 倍。）

4. 向以上溶液中加入 20 μL Proteinase K（20 mg/mL）溶液，混匀。

5. 加入 200 μL Buffer GL（如果室温较低，使用前请检查 Buffer GL 是否出现结晶或者沉淀，如有结晶 或者沉淀，请将 Buffer GL 于 56˚C 水浴孵育重新溶解），用吸头充分吹吸均匀或用 Vortex 充分震荡。

注意：不要将 Proteinase K 和 Buffer GL 进行预混，否则 Proteinase K 可能失活。

6. 将离心管放置 56˚C 水浴，孵育 15 分钟。

注意：此步骤不能省略！

7. 加入 2 μL 支原体 qPCR 内参质粒 mycoIC2（注意：内参质粒 mycoIC2 请吹吸均匀后，再加入。内参质粒 mycoIC2 只在本公司《探针法支原体检测试剂盒》内含有，如果使用其他支原体检测方法，本步骤可以 跳过！）。

注 1：此步骤只有使用本公司《探针法支原体检测试剂盒》时，需要加入支原体 qPCR 内参质粒 mycoIC2。

注 2：加入的内参质粒 mycoIC2 用于监控支原体 DNA 的提取和后续支原体 qPCR 的扩增是否有效。

8. 加入 200 μL 无水乙醇，上下颠倒混匀数次。 l 注意：此处不能高速离心！如果需要（一般不需要离心），只能 1000 rpm（约 100 g）低速短暂 离心（20 Sec），使管壁和壁盖上的液体集中到管底。

9. 用 1 mL 吸头将所得溶液全部（含管壁和盖子上溶液）加入到已装入收集管的吸附柱(Spin Columns DM） 中。12,000 rpm 离心 1 分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

10.向吸附柱中加入 500 μL Buffer GW1（使用前检查是否加入无水乙醇!）,盖上盖子，将吸附柱快速颠倒 一次（目的：清洗管壁和盖子中的杂质），12,000 rpm 离心 1 分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱 重新放回收集管中。

11.向吸附柱中加入 500 μL Buffer GW2（使用前检查是否加入无水乙醇!），盖上盖子，将吸附柱快速颠 倒一次（目的：清洗管壁和盖子中的杂质），12,000 rpm 离心 1 分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附 柱重新放回收集管中。

12.再次清洗：向吸附柱中加入 600 μL Buffer GW2（使用前检查是否加入无水乙醇!），盖上盖子，将吸附柱快速颠倒一次（目的：清洗管壁和盖子中的杂质），12,000 rpm 离心 1 分钟，倒掉收集管中的废 液，将吸附柱重新放回收集管中。

13.继续 12,000 rpm 离心 2 分钟。离心后，在亮光下，仔细检查吸附柱内部吸附膜上方的塑料垫圈四周是 否有液体残留。如果发现吸附柱内部塑料垫圈四周有液体残留，可以将吸附柱放回收集管内，将有液 体残留的一侧放在离心力内侧，继续 12,000 rpm 离心 1 分钟。

14.离心后，经仔细检查，如果确认吸附柱内部塑料垫圈四周没有液体残留，则可以丢弃收集管，将吸附柱 置于一个新的 1.5 mL 离心管（自备）中，打开吸附柱盖子，置于 50-65℃的烘箱内放置至少 15 分钟， 以让吸附膜中的乙醇挥发干净（请务必放在 50-65℃的烘箱内放置！如果室温放置，不仅时间需要 延长，还不排除有些样品由于乙醇挥发不干净，影响后续 PCR 扩增效率，甚至失败）。

注意：打开吸附柱盖子，将吸附柱放在 50-65℃的烘箱内至少 15 分钟，此步骤非常关键！如果没 有烘箱，强烈建议购买一个。这一步的目的是将吸附膜中残余的乙醇去除，乙醇的残留会严 重影响后续的酶促反应（如：酶切、PCR 扩增等），甚至可能导致后续的 PCR 失败。

15.向吸附柱的中间部位悬空加入 50 μL Elution Buffer EB，室温放置 3 分钟，12,000 rpm 离心 1 分钟， 收集 DNA 溶液，-20℃保存。

运输及保存方法

该产品常温运输，室温保存（收货后，其中的 Proteinase K 放-20˚C 保存）。该条件下，至少 3 年内有 效。Proteinase K 溶液可以在室温保存 2-3 个月，长期保存需要放-20˚C。

zyagen 雄性猪基因组DNA​简介

发表于由

 

zyagen 雄性猪基因组DNA简介

Porcine Genomic DNA, Male

雄性猪基因组DNA

zyagen GP-160M

 

Porcine Genomic DNA, Male

 

0.1mg

 

 

产品描述

Procine, Male 对照基因组 DNA 是一种高纯度完整的高分子量 DNA。它是从单个供体的单个组织中提取的，并用无 DNase 的 RNase 处理以去除污染的 RNA。基因组 DNA 由 Nanodrop（一种分光光度计技术）精确测量并储存在 -80oC

应用：
PCR 扩增、Southern 印迹分析、基因组 DNA 甲基化、单核苷酸多态性 (SNP) 分析、基因表达分析研究和 DNA 文库构建

质量控制：
通过琼脂糖凝胶电泳和分光光度计检测基因组DNA的完整性和纯度，A260/280比值>1.8，β-肌动蛋白PCR扩增成功，EcoR1和/或Hind III酶消化DNA成功。

包装/运输：
基因组 DNA 通常以 0.5mg/ml 或 1mg/ml 的浓度在 TE 缓冲液中提供，并以蓝色运输过夜。

 

zyagen 牛基因组DNA说明书

发表于由

zyagen 牛基因组DNA说明书

Bovine Genomic DNA , Female

zyagen GB-110F

 

Bovine Genomic DNA , Female

  

0.1mg

产品描述

牛、雌性对照基因组 DNA 是一种高纯度完整的高分子量 DNA。它是从单个供体的单个组织中提取的，并用无 DNase 的 RNase 处理以去除污染的 RNA。基因组 DNA 由 Nanodrop（一种分光光度计技术）精确测量并储存在 -80oC

应用：
PCR 扩增、Southern 印迹分析、基因组 DNA 甲基化、单核苷酸多态性 (SNP) 分析、基因表达分析研究和 DNA 文库构建

质量控制：
通过琼脂糖凝胶电泳和分光光度计检测基因组DNA的完整性和纯度，A260/280比值>1.8，β-肌动蛋白PCR扩增成功，EcoR1和/或Hind III酶消化DNA成功。

包装/运输：
基因组 DNA 通常以 0.5mg/ml 或 1mg/ml 的浓度在 TE 缓冲液中提供，并以蓝色运输过夜。

 

zyagen 绵羊基因组 DNA GS-190F说明书

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zyagen 绵羊基因组 DNA GS-190F说明书

绵羊基因组 DNA，雌性

Sheep Genomic DNA, Female

GS-190F

 

Sheep Genomic DNA, Female

0.1mg

产品描述

绵羊、雌性对照基因组 DNA 是一种高纯度完整的高分子量 DNA。它是从单个供体的单个组织中提取的，并用无 DNase 的 RNase 处理以去除污染的 RNA。基因组 DNA 由 Nanodrop（一种分光光度计技术）精确测量并储存在 -80oC

应用：
PCR 扩增、Southern 印迹分析、基因组 DNA 甲基化、单核苷酸多态性 (SNP) 分析、基因表达分析研究和 DNA 文库构建

质量控制：
通过琼脂糖凝胶电泳和分光光度计检测基因组DNA的完整性和纯度，A260/280比值>1.8，β-肌动蛋白PCR扩增成功，EcoR1和/或Hind III酶消化DNA成功。

包装/运输：
基因组 DNA 通常以 0.5mg/ml 或 1mg/ml 的浓度在 TE 缓冲液中提供，并以蓝色运输过夜。

 

bio-helix 基因组DNA分离双试剂盒

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bio-helix 基因组DNA分离双试剂盒

 

PureDireX – PDC02-0100 / NA015-0100

基因组DNA分离双试剂盒（基于柱）

尺寸：100 rxns

 

注意：PureDireX /纯化试剂盒/提取试剂盒/ NA015-0100 /基因组DNA 

 

PureDireX基因组DNA分离双试剂盒（基于柱）

DUAL基因组DNA分离试剂盒（血液/培养细胞/真菌）结合了试剂系统和离心柱系统。该试剂盒专门用于从全血，冷冻血液，血沉棕黄层，培养的动物/细菌细胞和真菌中分离基因组DNA。这种*的试剂系统可确保样品中的总DNA具有高产量和高质量。旋转柱系统设计用于纯化或浓缩先前已用试剂分离的DNA产物。整个过程可在1小时内完成，无需苯酚/氯方萃取。纯化的DNA适用于PCR或其他酶促反应。
 

样品

高达300μl的全血
高达200μl的冷冻血液
高达200μl的血沉棕黄层
培养的动物细胞（多1 x10 ^ 7）
培养的细菌细胞（多1 x10 ^ 9）
真菌细胞（向上）到5 x 10 ^ 7）

格式化
试剂和旋转列

产量
高达50微克

操作时间
60分钟内

洗脱体积为
50〜200μl

[PureDireX / PDC02-0100 / Bio-Helix]

  • 协议

▍新鲜全血或淡黄色外套

试剂系统协议

步骤1 – 样品细胞收获
1.在EDTA-Na2处理的收集管（或其他抗凝血剂混合物）中收集血液。
2.将多300μl血液或200μl血沉棕黄层转移至无菌1.5 ml微量离心管中。
3。加入900μlBufferRL并通过倒置混合。
4.将试管在室温下孵育10分钟（在孵育期间倒置两次）。
5.以4,000 xg离心5分钟。
6.*除去上清液，通过移液沉淀将细胞重悬于50μlBufferRL中。

第2步 – 裂解
1。将300μl缓冲液CL加入来自步骤1的重悬浮细胞中并通过涡旋混合。
2.在60°C孵育10分钟或直至样品裂解液澄清。在孵育期间，每3分钟倒置一次管。
可选步骤：RNA降解（如果需要无RNA基因组DNA，请执行此可选步骤。）
3。向样品裂解物中加入5μlRNaseA（10mg / ml）并通过涡旋混合。在室温下孵育5分钟。

步骤3 – 去除蛋白质
1.将100μl缓冲液PO加入样品裂解液中并立即涡旋10秒。
2.在冰上孵育5分钟。
3.以14-16,000xg离心3分钟。
4.将上清液转移到干净的1.5ml微量离心管中。
切换步骤
◆如果需要更纯的DNA，请切换到柱系统（DNA Pure）协议。

步骤4 – DNA沉淀
1.将300μl异丙醇加入到步骤3的样品中，并通过反转20次充分混合。
2.以14-16,000xg离心5分钟。
3.弃去上清液，加入300μl70％乙醇洗涤沉淀。
4.以14-16,000xg离心3分钟。
5.弃去上清液并将颗粒风干10分钟。

步骤5 DNA补液
1。加入50-100μl缓冲液E，在60℃下孵育5-10分钟以溶解DNA沉淀。在孵育期间，轻拍管底部以促进DNA再水合。

 

柱系统（DNA Pure）方案
*在初次使用前，向缓冲液W2中加入60ml无水乙醇。
*使用前将缓冲液E预热至60°C。
步骤1 – 样品制备
1.将400μl缓冲液BD加入步骤3蛋白质去除的样品中并剧烈摇动 。

步骤2 – DNA结合
1.将DG柱置于2 ml收集管中。
2.将样品混合物从上一步骤转移到DG色谱柱。
3.以14-16,000 xg离心30秒。
4.丢弃流通液并将DG柱放回同一收集管中。

步骤3 – 洗涤
1.将400μl缓冲液W1加入DG柱中。
2.以14,000 xg离心30秒。
3.丢弃流通液并将DG柱放回同一收集管中。
4.将600μl缓冲液W2（添加乙醇）加入DG柱中。
5.以14,000 xg离心30秒。
6.丢弃流通液并将DG柱放回同一收集管中。
7.再次以14,000xg离心2分钟以除去残留的缓冲液W2。

步骤4 – DNA洗脱
1.将干燥的DG柱置于干净的1.5 ml微量离心管中。
2.将50-200μl预热缓冲液E或TE（未提供）加入柱基质的中心。
3.将其在60℃下静置5分钟。
4.以14-16,000xg离心2分钟以洗脱纯化的DNA。

 

▍培养的哺乳动物细胞

试剂系统协议

步骤1 – 样品细胞收获
1.将培养的哺乳动物细胞（多10 ^ 7）转移到无菌的1.5ml微量离心管中。
2.以6,000 xg离心1分钟。
3.*除去上清液，通过移液沉淀将细胞重悬于50μlBufferRL中。

步骤2 – 裂解
1.将300μl缓冲液CL加入来自步骤1的重悬浮细胞中并通过涡旋混合。
2.在60°C孵育10分钟或直至样品裂解液澄清。在孵育期间，每3分钟倒置一次管。
可选步骤：RNA降解（如果需要无RNA基因组DNA，则执行此可选步骤。）
3。向样品裂解液中加入5μlRNaseA（10 mg / ml）并通过涡旋混合。在室温下孵育5分钟。

步骤3 – 去除蛋白质
1.将100μl缓冲液PO加入样品裂解液中并立即涡旋10秒。
2.在冰上孵育5分钟。
3.以14-16,000xg离心3分钟。
4.将上清液转移到干净的1.5ml微量离心管中。
切换步骤
◆如果需要更纯的DNA，请切换到柱系统（DNA Pure）协议。

步骤4 – DNA沉淀
1.将300μl异丙醇加入到步骤3的样品中，并通过反转20次充分混合。
2.以14-16,000xg离心5分钟。
3.弃去上清液，加入300μl70％乙醇洗涤沉淀。
4.以14-16,000xg离心3分钟。
5.弃去上清液并将颗粒风干10分钟。

步骤5 – DNA再水合
1.加入50-100μl缓冲液E，在60℃下孵育5-10分钟以溶解DNA
沉淀。在孵育期间，轻拍管底部以促进DNA再水合。

柱系统（DNA Pure）方案
*在初次使用前，向缓冲液W2中加入60ml无水乙醇。
*使用前将缓冲液E预热至60°C。

步骤1 – 样品制备
1.将400μl缓冲液BD加入步骤3蛋白质去除的样品中并剧烈摇动。

步骤2 – DNA结合
1.将DG柱置于2 ml收集管中。
2.将样品混合物从上一步骤转移到DG色谱柱。
3.以14-16,000 xg离心30秒。
4.丢弃流通液并将DG柱放回同一收集管中。

步骤3 – 洗涤
1.将400μl缓冲液W1加入DG柱中。
2.以14,000 xg离心30秒。
3.丢弃流通液并将DG柱放回同一收集管中。
4.将600μl缓冲液W2（添加乙醇）加入DG柱中。
5.以14,000 xg离心30秒。
6.丢弃流通液并将DG柱放回同一收集管中。
7.再次以14,000xg离心2分钟以除去残留的缓冲液W2。

步骤4 – DNA洗脱
1.将干燥的DG柱置于干净的1.5 ml微量离心管中。
2.将50-200μl预热缓冲液E或TE（未提供）加入柱基质的中心。
3.将其在60℃下静置5分钟。
4.以14-16,000xg离心2分钟以洗脱纯化的DNA。

 

▍Gram-阴性细菌细胞

试剂系统协议

步骤1 – 样品细胞收获
1.将培养的细菌细胞（多10 ^ 9）转移到无菌的1.5ml微量离心管中。
2.以12,000 xg离心1分钟。
3.*除去上清液，通过移液沉淀将细胞重悬于50μlBufferRL中。

步骤2 – 裂解
1.将300μl缓冲液CL加入来自步骤1的重悬浮细胞中并通过涡旋混合。
2.在60°C孵育10分钟或直至样品裂解液澄清。在孵育期间，每3分钟倒置一次管。
可选步骤：RNA降解（如果需要无RNA基因组DNA，则执行此可选步骤。）
3。向样品裂解液中加入5μlRNaseA（10 mg / ml）并通过涡旋混合。在室温下孵育5分钟。

步骤3 – 去除蛋白质
1.将100μl缓冲液PO加入样品裂解液中并立即涡旋10秒。
2.在冰上孵育5分钟。
3.以14-16,000xg离心3分钟。
4.将上清液转移到干净的1.5ml微量离心管中。
切换步骤
◆如果需要更纯的DNA，请切换到柱系统（DNA Pure）协议。

步骤4 – DNA沉淀
1.将300μl异丙醇加入到步骤3的样品中，并通过反转20次充分混合。
2.以14-16,000xg离心5分钟。
3.弃去上清液，加入300μl70％乙醇洗涤沉淀。
4.以14-16,000xg离心3分钟。
5.弃去上清液并将颗粒风干10分钟。

步骤5 – DNA再水合
1.加入50-100μl缓冲液E，在60℃下孵育5-10分钟以溶解DNA沉淀。在孵育期间，轻拍管底部以促进DNA再水合。

 

柱系统（DNA Pure）方案

*在初次使用前，向缓冲液W2中加入60ml无水乙醇。
*使用前将缓冲液E预热至60°C。

步骤1 – 样品制备
1.将400μl缓冲液BD加入步骤3蛋白质去除的样品中并剧烈摇动。

步骤2 – DNA结合
1.将DG柱置于2 ml收集管中。
2.将样品混合物从上一步骤转移到DG色谱柱。
3.以14-16,000 xg离心30秒。
4.丢弃流通液并将DG柱放回2 ml收集管中。

步骤3 – 洗涤
1.将400μl缓冲液W1加入DG柱中。
2.以14,000 xg离心30秒。
3.丢弃流通液并将DG柱放回同一收集管中。
4.将600μl缓冲液W2（添加乙醇）加入DG柱中。
5.以14,000 xg离心30秒。
6.丢弃流通液并将DG柱放回同一收集管中。
7.再次以14,000xg离心2分钟以除去残留的缓冲液W2。

步骤4 – DNA洗脱
1.将干燥的DG柱置于干净的1.5 ml微量离心管中。
2.将50-200μl预热缓冲液E或TE（未提供）加入柱基质的中心。
3.将其在60℃下静置5分钟。
4.以14-16,000xg离心2分钟以洗脱纯化的DNA。

 

 

▍Gram-Postive细菌细胞

试剂系统协议

步骤1 – 样品细胞收获
1.将培养的细菌细胞（多10 ^ 9）转移到无菌的1.5ml微量离心管中。
2.以12,000 xg离心1分钟。
3.*除去上清液，通过移液沉淀将细胞重悬于100μl溶菌酶缓冲液中。
4.在室温下孵育20分钟。
 

第2步 – 裂解

1.向步骤1的重悬浮细胞中加入300μlBufferCL，并通过涡旋混合。
2.在60°C孵育10分钟或直至样品裂解液澄清。在孵育期间，每3分钟倒置一次管。
可选步骤：RNA降解（如果需要无RNA基因组DNA，则执行此可选步骤。）
3 。向样品裂解液中加入5μlRNaseA（10 mg / ml）并通过涡旋混合。在室温下孵育5分钟。

步骤3 – 去除蛋白质
1.将100μl缓冲液PO加入样品裂解液中并立即涡旋10秒。
2.在冰上孵育5分钟。
3.以14-16,000xg离心3分钟。
4.将上清液转移到干净的1.5ml微量离心管中。
切换步骤
◆如果需要更纯的DNA，请切换到柱系统（DNA Pure）协议。

步骤4 – DNA沉淀
1.将300μl异丙醇加入到步骤3的样品中，并通过反转20次充分混合。
2.以14-16,000xg离心5分钟。
3.弃去上清液，加入300μl70％乙醇洗涤沉淀。
4.以14-16,000xg离心3分钟。
5.弃去上清液并将颗粒风干10分钟。

步骤5 – DNA再水合
1.加入50-100μl缓冲液E，在60℃下孵育5-10分钟以溶解DNA沉淀。在孵育期间，轻拍管底部以促进DNA再水合。

 

柱系统（DNA Pure）方案

*在初次使用前，向缓冲液W2中加入60ml无水乙醇。
*使用前将缓冲液E预热至60°C。

步骤1 – 样品制备
1.将400μl缓冲液BD加入步骤3蛋白质去除的样品中并剧烈摇动。

步骤2 – DNA结合
1.将DG柱置于2 ml收集管中。
2.将样品混合物从上一步骤转移到DG色谱柱。
3.以14-16,000 xg离心30秒。
4.丢弃流通液并将DG柱放回2 ml收集管中。

步骤3 – 洗涤
1.将400μl缓冲液W1加入DG柱中。
2.以14,000 xg离心30秒。
3.丢弃流通液并将DG柱放回同一收集管中。
4.将600μl缓冲液W2（添加乙醇）加入DG柱中。
5.以14,000 xg离心30秒。
6.丢弃流通液并将DG柱放回同一收集管中。
7.再次以14,000xg离心2分钟以除去残留的缓冲液W2。

步骤4 – DNA洗脱
1.将干燥的DG柱置于干净的1.5 ml微量离心管中。
2.将50-200μl预热缓冲液E或TE（未提供）加入柱基质的中心。
3.将其在60℃下静置5分钟。
4.以14-16,000xg离心2分钟以洗脱纯化的DNA。

 

 

▍真菌细胞

试剂系统协议

步骤1 – 样品细胞收获
1.将真菌细胞（多10 ^ 8）转移到无菌的1.5ml微量离心管中。
2.以6,000 xg离心5分钟。
3.*除去上清液，通过移液沉淀将细胞重悬于600μl山梨糖醇缓冲液中。
4.加入200U裂解酶或酶解酶。在30°C孵育30分钟。
5.以2,000 xg离心混合物10分钟以收获原生质球。
6.*除去上清液，通过移液沉淀将细胞重悬于50μlBufferRL中。
 

步骤2 – 裂解
1.将300μl缓冲液CL加入来自步骤1的重悬浮细胞中并通过涡旋混合。
2.在60°C孵育10分钟或直至样品裂解液澄清。在孵育期间，每3分钟倒置一次管。
可选步骤：RNA降解（如果需要无RNA基因组DNA，则执行此可选步骤。）
3。向样品裂解液中加入5μlRNaseA（10 mg / ml）并通过涡旋混合。在室温下孵育5分钟。
 

步骤3 – 去除蛋白质
1.将100μl缓冲液PO加入样品裂解液中并立即涡旋10秒。
2.在冰上孵育5分钟。
3.以14-16,000xg离心3分钟。
4.将上清液转移到干净的1.5ml微量离心管中。
切换步骤
◆如果需要更纯的DNA，请切换到柱系统（DNA Pure）协议。
 

步骤4 – DNA沉淀
1.将300μl异丙醇加入到步骤3的样品中，并通过反转20次充分混合。
2.以14-16,000xg离心5分钟。
3.弃去上清液，加入300μl70％乙醇洗涤沉淀。
4.以14-16,000xg离心3分钟。
5.弃去上清液并将颗粒风干10分钟。

步骤5 – DNA再水合
1.加入50-100μl缓冲液E，在60℃下孵育5-10分钟以溶解DNA沉淀。在孵育期间，轻拍管底部以促进DNA再水合。

 

柱系统（DNA Pure）方案

*在初次使用前，向缓冲液W2中加入60ml无水乙醇。
*使用前将缓冲液E预热至60°C。

步骤1 – 样品制备
1.将400μl缓冲液BD加入步骤3蛋白质去除的样品中并剧烈摇动。

步骤2 – DNA结合
1.将DG柱置于2 ml收集管中。
2.将样品混合物从上一步骤转移到DG色谱柱。
3.以14-16,000 xg离心30秒。
4.丢弃流通液并将DG柱放回2 ml收集管中。

步骤3 – 洗涤
1.将400μl缓冲液W1加入DG柱中。
2.以14,000 xg离心30秒。
3.丢弃流通液并将DG柱放回同一收集管中。
4.将600μl缓冲液W2（添加乙醇）加入DG柱中。
5.以14,000 xg离心30秒。
6.丢弃流通液并将DG柱放回同一收集管中。
7.再次以14,000xg离心2分钟以除去残留的缓冲液W2。

步骤4 – DNA洗脱
1.将干燥的DG柱置于干净的1.5 ml微量离心管中。
2.将50-200μl预热缓冲液E或TE（未提供）加入柱基质的中心。
3.将其在60℃下静置5分钟。
4.以14-16,000xg离心2分钟以洗脱纯化的DNA。

 

Bionano Genomics品牌代理

发表于由

Bionano Genomics

简要描述：

总部位于美国圣地亚哥的BioNano Genomics公司，一直致力于提供更好地获取全面基因组信息的解决方案。

总部位于美国圣地亚哥的BioNano Genomics公司，一直致力于提供更好地获取全面基因组信息的解决方案。公司平台为研究人员和临床医生提供了一个关于基因组个体元件如何排序和相互作用的全面、有序和可行的基因组图谱。BioNano Genomics公司携手其他生命科学组织，投身于转化研究，分子诊断及个性化医疗工作。该公司接受来自私人投资者和联邦机构的基因组学项目（包括NIH和NIST-ATP）的资金资助。

At Bionano, we are committed to the relentless pursuit of the truth in genomics so we can all realize its promise to improve quality of life for all. In doing so, we hold ourselves to the highest standards and are uncompromising in our commitment to quality and accuracy. We are not afraid of uncharted territory. In fact, we seek it out, because that is where the answers lie. Our optical mapping approach is unlike anything else. With this unique tool, our dynamic team is driving change and empowering discovery across all areas of genome research.


产品列表：


No.

品牌

货号

名称

规格

1

Bionano Genomics

80002

Animal Tissue DNA Isolation Kit 

10 reactions

2

Bionano Genomics

80004

Blood and Cell Culture DNA Isolation Kit

10 reactions

3

Bionano Genomics

80003

Plant DNA Isolation Kit 

5 reactions

4

Bionano Genomics

80005

DLS DNA Labeling Kit

10 reactions

5

Bionano Genomics

80001

NLRS DNA Labeling Kit

10 reactions

amsbio用于CRISPR基因组编辑的产品

发表于由

 

CRISPR/Cas9 Genome Editing

 

 

 

载体，蛋白质，抗体和试剂盒

没有废话的基因编辑

 

序列特异性基因编辑的前沿技术

我们提供了一系列的试剂和试剂盒来支持你的基因编辑应用，包括一系列非同源介导的和HDR介导的CRISPR基因敲除试剂盒，用于分裂和非分裂细胞的高效基因敲除。我们还提供了重组功能的CAS9蛋白和mRNA，以及多个载体（all-in-one，t7和cas9nickase）。

 

  • 用于小鼠和人类基因的CRISPR基因敲除试剂盒
  • CRISPR/CAS9载体的GRNA和CAS9表达
  • Recombinant Cas9 protein
  • 转染就绪CAS9mRNA
  • 自定义GRNA克隆与供体载体构建服务

 

CRISPR/Cas9 genome editing system

 

介绍

基因组编辑的新工具CRISPR / Cas9允许在灵活简单的系统中进行特定的基因组破坏和置换，从而实现高特异性和低细胞毒性。CRISPR / Cas9基因组编辑系统需要将Cas9蛋白与从人U6聚合酶III启动子表达的指导RNA载体共表达。通过在3'端存在与原间隔子相邻的基序（PAM-序列NGG），Cas9将解开DNA双链体，并在被引导RNA识别靶序列后切割两条链。然后可以将在救援供体载体中合成的功能盒插入解链的DNA中。利用细胞自身的自然修复机制，

 

 

amsbio用于CRISPR基因组编辑的产品

 

多合一CRISPR / Cas9载体

货号 描述 包装尺寸  
CAS601A-1 Cas9 SmartNuclease AAVS1-gRNA靶向载体[EF1a启动子] 10微克
CAS700G-1 EF1-T7-hspCas9-T2A-GFP-H1-gRNA线性化SmartNuclease载体 10 rxn
CAS750G-1 Cas9切口酶：EF1-T7-hspCas9-切口酶-T2A-GFP-H1-gRNA线性化SmartNickase载体 10 rxn
CAS790A-KIT 多重gRNA试剂盒+ Cas9切口酶：CMV-T7-hspCas9-切口酶-H1-gRNA线性化SmartNickase载体 10 rxn
卡萨AV100PA-1 EF1a-hsaCas9-U6-gRNA（SA）线性化的多合一SmartNuclease AAV质粒 10 rxn
GE100001 预切的pCAS-Guide克隆试剂盒（10个RXN），包括GE100007和GE100008。 1套
GE100002 用于基因组靶序列克隆的pCAS-Guide载体（带有Cas9表达）（10微克），包括GE100008。 1套
GE100003 pCAS-Scramble，pCas-Guide载体，带有加扰序列作为阴性对照（10 ug） 1套
GE100009 预切的pLenti-Cas-Guide克隆试剂盒（10个RXN），包括GE100007和GE100008。 1套
GE100010 用于基因组靶序列克隆（10 ug）的pLenti-Cas-Guide载体（带有Cas9表达），包括GE100008。 1套
GE100018 pCas-Guide-EF1a-GFP载体（带有Cas9和GFP表达），用于基因组靶序列克隆（10微克） 1套
GE100021 pCas-Guide-EF1a-GFP载体中的加扰序列（10 ug） 1套
GE100022 pCas-Guide-EF1a-CD4载体（带有Cas9和CD4表达），用于基因组靶序列克隆（10微克） 1套
GE100045 pLenti-EF1a-Cas-Guide（带有EF1a-Cas9）用于gRNA靶序列克隆（10 ug） 1套

 

指导RNA载体

货号 描述 包装尺寸  
GE100025 用于靶序列克隆的pT7-Guide-IVT载体；IVT产生gRNA（10ug） 1套
GE100032 pLenti-Guide-Puro，以嘌呤霉素为哺乳动物选择标记的慢病毒载体中的gRNA克隆载体（10ug） 1套
GE100042 pGuide，仅gRNA载体，10 ug 1套
GE100044 pGuide-EF1a-GFP，具有EF1a驱动的GFP的仅gRNA载体 1套

 

Multiplex gRNA载体和试剂盒

货号 描述 包装尺寸  
CAS720A-KIT 多重gRNA试剂盒+ CAG-T7-hspCas9-H1-gRNA线性化SmartNuclease载体 10 rxn
CAS740A-KIT 多重gRNA试剂盒+ CMV-T7-hspCas9-H1-gRNA线性化SmartNuclease载体 10 rxn
CAS750A-KIT 多重gRNA试剂盒+ Cas9切口酶：EF1-T7-hspCas9-切口酶-H1-gRNA线性化SmartNickase载体 10 rxn
CAS770A-KIT 多重gRNA试剂盒+ Cas9切口酶：CAG-T7-hspCas9-切口酶-H1-gRNA线性化SmartNickase载体 10 rxn
CAS790A-KIT 多重gRNA试剂盒+ Cas9切口酶：CMV-T7-hspCas9-切口酶-H1-gRNA线性化SmartNickase载体 10 rxn
CAS9-GRNA-KIT PrecisionX Multiplex gRNA克隆试剂盒 10 rxn

 

Cas9向量

货号 描述 包装尺寸  
GE100014 pT7-Cas9载体，其中Cas9在T7下用于IVT以产生Cas9 mRNA 1套
GE100028 pLenti-Cas9载体，lenti载体中的Cas9（10 ug） 1套
GE100029 pLenti-Cas9-IRES-Puro，带双顺反子IRES-Puro（10 ug）的慢病毒载体中的Cas9 1套
GE100030 pLenti-EF1a-Cas9-IRES-Puro，带有双顺反子IRES-Puro（10 ug）的EF1a启动子下慢病毒载体中的Cas9 1套
GE100031 pLenti-Cas9-P2A-tGFP，P2A（10 ug）后的带有tGFP的慢病毒载体中的Cas9 1套
GE100032 pLenti-Guide-Puro，以嘌呤霉素为哺乳动物选择标记的慢病毒载体中的gRNA克隆载体（10ug） 1套
GE100037 AAVS1供体载体中的Cas9表达载体，嘌呤霉素的选择（10微克） 1套
GE100039 AAVS1供体载体中的Cas9表达载体，杀稻瘟菌素的选择（10ug） 1套
GE100042 pGuide，仅gRNA载体，10 ug 1套
GE100044 pGuide-EF1a-GFP，具有EF1a驱动的GFP的仅gRNA载体 1套

 

AAVS1 Safe Harbor CRISPR载体和试剂盒

猫猫 描述 包装尺寸  
CAS601A-1 Cas9 SmartNuclease AAVS1-gRNA靶向载体[EF1a启动子] 10微克
CAS620A-1 hspCas9 AAVS1安全港敲除供体（AAVS1-SA-puro-EF1-hspCas9） 10微克
GE100023 AAVS1 gRNA载体，在pCas-Guide载体中克隆的经过验证的AAVS1靶向序列 1套
GE100024 克隆了带有AAVS1同源臂的供体载体，准备进行转基因克隆 1套
GE100027 用于靶向转基因插入AAVS1基因座的载体试剂盒，包括GE100023，GE100024和GE100003 1套
GE100035 克隆了具有AAVS1同源臂的AAVS1供体载体（选择弹力素），准备进行外源基因克隆（10 ug） 1套
GE100036 用于靶向转基因插入AAVS1基因座（杀稻瘟菌素选择）的载体试剂盒，包括AAVS1 gRNA载体（目录号GE100023），AAVS1-BSD供体（目录号GE100035）和gRNA加扰对照（目录号GE100003） 1套
GE100046 已克隆具有AAVS1同源臂的AAVS1供体载体（Puro选择），EF1a启动子，准备进行外源基因克隆（10 ug） 1套
GE100047 用于靶向转基因插入AAVS1基因座（EF1a，puro）的载体试剂盒，包括GE100023，GE100046和GE100003 1套
GE100048 克隆了具有AAVS1同源臂的AAVS1供体载体（选择弹塑性蛋白），EF1a启动子，准备进行外源基因克隆（10 ug） 1套
GE100049 用于靶向转基因插入AAVS1基因座（EF1a，blasticidin）的载体试剂盒，包括GE100023，GE100048和GE100003 1套
GE620A-1 AAVS1安全港目标向量2.0-通用捐助者（AAVS1-SA-puro-MCS） 10微克
GE620A-KIT AAVS1安全港靶向载体2.0-全能供体（AAVS1-SA-puro-MCS），带有CAS601A-1（Cas9 SmartNuclease AAVS1-gRNA靶向载体）和GE640PR-1（连接PCR引物混合物的完整试剂盒，用于确认AAVS1整合位点） 1套
GE622A-1 AAVS1安全港目标向量2.0-GOI敲入供体（AAVS1-SA-puro-EF1-MCS） 10微克
GE622A-KIT AAVS1安全港靶向载体2.0-GOI敲入供体（AAVS1-SA-puro-EF1-MCS），带有CAS601A-1（Cas9 SmartNuclease AAVS1-gRNA靶向载体）和GE640PR-1（结合PCR引物混合物的完整试剂盒） AAVS1集成站点） 1套

 

Cas9切口酶

猫猫 描述 包装尺寸  
GE100019 用于gRNA克隆的pCas-Guide-Nickase载体（带有Cas9 D10A表达）（10 ug） 1套
GE100020 pT7-Cas9-尼克酶载体（Cas9 D10A）（10 ug） 1套

 

Cas9蛋白

猫猫 描述 包装尺寸  
TP790148 化脓链球菌Cas9核酸内切酶（Cas9）的纯化重组蛋白，在该蛋白的N和C末端带有猿猴病毒40（SV40）T抗原核定位序列（NLS），其N端HIS标签在大肠杆菌中表达大肠杆菌 500 pmol

 

Cas9 mRNA –准备转染

猫猫 描述 包装尺寸  
CAS500A-1 可转染的Cas9 SmartNuclease mRNA（真核版） 20微克
CAS502A-1 可转染的Cas9 SmartNuclease mRNA（原核版本） 20微克

 

Cas9抗体

猫猫 描述 包装尺寸  
CAS9-AB-2 Cas9单克隆抗体[克隆7A9] 25微克
TA190309 兔多克隆CAS9抗体 100ul

 

Cas9实时PCR引物

猫猫 描述 包装尺寸  
CAS9-PR-1 Cas9 RT-PCR引物组（每个引物组50ul，5uM） 50反应

 

捐助者载体

猫猫 描述 包装尺寸
CAS620A-1 hspCas9 AAVS1安全港敲除供体（AAVS1-SA-puro-EF1-hspCas9） 10微克
GE602A-1 AAVS1安全港cDNA / miRNA供体载体[pAAVS1D-PGK.MCS-EF1a.copGFPpuro] 10微克
GE603A-1 AAVS1安全港阳性对照供体载体[pAAVS1D-CMV.RFP-EF1a.copGFPpuro] 10微克
GE620A-1 AAVS1安全港目标向量2.0-通用捐助者（AAVS1-SA-puro-MCS） 10微克
GE622A-1 AAVS1安全港目标向量2.0-GOI敲入供体（AAVS1-SA-puro-EF1-MCS） 10微克
GE624A-1 AAVS1安全港靶向载体2.0-记者敲入供体（AAVS1-SA-puro-MCS-GFP） 10微克
HR100PA-1 基因敲入/敲除的基本人力资源靶向载体[MCS1-LoxP-MCS2-MCS3-pA-LoxP-MCS4] 10微克
HR110PA-1 基因敲除HR靶向载体[MCS1-EF1α-RFP-T2A-Puro-pA-MCS2] 10微克
HR120PA-1 GFP融合HR靶向载体[GFP-pA-LoxP-EF1？-RFP-T2A-Puro-pA-LoxP-MCS] 10微克
HR130PA-1 T2A-GFP共表达HR靶向载体[T2A-GFP-pA-loxP-EF1？-RFP-T2A-Puro-pA-LoxP-MCS] 10微克
HR150PA-1 GFP-T2A-萤光素酶共表达HR靶向载体[GFP-T2A-Luc-pA-loxP-EF1α-RFP-T2A-Puro-pA-LoxP-MCS] 10微克
HR180PA-1 IRES-GFP共表达HR靶向载体[IRES-GFP-pA-loxP-MCS1-EF1？-RFP-T2A-Puro-pA-LoxP-MCS2] 10微克
HR210PA-1 具有TK选择的基因敲除HR靶向载体[MCS1-LoxP-EF1？-GFP-T2A-Puro-P2A-hsvTK-pA-LoxP-MCS2] 10微克
HR220PA-1 GFP融合HR靶向载体[GFP-pA-LoxP-EF1a-RFP-T2A-Hygro-pA-LoxP-MCS] 10微克
HR410PA-1 基因敲除HR靶向载体[MCS1-EF1a-GFP-T2A-Puro-pA-MCS2] 10微克
HR510PA-1 基因敲除HR靶向载体[MCS1-EF1a-RFP-T2A-Hygro-pA-MCS2] 10微克
HR700PA-1 带有随机选择标记的双选择标记（GFP + Puro）和阴性选择（TK）的基因敲除HR靶向载体 10微克
HR710PA-1 具有双重选择标记（RFP + Hygro）和否定选择（TK）的基因敲除HR靶向载体针对随机整合 10微克
HR720PA-1 带有随机选择标记的单基因选择基因（弹性蛋白）和阴性选择（TK）的基因敲除HR靶向载体 10微克