标签归档：ysfluortm

Annexin V-YSFluorTM 647/PI Apoptosis Detection Kit Annexin V-YSFluorTM 647/PI 细胞凋亡检测试剂盒

发表于由

Annexin V-YSFluorTM 647/PI Apoptosis Detection Kit Annexin V-YSFluorTM 647/PI 细胞凋亡检测试剂盒

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品描述

Annexin V-Alexa Fluor647/PI细胞凋亡检测试剂盒（Annexin V-Alexa Fluor647/PI Apoptosis Detection Kit）是用Alexa Fluor647标记了的Annexin V作为探针，来检测细胞早期凋亡的发生，可用流式细胞仪或其他荧光检测设备进行检测。

其检测原理为：在正常的活细胞中，磷脂酰丝氨酸（phosphotidylserine，PS）位于细胞膜的内侧，但在早期凋亡的细胞中，PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。Annexin V（膜联蛋白-V）是一种分子量为35-36KD的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力结合。可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。

另外，本试剂盒中还提供了碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）用来区分存活的早期细胞和坏死或晚期凋亡细胞。PI是一种核酸染料，它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜，但可以透过凋亡晚期和坏死细胞的细胞膜而使细胞核染红。因此，将Annexin V与PI联合使用时，PI 则被排除在活细胞（Annexin V-/PI-）和早期凋亡细胞（Annexin V+/PI-）之外，而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被Alexa Fluor647 和PI 结合染色呈现双阳性（Annexin V+/PI+）。

本试剂盒需要使用流式细胞仪进行检测。

产品组分

组分编号

组分名称

产品编号/规格

40304ES20（20T）

40304ES50（50T）

40304ES60（100T）

40304-A

Annexin V-Alexa Fluor647

100 μL

250 μL

500 μL

40304-B

PI Staining Solution (20 μg/mL)

200 μL

500 μL

1.0 mL

40304-C

1×Binding Buffer

10 mL

25 mL

50 mL

 

运输与保存方法

冰袋（wet ice）运输。-20 ℃避光保存，避免反复冻融，一年有效期。

【注】：如果需要在短时间内多次重复使用，可以在4 ℃避光保存，半年有效期。

 

注意事项

1、由于细胞凋亡是一个快速的过程，建议样品在染色后1小时之内进行分析。

2、对于贴壁细胞，消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞，需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞。胰酶消化时间过短，细胞需要用力吹打才能脱落，容易造成细胞膜的损伤，PI摄入过多；消化时间过长，细胞膜同样易造成损伤，甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与Annexin V-Alexa Fluor647的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后，轻摇时胰酶与细胞充分接触，然后倒掉大部分胰酶，利用剩余的少量胰酶再消化一段时间，待细胞间空隙增大，瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA，EDTA会影响Annexin V与PS的结合。

3、如果样品来源于血液，请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS，能与Annexin V结合，从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。

4、试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

5、Annexin V-Alexa Fluor647和PI是光敏物质，在操作时请注意避光。

6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

7、本产品仅作科研用途！

 

使用说明

1、 样品染色

1.1、悬浮细胞：300 g，4℃离心5 min收集细胞。

贴壁细胞：用不含EDTA的胰酶消化后，300 g，4℃离心5 min收集细胞。胰酶消化时间不宜过长，以防引起假阳性。1.2、用预冷的PBS洗涤细胞2次，每次均需300g，4℃离心5 min。

1.3、吸弃PBS，加入100 μL 1×Binding Buffer重悬细胞。

1.4、加入5μL Annexin V-Alexa Fluor 647和10 μL PI，轻轻混匀。

1.5、避光、室温反应15 min。

1.6、加入400 μL 1×Binding Buffer，混匀后放置于冰上，样品在1小时内用流式细胞仪或荧光显微镜检测。

【注】：为了避免洗涤细胞时损失细胞，在吸液时可以用大的Tip头套上小的Tip头吸液。

2、流式细胞仪分析

Alexa Fluor647最大激发波长为651 nm，最大发射波长为667 nm；PI-DNA复合物的最大激发波长为535 nm，最大发射波长为615 nm。用CellQuest等软件进行分析，绘制双色散点图（two-color dot plot），Alexa Fluor647为横坐标，PI为纵坐标。每个样采集10,000 events。

 

HB220222

 

Q：染色结果可以使用多功能酶标仪观察吗？

A：可以，建议如果条件允许最好是使用荧光显微镜或是共聚焦显微镜 流式仪器。

Q：染色后多久进行？

A：建议染色后应立即进行观察，应当在 30min 内完成整个实验观察过程。

Q：染色工作液使用什么溶液进行配置？

A：如果试剂盒内提供有稀释 buffer，应使用该溶液配置，如果没有配备，可以使用 HBSS 无血清培养基 PBS 等合适的缓冲液进行配置。

Q：染色时添加多少体系的工作液进行染色？

A：如果是爬片观察，添加的剂量应是尽量浸没细胞为宜，如果采用流式观察使用剂量可以参考说明   书建议的用量。

Q：40307 Tunel 细胞凋亡检测的可以应用到植物或是细菌（原核生物）吗？

A：可以，但是需要制备原生质体，因为植物细胞或是细菌（原核生物）含有细胞壁，具体的染液使   用剂量只需浸没细胞即可，染色时间对于不同细胞有一定的不同。

Q：40307 Tunel 细胞凋亡检测，细胞爬片好凋亡处理后需要在固定通透吗？

A：需要通透，因为 TdT 酶需要经过通透的细胞才能进入细胞内，而 Annexin V 和JC-1 是不能进行染

色固定的。

Q：Tunel 细胞凋亡检测时，贴壁细胞必须要先消化下来再染色吗？

A：不需要，对于贴壁细胞，要先用 PBS 洗 2-3 次，然后直接用多聚甲醛固定细胞，在通透处理，染

色观察。

Q：可以通过那些仪器检测tunel 荧光信号？

A：荧光显微镜 共聚焦显微镜 流式细胞仪 酶标仪均可以检测tunel 荧光信号。

Q：Tunel 检测在实验操作上有哪些注意事项？

A：荧光基团长期暴露在普通光照下，会发生严重淬灭现象，因此在实验操作上应尽量避光操作和孵育。

Q：0：Tunel 检测除了多聚甲醛固定，可不可以使用甲醇固定？

A：使用乙醇或甲醇固定会导致标记的效率较低。酸性固定液，也容易导致假阳性的出现。建议采用新鲜配置的 4%中性多聚甲醛固定液。

Q：1：试剂盒的保质期多久？

A：对于探针类的试剂在规定的保存条件下保质期是一年左右。

Q：2：荧光显微镜检测时发现荧光较弱，怎么办？

A：对于荧光较弱的情况可以适当的增加孵育时间和工作液浓度，对于细胞也尽量选择状态较好的细   胞进行染色观察。

Q：3：为什么我激发后荧光很快就猝灭了？

A：可能是使用浓度过高造成，可以再适当降低一些试剂浓度；可以在寻找视野时使用低能量的激光，

待找到合适视野时使用高能量激光激发观察；或者是使用抗猝灭剂。

Q：两个试剂的浓度分别是多少？

A：AnnexinV浓度时0.4mg/ml，PI浓度时20ug/ml

 

[1] Qu S, Jiao Z, Lu G, et al. PD-L1 lncRNA splice isoform promotes lung adenocarcinoma progression via enhancing c-Myc activity. Genome Biol. 2021;22(1):104. Published 2021 Apr 13. doi:10.1186/s13059-021-02331-0(IF:13.583)
[2] Wang J, Du X, Wang X, et al. Tumor-derived miR-378a-3p-containing extracellular vesicles promote osteolysis by activating the Dyrk1a/Nfatc1/Angptl2 axis for bone metastasis. Cancer Lett. 2022;526:76-90. doi:10.1016/j.canlet.2021.11.017(IF:8.679)
[3] Xie J, Xu W, Wu Y, Niu B, Zhang X. Macroporous organosilicon nanocomposites co-deliver Bcl2-converting peptide and chemotherapeutic agent for synergistic treatment against multidrug resistant cancer. Cancer Lett. 2020;469:340-354. doi:10.1016/j.canlet.2019.10.018(IF:6.508)
[4] Li S, Li X, Chen F, et al. Nobiletin mitigates hepatocytes death, liver inflammation, and fibrosis in a murine model of NASH through modulating hepatic oxidative stress and mitochondrial dysfunction. J Nutr Biochem. 2022;100:108888. doi:10.1016/j.jnutbio.2021.108888(IF:6.048)
[5] Han L, Wu Y, Liu F, Zhang H. eIF4A1 Inhibitor Suppresses Hyperactive mTOR-Associated Tumors by Inducing Necroptosis and G2/M Arrest. Int J Mol Sci. 2022;23(13):6932. Published 2022 Jun 22. doi:10.3390/ijms23136932(IF:5.924)
[6] Gao F, Wang Q, Zhang C, et al. RNA methyltransferase METTL3 induces intrinsic resistance to gefitinib by combining with MET to regulate PI3K/AKT pathway in lung adenocarcinoma. J Cell Mol Med. 2021;25(5):2418-2425. doi:10.1111/jcmm.16114(IF:5.310)
[7] Ren L, Hu L, Zhang Y, et al. Cataract-Causing S93R Mutant Destabilized Structural Conformation of βB1 Crystallin Linking With Aggregates Formation and Cellular Viability. Front Mol Biosci. 2022;9:844719. Published 2022 Mar 14. doi:10.3389/fmolb.2022.844719(IF:5.246)
[8] Ding M, Weng C, Fan S, Cao Q, Lu Z. Purkinje Cell Degeneration and Motor Coordination Deficits in a New Mouse Model of Autosomal Recessive Spastic Ataxia of Charlevoix-Saguenay. Front Mol Neurosci. 2017;10:121. Published 2017 May 1. doi:10.3389/fnmol.2017.00121(IF:5.076)
[9] Cai C, Dang W, Liu S, et al. Anthrax toxin receptor 1/tumor endothelial marker 8 promotes gastric cancer progression through activation of the PI3K/AKT/mTOR signaling pathway. Cancer Sci. 2020;111(4):1132-1145. doi:10.1111/cas.14326(IF:4.966)
[10] Li X, Yao Q, Huang J, et al. Morin Hydrate Inhibits TREM-1/TLR4-Mediated Inflammatory Response in Macrophages and Protects Against Carbon Tetrachloride-Induced Acute Liver Injury in Mice. Front Pharmacol. 2019;10:1089. Published 2019 Sep 20. doi:10.3389/fphar.2019.01089(IF:3.845)
[11] Jiang Y, Du M, Wu M, et al. Phosphatidic Acid Improves Reprogramming to Pluripotency by Reducing Apoptosis. Stem Cells Dev. 2016;25(1):43-54. doi:10.1089/scd.2015.0159(IF:3.727)
[12] Zhang Q, Wu C, Fan Y, et al. Nucleic acid-targeted pathogen reduction technique in red blood cells by UV-generated oxygen radicals for optimising recipient safety. Transfus Med. 2020;30(1):51-60. doi:10.1111/tme.12654(IF:1.900)

产品描述

Annexin V-Alexa Fluor647/PI细胞凋亡检测试剂盒（Annexin V-Alexa Fluor647/PI Apoptosis Detection Kit）是用Alexa Fluor647标记了的Annexin V作为探针，来检测细胞早期凋亡的发生，可用流式细胞仪或其他荧光检测设备进行检测。

其检测原理为：在正常的活细胞中，磷脂酰丝氨酸（phosphotidylserine，PS）位于细胞膜的内侧，但在早期凋亡的细胞中，PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。Annexin V（膜联蛋白-V）是一种分子量为35-36KD的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力结合。可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。

另外，本试剂盒中还提供了碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）用来区分存活的早期细胞和坏死或晚期凋亡细胞。PI是一种核酸染料，它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜，但可以透过凋亡晚期和坏死细胞的细胞膜而使细胞核染红。因此，将Annexin V与PI联合使用时，PI 则被排除在活细胞（Annexin V-/PI-）和早期凋亡细胞（Annexin V+/PI-）之外，而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被Alexa Fluor647 和PI 结合染色呈现双阳性（Annexin V+/PI+）。

本试剂盒需要使用流式细胞仪进行检测。

产品组分

组分编号

组分名称

产品编号/规格

40304ES20（20T）

40304ES50（50T）

40304ES60（100T）

40304-A

Annexin V-Alexa Fluor647

100 μL

250 μL

500 μL

40304-B

PI Staining Solution (20 μg/mL)

200 μL

500 μL

1.0 mL

40304-C

1×Binding Buffer

10 mL

25 mL

50 mL

 

运输与保存方法

冰袋（wet ice）运输。-20 ℃避光保存，避免反复冻融，一年有效期。

【注】：如果需要在短时间内多次重复使用，可以在4 ℃避光保存，半年有效期。

 

注意事项

1、由于细胞凋亡是一个快速的过程，建议样品在染色后1小时之内进行分析。

2、对于贴壁细胞，消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞，需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞。胰酶消化时间过短，细胞需要用力吹打才能脱落，容易造成细胞膜的损伤，PI摄入过多；消化时间过长，细胞膜同样易造成损伤，甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与Annexin V-Alexa Fluor647的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后，轻摇时胰酶与细胞充分接触，然后倒掉大部分胰酶，利用剩余的少量胰酶再消化一段时间，待细胞间空隙增大，瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA，EDTA会影响Annexin V与PS的结合。

3、如果样品来源于血液，请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS，能与Annexin V结合，从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。

4、试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

5、Annexin V-Alexa Fluor647和PI是光敏物质，在操作时请注意避光。

6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

7、本产品仅作科研用途！

 

使用说明

1、 样品染色

1.1、悬浮细胞：300 g，4℃离心5 min收集细胞。

贴壁细胞：用不含EDTA的胰酶消化后，300 g，4℃离心5 min收集细胞。胰酶消化时间不宜过长，以防引起假阳性。1.2、用预冷的PBS洗涤细胞2次，每次均需300g，4℃离心5 min。

1.3、吸弃PBS，加入100 μL 1×Binding Buffer重悬细胞。

1.4、加入5μL Annexin V-Alexa Fluor 647和10 μL PI，轻轻混匀。

1.5、避光、室温反应15 min。

1.6、加入400 μL 1×Binding Buffer，混匀后放置于冰上，样品在1小时内用流式细胞仪或荧光显微镜检测。

【注】：为了避免洗涤细胞时损失细胞，在吸液时可以用大的Tip头套上小的Tip头吸液。

2、流式细胞仪分析

Alexa Fluor647最大激发波长为651 nm，最大发射波长为667 nm；PI-DNA复合物的最大激发波长为535 nm，最大发射波长为615 nm。用CellQuest等软件进行分析，绘制双色散点图（two-color dot plot），Alexa Fluor647为横坐标，PI为纵坐标。每个样采集10,000 events。

 

HB220222

 

Q：染色结果可以使用多功能酶标仪观察吗？

A：可以，建议如果条件允许最好是使用荧光显微镜或是共聚焦显微镜 流式仪器。

Q：染色后多久进行？

A：建议染色后应立即进行观察，应当在 30min 内完成整个实验观察过程。

Q：染色工作液使用什么溶液进行配置？

A：如果试剂盒内提供有稀释 buffer，应使用该溶液配置，如果没有配备，可以使用 HBSS 无血清培养基 PBS 等合适的缓冲液进行配置。

Q：染色时添加多少体系的工作液进行染色？

A：如果是爬片观察，添加的剂量应是尽量浸没细胞为宜，如果采用流式观察使用剂量可以参考说明   书建议的用量。

Q：40307 Tunel 细胞凋亡检测的可以应用到植物或是细菌（原核生物）吗？

A：可以，但是需要制备原生质体，因为植物细胞或是细菌（原核生物）含有细胞壁，具体的染液使   用剂量只需浸没细胞即可，染色时间对于不同细胞有一定的不同。

Q：40307 Tunel 细胞凋亡检测，细胞爬片好凋亡处理后需要在固定通透吗？

A：需要通透，因为 TdT 酶需要经过通透的细胞才能进入细胞内，而 Annexin V 和JC-1 是不能进行染

色固定的。

Q：Tunel 细胞凋亡检测时，贴壁细胞必须要先消化下来再染色吗？

A：不需要，对于贴壁细胞，要先用 PBS 洗 2-3 次，然后直接用多聚甲醛固定细胞，在通透处理，染

色观察。

Q：可以通过那些仪器检测tunel 荧光信号？

A：荧光显微镜 共聚焦显微镜 流式细胞仪 酶标仪均可以检测tunel 荧光信号。

Q：Tunel 检测在实验操作上有哪些注意事项？

A：荧光基团长期暴露在普通光照下，会发生严重淬灭现象，因此在实验操作上应尽量避光操作和孵育。

Q：0：Tunel 检测除了多聚甲醛固定，可不可以使用甲醇固定？

A：使用乙醇或甲醇固定会导致标记的效率较低。酸性固定液，也容易导致假阳性的出现。建议采用新鲜配置的 4%中性多聚甲醛固定液。

Q：1：试剂盒的保质期多久？

A：对于探针类的试剂在规定的保存条件下保质期是一年左右。

Q：2：荧光显微镜检测时发现荧光较弱，怎么办？

A：对于荧光较弱的情况可以适当的增加孵育时间和工作液浓度，对于细胞也尽量选择状态较好的细   胞进行染色观察。

Q：3：为什么我激发后荧光很快就猝灭了？

A：可能是使用浓度过高造成，可以再适当降低一些试剂浓度；可以在寻找视野时使用低能量的激光，

待找到合适视野时使用高能量激光激发观察；或者是使用抗猝灭剂。

Q：两个试剂的浓度分别是多少？

A：AnnexinV浓度时0.4mg/ml，PI浓度时20ug/ml

 

[1] Qu S, Jiao Z, Lu G, et al. PD-L1 lncRNA splice isoform promotes lung adenocarcinoma progression via enhancing c-Myc activity. Genome Biol. 2021;22(1):104. Published 2021 Apr 13. doi:10.1186/s13059-021-02331-0(IF:13.583)
[2] Wang J, Du X, Wang X, et al. Tumor-derived miR-378a-3p-containing extracellular vesicles promote osteolysis by activating the Dyrk1a/Nfatc1/Angptl2 axis for bone metastasis. Cancer Lett. 2022;526:76-90. doi:10.1016/j.canlet.2021.11.017(IF:8.679)
[3] Xie J, Xu W, Wu Y, Niu B, Zhang X. Macroporous organosilicon nanocomposites co-deliver Bcl2-converting peptide and chemotherapeutic agent for synergistic treatment against multidrug resistant cancer. Cancer Lett. 2020;469:340-354. doi:10.1016/j.canlet.2019.10.018(IF:6.508)
[4] Li S, Li X, Chen F, et al. Nobiletin mitigates hepatocytes death, liver inflammation, and fibrosis in a murine model of NASH through modulating hepatic oxidative stress and mitochondrial dysfunction. J Nutr Biochem. 2022;100:108888. doi:10.1016/j.jnutbio.2021.108888(IF:6.048)
[5] Han L, Wu Y, Liu F, Zhang H. eIF4A1 Inhibitor Suppresses Hyperactive mTOR-Associated Tumors by Inducing Necroptosis and G2/M Arrest. Int J Mol Sci. 2022;23(13):6932. Published 2022 Jun 22. doi:10.3390/ijms23136932(IF:5.924)
[6] Gao F, Wang Q, Zhang C, et al. RNA methyltransferase METTL3 induces intrinsic resistance to gefitinib by combining with MET to regulate PI3K/AKT pathway in lung adenocarcinoma. J Cell Mol Med. 2021;25(5):2418-2425. doi:10.1111/jcmm.16114(IF:5.310)
[7] Ren L, Hu L, Zhang Y, et al. Cataract-Causing S93R Mutant Destabilized Structural Conformation of βB1 Crystallin Linking With Aggregates Formation and Cellular Viability. Front Mol Biosci. 2022;9:844719. Published 2022 Mar 14. doi:10.3389/fmolb.2022.844719(IF:5.246)
[8] Ding M, Weng C, Fan S, Cao Q, Lu Z. Purkinje Cell Degeneration and Motor Coordination Deficits in a New Mouse Model of Autosomal Recessive Spastic Ataxia of Charlevoix-Saguenay. Front Mol Neurosci. 2017;10:121. Published 2017 May 1. doi:10.3389/fnmol.2017.00121(IF:5.076)
[9] Cai C, Dang W, Liu S, et al. Anthrax toxin receptor 1/tumor endothelial marker 8 promotes gastric cancer progression through activation of the PI3K/AKT/mTOR signaling pathway. Cancer Sci. 2020;111(4):1132-1145. doi:10.1111/cas.14326(IF:4.966)
[10] Li X, Yao Q, Huang J, et al. Morin Hydrate Inhibits TREM-1/TLR4-Mediated Inflammatory Response in Macrophages and Protects Against Carbon Tetrachloride-Induced Acute Liver Injury in Mice. Front Pharmacol. 2019;10:1089. Published 2019 Sep 20. doi:10.3389/fphar.2019.01089(IF:3.845)
[11] Jiang Y, Du M, Wu M, et al. Phosphatidic Acid Improves Reprogramming to Pluripotency by Reducing Apoptosis. Stem Cells Dev. 2016;25(1):43-54. doi:10.1089/scd.2015.0159(IF:3.727)
[12] Zhang Q, Wu C, Fan Y, et al. Nucleic acid-targeted pathogen reduction technique in red blood cells by UV-generated oxygen radicals for optimising recipient safety. Transfus Med. 2020;30(1):51-60. doi:10.1111/tme.12654(IF:1.900)

Annexin V-YSFluorTM 488/PI Apoptosis Detection Kit Annexin V-YSFluorTM 488/PI 细胞凋亡检测试剂盒

发表于由

Annexin V-YSFluorTM 488/PI Apoptosis Detection Kit Annexin V-YSFluorTM 488/PI 细胞凋亡检测试剂盒

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品信息

产品名称

货号

规格

价格（元）

促销价（元）

nnexin V- YSFluorTM 488/PI Apoptosis Detection Kit  

Annexin V- YSFluorTM 488/PI 细胞凋亡检测试剂盒  

40305ES20

20 T

518.00

388.00

40305ES50

50 T

1120.00

788.00

40305ES60

100 T

1960.00

1348.00

 

产品描述

Annexin V-YSFluorTM 488/PI细胞凋亡检测试剂盒（Annexin V-YSFluorTM 488/PI Apoptosis Detection Kit）是用YSFluorTM 488标记了的Annexin V作为探针，来检测细胞早期凋亡的发生，可用流式细胞仪或其他荧光检测设备进行检测。

其检测原理为：在正常的活细胞中，磷脂酰丝氨酸（phosphotidylserine，PS）位于细胞膜的内侧，但在早期凋亡的细胞中，PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。Annexin-Ⅴ（膜联蛋白-V）是一种分子量为35-36KD的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力结合。可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。

另外，本试剂盒中还提供了碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）用来区分存活的早期细胞和坏死或晚期凋亡细胞。PI是一种核酸染料，它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜，但可以透过凋亡晚期和坏死细胞的细胞膜而使细胞核染红。因此，将Annexin V与PI联合使用时，PI 则被排除在活细胞（Annexin V-/PI-）和早期凋亡细胞（Annexin V+/PI-）之外，而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被YSFluorTM 488 和PI 结合染色呈现双阳性（Annexin V+/PI+）。

 

产品组分

编号

组分

产品编号/规格

40305ES20（20T）

40305ES50（50T）

40305ES60（100T）

40305-A

Annexin V-YSFluorTM 488

100 μL

250 μL

500 μL

40305-B

PI Staining Solution (20 μg/mL)

200 μL

500 μL

1.0 mL

40305-C

1×Binding Buffer

10 mL

25 mL

50 mL

 

运输与保存方法

冰袋（wet ice）运输。-20 ℃避光长期保存，避免反复冻融，一年有效。

【注】：如果需要在短时间内多次重复使用，可以在 4 ℃避光保存，半年有效。

 

注意事项

1）由于细胞凋亡是一个快速的过程，建议样品在染色后1小时之内进行分析。

2）对于贴壁细胞，消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞，需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞。胰酶消化时间过短，细胞需要用力吹打才能脱落，容易造成细胞膜的损伤，PI摄入过多；消化时间过长，细胞膜同样易造成损伤，甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与Annexin V–YSFluorTM 488的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后，轻摇时胰酶与细胞充分接触，然后倒掉大部分胰酶，利用剩余的少量胰酶再消化一段时间，待细胞间空隙增大，瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA，EDTA会影响Annexin V与PS的结合。

3）如果样品来源于血液，请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS，能与Annexin V结合，从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。

4）试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

5）Annexin V-YSFluorTM 488和PI是光敏物质，在操作时请注意避光。

6）本产品仅作科研用途！

 

使用说明

1.1 样品染色

1. a）悬浮细胞：300 g，4℃离心5 min收集细胞。

b）贴壁细胞：用不含EDTA的胰酶消化后，300 g，4℃离心5 min收集细胞。胰酶消化时间不宜过长，以防引起假阳性。

2. 用4℃预冷的PBS洗涤细胞2次，每次均需300g，4℃离心5 min。

3. 吸弃PBS，加入100μL 1×Binding Buffer重悬细胞。

4. 加入5μL Annexin V-YSFluorTM 488和10 μL PI，轻轻混匀。

5. 避光、室温反应15 min。

6. 加入400 μL 1×Binding Buffer，混匀，样品在1小时内用流式细胞仪检测。

【注】：为了避免洗涤细胞时损失细胞，在吸液时可以用大的Tip头套上小的Tip头吸液。

1.2 流式细胞仪分析

YSFluorTM 488最大激发波长为488 nm，最大发射波长为519 nm；PI-DNA复合物的最大激发波长为535 nm，最大发射波长为615 nm。用CellQuest等软件进行分析，绘制双色散点图（two-color dot plot），YSFluorTM 488为横坐标，PI为纵坐标。每个样采集10,000 events。

1.3 荧光显微镜分析

1) 滴一滴用Annexin V-FITC/PI双染的细胞悬液于载玻片上，并用盖玻片盖上细胞。

2) 在荧光显微镜下用双色滤光片观察。Annexin V-FITC荧光信号呈绿色，PI荧光信号呈红色。

HB240313

 

Q:Annexin V 和JC-1、Tunel 细胞凋亡检测的区别？

A: Annexin V 是检测细胞早期凋亡的试剂，JC-1 是检测细胞中期凋亡的试剂、Tunel 是检测细胞晚期凋亡的试剂。

[1] Zhang M, Weng Y, Cao Z, et al. ROS-Activatable siRNA-Engineered Polyplex for NIR-Triggered Synergistic Cancer Treatment. ACS Appl Mater Interfaces. 2020;12(29):32289-32300. doi:10.1021/acsami.0c06614(IF:8.758)
[2] Duan Z , Luo Q , Gu L , et al. A co-delivery nanoplatform for a lignan-derived compound and perfluorocarbon tuning IL-25 secretion and the oxygen level in tumor microenvironments for meliorative tumor radiotherapy. Nanoscale. 2021;13(32):13681-13692. doi:10.1039/d1nr03738b(IF:7.790)
[3] Tang L, Zhang C, Lu L, et al. Melatonin Maintains Inner Blood-Retinal Barrier by Regulating Microglia via Inhibition of PI3K/Akt/Stat3/NF-κB Signaling Pathways in Experimental Diabetic Retinopathy. Front Immunol. 2022;13:831660. Published 2022 Mar 15. doi:10.3389/fimmu.2022.831660(IF:7.561)
[4] Xie H, Zhang C, Liu D, et al. Erythropoietin protects the inner blood-retinal barrier by inhibiting microglia phagocytosis via Src/Akt/cofilin signalling in experimental diabetic retinopathy. Diabetologia. 2021;64(1):211-225. doi:10.1007/s00125-020-05299-x(IF:7.518)
[5] Yue C, Yang Y, Song J, et al. Mitochondria-targeting near-infrared light-triggered thermosensitive liposomes for localized photothermal and photodynamic ablation of tumors combined with chemotherapy. Nanoscale. 2017;9(31):11103-11118. doi:10.1039/c7nr02193c(IF:7.367)
[6] Yu H, Yang X, Xiao X, et al. Human Adipose Mesenchymal Stem Cell-derived Exosomes Protect Mice from DSS-Induced Inflammatory Bowel Disease by Promoting Intestinal-stem-cell and Epithelial Regeneration. Aging Dis. 2021;12(6):1423-1437. Published 2021 Sep 1. doi:10.14336/AD.2021.0601(IF:6.745)
[7] Huang J, Liu Y, Chen JX, et al. Harmine is an effective therapeutic small molecule for the treatment of cardiac hypertrophy. Acta Pharmacol Sin. 2022;43(1):50-63. doi:10.1038/s41401-021-00639-y(IF:6.150)
[8] Wang X, Zhang R, Wu T, et al. Successive treatment with naltrexone induces epithelial-mesenchymal transition and facilitates the malignant biological behaviors of bladder cancer cells. Acta Biochim Biophys Sin (Shanghai). 2021;53(2):238-248. doi:10.1093/abbs/gmaa169(IF:3.848)
[9] Qu B, Han X, Zhao L, Zhang F, Gao Q. Relationship of HIF‑1α expression with apoptosis and cell cycle in bone marrow mesenchymal stem cells from patients with myelodysplastic syndrome. Mol Med Rep. 2022;26(1):239. doi:10.3892/mmr.2022.12755(IF:2.952)
[10] Fan W, Gao X, Ding C, et al. Estrogen receptors participate in carcinogenesis signaling pathways by directly regulating NOD-like receptors. Biochem Biophys Res Commun. 2019;511(2):468-475. doi:10.1016/j.bbrc.2019.02.085(IF:2.705)
[11] Feng Z, Zhu Z, Chen W, Bai Y, Hu D, Cheng J. Chloride intracellular channel 4 participate in the protective effect of Ginkgolide B in MPP+ injured MN9D cells: insight from proteomic analysis. Clin Proteomics. 2020;17:32. Published 2020 Sep 5. doi:10.1186/s12014-020-09295-6(IF:2.568)

产品信息

产品名称

货号

规格

价格（元）

促销价（元）

nnexin V- YSFluorTM 488/PI Apoptosis Detection Kit  

Annexin V- YSFluorTM 488/PI 细胞凋亡检测试剂盒  

40305ES20

20 T

518.00

388.00

40305ES50

50 T

1120.00

788.00

40305ES60

100 T

1960.00

1348.00

 

产品描述

Annexin V-YSFluorTM 488/PI细胞凋亡检测试剂盒（Annexin V-YSFluorTM 488/PI Apoptosis Detection Kit）是用YSFluorTM 488标记了的Annexin V作为探针，来检测细胞早期凋亡的发生，可用流式细胞仪或其他荧光检测设备进行检测。

其检测原理为：在正常的活细胞中，磷脂酰丝氨酸（phosphotidylserine，PS）位于细胞膜的内侧，但在早期凋亡的细胞中，PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。Annexin-Ⅴ（膜联蛋白-V）是一种分子量为35-36KD的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力结合。可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。

另外，本试剂盒中还提供了碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）用来区分存活的早期细胞和坏死或晚期凋亡细胞。PI是一种核酸染料，它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜，但可以透过凋亡晚期和坏死细胞的细胞膜而使细胞核染红。因此，将Annexin V与PI联合使用时，PI 则被排除在活细胞（Annexin V-/PI-）和早期凋亡细胞（Annexin V+/PI-）之外，而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被YSFluorTM 488 和PI 结合染色呈现双阳性（Annexin V+/PI+）。

 

产品组分

编号

组分

产品编号/规格

40305ES20（20T）

40305ES50（50T）

40305ES60（100T）

40305-A

Annexin V-YSFluorTM 488

100 μL

250 μL

500 μL

40305-B

PI Staining Solution (20 μg/mL)

200 μL

500 μL

1.0 mL

40305-C

1×Binding Buffer

10 mL

25 mL

50 mL

 

运输与保存方法

冰袋（wet ice）运输。-20 ℃避光长期保存，避免反复冻融，一年有效。

【注】：如果需要在短时间内多次重复使用，可以在 4 ℃避光保存，半年有效。

 

注意事项

1）由于细胞凋亡是一个快速的过程，建议样品在染色后1小时之内进行分析。

2）对于贴壁细胞，消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞，需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞。胰酶消化时间过短，细胞需要用力吹打才能脱落，容易造成细胞膜的损伤，PI摄入过多；消化时间过长，细胞膜同样易造成损伤，甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与Annexin V–YSFluorTM 488的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后，轻摇时胰酶与细胞充分接触，然后倒掉大部分胰酶，利用剩余的少量胰酶再消化一段时间，待细胞间空隙增大，瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA，EDTA会影响Annexin V与PS的结合。

3）如果样品来源于血液，请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS，能与Annexin V结合，从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。

4）试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

5）Annexin V-YSFluorTM 488和PI是光敏物质，在操作时请注意避光。

6）本产品仅作科研用途！

 

使用说明

1.1 样品染色

1. a）悬浮细胞：300 g，4℃离心5 min收集细胞。

b）贴壁细胞：用不含EDTA的胰酶消化后，300 g，4℃离心5 min收集细胞。胰酶消化时间不宜过长，以防引起假阳性。

2. 用4℃预冷的PBS洗涤细胞2次，每次均需300g，4℃离心5 min。

3. 吸弃PBS，加入100μL 1×Binding Buffer重悬细胞。

4. 加入5μL Annexin V-YSFluorTM 488和10 μL PI，轻轻混匀。

5. 避光、室温反应15 min。

6. 加入400 μL 1×Binding Buffer，混匀，样品在1小时内用流式细胞仪检测。

【注】：为了避免洗涤细胞时损失细胞，在吸液时可以用大的Tip头套上小的Tip头吸液。

1.2 流式细胞仪分析

YSFluorTM 488最大激发波长为488 nm，最大发射波长为519 nm；PI-DNA复合物的最大激发波长为535 nm，最大发射波长为615 nm。用CellQuest等软件进行分析，绘制双色散点图（two-color dot plot），YSFluorTM 488为横坐标，PI为纵坐标。每个样采集10,000 events。

1.3 荧光显微镜分析

1) 滴一滴用Annexin V-FITC/PI双染的细胞悬液于载玻片上，并用盖玻片盖上细胞。

2) 在荧光显微镜下用双色滤光片观察。Annexin V-FITC荧光信号呈绿色，PI荧光信号呈红色。

HB240313

 

Q:Annexin V 和JC-1、Tunel 细胞凋亡检测的区别？

A: Annexin V 是检测细胞早期凋亡的试剂，JC-1 是检测细胞中期凋亡的试剂、Tunel 是检测细胞晚期凋亡的试剂。

[1] Zhang M, Weng Y, Cao Z, et al. ROS-Activatable siRNA-Engineered Polyplex for NIR-Triggered Synergistic Cancer Treatment. ACS Appl Mater Interfaces. 2020;12(29):32289-32300. doi:10.1021/acsami.0c06614(IF:8.758)
[2] Duan Z , Luo Q , Gu L , et al. A co-delivery nanoplatform for a lignan-derived compound and perfluorocarbon tuning IL-25 secretion and the oxygen level in tumor microenvironments for meliorative tumor radiotherapy. Nanoscale. 2021;13(32):13681-13692. doi:10.1039/d1nr03738b(IF:7.790)
[3] Tang L, Zhang C, Lu L, et al. Melatonin Maintains Inner Blood-Retinal Barrier by Regulating Microglia via Inhibition of PI3K/Akt/Stat3/NF-κB Signaling Pathways in Experimental Diabetic Retinopathy. Front Immunol. 2022;13:831660. Published 2022 Mar 15. doi:10.3389/fimmu.2022.831660(IF:7.561)
[4] Xie H, Zhang C, Liu D, et al. Erythropoietin protects the inner blood-retinal barrier by inhibiting microglia phagocytosis via Src/Akt/cofilin signalling in experimental diabetic retinopathy. Diabetologia. 2021;64(1):211-225. doi:10.1007/s00125-020-05299-x(IF:7.518)
[5] Yue C, Yang Y, Song J, et al. Mitochondria-targeting near-infrared light-triggered thermosensitive liposomes for localized photothermal and photodynamic ablation of tumors combined with chemotherapy. Nanoscale. 2017;9(31):11103-11118. doi:10.1039/c7nr02193c(IF:7.367)
[6] Yu H, Yang X, Xiao X, et al. Human Adipose Mesenchymal Stem Cell-derived Exosomes Protect Mice from DSS-Induced Inflammatory Bowel Disease by Promoting Intestinal-stem-cell and Epithelial Regeneration. Aging Dis. 2021;12(6):1423-1437. Published 2021 Sep 1. doi:10.14336/AD.2021.0601(IF:6.745)
[7] Huang J, Liu Y, Chen JX, et al. Harmine is an effective therapeutic small molecule for the treatment of cardiac hypertrophy. Acta Pharmacol Sin. 2022;43(1):50-63. doi:10.1038/s41401-021-00639-y(IF:6.150)
[8] Wang X, Zhang R, Wu T, et al. Successive treatment with naltrexone induces epithelial-mesenchymal transition and facilitates the malignant biological behaviors of bladder cancer cells. Acta Biochim Biophys Sin (Shanghai). 2021;53(2):238-248. doi:10.1093/abbs/gmaa169(IF:3.848)
[9] Qu B, Han X, Zhao L, Zhang F, Gao Q. Relationship of HIF‑1α expression with apoptosis and cell cycle in bone marrow mesenchymal stem cells from patients with myelodysplastic syndrome. Mol Med Rep. 2022;26(1):239. doi:10.3892/mmr.2022.12755(IF:2.952)
[10] Fan W, Gao X, Ding C, et al. Estrogen receptors participate in carcinogenesis signaling pathways by directly regulating NOD-like receptors. Biochem Biophys Res Commun. 2019;511(2):468-475. doi:10.1016/j.bbrc.2019.02.085(IF:2.705)
[11] Feng Z, Zhu Z, Chen W, Bai Y, Hu D, Cheng J. Chloride intracellular channel 4 participate in the protective effect of Ginkgolide B in MPP+ injured MN9D cells: insight from proteomic analysis. Clin Proteomics. 2020;17:32. Published 2020 Sep 5. doi:10.1186/s12014-020-09295-6(IF:2.568)

TUNEL Apoptosis Detection Kit (YSFluorTM 640) TUNEL细胞凋亡检测试剂盒（YSFluorTM 640）

发表于由

TUNEL Apoptosis Detection Kit (YSFluorTM 640) TUNEL细胞凋亡检测试剂盒（YSFluorTM 640）

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格（元）

促销价格（元）

TUNEL Apoptosis Detection Kit (YSFluorTM 640)

TUNEL细胞凋亡检测试剂盒（YSFluorTM 640）

40308ES20

20 T

1250.00

1188.00

40308ES50

50 T

3080.00

2928.00

40308ES60

100 T

4800.00

4318.00

 

产品描述

细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现180-200 bp的DNA ladder。 

TUNEL (TdT mediated dUTP Nick End Labeling) 细胞凋亡检测试剂盒（YSFluorTM 640）可以用来检测组织细胞在凋亡晚期过程中细胞核DNA的断裂情况。其原理是在末端脱氧核糖核苷酸转移酶（Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT）的作用下，在基因组DNA断裂时暴露出的3´-羟基（3´-OH）末端掺入YSFluorTM 640-12-dUTP，从而可以用荧光显微镜或流式细胞仪检测。YSFluorTM 640为红色荧光染料，具有很高的稳定性和很强的亮度。

本试剂盒应用范围广，可以用于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况，也可以检测培养的贴壁细胞或悬浮细胞的凋亡情况。

 

产品组分

编号

组分

产品编号/规格

40308ES20（20 T）

40308ES50（50 T）

40308ES60（100 T）

40308-A

5×Equilibration Buffer

750 μL

1.25 mL×2

1.25 mL ×3

40308-B

YSFluorTM 640-12-dUTP Labeling Mix

100 μL

250 μL

250 μL×2

40308-C

Recombinant TdT Enzyme

20 μL

50 μL

50 μL×2

40308-D

Proteinase K(2 mg/mL)

40 μL

100 μL

100 μL×2

40308-E

DNase I (1 U/ μL)

5 μL

12 μL

25 μL

40308-F

10 × DNase I Buffer with MgCl2

100 μL

250 μL

500 μL

 

运输与保存方法

冰袋（wet ice）运输。

本试剂盒储存在-20℃，YSFluorTM 640-12-dUTP Labeling Mix避光储存于-20℃，保质期为1年。

 

注意事项

1）需自备用于洗涤细胞的PBS，用于封片的抗荧光淬灭封片液，用于固定的4%多聚甲醛。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

3）本产品仅作科研用途！

 

操作步骤

一、样品准备

A. 石蜡包埋组织切片

1）室温下将石蜡组织切片放入二甲苯中浸泡5 min，重复一次，以彻底脱掉石蜡。

2）室温下用100%乙醇浸泡切片5 min，重复一次。

3）室温下用梯度乙醇（90、80、70%）各浸洗1次，每次3 min。

4）用PBS浸泡润洗切片，并用滤纸小心吸干玻片上样本周围多余的液体。这时，可用石蜡笔或疏水笔在样品周围描绘样品分布的轮廓，便于下游透性处理和平衡标记操作。在实验过程中，切勿让样品干燥，处理好的样本放在湿盒中保持湿润。

5）按1:100的比例，用PBS稀释2 mg/mL的Proteinase K溶液，使其终浓度为20 μg/mL。

6）每个样本上滴加100 μL浓度为20 μg/mL的Proteinase K溶液，使其被全部覆盖，室温孵育20 min。【注】：Proteinase K帮助组织和细胞对后续步骤的染色试剂通透。孵育时间过长会增加组织切片在后续洗涤步骤中从载波片上脱落的风险，过短则可能造成透性处理不充分，影响标记效率。未得到更好的结果，可能需要优化Proteinase K孵育的时间。

7）用PBS溶液润洗样本2-3次，轻轻去掉多余液体，并用滤纸小心吸干载玻片上样本周围的液体。处理后的样本放在湿盒中保持湿润。

B. 组织冰冻切片

1）取出冰冻切片，并回温至室温。将玻片浸没在4%多聚甲醛溶液（溶于PBS）中固定，室温下孵育30 min。

2）轻轻去掉多余液体，并用滤纸小心吸干玻片上样本周围多余的液体。

3）将玻片浸没在PBS溶液中，室温孵育15 min，重复用PBS清洗1次，共2次。

4）轻轻去掉多余液体，并用滤纸小心吸干玻片上样本周围多余的液体。这时，可用石蜡笔或疏水笔在样品周围描绘样品分布的轮廓，便于下游透性处理和平衡标记操作。在实验过程中，切勿让样品干燥，处理好的样本放在湿盒中保持湿润。

5）按1:100的比例，用PBS作为稀释液来稀释2 mg/mL的Proteinase K溶液，使其终浓度为20 μg/mL。

6）每个样本上滴加100 μL浓度为20 μg/mL的Proteinase K溶液，使其被全部覆盖，室温孵育10 min。【注】：Proteinase K帮助组织和细胞对后续步骤的染色试剂通透。孵育时间过长会增加组织切片在后续洗涤步骤中从载波片上脱落的风险，过短则可能造成透性处理不充分，影响标记效率。未得到更好的结果，可能需要优化Proteinase K孵育的时间。

7）于盛有PBS溶液的敞口烧杯中浸没清洗样本2-3次。

【注】：为了避免在清洗步骤中的样本脱片损失，建议不用洗瓶清洗，而是将玻片浸在PBS溶液中2-3次进行清洗。

8）轻轻去掉多余液体，并用滤纸小心吸干载玻片上样本周围的液体。处理后的样本放在湿盒中保持湿润。

C. 细胞样品

【细胞爬片的准备】：在Lab-Tek载波片小室（Chamber Slides）上培养贴壁细胞。在凋亡诱导处理之后，用PBS洗2遍载玻片。

【细胞涂片的制备（以多聚赖氨酸包被的载玻片为例）】

多聚赖氨酸包被的载玻片的准备：吸取50-100 μL 0.01%(w/v)多聚赖氨酸水溶液滴至每一片预清洗过的玻璃载玻片的表面。在将要用于固定细胞的区域将多聚赖氨酸溶液涂散为一薄层。待载玻片晾干之后，迅速用去离子水漂洗，然后让包被后的载玻片在空气中晾干30-60 min。包被后的载玻片能在室温储存数月。以约2×107个细胞/mL的浓度将细胞重悬于PBS中，吸取50-100 μL细胞悬液滴于多聚赖氨酸包被的载玻片上，用一片干净的载玻片轻柔的涂开细胞悬液。

按照以下步骤对细胞样品进行处理：

1）固定细胞，将载玻片浸入装有4%新鲜配制于PBS中的多聚甲醛的染色缸中，在4℃放置25 min。

2）洗涤载玻片，将其浸入PBS中，室温放置5 min。重复用PBS洗一次。

3）轻轻去掉多余液体，并用滤纸小心吸干玻片上样本周围多余的液体。这时，可用石蜡笔或疏水笔在样品周围描绘样品分布的轮廓，便于下游透性处理和平衡标记操作。在实验过程中，切勿让样品干燥，处理好的样本放在湿盒中保持湿润。

4）按1:100的比例，用PBS作为稀释液来稀释2 mg/mL的Proteinase K溶液，使其终浓度为20 μg/mL。

5）每个样本上滴加100 μL浓度为20 μg/mL的Proteinase K溶液，使其被全部覆盖，室温孵育5 min（也可浸于0.2%配制于PBS中的Triton X-100溶液中，室温孵育5 min进行通透处理）。【注】：Proteinase K帮助组织和细胞对后续步骤的染色试剂通透。孵育时间过长会增加组织切片在后续洗涤步骤中从载波片上脱落的风险，过短则可能造成透性处理不充分，影响标记效率。未得到更好的结果，可能需要优化Proteinase K孵育的时间。

6）PBS润洗样本2-3次。轻轻去掉多余液体，并用滤纸小心吸干载玻片上样本周围的液体。处理后的样本放在湿盒中。

二、DNA酶处理阳性对照的步骤

在样本通透处理后，用DNA酶I处理细胞来准备阳性对照载玻片。该流程通常会引起被处理的大多数细胞显现荧光。

【注】：DNA酶I处理固定的细胞会引起染色体DNA的断裂，产生许多可标记的DNA 3’-末端。

1） 按1:10的比例用去离子水稀释10×DNase I Buffer(每个样本需用200 µL 1×DNase I Buffer，即需要用20 µL 10×DNase I Buffer和180 µL去离子水混合稀释)，取其中100 µL滴加到已通透的样本上，室温孵育5min。向剩余100 μL 1×DNase I Buffer中加1 μL DNase I (1U/ μL)，使其终浓度为10 U/mL。

2）轻轻叩掉液体，加入100 μL含10U/mL DNase I 的缓冲液，室温孵育10 min。

3）轻叩载玻片，去掉多余的液体，并将载玻片在装有去离子水的染色缸中彻底洗3-4次。

【注】：阳性对照载玻片必须使用单独的染色缸，否则阳性对照载玻片上残余的DNase I 可能会在实验载玻片上引入高背景。

三、标记与检测

1）按1:5的比例用去离子水稀释5×Equilibration Buffer（每个样品需要100 μL 1×Equilibration Buffer）。

2）每个样本滴加100 μL 1×Equilibration Buffer使其全部覆盖待检样本区域，室温孵育10-30 min。或者将载玻片放入一个含1×Equilibration Buffer的缸中，保证缓冲液没过样本。在平衡细胞的同时在冰上解冻YSFluorTM 640-12-dUTP Labeling Mix，

并且依照表1，准备足够量的用于所有实验的和可选阳性对照反应的TdT孵育缓冲液。对于面积小于5 cm2的一个标准反应，其体积是50 μL，用50 μL乘以实验和阳性对照反应的数目来确定所需TdT孵育缓冲液的总体积。对于表面积更大的样本，可成比例的增大试剂体积。

表1.准备用于实验的和可选阳性对照反应的TdT孵育缓冲液

组分

体积（ μL/50 μL体系）

ddH2O

34

5×Equilibration Buffer

10

YSFluorTM 640-12-dUTP Labeling Mix

5

Recombinant TdT Enzyme

1

阴性对照体系：准备一份不含TdT酶的对照孵育缓冲液，用ddH2O替代TdT酶。

3）在平衡后的区域周围用吸水纸洗掉100 μL 1×Equilibration Buffer中的大部分，然后在5cm2面积的细胞上加入50 μL TdT孵育缓冲液。不要让细胞干掉。这之后的操作，载玻片要避光。

4）把塑料盖玻片（或封口膜）盖在细胞上以保证试剂的平均分布，在湿盒的底部放上用水浸湿的纸巾。将载玻片置于湿盒内，在37℃孵育60 min。将湿盒用铝箔纸包裹以避光。

【注】：塑料盖玻片在使用前可以切成两半。折起盖玻片的边缘以便于移除和操作。

5）移除塑料盖玻片（或封口膜），并将切片置于PBS溶液中室温孵育5 min，换用新鲜PBS重复2次。

6） 用滤纸轻轻擦掉样本周围及背面的PBS溶液。【注】：为了降低背景，载玻片在用PBS洗一遍后，可再用含0.1% Triton X-100和5 mg/mL BSA的PBS洗3次，每次5 min，这样游离的未反应的标记物可以清除较干净。

7）样本在染色缸中染色，在黑暗中将载玻片浸入装有DAPI溶液的染色缸，室温放置5 min。DAPI溶液用PBS新鲜配制并稀释到2 μg/mL。

8）洗涤样本，将载玻片浸入去离子水中，室温放置5min。重复两次，总共洗三次。

9）擦干载玻片上多余的水并向样品区域加100 μL PBS保持样品湿润。

10）立即在荧光显微镜下分析样本，在620 nm下检测YSFluorTM 640红色荧光，在460 nm观察蓝色的DAPI。DAPI能将凋亡和未凋亡的细胞都染成蓝色，只在凋亡的细胞核中才有YSFluorTM 640-12-dUTP掺入而定位的红色荧光。如有必要，载玻片能在4℃黑暗条件下存放过夜。

四、利用流式细胞术检测悬浮细胞

1）将3-5×106个细胞用PBS洗两次，每次在4℃，300×g离心10 min，然后重悬在0.5 mL PBS中。

2）固定细胞，加入5 mL 1%配制于PBS中的多聚甲醛溶液，冰上放置20 min。

3）细胞在4℃，300×g离心10 min，去上清并且重悬于5 mLPBS。重复洗一次，并用0.5 mLPBS重悬细胞。

4）通透细胞，加入5 mL冰上预冷的70%乙醇，在-20℃孵育4小时。细胞能在70%乙醇中-20℃条件下保存一周，或者，细胞可用配制于PBS中的0.2% Triton X-100溶液通透，室温放置5 min。

5）细胞在300×g离心10 min，并用5 mL PBS重悬。重复离心，并于1 mL PBS重悬。

6）转移2×106个细胞至一个1.5 mL的微量离心管。

7）300×g离心10 min，去上清，并用80 μL 1×Equilibration Buffer重悬。室温孵育5 min。

8）在平衡细胞的同时，在冰上融解YSFluorTM 640-12-dUTP Labeling Mix，并且依照表1，准备足够量的用于所有反应的TdT孵育缓冲液。对于2×106个细胞的一个标准反应，其体积是50 μL，用50 μL乘上反应数目来确定所需TdT孵育缓冲液的总体积。

9）细胞在300×g离心10min，去上清并把沉淀重悬在50 μL TdT孵育缓冲液中，37℃孵育60 min，避光。每隔15 min用微量移液器轻轻重悬细胞。

10）加入1 mL 20 mM EDTA终止反应，用微量移液器轻柔混匀。

11）300×g离心10 min，去上清并把沉淀重悬在1 mL配制于PBS中的0.1% Triton X-100溶液，其中含5 mg/mL BSA，重复一次，总共洗2次。

12）用流式细胞仪分析细胞，测量620 nm的YSFluorTM 640红色荧光。

HB240313

 

Q：血管内皮细胞，想要免疫荧光和 TUNEL 同时进行，不知道该先做哪个? TUNEL 要求立即检测？

A：先做 TUNEL，再进行免疫荧光，这个主要是怕免疫荧光对 TdT 酶产生影响。只要避光保存就可以不立即进行检测。

Q：感觉 DNA 染的有点弥散状，核定位的效果也不是很好，是染色时间太久？感觉细胞质中也像是染到了？

A：有非特异性染色，可能是因为时间太久或者是试剂浓度太高导致的。建议降低染色液浓度或减少染色时间。

[1] Sun X, Peng X, Cao Y, Zhou Y, Sun Y. ADNP promotes neural differentiation by modulating Wnt/β-catenin signaling. Nat Commun. 2020;11(1):2984. Published 2020 Jun 12. doi:10.1038/s41467-020-16799-0(IF:11.614)
[2] Zhu M, Zhang P, Yu S, et al. Targeting ZFP64/GAL-1 axis promotes therapeutic effect of nab-paclitaxel and reverses immunosuppressive microenvironment in gastric cancer. J Exp Clin Cancer Res. 2022;41(1):14. Published 2022 Jan 7. doi:10.1186/s13046-021-02224-x(IF:11.161)
[3] Zhang HT, Gui T, Liu RX, et al. Sequential targeting of YAP1 and p21 enhances the elimination of senescent cells induced by the BET inhibitor JQ1. Cell Death Dis. 2021;12(1):121. Published 2021 Jan 25. doi:10.1038/s41419-021-03416-1(IF:8.469)
[4] Chen YJ, Hong WF, Liu ML, et al. An integrated bioinformatic investigation of mitochondrial solute carrier family 25 (SLC25) in colon cancer followed by preliminary validation of member 5 (SLC25A5) in tumorigenesis. Cell Death Dis. 2022;13(3):237. Published 2022 Mar 14. doi:10.1038/s41419-022-04692-1(IF:8.469)
[5] Xun Y, Zhou P, Yang Y, et al. Role of Nox4 in High Calcium-Induced Renal Oxidative Stress Damage and Crystal Deposition. Antioxid Redox Signal. 2022;36(1-3):15-38. doi:10.1089/ars.2020.8159(IF:8.401)
[6] Yu W, Zong S, Zhou P, et al. Cochlear Marginal Cell Pyroptosis Is Induced by Cisplatin via NLRP3 Inflammasome Activation. Front Immunol. 2022;13:823439. Published 2022 Apr 20. doi:10.3389/fimmu.2022.823439(IF:7.561)
[7] Duan X, Huang Y, Chen X, et al. Moderate DNA hypomethylation suppresses intestinal tumorigenesis by promoting caspase-3 expression and apoptosis. Oncogenesis. 2021;10(5):38. Published 2021 May 4. doi:10.1038/s41389-021-00328-9(IF:7.485)
[8] Huang Y, Ma J, Meng Y, et al. Exposure to Oxadiazon-Butachlor causes cardiac toxicity in zebrafish embryos. Environ Pollut. 2020;265(Pt A):114775. doi:10.1016/j.envpol.2020.114775(IF:6.793)
[9] Qiang W, Shen T, Noman M, et al. Fibroblast Growth Factor 21 Augments Autophagy and Reduces Apoptosis in Damaged Liver to Improve Tissue Regeneration in Zebrafish. Front Cell Dev Biol. 2021;9:756743. Published 2021 Oct 22. doi:10.3389/fcell.2021.756743(IF:6.684)
[10] Wu Y, Zhang J, Li C, et al. The Activation of ROS/NF-κB/MMP-9 Pathway Promotes Calcium-Induced Kidney Crystal Deposition. Oxid Med Cell Longev. 2021;2021:8836355. Published 2021 Jun 8. doi:10.1155/2021/8836355(IF:6.543)
[11] Jiang S, Zhang Z, Huang F, et al. Protective Effect of Low Molecular Weight Peptides from Solenocera crassicornis Head against Cyclophosphamide-Induced Nephrotoxicity in Mice via the Keap1/Nrf2 Pathway. Antioxidants (Basel). 2020;9(8):745. Published 2020 Aug 13. doi:10.3390/antiox9080745(IF:6.313)
[12] Yang P, Yang Y, He X, et al. miR-153-3p Targets βII Spectrin to Regulate Formaldehyde-Induced Cardiomyocyte Apoptosis. Front Cardiovasc Med. 2021;8:764831. Published 2021 Dec 15. doi:10.3389/fcvm.2021.764831(IF:6.050)
[13] Chen YJ, Song HY, Zhang ZW, Chen Q, Tang ZP, Gu M. Extracts of Vine Tea Improve Diet-Induced Non-Alcoholic Steatohepatitis Through AMPK-LXRα Signaling. Front Pharmacol. 2021;12:711763. Published 2021 Jul 30. doi:10.3389/fphar.2021.711763(IF:5.811)
[14] Gong F, Shen T, Zhang J, et al. Nitazoxanide induced myocardial injury in zebrafish embryos by activating oxidative stress response. J Cell Mol Med. 2021;25(20):9740-9752. doi:10.1111/jcmm.16922(IF:5.310)
[15] Zhu D, Wang Z, Zhang G, et al. Periostin promotes nucleus pulposus cells apoptosis by activating the Wnt/β-catenin signaling pathway. FASEB J. 2022;36(7):e22369. doi:10.1096/fj.202200123R(IF:5.192)
[16] Xu H, Qu C, Gan L, et al. Deletion of the Impg2 gene causes the degeneration of rod and cone cells in mice. Hum Mol Genet. 2020;29(10):1624-1634. doi:10.1093/hmg/ddaa062(IF:5.101)
[17] Li Q, Qin M, Tan Q, et al. MicroRNA-129-1-3p protects cardiomyocytes from pirarubicin-induced apoptosis by down-regulating the GRIN2D-mediated Ca2+ signalling pathway. J Cell Mol Med. 2020;24(3):2260-2271. doi:10.1111/jcmm.14908(IF:4.486)
[18] Wen Y, Zong S, Liu T, Du P, Li H, Xiao H. Tauroursodeoxycholic acid attenuates cisplatin-induced ototoxicity by inhibiting the accumulation and aggregation of unfolded or misfolded proteins in the endoplasmic reticulum. Toxicology. 2021;453:152736. doi:10.1016/j.tox.2021.152736(IF:4.221)
[19] Meng Y, Yin Q, Ma Q, et al. FXII regulates the formation of deep vein thrombosis via the PI3K/AKT signaling pathway in mice. Int J Mol Med. 2021;47(5):87. doi:10.3892/ijmm.2021.4920(IF:4.101)
[20] Jin S, Yang L, Meng C, et al. Sequential Epiphyseal Cartilage Changes of Femoral Heads in C57BL/6 Female Mice Treated with Excessive Glucocorticoids. Cartilage. 2021;13(2_suppl):453S-464S. doi:10.1177/1947603520978574(IF:3.857)
[21] Feng Y, Lei B, Zhang H, et al. MicroRNA-136-5p from Endothelial Progenitor Cells-released Extracellular Vesicles Mediates TXNIP to Promote the Dissolution of Deep Venous Thrombosis. Shock. 2022;57(5):714-721. doi:10.1097/SHK.0000000000001920(IF:3.454)
[22] Wang H, He F, Liang B, et al. p53-Dependent LincRNA-p21 Protects Against Proliferation and Anti-apoptosis of Vascular Smooth Muscle Cells in Atherosclerosis by Upregulating SIRT7 via MicroRNA-17-5p. J Cardiovasc Transl Res. 2021;14(3):426-440. doi:10.1007/s12265-020-10074-9(IF:3.312)
[23] Liu Q, Xu X, Sun W. Down-regulated HSA_circ_0003528 inhibits hepatocellular carcinoma aggressiveness via the miR-212-3p/XIAP axis. Bioengineered. 2022;13(4):11269-11280. doi:10.1080/21655979.2022.2066046(IF:3.269)
[24] Xu J, Zhang B, Chu Z, Jiang F, Han J. Wogonin Alleviates Cisplatin-induced Cardiotoxicity in Mice Via Inhibiting Gasdermin D-mediated Pyroptosis. J Cardiovasc Pharmacol. 2021;78(4):597-603. Published 2021 Jun 16. doi:10.1097/FJC.0000000000001085(IF:3.105)
[25] Wang S, Zeng X, Yang Y, et al. Hypothermic oxygenated perfusion ameliorates ischemia-reperfusion injury of fatty liver in mice via Brg1/Nrf2/HO-1 axis. Artif Organs. 2022;46(2):229-238. doi:10.1111/aor.14076(IF:3.094)
[26] Xie WJ, Hou G, Wang L, Wang SS, Xiong XX. Astaxanthin suppresses lipopolysaccharide‑induced myocardial injury by regulating MAPK and PI3K/AKT/mTOR/GSK3β signaling. Mol Med Rep. 2020;22(4):3338-3346. doi:10.3892/mmr.2020.11443(IF:2.952)
[27] Zhang Y, Li Q, Xu D, et al. Idarubicin-induced oxidative stress and apoptosis in cardiomyocytes: An in vitro molecular approach. Hum Exp Toxicol. 2021;40(12_suppl):S553-S562. doi:10.1177/09603271211033774(IF:2.903)
[28] Li Q, Qin M, Li T, et al. Rutin protects against pirarubicin-induced cardiotoxicity by adjusting microRNA-125b-1-3p-mediated JunD signaling pathway. Mol Cell Biochem. 2020;466(1-2):139-148. doi:10.1007/s11010-020-03696-9(IF:2.795)

产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格（元）

促销价格（元）

TUNEL Apoptosis Detection Kit (YSFluorTM 640)

TUNEL细胞凋亡检测试剂盒（YSFluorTM 640）

40308ES20

20 T

1250.00

1188.00

40308ES50

50 T

3080.00

2928.00

40308ES60

100 T

4800.00

4318.00

 

产品描述

细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现180-200 bp的DNA ladder。 

TUNEL (TdT mediated dUTP Nick End Labeling) 细胞凋亡检测试剂盒（YSFluorTM 640）可以用来检测组织细胞在凋亡晚期过程中细胞核DNA的断裂情况。其原理是在末端脱氧核糖核苷酸转移酶（Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT）的作用下，在基因组DNA断裂时暴露出的3´-羟基（3´-OH）末端掺入YSFluorTM 640-12-dUTP，从而可以用荧光显微镜或流式细胞仪检测。YSFluorTM 640为红色荧光染料，具有很高的稳定性和很强的亮度。

本试剂盒应用范围广，可以用于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况，也可以检测培养的贴壁细胞或悬浮细胞的凋亡情况。

 

产品组分

编号

组分

产品编号/规格

40308ES20（20 T）

40308ES50（50 T）

40308ES60（100 T）

40308-A

5×Equilibration Buffer

750 μL

1.25 mL×2

1.25 mL ×3

40308-B

YSFluorTM 640-12-dUTP Labeling Mix

100 μL

250 μL

250 μL×2

40308-C

Recombinant TdT Enzyme

20 μL

50 μL

50 μL×2

40308-D

Proteinase K(2 mg/mL)

40 μL

100 μL

100 μL×2

40308-E

DNase I (1 U/ μL)

5 μL

12 μL

25 μL

40308-F

10 × DNase I Buffer with MgCl2

100 μL

250 μL

500 μL

 

运输与保存方法

冰袋（wet ice）运输。

本试剂盒储存在-20℃，YSFluorTM 640-12-dUTP Labeling Mix避光储存于-20℃，保质期为1年。

 

注意事项

1）需自备用于洗涤细胞的PBS，用于封片的抗荧光淬灭封片液，用于固定的4%多聚甲醛。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

3）本产品仅作科研用途！

 

操作步骤

一、样品准备

A. 石蜡包埋组织切片

1）室温下将石蜡组织切片放入二甲苯中浸泡5 min，重复一次，以彻底脱掉石蜡。

2）室温下用100%乙醇浸泡切片5 min，重复一次。

3）室温下用梯度乙醇（90、80、70%）各浸洗1次，每次3 min。

4）用PBS浸泡润洗切片，并用滤纸小心吸干玻片上样本周围多余的液体。这时，可用石蜡笔或疏水笔在样品周围描绘样品分布的轮廓，便于下游透性处理和平衡标记操作。在实验过程中，切勿让样品干燥，处理好的样本放在湿盒中保持湿润。

5）按1:100的比例，用PBS稀释2 mg/mL的Proteinase K溶液，使其终浓度为20 μg/mL。

6）每个样本上滴加100 μL浓度为20 μg/mL的Proteinase K溶液，使其被全部覆盖，室温孵育20 min。【注】：Proteinase K帮助组织和细胞对后续步骤的染色试剂通透。孵育时间过长会增加组织切片在后续洗涤步骤中从载波片上脱落的风险，过短则可能造成透性处理不充分，影响标记效率。未得到更好的结果，可能需要优化Proteinase K孵育的时间。

7）用PBS溶液润洗样本2-3次，轻轻去掉多余液体，并用滤纸小心吸干载玻片上样本周围的液体。处理后的样本放在湿盒中保持湿润。

B. 组织冰冻切片

1）取出冰冻切片，并回温至室温。将玻片浸没在4%多聚甲醛溶液（溶于PBS）中固定，室温下孵育30 min。

2）轻轻去掉多余液体，并用滤纸小心吸干玻片上样本周围多余的液体。

3）将玻片浸没在PBS溶液中，室温孵育15 min，重复用PBS清洗1次，共2次。

4）轻轻去掉多余液体，并用滤纸小心吸干玻片上样本周围多余的液体。这时，可用石蜡笔或疏水笔在样品周围描绘样品分布的轮廓，便于下游透性处理和平衡标记操作。在实验过程中，切勿让样品干燥，处理好的样本放在湿盒中保持湿润。

5）按1:100的比例，用PBS作为稀释液来稀释2 mg/mL的Proteinase K溶液，使其终浓度为20 μg/mL。

6）每个样本上滴加100 μL浓度为20 μg/mL的Proteinase K溶液，使其被全部覆盖，室温孵育10 min。【注】：Proteinase K帮助组织和细胞对后续步骤的染色试剂通透。孵育时间过长会增加组织切片在后续洗涤步骤中从载波片上脱落的风险，过短则可能造成透性处理不充分，影响标记效率。未得到更好的结果，可能需要优化Proteinase K孵育的时间。

7）于盛有PBS溶液的敞口烧杯中浸没清洗样本2-3次。

【注】：为了避免在清洗步骤中的样本脱片损失，建议不用洗瓶清洗，而是将玻片浸在PBS溶液中2-3次进行清洗。

8）轻轻去掉多余液体，并用滤纸小心吸干载玻片上样本周围的液体。处理后的样本放在湿盒中保持湿润。

C. 细胞样品

【细胞爬片的准备】：在Lab-Tek载波片小室（Chamber Slides）上培养贴壁细胞。在凋亡诱导处理之后，用PBS洗2遍载玻片。

【细胞涂片的制备（以多聚赖氨酸包被的载玻片为例）】

多聚赖氨酸包被的载玻片的准备：吸取50-100 μL 0.01%(w/v)多聚赖氨酸水溶液滴至每一片预清洗过的玻璃载玻片的表面。在将要用于固定细胞的区域将多聚赖氨酸溶液涂散为一薄层。待载玻片晾干之后，迅速用去离子水漂洗，然后让包被后的载玻片在空气中晾干30-60 min。包被后的载玻片能在室温储存数月。以约2×107个细胞/mL的浓度将细胞重悬于PBS中，吸取50-100 μL细胞悬液滴于多聚赖氨酸包被的载玻片上，用一片干净的载玻片轻柔的涂开细胞悬液。

按照以下步骤对细胞样品进行处理：

1）固定细胞，将载玻片浸入装有4%新鲜配制于PBS中的多聚甲醛的染色缸中，在4℃放置25 min。

2）洗涤载玻片，将其浸入PBS中，室温放置5 min。重复用PBS洗一次。

3）轻轻去掉多余液体，并用滤纸小心吸干玻片上样本周围多余的液体。这时，可用石蜡笔或疏水笔在样品周围描绘样品分布的轮廓，便于下游透性处理和平衡标记操作。在实验过程中，切勿让样品干燥，处理好的样本放在湿盒中保持湿润。

4）按1:100的比例，用PBS作为稀释液来稀释2 mg/mL的Proteinase K溶液，使其终浓度为20 μg/mL。

5）每个样本上滴加100 μL浓度为20 μg/mL的Proteinase K溶液，使其被全部覆盖，室温孵育5 min（也可浸于0.2%配制于PBS中的Triton X-100溶液中，室温孵育5 min进行通透处理）。【注】：Proteinase K帮助组织和细胞对后续步骤的染色试剂通透。孵育时间过长会增加组织切片在后续洗涤步骤中从载波片上脱落的风险，过短则可能造成透性处理不充分，影响标记效率。未得到更好的结果，可能需要优化Proteinase K孵育的时间。

6）PBS润洗样本2-3次。轻轻去掉多余液体，并用滤纸小心吸干载玻片上样本周围的液体。处理后的样本放在湿盒中。

二、DNA酶处理阳性对照的步骤

在样本通透处理后，用DNA酶I处理细胞来准备阳性对照载玻片。该流程通常会引起被处理的大多数细胞显现荧光。

【注】：DNA酶I处理固定的细胞会引起染色体DNA的断裂，产生许多可标记的DNA 3’-末端。

1） 按1:10的比例用去离子水稀释10×DNase I Buffer(每个样本需用200 µL 1×DNase I Buffer，即需要用20 µL 10×DNase I Buffer和180 µL去离子水混合稀释)，取其中100 µL滴加到已通透的样本上，室温孵育5min。向剩余100 μL 1×DNase I Buffer中加1 μL DNase I (1U/ μL)，使其终浓度为10 U/mL。

2）轻轻叩掉液体，加入100 μL含10U/mL DNase I 的缓冲液，室温孵育10 min。

3）轻叩载玻片，去掉多余的液体，并将载玻片在装有去离子水的染色缸中彻底洗3-4次。

【注】：阳性对照载玻片必须使用单独的染色缸，否则阳性对照载玻片上残余的DNase I 可能会在实验载玻片上引入高背景。

三、标记与检测

1）按1:5的比例用去离子水稀释5×Equilibration Buffer（每个样品需要100 μL 1×Equilibration Buffer）。

2）每个样本滴加100 μL 1×Equilibration Buffer使其全部覆盖待检样本区域，室温孵育10-30 min。或者将载玻片放入一个含1×Equilibration Buffer的缸中，保证缓冲液没过样本。在平衡细胞的同时在冰上解冻YSFluorTM 640-12-dUTP Labeling Mix，

并且依照表1，准备足够量的用于所有实验的和可选阳性对照反应的TdT孵育缓冲液。对于面积小于5 cm2的一个标准反应，其体积是50 μL，用50 μL乘以实验和阳性对照反应的数目来确定所需TdT孵育缓冲液的总体积。对于表面积更大的样本，可成比例的增大试剂体积。

表1.准备用于实验的和可选阳性对照反应的TdT孵育缓冲液

组分

体积（ μL/50 μL体系）

ddH2O

34

5×Equilibration Buffer

10

YSFluorTM 640-12-dUTP Labeling Mix

5

Recombinant TdT Enzyme

1

阴性对照体系：准备一份不含TdT酶的对照孵育缓冲液，用ddH2O替代TdT酶。

3）在平衡后的区域周围用吸水纸洗掉100 μL 1×Equilibration Buffer中的大部分，然后在5cm2面积的细胞上加入50 μL TdT孵育缓冲液。不要让细胞干掉。这之后的操作，载玻片要避光。

4）把塑料盖玻片（或封口膜）盖在细胞上以保证试剂的平均分布，在湿盒的底部放上用水浸湿的纸巾。将载玻片置于湿盒内，在37℃孵育60 min。将湿盒用铝箔纸包裹以避光。

【注】：塑料盖玻片在使用前可以切成两半。折起盖玻片的边缘以便于移除和操作。

5）移除塑料盖玻片（或封口膜），并将切片置于PBS溶液中室温孵育5 min，换用新鲜PBS重复2次。

6） 用滤纸轻轻擦掉样本周围及背面的PBS溶液。【注】：为了降低背景，载玻片在用PBS洗一遍后，可再用含0.1% Triton X-100和5 mg/mL BSA的PBS洗3次，每次5 min，这样游离的未反应的标记物可以清除较干净。

7）样本在染色缸中染色，在黑暗中将载玻片浸入装有DAPI溶液的染色缸，室温放置5 min。DAPI溶液用PBS新鲜配制并稀释到2 μg/mL。

8）洗涤样本，将载玻片浸入去离子水中，室温放置5min。重复两次，总共洗三次。

9）擦干载玻片上多余的水并向样品区域加100 μL PBS保持样品湿润。

10）立即在荧光显微镜下分析样本，在620 nm下检测YSFluorTM 640红色荧光，在460 nm观察蓝色的DAPI。DAPI能将凋亡和未凋亡的细胞都染成蓝色，只在凋亡的细胞核中才有YSFluorTM 640-12-dUTP掺入而定位的红色荧光。如有必要，载玻片能在4℃黑暗条件下存放过夜。

四、利用流式细胞术检测悬浮细胞

1）将3-5×106个细胞用PBS洗两次，每次在4℃，300×g离心10 min，然后重悬在0.5 mL PBS中。

2）固定细胞，加入5 mL 1%配制于PBS中的多聚甲醛溶液，冰上放置20 min。

3）细胞在4℃，300×g离心10 min，去上清并且重悬于5 mLPBS。重复洗一次，并用0.5 mLPBS重悬细胞。

4）通透细胞，加入5 mL冰上预冷的70%乙醇，在-20℃孵育4小时。细胞能在70%乙醇中-20℃条件下保存一周，或者，细胞可用配制于PBS中的0.2% Triton X-100溶液通透，室温放置5 min。

5）细胞在300×g离心10 min，并用5 mL PBS重悬。重复离心，并于1 mL PBS重悬。

6）转移2×106个细胞至一个1.5 mL的微量离心管。

7）300×g离心10 min，去上清，并用80 μL 1×Equilibration Buffer重悬。室温孵育5 min。

8）在平衡细胞的同时，在冰上融解YSFluorTM 640-12-dUTP Labeling Mix，并且依照表1，准备足够量的用于所有反应的TdT孵育缓冲液。对于2×106个细胞的一个标准反应，其体积是50 μL，用50 μL乘上反应数目来确定所需TdT孵育缓冲液的总体积。

9）细胞在300×g离心10min，去上清并把沉淀重悬在50 μL TdT孵育缓冲液中，37℃孵育60 min，避光。每隔15 min用微量移液器轻轻重悬细胞。

10）加入1 mL 20 mM EDTA终止反应，用微量移液器轻柔混匀。

11）300×g离心10 min，去上清并把沉淀重悬在1 mL配制于PBS中的0.1% Triton X-100溶液，其中含5 mg/mL BSA，重复一次，总共洗2次。

12）用流式细胞仪分析细胞，测量620 nm的YSFluorTM 640红色荧光。

HB240313

 

Q：血管内皮细胞，想要免疫荧光和 TUNEL 同时进行，不知道该先做哪个? TUNEL 要求立即检测？

A：先做 TUNEL，再进行免疫荧光，这个主要是怕免疫荧光对 TdT 酶产生影响。只要避光保存就可以不立即进行检测。

Q：感觉 DNA 染的有点弥散状，核定位的效果也不是很好，是染色时间太久？感觉细胞质中也像是染到了？

A：有非特异性染色，可能是因为时间太久或者是试剂浓度太高导致的。建议降低染色液浓度或减少染色时间。

[1] Sun X, Peng X, Cao Y, Zhou Y, Sun Y. ADNP promotes neural differentiation by modulating Wnt/β-catenin signaling. Nat Commun. 2020;11(1):2984. Published 2020 Jun 12. doi:10.1038/s41467-020-16799-0(IF:11.614)
[2] Zhu M, Zhang P, Yu S, et al. Targeting ZFP64/GAL-1 axis promotes therapeutic effect of nab-paclitaxel and reverses immunosuppressive microenvironment in gastric cancer. J Exp Clin Cancer Res. 2022;41(1):14. Published 2022 Jan 7. doi:10.1186/s13046-021-02224-x(IF:11.161)
[3] Zhang HT, Gui T, Liu RX, et al. Sequential targeting of YAP1 and p21 enhances the elimination of senescent cells induced by the BET inhibitor JQ1. Cell Death Dis. 2021;12(1):121. Published 2021 Jan 25. doi:10.1038/s41419-021-03416-1(IF:8.469)
[4] Chen YJ, Hong WF, Liu ML, et al. An integrated bioinformatic investigation of mitochondrial solute carrier family 25 (SLC25) in colon cancer followed by preliminary validation of member 5 (SLC25A5) in tumorigenesis. Cell Death Dis. 2022;13(3):237. Published 2022 Mar 14. doi:10.1038/s41419-022-04692-1(IF:8.469)
[5] Xun Y, Zhou P, Yang Y, et al. Role of Nox4 in High Calcium-Induced Renal Oxidative Stress Damage and Crystal Deposition. Antioxid Redox Signal. 2022;36(1-3):15-38. doi:10.1089/ars.2020.8159(IF:8.401)
[6] Yu W, Zong S, Zhou P, et al. Cochlear Marginal Cell Pyroptosis Is Induced by Cisplatin via NLRP3 Inflammasome Activation. Front Immunol. 2022;13:823439. Published 2022 Apr 20. doi:10.3389/fimmu.2022.823439(IF:7.561)
[7] Duan X, Huang Y, Chen X, et al. Moderate DNA hypomethylation suppresses intestinal tumorigenesis by promoting caspase-3 expression and apoptosis. Oncogenesis. 2021;10(5):38. Published 2021 May 4. doi:10.1038/s41389-021-00328-9(IF:7.485)
[8] Huang Y, Ma J, Meng Y, et al. Exposure to Oxadiazon-Butachlor causes cardiac toxicity in zebrafish embryos. Environ Pollut. 2020;265(Pt A):114775. doi:10.1016/j.envpol.2020.114775(IF:6.793)
[9] Qiang W, Shen T, Noman M, et al. Fibroblast Growth Factor 21 Augments Autophagy and Reduces Apoptosis in Damaged Liver to Improve Tissue Regeneration in Zebrafish. Front Cell Dev Biol. 2021;9:756743. Published 2021 Oct 22. doi:10.3389/fcell.2021.756743(IF:6.684)
[10] Wu Y, Zhang J, Li C, et al. The Activation of ROS/NF-κB/MMP-9 Pathway Promotes Calcium-Induced Kidney Crystal Deposition. Oxid Med Cell Longev. 2021;2021:8836355. Published 2021 Jun 8. doi:10.1155/2021/8836355(IF:6.543)
[11] Jiang S, Zhang Z, Huang F, et al. Protective Effect of Low Molecular Weight Peptides from Solenocera crassicornis Head against Cyclophosphamide-Induced Nephrotoxicity in Mice via the Keap1/Nrf2 Pathway. Antioxidants (Basel). 2020;9(8):745. Published 2020 Aug 13. doi:10.3390/antiox9080745(IF:6.313)
[12] Yang P, Yang Y, He X, et al. miR-153-3p Targets βII Spectrin to Regulate Formaldehyde-Induced Cardiomyocyte Apoptosis. Front Cardiovasc Med. 2021;8:764831. Published 2021 Dec 15. doi:10.3389/fcvm.2021.764831(IF:6.050)
[13] Chen YJ, Song HY, Zhang ZW, Chen Q, Tang ZP, Gu M. Extracts of Vine Tea Improve Diet-Induced Non-Alcoholic Steatohepatitis Through AMPK-LXRα Signaling. Front Pharmacol. 2021;12:711763. Published 2021 Jul 30. doi:10.3389/fphar.2021.711763(IF:5.811)
[14] Gong F, Shen T, Zhang J, et al. Nitazoxanide induced myocardial injury in zebrafish embryos by activating oxidative stress response. J Cell Mol Med. 2021;25(20):9740-9752. doi:10.1111/jcmm.16922(IF:5.310)
[15] Zhu D, Wang Z, Zhang G, et al. Periostin promotes nucleus pulposus cells apoptosis by activating the Wnt/β-catenin signaling pathway. FASEB J. 2022;36(7):e22369. doi:10.1096/fj.202200123R(IF:5.192)
[16] Xu H, Qu C, Gan L, et al. Deletion of the Impg2 gene causes the degeneration of rod and cone cells in mice. Hum Mol Genet. 2020;29(10):1624-1634. doi:10.1093/hmg/ddaa062(IF:5.101)
[17] Li Q, Qin M, Tan Q, et al. MicroRNA-129-1-3p protects cardiomyocytes from pirarubicin-induced apoptosis by down-regulating the GRIN2D-mediated Ca2+ signalling pathway. J Cell Mol Med. 2020;24(3):2260-2271. doi:10.1111/jcmm.14908(IF:4.486)
[18] Wen Y, Zong S, Liu T, Du P, Li H, Xiao H. Tauroursodeoxycholic acid attenuates cisplatin-induced ototoxicity by inhibiting the accumulation and aggregation of unfolded or misfolded proteins in the endoplasmic reticulum. Toxicology. 2021;453:152736. doi:10.1016/j.tox.2021.152736(IF:4.221)
[19] Meng Y, Yin Q, Ma Q, et al. FXII regulates the formation of deep vein thrombosis via the PI3K/AKT signaling pathway in mice. Int J Mol Med. 2021;47(5):87. doi:10.3892/ijmm.2021.4920(IF:4.101)
[20] Jin S, Yang L, Meng C, et al. Sequential Epiphyseal Cartilage Changes of Femoral Heads in C57BL/6 Female Mice Treated with Excessive Glucocorticoids. Cartilage. 2021;13(2_suppl):453S-464S. doi:10.1177/1947603520978574(IF:3.857)
[21] Feng Y, Lei B, Zhang H, et al. MicroRNA-136-5p from Endothelial Progenitor Cells-released Extracellular Vesicles Mediates TXNIP to Promote the Dissolution of Deep Venous Thrombosis. Shock. 2022;57(5):714-721. doi:10.1097/SHK.0000000000001920(IF:3.454)
[22] Wang H, He F, Liang B, et al. p53-Dependent LincRNA-p21 Protects Against Proliferation and Anti-apoptosis of Vascular Smooth Muscle Cells in Atherosclerosis by Upregulating SIRT7 via MicroRNA-17-5p. J Cardiovasc Transl Res. 2021;14(3):426-440. doi:10.1007/s12265-020-10074-9(IF:3.312)
[23] Liu Q, Xu X, Sun W. Down-regulated HSA_circ_0003528 inhibits hepatocellular carcinoma aggressiveness via the miR-212-3p/XIAP axis. Bioengineered. 2022;13(4):11269-11280. doi:10.1080/21655979.2022.2066046(IF:3.269)
[24] Xu J, Zhang B, Chu Z, Jiang F, Han J. Wogonin Alleviates Cisplatin-induced Cardiotoxicity in Mice Via Inhibiting Gasdermin D-mediated Pyroptosis. J Cardiovasc Pharmacol. 2021;78(4):597-603. Published 2021 Jun 16. doi:10.1097/FJC.0000000000001085(IF:3.105)
[25] Wang S, Zeng X, Yang Y, et al. Hypothermic oxygenated perfusion ameliorates ischemia-reperfusion injury of fatty liver in mice via Brg1/Nrf2/HO-1 axis. Artif Organs. 2022;46(2):229-238. doi:10.1111/aor.14076(IF:3.094)
[26] Xie WJ, Hou G, Wang L, Wang SS, Xiong XX. Astaxanthin suppresses lipopolysaccharide‑induced myocardial injury by regulating MAPK and PI3K/AKT/mTOR/GSK3β signaling. Mol Med Rep. 2020;22(4):3338-3346. doi:10.3892/mmr.2020.11443(IF:2.952)
[27] Zhang Y, Li Q, Xu D, et al. Idarubicin-induced oxidative stress and apoptosis in cardiomyocytes: An in vitro molecular approach. Hum Exp Toxicol. 2021;40(12_suppl):S553-S562. doi:10.1177/09603271211033774(IF:2.903)
[28] Li Q, Qin M, Li T, et al. Rutin protects against pirarubicin-induced cardiotoxicity by adjusting microRNA-125b-1-3p-mediated JunD signaling pathway. Mol Cell Biochem. 2020;466(1-2):139-148. doi:10.1007/s11010-020-03696-9(IF:2.795)

YSFluorTM 488-conjugated Streptavidin YSFluorTM 488标记链霉亲和素

发表于由

YSFluorTM 488-conjugated Streptavidin YSFluorTM 488标记链霉亲和素

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品简介

链霉亲和素是一种来源于阿维丁链霉菌（streptomyces avidinii）的生物素结合蛋白，其非特异性结合远比亲和素低，且与蛋清亲和素在中性pH值具有净正电荷和包含大约7%的碳水化合物相比，链霉亲和素蛋白具有在中性pH值几乎没有净电荷，不含有碳水化合物等更有利的化学性质，所以它被广泛用来作为抗生物素蛋白的替代品。

本品是YSFluorTM 488标记链霉亲和素，该荧光素YSFluorTM 488，Amax（最大激发波长）为493 nm，Emax（最大发射波长）为519 nm，同Alex Fluor 488和FITC的光谱性质一样，通常可考虑相互替代。建议工作液浓度：0.5-2 µg/mL（For most applications）。

 

产品信息

货号

35103JP60

规格

100 μL

 

产品性质

链霉亲和素浓度（Streptavidin Concentration）

0.9 mg/mL

缓冲液（Buffer）

0.005 M磷酸钠，0.125 M氯化钠，pH 7.6

稳定剂（Stabilizer）

7.5 mg/mL BSA（无IgG，无蛋白酶)

荧光基团（Fluorophore）

YSFluorTM 488，Ex/Em=493 nm/519 nm

防腐剂（Preservative）

0.025% 叠氮化钠

 

储存条件

-25 ~ -15℃保存，有效期1年，尽量避免反复冻融。

 

注意事项

  1. 本品含叠氮化钠，对人体有害，请注意适当防护。
  2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  3. 本产品仅作科研用途！

 

Ver.CN20240322

 

YSFluorTM 488-conjugated Streptavidin YSFluorTM 488标记链霉亲和素

暂无内容

[1] Tang F, Zhou M, Qin K, et al. Selective N-glycan editing on living cell surfaces to probe glycoconjugate function. Nat Chem Biol. 2020;16(7):766-775. doi:10.1038/s41589-020-0551-8(IF:12.587)
[2] Fang T, Zhang J, Zuo T, et al. Chemo-Photothermal Combination Cancer Therapy with ROS Scavenging, Extracellular Matrix Depletion, and Tumor Immune Activation by Telmisartan and Diselenide-Paclitaxel Prodrug Loaded Nanoparticles. ACS Appl Mater Interfaces. 2020;12(28):31292-31308. doi:10.1021/acsami.0c10416(IF:8.758)
[3] Zhu Y, Tong X, Wang Y, Lu X. WTIP upregulates FOXO3a and induces apoptosis through PUMA in acute myeloid leukemia. Cell Death Dis. 2021;13(1):18. Published 2021 Dec 20. doi:10.1038/s41419-021-04467-0(IF:8.469)
[4] He F, Liu H, Guo X, Yin BC, Ye BC. Direct Exosome Quantification via Bivalent-Cholesterol-Labeled DNA Anchor for Signal Amplification. Anal Chem. 2017;89(23):12968-12975. doi:10.1021/acs.analchem.7b03919(IF:6.320)
[5] Xu H, Liao C, Zuo P, Liu Z, Ye BC. Magnetic-Based Microfluidic Device for On-Chip Isolation and Detection of Tumor-Derived Exosomes. Anal Chem. 2018;90(22):13451-13458. doi:10.1021/acs.analchem.8b03272(IF:6.042)
[6] Liang S, Sun M, Lu Y, et al. Cytokine-induced killer cells-assisted tumor-targeting delivery of Her-2 monoclonal antibody-conjugated gold nanostars with NIR photosensitizer for enhanced therapy of cancer. J Mater Chem B. 2020;8(36):8368-8382. doi:10.1039/d0tb01391a(IF:5.344)
[7] Zhou S, Deng H, Zhang Y, et al. Thiolated Nanoparticles Overcome the Mucus Barrier and Epithelial Barrier for Oral Delivery of Insulin. Mol Pharm. 2020;17(1):239-250. doi:10.1021/acs.molpharmaceut.9b00971(IF:4.396)
[8] Rao Z, Shen D, Chen J, et al. Basic Fibroblast Growth Factor Attenuates Injury in Myocardial Infarction by Enhancing Hypoxia-Inducible Factor-1 Alpha Accumulation. Front Pharmacol. 2020;11:1193. Published 2020 Aug 7. doi:10.3389/fphar.2020.01193(IF:4.225)
[9] Li T, Jia SW, Hou D, et al. Oxytocin Modulation of Maternal Behavior and Its Association With Immunological Activity in Rats With Cesarean Delivery. ASN Neuro. 2021;13:17590914211014731. doi:10.1177/17590914211014731(IF:4.146)
[10] Li T, Jia SW, Hou D, et al. Intranasal Oxytocin Restores Maternal Behavior and Oxytocin Neuronal Activity in the Supraoptic Nucleus in Rat Dams with Cesarean Delivery. Neuroscience. 2021;468:235-246. doi:10.1016/j.neuroscience.2021.06.020(IF:3.590)
[11] Hu S, Ouyang J, Zheng G, et al. Identification of mutant p53-specific proteins interaction network using TurboID-based proximity labeling. Biochem Biophys Res Commun. 2022;615:163-171. doi:10.1016/j.bbrc.2022.05.046(IF:3.575)
[12] Zhang S, Wang J, Wang J. One-Day TALEN Assembly Protocol and a Dual-Tagging System for Genome Editing. ACS Omega. 2020;5(31):19702-19714. Published 2020 Jul 29. doi:10.1021/acsomega.0c02396(IF:2.870)

产品简介

链霉亲和素是一种来源于阿维丁链霉菌（streptomyces avidinii）的生物素结合蛋白，其非特异性结合远比亲和素低，且与蛋清亲和素在中性pH值具有净正电荷和包含大约7%的碳水化合物相比，链霉亲和素蛋白具有在中性pH值几乎没有净电荷，不含有碳水化合物等更有利的化学性质，所以它被广泛用来作为抗生物素蛋白的替代品。

本品是YSFluorTM 488标记链霉亲和素，该荧光素YSFluorTM 488，Amax（最大激发波长）为493 nm，Emax（最大发射波长）为519 nm，同Alex Fluor 488和FITC的光谱性质一样，通常可考虑相互替代。建议工作液浓度：0.5-2 µg/mL（For most applications）。

 

产品信息

货号

35103JP60

规格

100 μL

 

产品性质

链霉亲和素浓度（Streptavidin Concentration）

0.9 mg/mL

缓冲液（Buffer）

0.005 M磷酸钠，0.125 M氯化钠，pH 7.6

稳定剂（Stabilizer）

7.5 mg/mL BSA（无IgG，无蛋白酶)

荧光基团（Fluorophore）

YSFluorTM 488，Ex/Em=493 nm/519 nm

防腐剂（Preservative）

0.025% 叠氮化钠

 

储存条件

-25 ~ -15℃保存，有效期1年，尽量避免反复冻融。

 

注意事项

  1. 本品含叠氮化钠，对人体有害，请注意适当防护。
  2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  3. 本产品仅作科研用途！

 

Ver.CN20240322

 

YSFluorTM 488-conjugated Streptavidin YSFluorTM 488标记链霉亲和素

暂无内容

[1] Tang F, Zhou M, Qin K, et al. Selective N-glycan editing on living cell surfaces to probe glycoconjugate function. Nat Chem Biol. 2020;16(7):766-775. doi:10.1038/s41589-020-0551-8(IF:12.587)
[2] Fang T, Zhang J, Zuo T, et al. Chemo-Photothermal Combination Cancer Therapy with ROS Scavenging, Extracellular Matrix Depletion, and Tumor Immune Activation by Telmisartan and Diselenide-Paclitaxel Prodrug Loaded Nanoparticles. ACS Appl Mater Interfaces. 2020;12(28):31292-31308. doi:10.1021/acsami.0c10416(IF:8.758)
[3] Zhu Y, Tong X, Wang Y, Lu X. WTIP upregulates FOXO3a and induces apoptosis through PUMA in acute myeloid leukemia. Cell Death Dis. 2021;13(1):18. Published 2021 Dec 20. doi:10.1038/s41419-021-04467-0(IF:8.469)
[4] He F, Liu H, Guo X, Yin BC, Ye BC. Direct Exosome Quantification via Bivalent-Cholesterol-Labeled DNA Anchor for Signal Amplification. Anal Chem. 2017;89(23):12968-12975. doi:10.1021/acs.analchem.7b03919(IF:6.320)
[5] Xu H, Liao C, Zuo P, Liu Z, Ye BC. Magnetic-Based Microfluidic Device for On-Chip Isolation and Detection of Tumor-Derived Exosomes. Anal Chem. 2018;90(22):13451-13458. doi:10.1021/acs.analchem.8b03272(IF:6.042)
[6] Liang S, Sun M, Lu Y, et al. Cytokine-induced killer cells-assisted tumor-targeting delivery of Her-2 monoclonal antibody-conjugated gold nanostars with NIR photosensitizer for enhanced therapy of cancer. J Mater Chem B. 2020;8(36):8368-8382. doi:10.1039/d0tb01391a(IF:5.344)
[7] Zhou S, Deng H, Zhang Y, et al. Thiolated Nanoparticles Overcome the Mucus Barrier and Epithelial Barrier for Oral Delivery of Insulin. Mol Pharm. 2020;17(1):239-250. doi:10.1021/acs.molpharmaceut.9b00971(IF:4.396)
[8] Rao Z, Shen D, Chen J, et al. Basic Fibroblast Growth Factor Attenuates Injury in Myocardial Infarction by Enhancing Hypoxia-Inducible Factor-1 Alpha Accumulation. Front Pharmacol. 2020;11:1193. Published 2020 Aug 7. doi:10.3389/fphar.2020.01193(IF:4.225)
[9] Li T, Jia SW, Hou D, et al. Oxytocin Modulation of Maternal Behavior and Its Association With Immunological Activity in Rats With Cesarean Delivery. ASN Neuro. 2021;13:17590914211014731. doi:10.1177/17590914211014731(IF:4.146)
[10] Li T, Jia SW, Hou D, et al. Intranasal Oxytocin Restores Maternal Behavior and Oxytocin Neuronal Activity in the Supraoptic Nucleus in Rat Dams with Cesarean Delivery. Neuroscience. 2021;468:235-246. doi:10.1016/j.neuroscience.2021.06.020(IF:3.590)
[11] Hu S, Ouyang J, Zheng G, et al. Identification of mutant p53-specific proteins interaction network using TurboID-based proximity labeling. Biochem Biophys Res Commun. 2022;615:163-171. doi:10.1016/j.bbrc.2022.05.046(IF:3.575)
[12] Zhang S, Wang J, Wang J. One-Day TALEN Assembly Protocol and a Dual-Tagging System for Genome Editing. ACS Omega. 2020;5(31):19702-19714. Published 2020 Jul 29. doi:10.1021/acsomega.0c02396(IF:2.870)

YSFluorTM 647-conjugated Streptavidin YSFluorTM 647标记链霉亲和素

发表于由

YSFluorTM 647-conjugated Streptavidin YSFluorTM 647标记链霉亲和素

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品简介

链霉亲和素是一种来源于阿维丁链霉菌（streptomyces avidinii）的生物素结合蛋白，其非特异性结合远比亲和素低，且与蛋清亲和素在中性pH值具有净正电荷和包含大约7%的碳水化合物相比，链霉亲和素蛋白具有在中性pH值几乎没有净电荷，不含有碳水化合物等更有利的化学性质，所以它被广泛用来作为抗生物素蛋白的替代品。

本品是YSFluorTM 647标记链霉亲和素，该荧光素YSFluorTM 647，Amax（最大激发波长）为651 nm，Emax（最大发射波长）为667 nm，同Alex Fluor 647和APC的光谱性质一样，通常可考虑相互替代。建议工作液浓度：0.5-2 µg/mL（For most applications）。

 

产品信息

货号

35104JP60

规格

100 μL

 

产品信息

链霉亲和素浓度（Streptavidin Concentration）

0.9 mg/mL

缓冲液（Buffer）

0.005 M磷酸钠，0.125 M氯化钠，pH 7.6

稳定剂（Stabilizer）

7.5 mg/mL BSA（无IgG，无蛋白酶)

荧光基团（Fluorophore）

YSFluorTM 647，Ex/Em=651 nm/667 nm

防腐剂（Preservative）

0.025% 叠氮化钠

 

储存条件

-25 ~ -15℃保存，有效期1年，尽量避免反复冻融。

 

注意事项

  1. 本品含叠氮化钠，对人体有害，请注意适当防护。
  2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  3. 本产品仅作科研用途！

Ver.CN20240322

 

YSFluorTM 647-conjugated Streptavidin YSFluorTM 647标记链霉亲和素

暂无内容

[1] Zhang G, He Y, Liu Y, Du Y, Yang C, Gao F. Reduced hyaluronan cross-linking induces breast cancer malignancy in a CAF-dependent manner. Cell Death Dis. 2021;12(6):586. Published 2021 Jun 7. doi:10.1038/s41419-021-03875-6(IF:8.469)
[2] Xia S, Xu HT. Astrocytic Gap Junctions Contribute to Aberrant Neuronal Synchronization in a Mouse Model of MeCP2 Duplication Syndrome. Neurosci Bull. 2022;38(6):591-606. doi:10.1007/s12264-022-00824-x(IF:5.203)
[3] Li D, Liu H, Liu X, et al. Involvement of Hyperpolarization-Activated Cyclic Nucleotide-Gated Channel 3 in Oxytocin Neuronal Activity in Lactating Rats With Pup Deprivation. ASN Neuro. 2020;12:1759091420944658. doi:10.1177/1759091420944658(IF:4.167)

产品简介

链霉亲和素是一种来源于阿维丁链霉菌（streptomyces avidinii）的生物素结合蛋白，其非特异性结合远比亲和素低，且与蛋清亲和素在中性pH值具有净正电荷和包含大约7%的碳水化合物相比，链霉亲和素蛋白具有在中性pH值几乎没有净电荷，不含有碳水化合物等更有利的化学性质，所以它被广泛用来作为抗生物素蛋白的替代品。

本品是YSFluorTM 647标记链霉亲和素，该荧光素YSFluorTM 647，Amax（最大激发波长）为651 nm，Emax（最大发射波长）为667 nm，同Alex Fluor 647和APC的光谱性质一样，通常可考虑相互替代。建议工作液浓度：0.5-2 µg/mL（For most applications）。

 

产品信息

货号

35104JP60

规格

100 μL

 

产品信息

链霉亲和素浓度（Streptavidin Concentration）

0.9 mg/mL

缓冲液（Buffer）

0.005 M磷酸钠，0.125 M氯化钠，pH 7.6

稳定剂（Stabilizer）

7.5 mg/mL BSA（无IgG，无蛋白酶)

荧光基团（Fluorophore）

YSFluorTM 647，Ex/Em=651 nm/667 nm

防腐剂（Preservative）

0.025% 叠氮化钠

 

储存条件

-25 ~ -15℃保存，有效期1年，尽量避免反复冻融。

 

注意事项

  1. 本品含叠氮化钠，对人体有害，请注意适当防护。
  2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  3. 本产品仅作科研用途！

Ver.CN20240322

 

YSFluorTM 647-conjugated Streptavidin YSFluorTM 647标记链霉亲和素

暂无内容

[1] Zhang G, He Y, Liu Y, Du Y, Yang C, Gao F. Reduced hyaluronan cross-linking induces breast cancer malignancy in a CAF-dependent manner. Cell Death Dis. 2021;12(6):586. Published 2021 Jun 7. doi:10.1038/s41419-021-03875-6(IF:8.469)
[2] Xia S, Xu HT. Astrocytic Gap Junctions Contribute to Aberrant Neuronal Synchronization in a Mouse Model of MeCP2 Duplication Syndrome. Neurosci Bull. 2022;38(6):591-606. doi:10.1007/s12264-022-00824-x(IF:5.203)
[3] Li D, Liu H, Liu X, et al. Involvement of Hyperpolarization-Activated Cyclic Nucleotide-Gated Channel 3 in Oxytocin Neuronal Activity in Lactating Rats With Pup Deprivation. ASN Neuro. 2020;12:1759091420944658. doi:10.1177/1759091420944658(IF:4.167)

YSFluorTM 594-conjugated Streptavidin YSFluorTM 594标记链霉亲和素

发表于由

YSFluorTM 594-conjugated Streptavidin YSFluorTM 594标记链霉亲和素

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品简介

链霉亲和素是一种来源于阿维丁链霉菌（streptomyces avidinii）的生物素结合蛋白，其非特异性结合远比亲和素低，且与蛋清亲和素在中性pH值具有净正电荷和包含大约7%的碳水化合物相比，链霉亲和素蛋白具有在中性pH值几乎没有净电荷，不含有碳水化合物等更有利的化学性质，所以它被广泛用来作为抗生物素蛋白的替代品。

本品是YSFluorTM 594标记链霉亲和素，该荧光素YSFluorTM 594，Amax（最大激发波长）为591 nm，Emax（最大发射波长）为614 nm，同Alex Fluor 594和Texas Red的光谱性质一样，通常可考虑相互替代。建议工作液浓度：0.5-2 µg/mL（For most applications）。

 

产品信息

货号

35107JP60

规格

100 μL

 

产品信息

链霉亲和素浓度（Streptavidin Concentration）

0.9 mg/mL

缓冲液（Buffer）

0.005 M磷酸钠，0.125 M氯化钠，pH 7.6

稳定剂（Stabilizer）

7.5 mg/mL BSA（无IgG，无蛋白酶)

荧光基团（Fluorophore）

YSFluorTM 594，Ex/Em=591 nm/614 nm

防腐剂（Preservative）

0.025% 叠氮化钠

 

储存条件

-25 ~ -15℃保存，有效期1年，尽量避免反复冻融。

 

注意事项

  1. 本品含叠氮化钠，对人体有害，请注意适当防护。
  2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  3. 本产品仅作科研用途！

 

Ver.CN20240322

 

YSFluorTM 594-conjugated Streptavidin YSFluorTM 594标记链霉亲和素

暂无内容

[1] Zhou X, Ma T, Yang L, et al. Spider venom-derived peptide induces hyperalgesia in Nav1.7 knockout mice by activating Nav1.9 channels. Nat Commun. 2020;11(1):2293. Published 2020 May 8. doi:10.1038/s41467-020-16210-y(IF:12.121)
[2] Zhu Y, Tong X, Wang Y, Lu X. WTIP upregulates FOXO3a and induces apoptosis through PUMA in acute myeloid leukemia. Cell Death Dis. 2021;13(1):18. Published 2021 Dec 20. doi:10.1038/s41419-021-04467-0(IF:8.469)
[3] Cheng Z, Sun Y, Niu X, et al. Gene expression profiling reveals U1 snRNA regulates cancer gene expression. Oncotarget. 2017;8(68):112867-112874. Published 2017 Dec 1. doi:10.18632/oncotarget.22842(IF:5.168)
[4] Rao Z, Shen D, Chen J, et al. Basic Fibroblast Growth Factor Attenuates Injury in Myocardial Infarction by Enhancing Hypoxia-Inducible Factor-1 Alpha Accumulation. Front Pharmacol. 2020;11:1193. Published 2020 Aug 7. doi:10.3389/fphar.2020.01193(IF:4.225)
[5] Cheng Z, Shang Y, Gao S, Zhang T. Overexpression of U1 snRNA induces decrease of U1 spliceosome function associated with Alzheimer's disease. J Neurogenet. 2017;31(4):337-343. doi:10.1080/01677063.2017.1395425(IF:2.291)
[6] Cheng Z, Du Z, Shang Y, Zhang Y, Zhang T. A Preliminary Study: PS1 Increases U1 snRNA Expression Associated with AD. J Mol Neurosci. 2017;62(3-4):269-275. doi:10.1007/s12031-017-0932-y(IF:2.229)

产品简介

链霉亲和素是一种来源于阿维丁链霉菌（streptomyces avidinii）的生物素结合蛋白，其非特异性结合远比亲和素低，且与蛋清亲和素在中性pH值具有净正电荷和包含大约7%的碳水化合物相比，链霉亲和素蛋白具有在中性pH值几乎没有净电荷，不含有碳水化合物等更有利的化学性质，所以它被广泛用来作为抗生物素蛋白的替代品。

本品是YSFluorTM 594标记链霉亲和素，该荧光素YSFluorTM 594，Amax（最大激发波长）为591 nm，Emax（最大发射波长）为614 nm，同Alex Fluor 594和Texas Red的光谱性质一样，通常可考虑相互替代。建议工作液浓度：0.5-2 µg/mL（For most applications）。

 

产品信息

货号

35107JP60

规格

100 μL

 

产品信息

链霉亲和素浓度（Streptavidin Concentration）

0.9 mg/mL

缓冲液（Buffer）

0.005 M磷酸钠，0.125 M氯化钠，pH 7.6

稳定剂（Stabilizer）

7.5 mg/mL BSA（无IgG，无蛋白酶)

荧光基团（Fluorophore）

YSFluorTM 594，Ex/Em=591 nm/614 nm

防腐剂（Preservative）

0.025% 叠氮化钠

 

储存条件

-25 ~ -15℃保存，有效期1年，尽量避免反复冻融。

 

注意事项

  1. 本品含叠氮化钠，对人体有害，请注意适当防护。
  2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  3. 本产品仅作科研用途！

 

Ver.CN20240322

 

YSFluorTM 594-conjugated Streptavidin YSFluorTM 594标记链霉亲和素

暂无内容

[1] Zhou X, Ma T, Yang L, et al. Spider venom-derived peptide induces hyperalgesia in Nav1.7 knockout mice by activating Nav1.9 channels. Nat Commun. 2020;11(1):2293. Published 2020 May 8. doi:10.1038/s41467-020-16210-y(IF:12.121)
[2] Zhu Y, Tong X, Wang Y, Lu X. WTIP upregulates FOXO3a and induces apoptosis through PUMA in acute myeloid leukemia. Cell Death Dis. 2021;13(1):18. Published 2021 Dec 20. doi:10.1038/s41419-021-04467-0(IF:8.469)
[3] Cheng Z, Sun Y, Niu X, et al. Gene expression profiling reveals U1 snRNA regulates cancer gene expression. Oncotarget. 2017;8(68):112867-112874. Published 2017 Dec 1. doi:10.18632/oncotarget.22842(IF:5.168)
[4] Rao Z, Shen D, Chen J, et al. Basic Fibroblast Growth Factor Attenuates Injury in Myocardial Infarction by Enhancing Hypoxia-Inducible Factor-1 Alpha Accumulation. Front Pharmacol. 2020;11:1193. Published 2020 Aug 7. doi:10.3389/fphar.2020.01193(IF:4.225)
[5] Cheng Z, Shang Y, Gao S, Zhang T. Overexpression of U1 snRNA induces decrease of U1 spliceosome function associated with Alzheimer's disease. J Neurogenet. 2017;31(4):337-343. doi:10.1080/01677063.2017.1395425(IF:2.291)
[6] Cheng Z, Du Z, Shang Y, Zhang Y, Zhang T. A Preliminary Study: PS1 Increases U1 snRNA Expression Associated with AD. J Mol Neurosci. 2017;62(3-4):269-275. doi:10.1007/s12031-017-0932-y(IF:2.229)