产品描述

D-荧光素（D-Luciferin）是荧光素酶（Luciferase）的常用底物，普遍用于整个生物技术领域，特别是体内活体成像技术。其作用机制是在ATP和荧光素酶的作用下，荧光素（底物）能够被氧化发光。当荧光素过量时，产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关性（见下图）。将携带荧光素酶编码基因（Luc）的质粒转染入细胞后，导入研究动物如大小鼠体内，之后注入荧光素，通过生物发光成像技术（BLI）来检测光强度变化，从而实时监测疾病发展状态或药物的治疗功效等。也可以利用ATP对此反应体系的影响，根据生物发光强度的变化来指示能量或生命体征。

D-荧光素也常用于体外研究，包括荧光素酶和ATP水平分析；报告基因分析；高通量测序和各种污染检测。目前市场上有三种产品形式，D-荧光素（游离酸），D-荧光素钠盐，以及D-荧光素钾盐。这三种产品主要的差别在于溶解特性上。D-荧光素（游离酸）水溶性以及缓冲体系的溶解性都很弱，除非溶于弱碱如NaOH和KOH溶液。溶于甲醇（10 mg/ml）和DMSO（50 mg/ml）。但钠盐和钾盐形式的D-荧光素能够非常容易且快速的溶入水或者缓冲液中，使用方便，溶剂无毒性，特别适合体内实验。配成液体后的这三种产品，在绝大多数的应用上都没有实质性的差别。

产品性质

运输和保存方法

室温运输。-20℃干燥避光保存，有效期2年。

使用方法

1．体外生物发光检测
1） 用蒸馏水溶解D-荧光素钠盐，配制成30mg/ml的储存液（200×）。混匀后立即使用或分装于-20℃或-80℃冻存，避免反复冻融。
2） 用预热好的组织培养基1:200稀释储存液，配制工作液（终浓度150µg/ml）。
3） 去除培养细胞的培养基。
4） 待图像分析前，向细胞内添加1×荧光素工作液，然后进行图像分析。

2．  活体成像分析
1） 用无菌的PBS（w/o Mg²⁺）或者DPBS（w/o Mg²⁺）配制D-荧光素钠盐工作液（15mg/ml），0.2µm滤膜过滤除菌。混匀后立即使用或分装于-20℃或-80℃冻存，避免反复冻融。一旦使用，放到4℃解冻，保持冰冷且避光。

2） 注射量取决于注射方式，具体如下：

3） 注射入体内10-20 min（待光信号达到最强稳定平台期），再进行成像分析。

注：建议对每只动物模型都需要建立荧光素酶动力学曲线，从而确定最高信号检测时间和信号平台期。

注意事项

1) 本品（firefly luciferin）和甲虫荧光素（beetle luciferin）都是指化合物(S)-2-(6-Hydroxy-2-benzothiazolyl) -2-thiazoline-4-carboxylic acid，仅仅是不同公司在命名上的差异。
2) 本品保存和操作的过程中都要避光。另外水溶性储存液过滤除菌后，可以-20℃或-80℃分装冻存，避免反复冻融。
3) 注射方式，动物类型以及体重等都会影响信号的发射，因此建议每次实验都要做荧光素酶动力学曲线，确定最佳信号平台期和最佳的检测时间。
4) 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

HB220915

Q：荧光虫荧光素（ Firefly Luciferin）、甲虫荧光素（ Beetle Luciferin）和 D-Luciferin 有区别吗？

A：无区别。三者仅仅是不同公司在命名上的差异，均是化合物 (S)-2-(6-Hydroxy-2-benzothiazolyl)-2

-thiazoline-4-carboxylic acid

Q：该系列产品主要用于哪些应用？

A：除用于活体成像外，荧光素类产品还用于荧光素酶参与的其他应用中，如 体外报告基因检测、微生物/病毒监测、焦磷酸测序等

Q：荧光素钠颜料和 D-荧光素钠盐的区别？

A：荧光素钠颜料：可用于细胞通透性检测，通过检测 OD490 处吸光度值测定 颜料的通透性。 D-

荧光素钠盐：用于活体成像和报告基因系统，通过冷发光模块检测，不 需要激发光激发。

Q：荧光素钾盐、钠盐、自由酸区别？

A：三者的区别主要在于： 1）溶解性：盐形式易溶于水，其中钾盐溶解度为 60mg/ml，钠盐溶解度为 100mg/ml。自由酸不易溶于水，可用碳酸氢钠溶液弱碱调节溶解，其 在甲醇中的溶解度为10mg/ml，DMSO 中溶解度为 50mg/ml。 2）毒性方面：盐形式在使用过程中较方便，尤其是在体内成像实验中， 因其能够溶解在水中，反应毒性也会更小些（荧光素是一种由苯丙噻唑和 噻唑羧酸基团组成的低分子量有机化合物，有低毒性）。3）使用效果：无明显差异。在体内实验研究中，选用钾盐使用率较高。

Q：荧光素的纯度对实验有成影响吗？

A：有影响。99%以上的纯度较好。对于 99%纯度的荧光素，有 1%的固体杂质。若是这 1 g 的杂质溶解在25ml 的缓冲液中（该稀释比例是进行活体成像实验的标准稀释方法），此时杂质的浓度为 0.4 g/L。假 设杂质的分子量为 1000 g/mol,那么杂质的物质的量浓度为 400 μM，该浓度可能会抑制细胞内某些酶的作 用，并且有可能降低实验效果或对动物产生伤害。

Q：产品稳定性如何？

A：粉末避光保存于-20 或-70℃，有效期至少 1 年。

Q：活体成像底物作用原理？

A：D-荧光素（D-Luciferin）是荧光素酶（Luciferase）的常用底物。其作用机制是在 ATP 和荧光素酶的作用下，荧光素（底物）能够被氧化发光。当荧光素过量时，产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关性。2、天然腔肠素（Coelenterazine native）是海肾荧光素酶（Rluc）和 Gaussia 荧光素酶（Gluc） 等多种荧光素酶的作用底物。

Q：推荐仪器？多功能酶标仪能用吗？

A：推荐仪器：1、具有生物化学发光检测模块。荧光素产生的光可以被光度计或闪烁计数器检测。常见的活体成像仪器：如 IVIS® Lumina 小动物活体成像系统，德国 Bruker 公司的 In-Vivo Xtreme 多模式小动物活体成像仪。2、多功能酶标仪：需要和仪器厂家确认是否具体生物化学发光检测模块（注： 不能用荧光显微镜。）

Q：底物的激发波长和发射波长？

A：化学发光，无需激发波长。萤火虫荧光素发射波长是 560nm。海肾荧光素发射波长是 465 nm。

Q：底物可以进入活细胞中吗？

A：可以通过血脑屏障，胎盘屏障和血液测试屏障，也可以进入活细胞。

Q：荧光素类注射方式和用量？

A：下面建议浓度来源于文献：1）注射方式：可通过腹腔注射或尾静脉注射 2）注射量：科学的方法是根据动力学曲线评估注射剂量。建立最初尝试注射剂量为：150mg 底物/kg 小鼠体重。因此，购买量可按照上述方法计算：若 10 只小鼠，22 –25g，则需要底物 33 –37.5mg 。

Q：荧光素的发光特性如何？

A：荧光素腹腔注射老鼠后约 3 min 后，能够表达荧光素酶的细胞开始发光，10 min 后强度达到稳定的最高点，在最高点持续约 10 – 15 min 后开始衰减，可在注射后 10 -15 min 内检测。仅供参考，建议预实验建立荧光素酶 动力学曲线，从而确定最高信号检测时间和信号平台期

Q：活体成像实验，无效果的原因？

A：成功进行活体成像实验需要以下条件：目的组织或细胞表达荧光素酶基因；荧光素底物注射成功； 依赖于发光部位的组织厚度。若实验不成功，可从上述因素查找，荧光素酶基因是否表达，荧光素底物是否未正确注射，及发光部位较深等

Q：荧光素钾（钠）盐溶液如何配制？必须用不含钙离子和镁离 子的 DPBS 溶解吗？

A：1、下面建议浓度来源于文献：

1）储备液（体外实验用） 浓度 100mM，约相当于 30mg/mL。用无菌蒸馏水溶解。 建议：现配现用，若无条件，可分装保存。 长期保存可能会导致信号衰 减。

2）1×工作液（体外实验用） 浓度 0.5mM，约相当于 150ug/mL。用预热的培养基稀释储存液至 1×。建议：现配现用，若多余，则舍弃。不建议再次使用。

3）15mg/mL 储存液（动物实验用）不含钙离子和镁离子的 DPBS 溶解（因为一方面，钙镁离子通常对胰酶活 性有影响；另外一方面在活体成像实验时，Mg2+是催化荧光素底物氧化的 重要因素，而Ca2+是和腔肠素底物氧化有关的离子），混匀。0.22μM 滤器 过滤除菌。 建议：现配现用，长期保存可能会导致信号衰减。

2. 除了 DPBS 外，还可以用其他缓冲液溶解荧光素底物，如生理盐水 Nacl 等。原则上避免溶液中的阳离子对实验造成影响。可参考相关文献操作。

Q：D-荧光素钠盐，对动物有毒副作用吗？

A：一般情况下，D-荧光素钠盐不会对动物产生毒副作用。

Q：荧光素钠盐，分解率是多少？

A：没有该信息。

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