RT-LAMP pH敏感指示剂试剂盒|RT-LAMP pH Sensitive Dyestuff Kit
产品说明书
FAQ
COA
已发表文献
本产品将LAMP可视光染料整合到buffer中，buffer中含dATP、dCTP、dGTP和dUTP等Bst II DNA Polymerase扩增必须的组分，同时包含pH 敏感指示剂，试剂盒含有无甘油Bst II DNA Polymerase、UDGase、RT enzyme等，可用于冻干反应体系的配制；同时减少了加样操作，降低操作误差，在极大程度上抑制假阳性反应，提高检测的准确度。本试剂盒具有较高的扩增效率和灵敏度，扩增结果可肉眼判断，阳性反应孔为橙黄色，阴性反应孔为洋红色，反差极大。
产品组分
|
组分编号 |
组分名称 |
产品编号/规格 |
||
|
13906ES65 (100 T) |
13906ES80 (1000 T) |
13906ES92 (10000 T) |
||
|
13906-A |
2.5×pH Sensitive Reation Buffer |
1 mL |
10 mL |
100 mL |
|
13906–B |
无甘油RT酶Mix |
30 μL |
300 μL |
3 mL |
|
13906–C |
无甘油Bst酶 |
50 μL |
500 μL |
5 mL |
运输和保存方法
Part I：组分13906-A【2.5×pH Sensitive Reation Buffer】干冰运输，-20°C保存，有效期6个月。
Prat II：组分13906–BC【无甘油RT酶MixBst酶】冰袋运输，4°C保存，有效期6个月。
注意事项
1. 使用本试剂前请仔细阅读说明书。
2. 整个实验，应规范操作，包括反应体系的配制、样本处理及加样。
3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
1. 待检样本准备
核酸提取后样本：直接作为模板，加入反应体系中。
煮沸法：临床采集的拭子样本直接放入水中，置于95°C水浴锅或金属浴中进行5 min的热裂解，释放核酸，混匀后即可作为模板加入反应体系中。
【注】：1）处理样本的试剂不能使用强酸或强碱的核酸释放剂，若必须使用，则样本处理完后，需将样本的pH调节至8.0。
2）加入的样本中，避免使用Tris-HCl等高浓度的缓冲体系，避免pH指示剂不能发生变色，影响实验结果判读。
2. 反应体系
将A组分从-20°C取出，溶解后颠倒混匀，瞬时离心确保所有液体落到管底。根据待检测样品量，配制如下体系（通常实验需要设置阴性对照和阳性对照）：
|
组分 |
单次反应体积（μL） |
终浓度 |
|
2.5×pH Sensitive Reation Buffer |
10 |
1× |
|
Bst酶 |
0.5 |
0.32 U/µL |
|
RT酶Mix |
0.3 |
– |
|
10×Primers 2 |
2.5 |
1× |
|
模板3 |
10 ng-1 µg |
– |
|
加ddH2O至 |
25 |
– |
【注】：
1）阴性对照推荐设置空白（不加模板）对照以及NTC（一般为水）对照。
2）10×Primers：16 µM FIP/BIP，2 µM F3/B3，4 µM Loop F/B each。
3）模板加入量在1-8 µL内调整；推荐模板RNA溶解于DEPC水中。
3. 加样
1）如果反应是在水浴锅中进行，则每管加入20 μL矿物油（自备），以防止液体蒸发导致结果的误差。如果反应是在PCR仪中进行，不需要加矿物油（请开启热盖）。
2）为避免污染，建议用户在超净台中配制组分，在其他房间的通风橱中加入模板以免出现假阳性结果。
3）由于本试剂使用的是pH指示剂法，该试剂中的缓冲液能力较弱，试剂不可长期接触空气，否则会吸附空气中的二氧化碳致使试剂变酸，导致试剂颜色变浅，影响实验结果判读。
4. 反应条件
|
温度 |
时间 |
作用 |
|
25-37°C |
2-5 min |
降解含U模板 |
|
60-65°C |
30 min |
恒温扩增 |
|
85°C |
5 min |
失活 |
【注】：
1）本试剂盒所用酶对温度非常敏感，强烈建议使用PCR仪操作；如用水浴锅，应先加热使其达到规定温度后再反应。温差超过2°C，将导致扩增效率降低，使阳性反应无法在说明书规定的时间内洋红色变成橙黄色。
2）反应温度需要根据引物的Tm值进行调整。
3）反应时间依据模板浓度而定，低浓度模板可能需要60 min时间才能有比较明显的反应。
5. 结果判断
反应30 min后，立刻取出反应管，待降温至室温后，置于光线良好的环境中观察（建议以白纸作为背景）。如反应液为洋红色，则为阴性结果；如反应液为橙黄色则为阳性结果。
【注】：反应的时间必须准确计时，超过说明书规定的反应时间可能会出现假阳性。反应管不可开盖，否则会污染，影响后续实验。
HB220518
本产品将LAMP可视光染料整合到buffer中，buffer中含dATP、dCTP、dGTP和dUTP等Bst II DNA Polymerase扩增必须的组分，同时包含pH 敏感指示剂，试剂盒含有无甘油Bst II DNA Polymerase、UDGase、RT enzyme等，可用于冻干反应体系的配制；同时减少了加样操作，降低操作误差，在极大程度上抑制假阳性反应，提高检测的准确度。本试剂盒具有较高的扩增效率和灵敏度，扩增结果可肉眼判断，阳性反应孔为橙黄色，阴性反应孔为洋红色，反差极大。
产品组分
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组分编号 |
组分名称 |
产品编号/规格 |
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13906ES65 (100 T) |
13906ES80 (1000 T) |
13906ES92 (10000 T) |
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13906-A |
2.5×pH Sensitive Reation Buffer |
1 mL |
10 mL |
100 mL |
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13906–B |
无甘油RT酶Mix |
30 μL |
300 μL |
3 mL |
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13906–C |
无甘油Bst酶 |
50 μL |
500 μL |
5 mL |
运输和保存方法
Part I：组分13906-A【2.5×pH Sensitive Reation Buffer】干冰运输，-20°C保存，有效期6个月。
Prat II：组分13906–BC【无甘油RT酶MixBst酶】冰袋运输，4°C保存，有效期6个月。
注意事项
1. 使用本试剂前请仔细阅读说明书。
2. 整个实验，应规范操作，包括反应体系的配制、样本处理及加样。
3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
1. 待检样本准备
核酸提取后样本：直接作为模板，加入反应体系中。
煮沸法：临床采集的拭子样本直接放入水中，置于95°C水浴锅或金属浴中进行5 min的热裂解，释放核酸，混匀后即可作为模板加入反应体系中。
【注】：1）处理样本的试剂不能使用强酸或强碱的核酸释放剂，若必须使用，则样本处理完后，需将样本的pH调节至8.0。
2）加入的样本中，避免使用Tris-HCl等高浓度的缓冲体系，避免pH指示剂不能发生变色，影响实验结果判读。
2. 反应体系
将A组分从-20°C取出，溶解后颠倒混匀，瞬时离心确保所有液体落到管底。根据待检测样品量，配制如下体系（通常实验需要设置阴性对照和阳性对照）：
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组分 |
单次反应体积（μL） |
终浓度 |
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2.5×pH Sensitive Reation Buffer |
10 |
1× |
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Bst酶 |
0.5 |
0.32 U/µL |
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RT酶Mix |
0.3 |
– |
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10×Primers 2 |
2.5 |
1× |
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模板3 |
10 ng-1 µg |
– |
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加ddH2O至 |
25 |
– |
【注】：
1）阴性对照推荐设置空白（不加模板）对照以及NTC（一般为水）对照。
2）10×Primers：16 µM FIP/BIP，2 µM F3/B3，4 µM Loop F/B each。
3）模板加入量在1-8 µL内调整；推荐模板RNA溶解于DEPC水中。
3. 加样
1）如果反应是在水浴锅中进行，则每管加入20 μL矿物油（自备），以防止液体蒸发导致结果的误差。如果反应是在PCR仪中进行，不需要加矿物油（请开启热盖）。
2）为避免污染，建议用户在超净台中配制组分，在其他房间的通风橱中加入模板以免出现假阳性结果。
3）由于本试剂使用的是pH指示剂法，该试剂中的缓冲液能力较弱，试剂不可长期接触空气，否则会吸附空气中的二氧化碳致使试剂变酸，导致试剂颜色变浅，影响实验结果判读。
4. 反应条件
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温度 |
时间 |
作用 |
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25-37°C |
2-5 min |
降解含U模板 |
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60-65°C |
30 min |
恒温扩增 |
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85°C |
5 min |
失活 |
【注】：
1）本试剂盒所用酶对温度非常敏感，强烈建议使用PCR仪操作；如用水浴锅，应先加热使其达到规定温度后再反应。温差超过2°C，将导致扩增效率降低，使阳性反应无法在说明书规定的时间内洋红色变成橙黄色。
2）反应温度需要根据引物的Tm值进行调整。
3）反应时间依据模板浓度而定，低浓度模板可能需要60 min时间才能有比较明显的反应。
5. 结果判断
反应30 min后，立刻取出反应管，待降温至室温后，置于光线良好的环境中观察（建议以白纸作为背景）。如反应液为洋红色，则为阴性结果；如反应液为橙黄色则为阳性结果。
【注】：反应的时间必须准确计时，超过说明书规定的反应时间可能会出现假阳性。反应管不可开盖，否则会污染，影响后续实验。
HB220518
暂无内容
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