本产品将LAMP可视光染料整合到buffer中，buffer中含dATP、dCTP、dGTP和dUTP等Bst II DNA Polymerase扩增必须的组分，同时包含pH 敏感指示剂，试剂盒含有无甘油Bst II DNA Polymerase、UDGase、RT enzyme等，可用于冻干反应体系的配制；同时减少了加样操作，降低操作误差，在极大程度上抑制假阳性反应，提高检测的准确度。本试剂盒具有较高的扩增效率和灵敏度，扩增结果可肉眼判断，阳性反应孔为橙黄色，阴性反应孔为洋红色，反差极大。

 

产品组分

组分编号	组分名称	产品编号/规格
		13906ES65 (100 T)	13906ES80 (1000 T)	13906ES92 (10000 T)
13906-A	2.5×pH Sensitive Reation Buffer	1 mL	10 mL	100 mL
13906–B	无甘油RT酶Mix	30 μL	300 μL	3 mL
13906–C	无甘油Bst酶	50 μL	500 μL	5 mL

 

运输和保存方法

Part I：组分13906-A【2.5×pH Sensitive Reation Buffer】干冰运输，-20°C保存，有效期6个月。

Prat II：组分13906–BC【无甘油RT酶MixBst酶】冰袋运输，4°C保存，有效期6个月。

 

注意事项

1. 使用本试剂前请仔细阅读说明书。

2. 整个实验，应规范操作，包括反应体系的配制、样本处理及加样。

3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

使用方法

1. 待检样本准备

核酸提取后样本：直接作为模板，加入反应体系中。

煮沸法：临床采集的拭子样本直接放入水中，置于95°C水浴锅或金属浴中进行5 min的热裂解，释放核酸，混匀后即可作为模板加入反应体系中。

【注】：1）处理样本的试剂不能使用强酸或强碱的核酸释放剂，若必须使用，则样本处理完后，需将样本的pH调节至8.0。

2）加入的样本中，避免使用Tris-HCl等高浓度的缓冲体系，避免pH指示剂不能发生变色，影响实验结果判读。

2. 反应体系

将A组分从-20°C取出，溶解后颠倒混匀，瞬时离心确保所有液体落到管底。根据待检测样品量，配制如下体系（通常实验需要设置阴性对照和阳性对照）：

组分	单次反应体积（μL）	终浓度
2.5×pH Sensitive Reation Buffer	10	1×
Bst酶	0.5	0.32 U/µL
RT酶Mix	0.3	–
10×Primers 2	2.5	1×
模板3	10 ng-1 µg	–
加ddH2O至	25	–

【注】：

1）阴性对照推荐设置空白（不加模板）对照以及NTC（一般为水）对照。

2）10×Primers：16 µM FIP/BIP，2 µM F3/B3，4 µM Loop F/B each。

3）模板加入量在1-8 µL内调整；推荐模板RNA溶解于DEPC水中。

3. 加样

1）如果反应是在水浴锅中进行，则每管加入20 μL矿物油（自备），以防止液体蒸发导致结果的误差。如果反应是在PCR仪中进行，不需要加矿物油（请开启热盖）。

2）为避免污染，建议用户在超净台中配制组分，在其他房间的通风橱中加入模板以免出现假阳性结果。

3）由于本试剂使用的是pH指示剂法，该试剂中的缓冲液能力较弱，试剂不可长期接触空气，否则会吸附空气中的二氧化碳致使试剂变酸，导致试剂颜色变浅，影响实验结果判读。

4. 反应条件

温度	时间	作用
25-37°C	2-5 min	降解含U模板
60-65°C	30 min	恒温扩增
85°C	5 min	失活

【注】：

1）本试剂盒所用酶对温度非常敏感，强烈建议使用PCR仪操作；如用水浴锅，应先加热使其达到规定温度后再反应。温差超过2°C，将导致扩增效率降低，使阳性反应无法在说明书规定的时间内洋红色变成橙黄色。

2）反应温度需要根据引物的Tm值进行调整。

3）反应时间依据模板浓度而定，低浓度模板可能需要60 min时间才能有比较明显的反应。

5. 结果判断

反应30 min后，立刻取出反应管，待降温至室温后，置于光线良好的环境中观察（建议以白纸作为背景）。如反应液为洋红色，则为阴性结果；如反应液为橙黄色则为阳性结果。

【注】：反应的时间必须准确计时，超过说明书规定的反应时间可能会出现假阳性。反应管不可开盖，否则会污染，影响后续实验。

 

HB220518