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labbioreagents REK-01-1215说明书

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labbioreagents REK-01-1215说明书

 

利妥昔单抗 （美罗华®）（人）ELISA试剂盒

 

Rituximab (Mabthera)

(Human) ELISA Kit

目录号：REK-01-1215规格：1板（96孔）

版本：02

仅供研究使用

 

一般描述

 

 

利妥昔单抗ELISA试剂盒是一种夹心酶联免疫分析法，用于定量测定血清和血浆中的利妥昔单抗，具有较高的灵敏度和特异性。

 

 

试剂盒性能

 

· 灵敏度：10 ng/mL

· 分析范围：10-250 ng/mL

· 交叉反应：与天然血清免疫球蛋白无交叉反应

· 回收率：已知浓度的正常人血清样品为80-120%。

· 精密度

（CV(%)= SD/平均值×100）

Ø 批内：CV < 20%

Ø 批间：CV < 20%

 

 

提供的材料

组件列表

 

组件

数量

共价结合ELISA板

1个平板

利妥昔单抗

10 µg

捕获抗体(10X)

700 µL

检测抗体(10X)

700 µL

链霉亲和素(HRP)（避光）

12 mL

平板包被缓冲液

15 mL

封闭缓冲液

15 mL

试验稀释剂

40 mL

TMB底物（避光）

12 mL

终止液

12 mL

 

 

储存说明

 

从运输之日起，整个试剂盒可在4 ℃下储存长达12个月。

 

 

试验方案

 

分析前，使所有试剂、微孔板和样品恢复至室温。

 

1. 使用平板包被缓冲液将捕获抗体（未结合的抗利妥昔单抗抗体）稀释10倍。用50µL/孔制备的捕获抗体包被96孔板，并在4 ℃下孵育过夜，同时振摇。

2. 用0.05%PBST洗板5次（5次）。

 

3. 向各孔中加入100µL封闭缓冲液，封闭平板，并在室温下孵育1小时。

4. 用0.05%PBST洗板5次（5次）。

 

  • 用试验稀释剂稀释利妥昔单抗预加标血清或血浆，制备标准品(10–250 ng/mL)。向适当孔中加入50µL标准品、对照品和稀释样品。盖上微孔板，在室温下孵育1小时。

6. 用0.05%PBST洗板5次（5次）。

 

  • 用试验稀释剂将检测抗体（生物素偶联抗利妥昔单抗检测抗体）稀释10倍。向各孔中加入50µL制备的检测抗体溶液，并在室温下孵育1小时。

8. 用0.05%PBST洗板5次（5次）。

 

9. 加入100µL链霉亲和素(HRP)，并在室温下于暗处孵育平板30 min。

10. 用0.05%PBST洗板5次（5次）。

 

11. 加入100µL TMB底物溶液，并将平板在室温下避光孵育20 min。

12. 加入100µL终止液终止反应。

 

13. 在20 min内，在酶标仪中读取设定为450 nm的吸光度（参考波长为650 nm）。

 

 

技术提示

 

 

· 使用前将试剂恢复至室温

· 不同批次的试剂在使用时不得混合。

· 避免样本和试剂之间的任何污染。

· TMB保持无色直至加入平板。TMB避光保存。

  • 加入终止液后，孔中的显色颜色将立即从蓝色变为黄色。显示绿色的孔表示终止液和TMB未充分混合。
  • 绘制各标准品的OD450/650 nm作为Y轴，对应利妥昔单抗浓度作为X轴，构建四参数逻辑(4 pL)标准曲线。在OD450/650 nm与利妥昔单抗浓度不能很好匹配的情况下，请使用五参数逻辑(5 pL)或具有适当加权因子的点对点生成标准曲线。

 

安全要求

 

 

· 处理试剂和样本时，穿戴适当的PPE（例如手套、实验室工作服）。

  • 本试剂盒含有人源性组分。发现这些材料对HBsAg、HCV抗体以及HIV 1/2抗原和抗体无反应性。然而，这些材料应被视为具有潜在传染性，因为没有试验可以保证*没有传染性因子。
  • 避免直接接触TMB和终止液，这可能会引起皮肤/眼睛刺激。如果与终止液和底物溶液接触，请用水*清洗皮肤/眼睛，并在必要时就医。

· 根据适用的国家法规要求处置消耗材料和未使用的内容物。

 

 

平板布局

 

 

 

 

12

 

 

 

 

 

 

 

 

 

11

 

 

 

 

 

 

 

 

 

10

 

 

 

 

 

 

 

 

 

9

 

 

 

 

 

 

 

 

 

8

 

 

 

 

 

 

 

 

 

7

 

 

 

 

 

 

 

 

 

6

 

 

 

 

 

 

 

 

 

5

 

 

 

 

 

 

 

 

 

4

 

 

 

 

 

 

 

 

 

3

 

 

 

 

 

 

 

 

 

2

 

 

 

 

 

 

 

 

 

1

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

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大肠杆菌表达重组肠激酶rEK(不带标签) 牛肠激酶|Enterokinase,Recombinant,Expressed in E.coli

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大肠杆菌表达重组肠激酶rEK(不带标签) 牛肠激酶|Enterokinase,Recombinant,Expressed in E.coli

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品简介

 

重组肠激酶（rEK）是一种高纯度的重组牛肠激酶轻链片段，氨基酸序列与牛肠激酶轻链一致，有着和天然提取的肠激酶同样特异的酶切位点，切割位点Asp-Asp-Asp-Asp-Lys，可去除位于蛋白N-末端的融合蛋白，以除去不需要的融合标签，同时重组肠激酶（rEK）具有比天然酶更高的切割活性。

翌圣重组肠激酶为采用重组大肠杆菌分泌表达的高纯度、高活性、高特异的牛肠激酶，不含其他蛋白酶，可以在较宽pH范围（4.5-9.5）和较宽温度范围内有效切割融合蛋白，并且在各种去垢剂和变性剂存在的条件下仍具有部分活性。本品不含标签，由于具有极高酶切活性，酶切反应使用量少，不影响下游蛋白应用，可不考虑除去。

 

产品信息

 

货号

20401JP60 / 20401JP70 / 20401JP76 / 20401JP80 / 20401JP90

规格

100 U / 200 U / 500 U / 1000 U / 5000 U

 

产品性质

 

来源（Source）

大肠杆菌表达

分子量（Molecular Weight）

理论值25.85 kDa

外观（Appearance）

澄清、无色至淡黄色液体

酶浓度（Enzyme Concentration）

≥5 U/uL

活性定义（Activity Definition）

一个活性单位定义为25°C，12-16 h，在25 mM Tris-HCl，Ph 8.0缓冲体系下，将500 μg带有肠激酶酶切位点的融合蛋白切开95%所需要的酶量

内毒素检测（Endotoxin）

用LAL法测定内毒素含量小于1 EU/μg

质量保证（Quality assurance）

经多次柱纯化，SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带；不含其他蛋白酶，无非特异性切割

缓冲体系（Buffer）

50 mM Tris-HCl，pH8.0，250 mM NaCl，2 mM Ca 2+，50%甘油

 

储存条件

 

-25~-15℃保存，有效期2年。尽量避免反复冻融（5次以内，无活性损失）

 

使用方法（应用举例）

【注】该酶效力高且待切蛋白结构性质不同，建议先进行预实验摸索酶使用浓度及酶切反应时间。

1）反应体系

融合蛋白

0.05-0.1 mg（蛋白浓度：0.1-1 mg/mL）

Enterokinase

0.1-0.2 U

缓冲体系

25 mM Tris-HCL 8.0

2）反应条件：25°C过夜酶切（注：完全酶切需要16-24 h）。

【注】重组肠激酶可使用25 mM Tris-HCl pH 8.0稀释成每1 μL含0.1 U的溶液使用。

4°C低温酶切条件：4°C能对底物进行有效酶切，但需要延长酶切时间至48-64 h 或者增加2-3倍酶量。

 

注意事项

 

  1. 本产品所讲述的缓冲体系需要自行配置。
  2. 不建议37℃条件下酶切，可能会有非特异性酶切出现。
  3. 在＞200 mM咪唑，或＞200 mM NaCl，或＞5%甘油，酶切会受到影响。如果样品溶液中含有上述成分的一种或多种，为获得理想的酶切结果，请先将样品透析到25 mM Tris-HCl 8.0缓冲液中，然后再进行酶切实验；若不方便透析，可将样品稀释到咪唑含量在100 mM以下，NaCl浓度在50 mM以下，甘油浓度小于5%以下进行酶切，酶的用量与蛋白比例不变；若干扰因素很多，且不便去除，需要适当增加酶量或延长酶切时间，有助于得到理想的酶切效果。
  4.  磷酸盐对Enterokinase有很强的抑制作用，痕量的磷酸盐都会严重影响Enterokinase的活性，因此在酶切体系内不能存在磷酸盐。
  5.  本品是具有高酶活力重组肠激酶，切割蛋白使用量少，可不考虑除去。后续如需去除重组肠激酶，可用阴离子交换树脂（如DEAE-FF）对其进行洗脱。推荐洗脱条件如下：

         平衡缓冲液：25 mM Tris-HCl pH 8.0

         洗脱缓冲液：25 mM Tris-HCl pH 8.0，含100 mM NaCl
     6. 蛋白酶切效果不好，可适当增加酶量，或适当延长酶切时间。

     7. 本产品仅作科研用途。

     8. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

 

Ver.CN20231101

Q：该酶使用浓度是多少？

A：该酶效力高且待切蛋白结构性质不同，建议先进行预实验摸索酶使用浓度及酶切反应时间。

Q：如果需要去除重组肠激酶，该如何去除？

A：本品不含标签，后续如需去除重组肠激酶，可用阴离子交换树脂（eg.DEAE-FF） 对其进行洗脱。

Q：本品一定要去除吗？

A：本品是具有高酶活力重组肠激酶，切割蛋白使用量少，可不考虑除去。

Q：本品酶切效果不好怎么办？

A：蛋白酶切效果不好，可适当增加酶量，或适当延长酶切时间。

[1] Deng Z, Zeng Q, Tang J, et al. Anti-inflammatory effects of FS48, the first potassium channel inhibitor from the salivary glands of the flea Xenopsylla cheopis. J Biol Chem. 2021;296:100670. doi:10.1016/j.jbc.2021.100670(IF:5.157)
[2] Hong B, Chang Q, Zhai Y, Ren B, Zhang F. Functional Characterization of Odorant Binding Protein PyasOBP2 From the Jujube Bud Weevil, Pachyrhinus yasumatsui (Coleoptera: Curculionidae). Front Physiol. 2022;13:900752. Published 2022 Apr 27. doi:10.3389/fphys.2022.900752(IF:4.566)

产品简介

 

重组肠激酶（rEK）是一种高纯度的重组牛肠激酶轻链片段，氨基酸序列与牛肠激酶轻链一致，有着和天然提取的肠激酶同样特异的酶切位点，切割位点Asp-Asp-Asp-Asp-Lys，可去除位于蛋白N-末端的融合蛋白，以除去不需要的融合标签，同时重组肠激酶（rEK）具有比天然酶更高的切割活性。

翌圣重组肠激酶为采用重组大肠杆菌分泌表达的高纯度、高活性、高特异的牛肠激酶，不含其他蛋白酶，可以在较宽pH范围（4.5-9.5）和较宽温度范围内有效切割融合蛋白，并且在各种去垢剂和变性剂存在的条件下仍具有部分活性。本品不含标签，由于具有极高酶切活性，酶切反应使用量少，不影响下游蛋白应用，可不考虑除去。

 

产品信息

 

货号

20401JP60 / 20401JP70 / 20401JP76 / 20401JP80 / 20401JP90

规格

100 U / 200 U / 500 U / 1000 U / 5000 U

 

产品性质

 

来源（Source）

大肠杆菌表达

分子量（Molecular Weight）

理论值25.85 kDa

外观（Appearance）

澄清、无色至淡黄色液体

酶浓度（Enzyme Concentration）

≥5 U/uL

活性定义（Activity Definition）

一个活性单位定义为25°C，12-16 h，在25 mM Tris-HCl，Ph 8.0缓冲体系下，将500 μg带有肠激酶酶切位点的融合蛋白切开95%所需要的酶量

内毒素检测（Endotoxin）

用LAL法测定内毒素含量小于1 EU/μg

质量保证（Quality assurance）

经多次柱纯化，SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带；不含其他蛋白酶，无非特异性切割

缓冲体系（Buffer）

50 mM Tris-HCl，pH8.0，250 mM NaCl，2 mM Ca 2+，50%甘油

 

储存条件

 

-25~-15℃保存，有效期2年。尽量避免反复冻融（5次以内，无活性损失）

 

使用方法（应用举例）

【注】该酶效力高且待切蛋白结构性质不同，建议先进行预实验摸索酶使用浓度及酶切反应时间。

1）反应体系

融合蛋白

0.05-0.1 mg（蛋白浓度：0.1-1 mg/mL）

Enterokinase

0.1-0.2 U

缓冲体系

25 mM Tris-HCL 8.0

2）反应条件：25°C过夜酶切（注：完全酶切需要16-24 h）。

【注】重组肠激酶可使用25 mM Tris-HCl pH 8.0稀释成每1 μL含0.1 U的溶液使用。

4°C低温酶切条件：4°C能对底物进行有效酶切，但需要延长酶切时间至48-64 h 或者增加2-3倍酶量。

 

注意事项

 

  1. 本产品所讲述的缓冲体系需要自行配置。
  2. 不建议37℃条件下酶切，可能会有非特异性酶切出现。
  3. 在＞200 mM咪唑，或＞200 mM NaCl，或＞5%甘油，酶切会受到影响。如果样品溶液中含有上述成分的一种或多种，为获得理想的酶切结果，请先将样品透析到25 mM Tris-HCl 8.0缓冲液中，然后再进行酶切实验；若不方便透析，可将样品稀释到咪唑含量在100 mM以下，NaCl浓度在50 mM以下，甘油浓度小于5%以下进行酶切，酶的用量与蛋白比例不变；若干扰因素很多，且不便去除，需要适当增加酶量或延长酶切时间，有助于得到理想的酶切效果。
  4.  磷酸盐对Enterokinase有很强的抑制作用，痕量的磷酸盐都会严重影响Enterokinase的活性，因此在酶切体系内不能存在磷酸盐。
  5.  本品是具有高酶活力重组肠激酶，切割蛋白使用量少，可不考虑除去。后续如需去除重组肠激酶，可用阴离子交换树脂（如DEAE-FF）对其进行洗脱。推荐洗脱条件如下：

         平衡缓冲液：25 mM Tris-HCl pH 8.0

         洗脱缓冲液：25 mM Tris-HCl pH 8.0，含100 mM NaCl
     6. 蛋白酶切效果不好，可适当增加酶量，或适当延长酶切时间。

     7. 本产品仅作科研用途。

     8. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

 

Ver.CN20231101

Q：该酶使用浓度是多少？

A：该酶效力高且待切蛋白结构性质不同，建议先进行预实验摸索酶使用浓度及酶切反应时间。

Q：如果需要去除重组肠激酶，该如何去除？

A：本品不含标签，后续如需去除重组肠激酶，可用阴离子交换树脂（eg.DEAE-FF） 对其进行洗脱。

Q：本品一定要去除吗？

A：本品是具有高酶活力重组肠激酶，切割蛋白使用量少，可不考虑除去。

Q：本品酶切效果不好怎么办？

A：蛋白酶切效果不好，可适当增加酶量，或适当延长酶切时间。

[1] Deng Z, Zeng Q, Tang J, et al. Anti-inflammatory effects of FS48, the first potassium channel inhibitor from the salivary glands of the flea Xenopsylla cheopis. J Biol Chem. 2021;296:100670. doi:10.1016/j.jbc.2021.100670(IF:5.157)
[2] Hong B, Chang Q, Zhai Y, Ren B, Zhang F. Functional Characterization of Odorant Binding Protein PyasOBP2 From the Jujube Bud Weevil, Pachyrhinus yasumatsui (Coleoptera: Curculionidae). Front Physiol. 2022;13:900752. Published 2022 Apr 27. doi:10.3389/fphys.2022.900752(IF:4.566)