线性聚乙烯亚胺PEI的应用领域和使用注意事项
线性聚乙烯亚胺PEI的应用领域和使用注意事项
gmp级pei操作方法
Jinpan Polyethyleneimine PEI PRO(GMP)
订购信息
货号 |
产品名称 |
规格 |
78EF10003–5Ml 78EF10003-1L |
Jinpan Polyethyleneimine PEI PRO(GMP) |
5Ml 1L |
储存温度:2-4℃保存⼀年。(避免冷冻)
产品描述
Jinpan Polyethyleneimine PEI PRO(GMP)是GMP级别转染试剂,本制品利BIOHUB公司生产的线性阳离子聚合物,按照符合GMP认证管理体系下,采用药用规格原辅料生产,所用起始材料及所需化学品和配制过程均在无菌环境中操作进行,以确保制造过程中每个步骤的特性、效力、纯度和安全性的一致性 。并严格控制重金属残留、细菌内毒素残留等,生产工艺符合 GMP 规范的产品生产与质量管理规程,保障生产过程及所有原辅料可追溯。
操作方法参考
一、贴壁细胞转染 以 6 孔板转染 293T 细胞为例:
(一)转染前准备
1) 转染前一天:用胶原酶 (WORTHINGTONG 公司 LS004196)消 化细胞并计数(不建议用胰酶)。 按照每孔2×10 6的细胞量接种293T至6孔板(每孔加入2ml新鲜DMEM:F12+5%FBS *培养基和 1ml 的细胞悬液)置于 37°C,5%CO2培养箱培24h。
2) 24h 后,移除之前培养基,每孔加入 2ml 新鲜的 DMEM:F12+5%FBS。
注意:确保 293T 细胞生长状态良好传代 不超过15代。
(二)转染过程
3) 第一天:显微镜下检查细胞汇合度,当细胞达到 70%到 80%的汇合度时,开始准备转染。
4) 对于每孔细胞,用 100µl 无血清培养基(如 OPTI-MEMⅠ培养基)稀释 DNA 使 DNA 终浓 度为 1ug/ml(DNA/总培养体积)。
5) 对于每孔细胞,用100μ无血清培养基(如 OPTI-MEMⅠ培养基)稀释适当比例的适量 Jinpan-PRO GMP 。DNA:Jinpan-PRO GMP 的比例要依据自己实验摸索最适比例。
6) 将稀释的 Jinpan-PRO GMP转染试剂加入到稀释的质粒中(总体积 200µL)轻轻混匀, 室温孵育30分钟。
7) 小心地将 Jinpan-PRO GMP复合物滴加到细胞培养板每个孔中,轻轻摇动培养板混匀。注 意加入混合液时轻轻沿着孔板边缘滴入,而不是在细胞的顶部以免破坏细胞的粘附性。
8) 将培养板放入 37°C,5%CO2培养箱培养中培养 24h。
(三)观察转染结果 9) 第二天:在荧光显微镜下观察细胞转染效率,通常超过 80%的 293T 细胞在转染后的 24h 可以观察到绿色荧光。 小贴士 :建议进行不同基因转染时应对 Jinpan-PRO GMP 和 DNA 的比例进行优化,以达到最适比例, 通常筛选范围在 1:1 到 1:3 之间。如果之前用过进口品牌的 PEI,用Jinpan-PRO GMP时应适当 降低使用浓度。
通常情况下,分别准备Jinpan-PRO GMP 和DNA转染溶液时其体积一般是转染前每孔细胞培 养液体积总量的 1/10-1/20,如细胞培养液体积为 3ml,则稀释Jinpan-PRO GMPI及 DNA 的体积为150ul。质粒 DNA 的浓度通常为 1ug/ml(DNA 质量/细胞培养总体积)[1][4]。 不同质粒种类以及大小会影响转染效率,如较大片段插入质粒可能转染效率低,可根据 实际实验需要调整,如适当增加转染质粒总量等。 ØHEK293 GnTI 细胞重悬浮可用枪头或移液管反复吹打,但 CHO-S 细胞的粘附性比较强 重悬浮时需要借助细胞刮刀。 一般建议用胶原酶消化细胞,如果表达的是膜蛋白,胰酶消化细胞可能会降低蛋白表达, 建议用胶原酶消化细胞,我们推荐(LS004196WORTHINGTONG)的胶原酶。 对于贴壁性低的细胞系,可用明胶或鼠尾胶铺板,增加细胞与培养皿之间的粘附性。 一旦确定了细胞类型、培养基和78BioPEI GMP与 DNA 的最佳比例,就可以在转染后 24 至 96 小时内多次观察转染效率,以优化最大表达量时间点。
二、悬浮细胞转染 离心对数期生长的细胞用新鲜的培养基重悬浮使细胞密度达到 1×10 6cells/mL 小规模转 染时,如需大规模转染细胞密度要到达 2-3×10 6cellsml/mL,可参考文献[4]。以 293F 细胞 于 100mL 培养瓶(溶液体积占瓶体积的 1/5)操作体系举例如下:
(一)转染前准备
1) HEK293F 细胞传代接种于 20mL 悬浮细胞生长培养基中(36.5℃,120rpm,5%CO2 )的条 件下培养。当细胞密度到 1X10 6cells/mL,然后旋紧瓶口放入摇床继续培养,2~4 小时 后可以进行转染。
(二)转染过程
2) 用 1mlOptiPRO™SFM(无血清培养基)稀释适量的 DNA,使 DNA 终浓度为 1ug/ml(DNA/总 培养体积)。混匀并静置 5min。
3) 用1mlOptiPRO™SFM(无血清培养基)稀释适当比例的Jinpan-PRO GMP,混匀并静置 10min。
(78BioPEI:DNA 参考比例范围,可参考上述贴壁细胞Jinpan-PRO GMP和 DNA 优化方案优化)。
4) 将Jinpan-PRO GMP转染试剂加入到稀释的质粒中轻轻混匀,室温孵育 30 分钟。
5) 将Jinpan-PRO GMP转染复合物逐滴加入到细胞培养液中,摇匀后旋紧瓶口放回摇床 (36.5℃,5%CO2,120rpm)。
6) 基因表达可在 24-72 小时后检测,具体时间取决于细胞系和转基因.
小贴士
在悬浮培养中,单个细胞的转染效率要高于聚集在一起的细胞,需要优化适合单细胞的 生长条件。 方形瓶应经过两个连续的干燥循环高压灭菌(每个 45 分钟,干燥 15 分钟) 盖子应尽可能松,不得脱落。应该让它们冷却拧紧盖子前,将其*放入层流罩中。如果瓶子向内塌陷,细胞将无法正常生长。 如果要获得更多的蛋白产量,有参考文献表明转染后 24 小时,可以适当稀释细胞,稀释比例参考范围(1:2—1:5)之间,可以增加蛋白产量,稀释效应与最佳稀释比率应根 据经验确定, 可以把 DNA 和Jinpan-PRO GMP 转染试剂直接加入到细胞悬液中进行转染,但必须经过上述 特定流程的 DNA 和转染试剂的比例和用量的相应优化。
简要描述:上海金畔生物自产线性PEI转染试剂PEI转染注意要点 化学名:线性聚乙烯亚胺,线性PEI,聚乙烯亚胺,线性,MW 25000,转染级订货号#: 9002-98-6 规格:1G 品牌:Jinpan CAS#: 9002-98-6,26913-06-4 分子式:(CH2CH2NH)n 分子量: 25,000
详细介绍
产品咨询
Jinpan品牌线性PEI转染试剂说明书
Jinpan品牌
PEI转染注意要点
化学名:线性聚乙烯亚胺,线性PEI,聚乙烯亚胺,线性,MW 25000,转染级
订货号#: 9002-98-6 规格:1G 品牌:Jinpan CAS#: 9002-98-6,26913-06-4
分子式:(CH2CH2NH)n 分子量: 25,000 熔点: 73-75º
溶于:热水,低pH冷水,甲醇和乙醇。 不溶于:苯,乙酉迷和丙酮
外观:白色至黄色固体 处理:手套和通风橱
储存:在室温下避光干燥储存
配置:1:称取100mg线性聚乙烯亚胺,加新鲜的细胞级别的水90ml,加盐酸至PH=3左右, 加热至80℃左右搅拌过夜溶解PEI,
2:用氢氧化钠溶液调整pH值至7.0 ,定容至100ml,用0.22um的滤器过滤,分装后储存于4℃,保质期可以达到12个月。
转染操作流程:
◆ 瞬时转染方法 1. 接种细胞: 转染前一天,用胶原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化细胞并计数(不建议用胰酶)。调整细胞浓度,将细胞铺入细胞培养的器皿,每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到 70~80%。
2. 准备 DNA-PEI 复合物: DNA、PEI 试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。,用 Opti-MEM ITM(Invitrogen)或其他适合的无蛋白培养基稀释适量 DNA。用同样的培养基稀释 PEI 试剂。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有 DNA 溶液 的试管,一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中(注意:请勿颠倒添加顺序)。充分混匀后,室温静置 10~25 min 以形成 DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时,请用圆底聚丙烯管,例如 NEST 5 mL /14 mL 离心管。
3. 转染细胞: 直接向每个孔中加入 DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时,去除生长培养基,替换成无血清培养基,然后滴DNA-PEI复合物。转染 3 h 后,添加½体积的包含 30%血清的生长培养基。
4. 孵育细胞和分析结果: 在 CO2培养箱中 37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染后快 7 h 即可检测到转入基因的表达。 请自行确定适合检测时间。
◆稳定转染方法
1. 接种细胞: 转染前一天,用胶原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化细胞并计数(不建议用胰酶)。调整细胞浓度,将细胞铺入细胞培养的器皿,每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到 70~80%。
2. 准备 DNA-PEI 复合物: DNA、PEI 试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据表 1 所示,用 Opti-MEM ITM(Invitrogen)或其他适合的无蛋白培养基稀释适量 DNA。用同样的培养基稀释 PEI 试剂。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 线性PEI转染试剂(这个需要客户自行摸索配比,每一批转染试剂和每一批DNA比例可能会稍有不同)。一边轻轻涡旋装有 DNA 溶液的试管,一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中(注意:请勿颠倒添加顺序)。充分混匀后,室温静置 10~25 min 以形成 DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时,请用圆底聚丙烯管,例如 NEST 5 mL /14 mL 离心管。
3. 转染细胞: 直接向每个孔中加入 DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时,去除生长培养基,替换成无血清培养基,然后滴DNA-PEI复合物。转染 3 h 后,添加½体积的包含 30%血清的生长培养基。
4. 孵育细胞和分析结果: 在 CO2培养箱中 37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染后 7 h 即可检测到转入基因的表达。
5.转染 24 h 后,将细胞传代至新鲜的生长培养基中(将细胞稀释 10 倍 以上),在 CO2培养箱中 37℃孵育过夜。第二天加入与转染抗性基因相匹配的筛选药物。约 1~2 周可 筛选到耐药性克隆,在这期间需经常更换含筛选药物的生长培养基。 „
上海金畔生物自产线性PEI转染试剂特别提醒
1. PEI 25K含有4-11%的残留丙酰基,这可能阻碍聚合物主链与DNA的有效结合,所以批间转染效率可能会有比较大的差异,建议一个批次可以多购买,PEI 25K稳定性在室温干燥避光下可稳定保存10年以上(虽然有效期标注只有18个月左右)
2. 对于某些类型的细胞如 HEK-293、HEK293T、NIH/3T3 和 COS 细胞,在转染前两天铺板可显著 提高转入基因的表达水平。如果选择转染前两天铺板,可适当降低铺板密度,以确保转染时细胞的汇合度仍为 70~80%。
3. 对于接触抑制敏感的细胞,可适当降低铺板密度。
4. 即使在有蛋白(如 10%的血清)存在的情况下,DNA-PEI复合物仍能转染细胞,但是 DNA-PEI复合物必须在无蛋白存在的条件下形成。我们推荐使用 Opti-MEM ITM 培养基以达到宜转染效率。其他的无蛋白培养基则需测试与线性PEI转染试剂的兼容性。
5. 对大多数细胞来而言,每 1 μg DNA 使用 3.0 μL PEI转染试剂都能获得较高转染效率。使用 者也可尝试每 1 μg DNA 使用 1~4 μL 体积线性PEI转染试剂进行优化。
6.本手册只是一个基本操作手册,具体转染过程中需要根据实验进行优化,优化方向为混合时间,转染时间,DNA混合比列…….
7.Polyethylenimine, Linear (MW 25,000) 为Polysciences公司生产的化合物产品,每批产品出厂前都经过严格的检测,保证每批产品都*、稳定且高品质,但由于作为转染试剂使用过程中有很多实验室因素(配置方法,PH,水纯度,称量的准度,dna RNA纯度,细胞状态,细胞品系…)造成溶解出现问题或者转染效率出现差异,所以厂家只受理该产品纯度,分子量及重量缺失破损等相关投诉,针对极个别客户溶解问题和转染效率问题我们只能友善解决,所以不能保证您能获得满意答复,对于产品产品转染效率不高,转染批间有差异,转染不了等问题,不作为评价我们售后工作的依据。
如果我们提供的PEI手册都无法解答您的问题,建议您可以多看文献,多调整一下转染条件,找出适合自己细胞的转染方法。如果无暇摸索条件,您也可以直接购买我们配置好细胞转染液,这样免去您很多烦恼,谢谢理解
8.部分数据参考,本数据来源于网络,不作为售后投诉依据
上海金畔生物自产线性PEI转染试剂转染试剂和DNA配比数据
细胞型号 |
培养基 |
每孔细 胞数 |
DNA的量 |
转染试剂量 |
和培养基混合 4-6h |
293H |
DMEM |
3×104 |
0.2µg |
0.5µL |
DMEM+10�S |
293FT |
DMEM |
3×104 |
0.2µg |
0.5µL |
DMEM+10�S |
293E |
DMEM |
3×104 |
0.2µg |
0.5µL |
DMEM+10�S |
293F |
DMEM |
3×104 |
0.2µg |
0.5µL |
DMEM+10�S |
COS7 |
DMEM |
1.5×104 |
0.4µg |
0.5µL |
DMEM+10�S |
hela |
DMEM |
2×104 |
0.3µg |
0.5µL |
1640+15�S |
Caco2 |
MEM |
3.5×104 |
0.3µg |
0.75µL |
MEM+10�S |
BHK21 |
MEM |
2×104 |
0.2µg |
0.5µL |
MEM+10�S |
CHO-DG44 |
DMEM+HT+pro |
2×104 |
0.5µg |
0.5µL |
DMEM+HT+pro +10�S |
RAW264.7 |
DMEM |
3×104 |
0.2µg |
0.5µL |
DMEM +10�S |
MCF7 |
MEM/NEAA+0.01mg/mL insulin + sodium pyruvat |
2×104 |
0.1µg |
0.25µL |
MEM/NEAA+0.01mg/mL insulin + sodium pyruvat+10�S |
SW480 |
IMDM |
3×104 |
0.4µg |
0.5µL |
IMDM +10�S |
MDCK |
DMEM |
4×104 |
0.6µg |
1µL |
DMEM+10�S |
CHO-K1 |
IMDM+Pro |
3×104 |
0.2µg |
0.5µL |
IMDM+Pro +10�S |
HepG2 |
DMEM |
3×104 |
0.5µg |
0.75µL |
DMEM+10�S |
A549 |
DMEM |
2×104 |
0.3µg |
0.5µL |
DMEM+10�S |
NIH/3T3 |
DMEM |
1.5×104 |
0.1µg |
0.75µL |
DMEM+10�S |
vero |
DMEM |
3×104 |
0.3µg |
0.75µL |
DMEM+10�S |
sf9 |
SIM SF |
5×104 |
0.4µg |
0.75µL |
SIM SF+10�S |
转染效率
细胞种类 |
中文名称 |
PEI 转染效率 |
HEK293 |
人胚肾细胞 |
90%-95% |
293-T |
人胚肾细胞 |
90%-95% |
CHO-K1 |
仓鼠卵巢细胞 |
80%-90% |
U251 |
人源神经胶质瘤细胞 |
80%-90% |
Hela |
人源宫颈癌细胞 |
70%-80% |
COS7 |
猴SV40转化肾细胞 |
70%-80% |
HepG2 |
人源肝癌细胞 |
70%-80% |
NIH/3T3 |
小鼠胚胎成纤维细胞 |
60%-70% |
胶质瘤干细胞 |
人源胶质瘤干细胞 |
60%-70% |
Patu8988 |
人源胰腺癌细胞 |
60%-70% |
U2OS |
人源骨肉瘤细胞 |
60%-70% |
上海金畔生物自产线性PEI转染试剂价格表
货号 |
品名 |
规格 |
品牌. |
---|---|---|---|
23966-1 |
Polyethylenimine, Linear (MW 25,000) |
1g |
polysciences |
78pei25000 | 线性聚乙烯亚胺 分子量25000 | 100mg | biohub |
78pei25000 | 线性聚乙烯亚胺 分子量25000 | 1g | biohub |
78pei25000 | 线性聚乙烯亚胺 分子量25000 | 5g | biohub |
简要描述:上海金畔生物Jinpan 78PEI MAX 40K转染试剂说明书化学名:线性聚乙烯亚胺,线性PEI,聚乙烯亚胺,线性,MW 40000,转染级 线性聚乙烯亚胺 分子量40000订货号#: 49553-93-7 规格:100mg 500mg 5g品牌:Jinpan CAS#: 49553-93-7
详细介绍
产品咨询
上海金畔生物Jinpan 78PEI MAX 40K转染试剂说明书
化学名:线性聚乙烯亚胺,线性PEI,聚乙烯亚胺,线性,MW 40000,转染级
线性聚乙烯亚胺 分子量40000
订货号#: 49553-93-7 规格:100mg 500mg 5g
品牌:Jinpan CAS#: 49553-93-7
分子量: 40,000(~22,000自由基)
溶于:水 不溶于:常用有机溶剂(乙醇,丙酮,四氢呋口南)
外观:白色至灰白色自由流动的固体
处理:手套和通风橱 储存:在室温下避光干燥储存
PEI MAX 40K(在游离碱中也称为PEI 22K)是一种功能强大,值得信赖且经济实惠的瞬时转染试剂。在HEK293和CHO大多数表达系统中,PEI MAX都能提供稳定的高表达(96孔板至100L生物反应器)。现在每年有更多的研究人员和公司来使用PEI MAX进行细胞转染,因为相对于大多数转染试剂而言 PEI MAX既能等到稳定的高表达又能使转染成本降低少40%。
PEI MAX 比更PEI 25K易于使用,并且比PEI 25K有更高的转染效率,通常PEI 25K转染过程通常需要几个小时才能完成准备,而PEI MAX 40K可在两小时内完成整个转染过程。另外,PEI 25K含有4-11%的残留丙酰基,这可能阻碍聚合物主链与DNA的有效结合,而PEI MAX 40K的丙酰基*脱落,意味着PEI MAX每批产品的性能更加稳定。
货号 |
品名 |
规格 |
---|---|---|
78pei40000 | 线性聚乙烯亚胺 分子量40000 | 100mg |
78pei40000 | 线性聚乙烯亚胺 分子量40000 | 1g |
78pei40000 | 线性聚乙烯亚胺 分子量40000 | 5g |
PEI Transfection
Transfection:
Reagents:
PEI (1ug/ul) – PEI is Polyethylenimine 25kD linear from Polysciences (cat# 23966-2). To make a stock solution:
货号 | 品名 | 价格¥ | 规格 | 品牌 | 备注 |
23966-2 | POLYETHYLENIMINE LINEAR | 2864 | 2 g | polysciences | 大量现货 |
24765-2 | POLYETHYLENEIMINE 'MAX' | 3184 | 2 g | polysciences | 转染效率高30% 更好溶解 |
78002qf01 | 线性PEI转染液 | 200 | 1ml | jinpanbio | 23966配制 |
78002qf02 | 线性PEI转染液 | 600 | 50ml | jinpanbio | 23966配制 |
78002qf03 | 线性PEI转染液 | 1800 | 500ml | jinpanbio | 23966配制 |
78003qf01 | 线性PEI转染液 | 200 | 1ml | jinpanbio | 24765配制 |
78003qf02 | 线性PEI转染液 | 700 | 50ml | jinpanbio | 24765配制 |
78003qf03 | 线性PEI转染液 | 2200 | 500ml | jinpanbio | 24765配制 |
78004qf01 | POLYETHYLENIMINE LINEAR | 1432 | 1g | jinpanbio | 23966分装 |
78005qf01 | POLYETHYLENEIMINE 'MAX'(40 000M.W.* | 1592 | 1g | jinpanbio | 24765分装 |
PEI转染的方法
常规转染技术可分为两大类,一类是瞬时转染,一类是稳定转染(*转染)。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中,因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数,产生高水平的表达,但通常只持续几天,多用于启动子和其它调控元件的分析。一般来说,超螺旋质粒DNA转染效率较高,在转染后24-72小时内(依赖于各种不同的构建)分析结果,常常用到一些报告系统如荧光蛋白,β半乳糖苷酶等来帮助检测。后者也称稳定转染,外源DNA既可以整合到宿主染色体中,也可能作为一种游离体(episome)存在。尽管线性DNA比超螺旋DNA转入量低但整合率高。外源DNA整合到染色体中概率很小,大约1/104转染细胞能整合,通常需要通过一些选择性标记,如来氨丙基转移酶(APH;新霉素抗性基因),潮霉素B磷酸转移酶(HPH),胸苷激酶(TK)等反复筛选,得到稳定转染的同源细胞系。
PEI转染的方法
材料:质粒DNA 指数生长的真核细胞 PEI (聚乙烯亚胺,是线性的) 1×HBS (pH7.4)
配方: PEI 储存液(100 μM):称取125 mg PEI 粉末溶解于50 ml 1×HBS (pH7.4)
中, 0.2 μm 滤膜过滤,储存于4℃备用。
1×HBS (pH7.4): 将8.76 g NaCl 溶解于900 ml 超纯水,加入20 ml 1 M 的
HEPES,调pH 值到7.4,定容至1 L,过滤(0.2 μm 滤膜)后储存于4℃备用。
方法:
1.细胞分盘: 通过胰酶消化收集细胞,用适当的*培养基以4×105 至8×105
细胞/cm2 的密度平铺细胞于60 mm 组织培养皿上(根据实验需要选择培养皿,
使细胞贴壁后所占总面积达到培养皿面积的70-90%)。根据细胞贴壁情况于
含5% CO2 的37℃温箱中孵育8-24 h,当细胞贴壁*后即可开始转染。转染
前换入2 mL 预热的无血清培养基。
2. 制备PEI-DNA 混合物:以60 mm 组织培养皿用420 μL 反应总体积为例。准
备两支1.5 mL 离心管,一管将质粒DNA(总量2-8 μg 为佳)加入240 μL HBS
中,混匀。另一管中则用HBS 将100 μM 的PEI 储存液稀释成10 μM,充分
混合。然后取180 μL 10 μM PEI 溶液加入含有DNA 的HBS 中,充分混匀后
室温静置20-30 min。zui后将这420 μL 的PEI-DNA 混合液逐滴加入上述单层
细胞的细胞培养基中,轻轻摇动平皿混匀,置于含5%~7% CO2 的37℃ 温箱
孵育。
注:每次用100 μM 的PEI 储存液前都需要先将其充分混匀,保证所取的
浓度一致。
3. 培养6-10 h 后更换为37℃预热的含有血清的培养基,继续培养,16 h 左右
可以观测到报告基因的表达。
订货信息
货号 | 品名 | 价格¥ | 规格 | 品牌 | 备注 |
23966-2 | POLYETHYLENIMINE LINEAR | 2864 | 2 g | polysciences | 大量现货 |
24765-2 | POLYETHYLENEIMINE 'MAX' | 3184 | 2 g | polysciences | 转染效率高30% 更好溶解 |
78002qf01 | 线性PEI转染液 | 200 | 1ml | jinpanbio | 23966配制 |
78002qf02 | 线性PEI转染液 | 800 | 50ml | jinpanbio | 23966配制 |
78002qf03 | 线性PEI转染液 | 5500 | 500ml | jinpanbio | 23966配制 |
78003qf01 | 线性PEI转染液 | 200 | 1ml | jinpanbio | 24765配制 |
78003qf02 | 线性PEI转染液 | 700 | 50ml | jinpanbio | 24765配制 |
78003qf03 | 线性PEI转染液 | 2200 | 500ml | jinpanbio | 24765配制 |
78004qf01 | POLYETHYLENIMINE LINEAR | 1432 | 1g | jinpanbio | 23966分装 |
78005qf01 | POLYETHYLENEIMINE 'MAX'(40 000M.W.* | 1592 | 1g | jinpanbio | 24765分装 |
简要描述:Jinpan 线性聚乙烯亚胺PEI MW25000 转染试剂系列是基于聚乙烯亚胺(Polyethylenimine,PEI)的产品,因其较高的转染效果,已广泛应用于AAV,LV和重组蛋白等工业化生产。聚乙烯亚胺是一种具有较高阳离子电荷密度的有机大分子,每相隔两个碳原子,即每第三个原子都是质子化的氨基氮原子,使得聚合物网络在任何pH下都能充当有效的“质子海绵”体(proton sponge),因
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Jinpan 生产的78Bio PEI是一种优化的线性阳离子聚合物转染试剂,分子量分别为 25000 和 40000,78BioPEI40000 相比 25000 转染效率高,但毒性也略大于 78PIE25000。在 HEK293 和 CHO 的蛋白表达系统中,相比于市面上的脂质体 78BioPEI 都表现出高的蛋白表达量(无 论是 96 孔板还是 100L 的细胞反应器),以及更小的细胞毒性、更高的转染效和更高的可 重复性,并且十分经济的高性价比转染试剂。产品具有以下特点:
1.转染效率高,细胞毒性低; 蛋白表达量高;
2.节约成本:Jinpan 78 PEI转染试剂 ,进口品质,亲民价格,至少能够降 40% 的转染试剂总成本;
3.适用于 HEK293 等真核细胞的转染;
4.适用于贴壁细胞和悬浮细胞的转染;
5.适用于有血清和无血清的转染条件;
6. 无机试剂,无动物源成分;
7. 产品稳定,质控严格;
8. 工艺流程适用范围广,容易优化 适合小规模培养板,培养瓶到大规模的生物反应器。
表1 可借鉴的转染参数(96-孔- 5L 生物反应[4)
96-孔板6-孔板
6 孔深孔板
-ThinCertTM
细胞培养体系
接种细胞量(*106
cell/mL)
200u1
0.2
悬浮细胞初始量100 ul
DNA 量-DNA (W)
/培养总体积(V)
DNA:L78BioPEI
(w:w) 比例
DNA 溶解体积
lug/ml
1: 1-1:5
20 uL
78BioPEI 溶解体积80 uL
2 mL6 mL
1.5-2.01.5-2.0
1.8 mL5.0-5.4 mL
1 ug'mL1 ug/ml
1: 1-1:5 1: 1-1:5
100 uL500-300 uL
100uL500-300 uL
125 mL 培养瓶
25 mL
1.5-2.0
22.5 mL
1 ug/ml
1: 1-1:5
1.25 mL
1.25 mL
PEI转染手册
转染操作流程:
1、细胞传代:
转染前24h内分离293T细胞至含10%胎牛血清的DMEM培养基 中进行传代培养,接种密度如下:
6孔板:0.5×106细胞
10cm培养皿:4.0×106细胞
15cm培养皿:9.0×106细胞
2、转染
转染前将所有试剂置于室温。
2.1质粒DNA的稀释
在无菌试管中,用无血清的DMEM W / O酚红培养基(浓度为10%)稀释质粒DNA(ug)。病毒包装体(psPAX2):病毒包膜(pMD2G)和重组质粒DNA的稀释比例分别为4:2:1。
6孔板:200ul+3ug的DNA
10cm培养皿:1ml+7-8ug的DNA
15cm培养皿:2ml+11-12ug的DNA
2.2 转染复合体形成
将PEI(1ug/uL)加入已稀释的总DNA中,PEI与DNA(ug)的混合比率为3:1。加入后立即涡旋混合。
6孔板:9ul PEI复合体(1ug/ul)=9ug
10cm培养皿:21ul PEI复合体(1ug/ul)=21ug
15cm培养皿:33ul PEI复合体(1ug/ul)=33ug
将添加到细胞的DNA/ PEI的混合物在室温下孵育15分钟。
4、收获转染细胞
转染后48小时内收获转染细胞/或病毒上清。
试剂的配制:
PEI(1ug/ul)
1、将无内毒素的无菌水加热至80℃左右溶解PEI,冷却到室温。
2、调整pH值至7.0,用0.22um的滤器过滤消毒,分装后储存在-20℃。工作液可保持在4℃
订货信息
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友情提醒: BIOHIB的线性聚乙烯亚胺78pei25000
可完美替代 Polysciences公司货号为 23966-1Polyethylenimine, Linear (MW 25,000)的产品 BIOHIB的线性聚乙烯亚胺78pei40000
可完美替代 Polysciences公司货号为 24765-1 Polyethylenimine, Linear (MW 40,000)的产品
实验结果反馈如下:
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上海金畔生物自产BioHuB PEI与Polyscience 24765-1效果对比
实验结果反馈表
单位 |
**大学模式生物研究所 |
实验组名称 |
***实验室 |
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实验室研究方向 |
神经发育及再生 |
试用人 |
** |
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转染细胞种类 |
293T |
现用转染试剂品牌 |
Polyscience 24765-1 |
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转染选用质粒
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pLKO.1 |
现用转染试剂价格
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1g/****元 |
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转染后观察时间 |
24/48hr |
现用转染试剂规格及 平均可用时长 |
1g 2-3年 |
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相同转染条件下, BioHuB PEI与现用转染试剂效果对比
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BioHuB PEI转染效率:70-90% |
现用转染试剂转染效率:70-90% |
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试用结果图片展示:
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具体试用效果及建议: PEIMAX-40k 相比上代PEI-25k 整体转染效率增强,且在含血清培养基条件下仍可有效转染,且转染比例较高。对常用易转染细胞系实验,相比lipo系列,有较高的性价比。在一定条件下,适当增加transfer DNA量,可明显提高细胞转染效率及蛋白表达,且细胞活力正常。值得注意的是,过量PEIMAX 转染可能会产生细胞毒性,需对实验细胞进行预测试。 |