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E2F-Luc荧光素酶报告基因质粒(E2F Luciferase Reporter Plasmid)

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E2F-Luc荧光素酶报告基因质粒(E2F Luciferase Reporter Plasmid)

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

 

E2F-Luc萤光素酶报告基因（报告基因质粒）(E2F luciferase reporter plasmid)是金畔生物自主研发的用于检测E2F转录活性水平为目的的报告基因。E2F转录因子在细胞周期调控中其重要的作用。研究证明，E2F-1对细胞的生长具有双向调节作用，可以调节细胞的增殖和凋亡。因此，E2F与肿瘤发生、细胞凋亡、肿瘤抑制等均有密切关系。

E2F 报告基因主要用于检测细胞中Cell Cycle信号通路、药物研究、基因过表达和RNAi的表型分析等。

pE2F-Luc是金畔生物改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个E2F结合位点，可以高灵敏度地检测E2F的激活水平。同时，对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变，在保持原有功能不变的情况下，增加了质粒的转录因子结合特异性。由于质粒体积减小，使得E2F报告基因更易于转染。

 

质粒图谱

E2F-Luc荧光素酶报告基因质粒(E2F Luciferase Reporter Plasmid) 

 

质粒元件信息

E2F response element (E2F)

32-67

Minimal TA promoter (pTA)

96-108

Luciferase reporter gene

150-1812

SV40 late poly(A) signal

1847-2068

SV40 early promoter

2116-2534

Synthetic neomycin phosphotransferase (Neor) coding region

2559-3353

Synthetic poly(A) signal

3378-3426

Synthetic Beta-lactamase(Ampr) coding region

4541-5401

Synthetic poly(A) signal/transcriptional pause site

5506-5659

 

运输和保存方法

冰袋低温运输。–20℃保存。保质期1年。

 

注意事项

1）本质粒未经金畔生物允许不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位；

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；

3）本产品仅作科研用途！

4）不提供该质粒序列信息。

 

使用说明

1）首次使用1 µg包装的本产品时，请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定；

2）pE2F-Luc可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。用萤光素酶检测试剂盒或双萤光素酶检测试剂盒进行检测。

 

参考文献

[1] Tang J, Liu J, Li J, et al. Upregulation of SKA3 enhances cell proliferation and correlates with poor prognosis in hepatocellular carcinoma[J]. Oncology Reports, 2021, 45(4): 1-11.

[2] Wu P, Ding B, Ye L, et al. Zhibaidihuang decoction ameliorates cell oxidative stress by regulating the Keap1-Nrf2-ARE signalling pathway[J]. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine, 2020.

[3] Polovic M, Dittmar S, Hennemeier I, et al. Identification of a novel lncRNA induced by the nephrotoxin ochratoxin A and expressed in human renal tumor tissue[J]. Cellular and Molecular Life Sciences, 2018, 75(12): 2241-2256.

[4] Tang J, Liu J, Li J, et al. Upregulation of SKA3 enhances cell proliferation and correlates with poor prognosis in hepatocellular carcinoma[J]. Oncology Reports, 2021, 45(4): 1-11.

[5] Zheng Y, Stamminger T, Hearing P. E2F/Rb family proteins mediate interferon induced repression of adenovirus immediate early transcription to promote persistent viral infection[J]. PLoS pathogens, 2016, 12(1): e1005415.

 

相关产品

产品名称

货号

规格

Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit 双荧光素酶报告基因检测试剂盒HOT

11402JP60/80

100/1000 T

Luciferase Reporter Gene Assay Kit 萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒

11401JP60/76/80

100/500/1000 T

pGM-CMV Luciferase Reporter Plasmid Positive Control pGM-CMV-Luc荧光素酶报告基因质粒阳性对照

11556JP03

1 μg

Luciferase Reporter Plasmid negative control （荧光素酶报告基因质粒阴性对照）

11555JP03

1 μg

pGMLR-TK Luciferase Reporter Plasmid（pGMLR-TK海肾荧光素酶报告基因质粒）

11557JP03

1 μg

pGMLR-CMV Luciferase Reporter Plasmid（pGMLR-CMV海肾荧光素酶报告基因质粒）

11558JP03

1 μg

 

HB211026

 

 

E2F-Luc荧光素酶报告基因质粒(E2F Luciferase Reporter Plasmid)

暂无内容

[1] Wang H, Yu S, Peng H, et al. Long noncoding RNA Linc00337 functions as an E2F1 co-activator and promotes cell proliferation in pancreatic ductal adenocarcinoma. J Exp Clin Cancer Res. 2020;39(1):216. Published 2020 Oct 14. doi:10.1186/s13046-020-01725-5(IF:7.068)

 

E2F-Luc萤光素酶报告基因（报告基因质粒）(E2F luciferase reporter plasmid)是金畔生物自主研发的用于检测E2F转录活性水平为目的的报告基因。E2F转录因子在细胞周期调控中其重要的作用。研究证明，E2F-1对细胞的生长具有双向调节作用，可以调节细胞的增殖和凋亡。因此，E2F与肿瘤发生、细胞凋亡、肿瘤抑制等均有密切关系。

E2F 报告基因主要用于检测细胞中Cell Cycle信号通路、药物研究、基因过表达和RNAi的表型分析等。

pE2F-Luc是金畔生物改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个E2F结合位点，可以高灵敏度地检测E2F的激活水平。同时，对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变，在保持原有功能不变的情况下，增加了质粒的转录因子结合特异性。由于质粒体积减小，使得E2F报告基因更易于转染。

 

质粒图谱

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质粒元件信息

E2F response element (E2F)

32-67

Minimal TA promoter (pTA)

96-108

Luciferase reporter gene

150-1812

SV40 late poly(A) signal

1847-2068

SV40 early promoter

2116-2534

Synthetic neomycin phosphotransferase (Neor) coding region

2559-3353

Synthetic poly(A) signal

3378-3426

Synthetic Beta-lactamase(Ampr) coding region

4541-5401

Synthetic poly(A) signal/transcriptional pause site

5506-5659

 

运输和保存方法

冰袋低温运输。–20℃保存。保质期1年。

 

注意事项

1）本质粒未经金畔生物允许不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位；

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；

3）本产品仅作科研用途！

4）不提供该质粒序列信息。

 

使用说明

1）首次使用1 µg包装的本产品时，请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定；

2）pE2F-Luc可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。用萤光素酶检测试剂盒或双萤光素酶检测试剂盒进行检测。

 

参考文献

[1] Tang J, Liu J, Li J, et al. Upregulation of SKA3 enhances cell proliferation and correlates with poor prognosis in hepatocellular carcinoma[J]. Oncology Reports, 2021, 45(4): 1-11.

[2] Wu P, Ding B, Ye L, et al. Zhibaidihuang decoction ameliorates cell oxidative stress by regulating the Keap1-Nrf2-ARE signalling pathway[J]. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine, 2020.

[3] Polovic M, Dittmar S, Hennemeier I, et al. Identification of a novel lncRNA induced by the nephrotoxin ochratoxin A and expressed in human renal tumor tissue[J]. Cellular and Molecular Life Sciences, 2018, 75(12): 2241-2256.

[4] Tang J, Liu J, Li J, et al. Upregulation of SKA3 enhances cell proliferation and correlates with poor prognosis in hepatocellular carcinoma[J]. Oncology Reports, 2021, 45(4): 1-11.

[5] Zheng Y, Stamminger T, Hearing P. E2F/Rb family proteins mediate interferon induced repression of adenovirus immediate early transcription to promote persistent viral infection[J]. PLoS pathogens, 2016, 12(1): e1005415.

 

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Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit 双荧光素酶报告基因检测试剂盒HOT

11402JP60/80

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Luciferase Reporter Gene Assay Kit 萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒

11401JP60/76/80

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pGM-CMV Luciferase Reporter Plasmid Positive Control pGM-CMV-Luc荧光素酶报告基因质粒阳性对照

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1 μg

Luciferase Reporter Plasmid negative control （荧光素酶报告基因质粒阴性对照）

11555JP03

1 μg

pGMLR-TK Luciferase Reporter Plasmid（pGMLR-TK海肾荧光素酶报告基因质粒）

11557JP03

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[1] Wang H, Yu S, Peng H, et al. Long noncoding RNA Linc00337 functions as an E2F1 co-activator and promotes cell proliferation in pancreatic ductal adenocarcinoma. J Exp Clin Cancer Res. 2020;39(1):216. Published 2020 Oct 14. doi:10.1186/s13046-020-01725-5(IF:7.068)

ERSE-Luc荧光素酶报告基因质粒(ERSE Luciferase Reporter Plasmid)

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ERSE-Luc荧光素酶报告基因质粒(ERSE Luciferase Reporter Plasmid)

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已发表文献

 

ERSE-Luc萤光素酶报告基因（报告基因质粒）(ERSE luciferase reporter plasmid)是金畔生物自主研发的用于检测ERSE转录活性水平为目的的报告基因。ERSE充当一个顺式作用元件调节内质网应激反应的转录应答。ERSE是包含NF-Y/CBF和YY1转录因子结合位点的三重核苷酸序列。内质网应激反应元件结合因子(ERSF)复合体也是与ERSE核苷酸序列相互作用的。内质网应激在一些多发性疾病中具有关键的作用。

ERSE报告基因主要用于检测ER Stress信号通路、药物研究、基因过表达和RNAi的表型分子等。

pERSE-Luc是金畔生物改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个ERSE结合位点，可以高灵敏度地检测ERSE的激活水平。同时，对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变，在保持原有功能不变的情况下，增加了质粒的转录因子结合特异性。由于质粒体积减小，使得ERSE报告基因更易于转染。

 

质粒图谱

ERSE-Luc荧光素酶报告基因质粒(ERSE Luciferase Reporter Plasmid) 

 

质粒元件信息

ERSE response element (ERSE)

32-89

Minimal TA promoter (pTA)

118-140

Luciferase reporter gene

172-1834

SV40 late poly(A) signal

1869-2090

SV40 early promoter

2138-2556

Synthetic neomycin phosphotransferase(Neor) coding region

2581-3375

Synthetic poly(A) signal

3400-3448

Synthetic Beta-lactamase(Ampr) coding region

4563-5423

Synthetic poly(A) signal/transcriptional pause site

5528-5681

 

运输与保存方法

冰袋运输。-20ºC保存。保质期1年。

 

注意事项

1）本质粒未经金畔生物允许不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。

2）为了您的健康，实验操作时请穿实验服和戴一次性手套。

3）本产品仅作科研用途！

4）不提供该质粒序列信息。

 

使用说明

1）pERSE-Luc可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。用萤光素酶检测试剂盒或双萤光素酶检测试剂盒进行检测。

2）首次使用1 µg包装的本产品时，请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。

 

参考文献

[1] Liu H, Shi C, Deng Y. MALAT1 affects hypoxia-induced vascular endothelial cell injury and autophagy by regulating miR-19b-3p/HIF-1α axis[J]. Molecular and cellular biochemistry, 2020, 466(1): 25-34.

[2] Brown H C, Gangadharan B, Doering C B. Enhanced biosynthesis of coagulation factor VIII through diminished engagement of the unfolded protein response[J]. Journal of Biological Chemistry, 2011, 286(27): 24451-24457.

[3] Oh-hashi K, Koga H, Ikeda S, et al. CRELD2 is a novel endoplasmic reticulum stress-inducible gene[J]. Biochemical and biophysical research communications, 2009, 387(3): 504-510.

[4] Kwok S C M, Daskal I. Brefeldin A activates CHOP promoter at the AARE, ERSE and AP-1 elements[J]. Molecular and cellular biochemistry, 2008, 319(1): 203-208.

 

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Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit 双荧光素酶报告基因检测试剂盒HOT

11402JP60/80

100/1000 T

Luciferase Reporter Gene Assay Kit 萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒

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100/500/1000 T

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1 μg

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11558JP03

1 μg

 

HB211110

 

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ERSE-Luc萤光素酶报告基因（报告基因质粒）(ERSE luciferase reporter plasmid)是金畔生物自主研发的用于检测ERSE转录活性水平为目的的报告基因。ERSE充当一个顺式作用元件调节内质网应激反应的转录应答。ERSE是包含NF-Y/CBF和YY1转录因子结合位点的三重核苷酸序列。内质网应激反应元件结合因子(ERSF)复合体也是与ERSE核苷酸序列相互作用的。内质网应激在一些多发性疾病中具有关键的作用。

ERSE报告基因主要用于检测ER Stress信号通路、药物研究、基因过表达和RNAi的表型分子等。

pERSE-Luc是金畔生物改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个ERSE结合位点，可以高灵敏度地检测ERSE的激活水平。同时，对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变，在保持原有功能不变的情况下，增加了质粒的转录因子结合特异性。由于质粒体积减小，使得ERSE报告基因更易于转染。

 

质粒图谱

ERSE-Luc荧光素酶报告基因质粒(ERSE Luciferase Reporter Plasmid) 

 

质粒元件信息

ERSE response element (ERSE)

32-89

Minimal TA promoter (pTA)

118-140

Luciferase reporter gene

172-1834

SV40 late poly(A) signal

1869-2090

SV40 early promoter

2138-2556

Synthetic neomycin phosphotransferase(Neor) coding region

2581-3375

Synthetic poly(A) signal

3400-3448

Synthetic Beta-lactamase(Ampr) coding region

4563-5423

Synthetic poly(A) signal/transcriptional pause site

5528-5681

 

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冰袋运输。-20ºC保存。保质期1年。

 

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1）本质粒未经金畔生物允许不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。

2）为了您的健康，实验操作时请穿实验服和戴一次性手套。

3）本产品仅作科研用途！

4）不提供该质粒序列信息。

 

使用说明

1）pERSE-Luc可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。用萤光素酶检测试剂盒或双萤光素酶检测试剂盒进行检测。

2）首次使用1 µg包装的本产品时，请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。

 

参考文献

[1] Liu H, Shi C, Deng Y. MALAT1 affects hypoxia-induced vascular endothelial cell injury and autophagy by regulating miR-19b-3p/HIF-1α axis[J]. Molecular and cellular biochemistry, 2020, 466(1): 25-34.

[2] Brown H C, Gangadharan B, Doering C B. Enhanced biosynthesis of coagulation factor VIII through diminished engagement of the unfolded protein response[J]. Journal of Biological Chemistry, 2011, 286(27): 24451-24457.

[3] Oh-hashi K, Koga H, Ikeda S, et al. CRELD2 is a novel endoplasmic reticulum stress-inducible gene[J]. Biochemical and biophysical research communications, 2009, 387(3): 504-510.

[4] Kwok S C M, Daskal I. Brefeldin A activates CHOP promoter at the AARE, ERSE and AP-1 elements[J]. Molecular and cellular biochemistry, 2008, 319(1): 203-208.

 

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Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit 双荧光素酶报告基因检测试剂盒HOT

11402JP60/80

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Luciferase Reporter Gene Assay Kit 萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒

11401JP60/76/80

100/500/1000 T

pGM-CMV Luciferase Reporter Plasmid Positive Control pGM-CMV-Luc荧光素酶报告基因质粒阳性对照

11556JP03

1 μg

Luciferase Reporter Plasmid negative control （荧光素酶报告基因质粒阴性对照）

11555JP03

1 μg

pGMLR-TK Luciferase Reporter Plasmid（pGMLR-TK海肾荧光素酶报告基因质粒）

11557JP03

1 μg

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11558JP03

1 μg

 

HB211110

 

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D-荧光素钠盐 荧光素酶底物|D-Luciferin,Sodium Salt

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D-荧光素钠盐 荧光素酶底物|D-Luciferin,Sodium Salt

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产品描述

D-荧光素（D-Luciferin）是荧光素酶（Luciferase）的常用底物，普遍用于整个生物技术领域，特别是体内活体成像技术。其作用机制是在ATP和荧光素酶的作用下，荧光素（底物）能够被氧化发光。当荧光素过量时，产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关性（见下图）。将携带荧光素酶编码基因（Luc）的质粒转染入细胞后，导入研究动物如大小鼠体内，之后注入荧光素，通过生物发光成像技术（BLI）来检测光强度变化，从而实时监测疾病发展状态或药物的治疗功效等。也可以利用ATP对此反应体系的影响，根据生物发光强度的变化来指示能量或生命体征。

D-荧光素钠盐 荧光素酶底物|D-Luciferin,Sodium Salt

D-荧光素也常用于体外研究，包括荧光素酶和ATP水平分析；报告基因分析；高通量测序和各种污染检测。目前市场上有三种产品形式，D-荧光素（游离酸），D-荧光素钠盐，以及D-荧光素钾盐。这三种产品主要的差别在于溶解特性上。D-荧光素（游离酸）水溶性以及缓冲体系的溶解性都很弱，除非溶于弱碱如NaOH和KOH溶液。溶于甲醇（10 mg/ml）和DMSO（50 mg/ml）。但钠盐和钾盐形式的D-荧光素能够非常容易且快速的溶入水或者缓冲液中，使用方便，溶剂无毒性，特别适合体内实验。配成液体后的这三种产品，在绝大多数的应用上都没有实质性的差别。

 

产品性质

中文别名（Chinese synonym）

D-荧光素钠盐；

英文别名（English synonym）

(S)-4,5-Dihydro-2-(6-hydroxy-2-benzothiazolyl)-4-thiazolecarboxylic acid sodium salt; D-Luciferin firefly, sodium salt monohydrate;

CAS号（CAS NO.）

103404-75-7

分子式（Formula）

NaC11H7N2O3S2 · H2O

分子量（Molecular weight）

302.3 g/mol

外观（Appearance）

淡黄色粉末

溶解性（Solubility）

溶于水（高达100 mg/ml）

纯度（Purity）（HPLC）

≥95.0%

 

运输和保存方法

室温运输。-20℃干燥避光保存，有效期2年。

 

使用方法

1．体外生物发光检测
1） 用蒸馏水溶解D-荧光素钠盐，配制成30mg/ml的储存液（200×）。混匀后立即使用或分装于-20℃或-80℃冻存，避免反复冻融。
2） 用预热好的组织培养基1:200稀释储存液，配制工作液（终浓度150µg/ml）。
3） 去除培养细胞的培养基。
4） 待图像分析前，向细胞内添加1×荧光素工作液，然后进行图像分析。

2．  活体成像分析
1） 用无菌的PBS（w/o Mg2+）或者DPBS（w/o Mg2+）配制D-荧光素钠盐工作液（15mg/ml），0.2µm滤膜过滤除菌。混匀后立即使用或分装于-20℃或-80℃冻存，避免反复冻融。一旦使用，放到4℃解冻，保持冰冷且避光。

2） 注射量取决于注射方式，具体如下：

注射方式

剂量

静脉注射（25-27gauge针头）

按10µl/g体重浓度，加入相应体积的15mg/ml荧光素工作液

腹腔注射（25-27gauge针头）

按10µl /g体重浓度，加入相应体积的15mg/ml荧光素工作液

肌肉注射（27gauge针头）

50µl，浓度为1-2mg/ml荧光素工作液

鼻内注射（pipette）

50µl，浓度为3mg/ml荧光素工作液

3） 注射入体内10-20 min（待光信号达到最强稳定平台期），再进行成像分析。

注：建议对每只动物模型都需要建立荧光素酶动力学曲线，从而确定最高信号检测时间和信号平台期。

 

注意事项

1) 本品（firefly luciferin）和甲虫荧光素（beetle luciferin）都是指化合物(S)-2-(6-Hydroxy-2-benzothiazolyl) -2-thiazoline-4-carboxylic acid，仅仅是不同公司在命名上的差异。
2) 本品保存和操作的过程中都要避光。另外水溶性储存液过滤除菌后，可以-20℃或-80℃分装冻存，避免反复冻融。
3) 注射方式，动物类型以及体重等都会影响信号的发射，因此建议每次实验都要做荧光素酶动力学曲线，确定最佳信号平台期和最佳的检测时间。
4) 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

HB220915

 

Q：荧光虫荧光素（ Firefly Luciferin）、甲虫荧光素（ Beetle Luciferin）和 D-Luciferin 有区别吗？

A：无区别。三者仅仅是不同公司在命名上的差异，均是化合物 (S)-2-(6-Hydroxy-2-benzothiazolyl)-2

-thiazoline-4-carboxylic acid

Q：该系列产品主要用于哪些应用？

A：除用于活体成像外，荧光素类产品还用于荧光素酶参与的其他应用中，如 体外报告基因检测、微生物/病毒监测、焦磷酸测序等

Q：荧光素钠颜料和 D-荧光素钠盐的区别？

A：荧光素钠颜料：可用于细胞通透性检测，通过检测 OD490 处吸光度值测定 颜料的通透性。 D-

荧光素钠盐：用于活体成像和报告基因系统，通过冷发光模块检测，不 需要激发光激发。

Q：荧光素钾盐、钠盐、自由酸区别？

A：三者的区别主要在于： 1）溶解性：盐形式易溶于水，其中钾盐溶解度为 60mg/ml，钠盐溶解度为 100mg/ml。自由酸不易溶于水，可用碳酸氢钠溶液弱碱调节溶解，其 在甲醇中的溶解度为10mg/ml，DMSO 中溶解度为 50mg/ml。 2）毒性方面：盐形式在使用过程中较方便，尤其是在体内成像实验中， 因其能够溶解在水中，反应毒性也会更小些（荧光素是一种由苯丙噻唑和 噻唑羧酸基团组成的低分子量有机化合物，有低毒性）。3）使用效果：无明显差异。在体内实验研究中，选用钾盐使用率较高。

Q：荧光素的纯度对实验有成影响吗？

A：有影响。99%以上的纯度较好。对于 99%纯度的荧光素，有 1%的固体杂质。若是这 1 g 的杂质溶解在25ml 的缓冲液中（该稀释比例是进行活体成像实验的标准稀释方法），此时杂质的浓度为 0.4 g/L。假 设杂质的分子量为 1000 g/mol,那么杂质的物质的量浓度为 400 μM，该浓度可能会抑制细胞内某些酶的作 用，并且有可能降低实验效果或对动物产生伤害。

Q：产品稳定性如何？

A：粉末避光保存于-20 或-70℃，有效期至少 1 年。

 

Q：活体成像底物作用原理？

A：D-荧光素（D-Luciferin）是荧光素酶（Luciferase）的常用底物。其作用机制是在 ATP 和荧光素酶的作用下，荧光素（底物）能够被氧化发光。当荧光素过量时，产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关性。2、天然腔肠素（Coelenterazine native）是海肾荧光素酶（Rluc）和 Gaussia 荧光素酶（Gluc） 等多种荧光素酶的作用底物。

Q：推荐仪器？多功能酶标仪能用吗？

A：推荐仪器：1、具有生物化学发光检测模块。荧光素产生的光可以被光度计或闪烁计数器检测。常见的活体成像仪器：如 IVIS® Lumina 小动物活体成像系统，德国 Bruker 公司的 In-Vivo Xtreme 多模式小动物活体成像仪。2、多功能酶标仪：需要和仪器厂家确认是否具体生物化学发光检测模块（注： 不能用荧光显微镜。）

Q：底物的激发波长和发射波长？

A：化学发光，无需激发波长。萤火虫荧光素发射波长是 560nm。海肾荧光素发射波长是 465 nm。

Q：底物可以进入活细胞中吗？

A：可以通过血脑屏障，胎盘屏障和血液测试屏障，也可以进入活细胞。

Q：荧光素类注射方式和用量？

A：下面建议浓度来源于文献：1）注射方式：可通过腹腔注射或尾静脉注射 2）注射量：科学的方法是根据动力学曲线评估注射剂量。建立最初尝试注射剂量为：150mg 底物/kg 小鼠体重。因此，购买量可按照上述方法计算：若 10 只小鼠，22 –25g，则需要底物 33 –37.5mg 。

Q：荧光素的发光特性如何？

A：荧光素腹腔注射老鼠后约 3 min 后，能够表达荧光素酶的细胞开始发光，10 min 后强度达到稳定的最高点，在最高点持续约 10 – 15 min 后开始衰减，可在注射后 10 -15 min 内检测。仅供参考，建议预实验建立荧光素酶 动力学曲线，从而确定最高信号检测时间和信号平台期

Q：活体成像实验，无效果的原因？

A：成功进行活体成像实验需要以下条件：目的组织或细胞表达荧光素酶基因；荧光素底物注射成功； 依赖于发光部位的组织厚度。若实验不成功，可从上述因素查找，荧光素酶基因是否表达，荧光素底物是否未正确注射，及发光部位较深等

Q：荧光素钾（钠）盐溶液如何配制？必须用不含钙离子和镁离 子的 DPBS 溶解吗？

A：1、下面建议浓度来源于文献：

1）储备液（体外实验用） 浓度 100mM，约相当于 30mg/mL。用无菌蒸馏水溶解。 建议：现配现用，若无条件，可分装保存。 长期保存可能会导致信号衰 减。

2）1×工作液（体外实验用） 浓度 0.5mM，约相当于 150ug/mL。用预热的培养基稀释储存液至 1×。建议：现配现用，若多余，则舍弃。不建议再次使用。

3）15mg/mL 储存液（动物实验用）不含钙离子和镁离子的 DPBS 溶解（因为一方面，钙镁离子通常对胰酶活 性有影响；另外一方面在活体成像实验时，Mg2+是催化荧光素底物氧化的 重要因素，而Ca2+是和腔肠素底物氧化有关的离子），混匀。0.22μM 滤器 过滤除菌。 建议：现配现用，长期保存可能会导致信号衰减。

  1. 除了 DPBS 外，还可以用其他缓冲液溶解荧光素底物，如生理盐水 Nacl 等。原则上避免溶液中的阳离子对实验造成影响。可参考相关文献操作。

Q：D-荧光素钠盐，对动物有毒副作用吗？

A：一般情况下，D-荧光素钠盐不会对动物产生毒副作用。

Q：荧光素钠盐，分解率是多少？

A：没有该信息。

 

 

[1] Guo Y, Guo Y, Chen C, et al. Circ3823 contributes to growth, metastasis and angiogenesis of colorectal cancer: involvement of miR-30c-5p/TCF7 axis. Mol Cancer. 2021;20(1):93. Published 2021 Jun 25. doi:10.1186/s12943-021-01372-0(IF:27.401)
[2] Wang Z, Yu L, Wang Y, et al. Dynamic Adjust of Non-Radiative and Radiative Attenuation of AIE Molecules Reinforces NIR-II Imaging Mediated Photothermal Therapy and Immunotherapy. Adv Sci (Weinh). 2022;9(8):e2104793. doi:10.1002/advs.202104793(IF:16.806)
[3] Liu Q, Sheng Z, Cheng C, et al. Anesthetic Propofol Promotes Tumor Metastasis in Lungs via GABAA R-Dependent TRIM21 Modulation of Src Expression. Adv Sci (Weinh). 2021;8(18):e2102079. doi:10.1002/advs.202102079(IF:16.806)
[4] Zhou M, Zhang J, Shen J, et al. Hydrogen sulfide-linked persulfidation of ABI4 controls ABA responses through the transactivation of MAPKKK18 in Arabidopsis. Mol Plant. 2021;14(6):921-936. doi:10.1016/j.molp.2021.03.007(IF:13.164)
[5] Wang J, Wang C, Li Y, et al. Potential of peptide-engineered exosomes with overexpressed miR-92b-3p in anti-angiogenic therapy of ovarian cancer. Clin Transl Med. 2021;11(5):e425. doi:10.1002/ctm2.425(IF:11.492)
[6] Mao Z, Wei X, Li L, et al. Arabidopsis cryptochrome 1 controls photomorphogenesis through regulation of H2A.Z deposition. Plant Cell. 2021;33(6):1961-1979. doi:10.1093/plcell/koab091(IF:11.277)
[7] Xu P, Chen H, Li T, et al. Blue light-dependent interactions of CRY1 with GID1 and DELLA proteins regulate gibberellin signaling and photomorphogenesis in Arabidopsis. Plant Cell. 2021;33(7):2375-2394. doi:10.1093/plcell/koab124(IF:11.277)
[8] Lin S, Wen Z, Li S, et al. LncRNA Neat1 promotes the macrophage inflammatory response and acts as a therapeutic target in titanium particle-induced osteolysis. Acta Biomater. 2022;142:345-360. doi:10.1016/j.actbio.2022.02.007(IF:8.947)
[9] Zhang Z, Zeng D, Zhang W, et al. Modulation of oxidative phosphorylation augments antineoplastic activity of mitotic aurora kinase inhibition. Cell Death Dis. 2021;12(10):893. Published 2021 Sep 30. doi:10.1038/s41419-021-04190-w(IF:8.469)
[10] Wang L, Tong X, Zhou Z, et al. Circular RNA hsa_circ_0008305 (circPTK2) inhibits TGF-β-induced epithelial-mesenchymal transition and metastasis by controlling TIF1γ in non-small cell lung cancer. Mol Cancer. 2018;17(1):140. Published 2018 Sep 27. doi:10.1186/s12943-018-0889-7(IF:7.776)
[11] Cao X, Xu P, Liu Y, et al. Arabidopsis cryptochrome 1 promotes stomatal development through repression of AGB1 inhibition of SPEECHLESS DNA-binding activity. J Integr Plant Biol. 2021;63(11):1967-1981. doi:10.1111/jipb.13168(IF:7.061)
[12] Du SS, Li L, Li L, et al. Photoexcited Cryptochrome2 Interacts Directly with TOE1 and TOE2 in Flowering Regulation. Plant Physiol. 2020;184(1):487-505. doi:10.1104/pp.20.00486(IF:6.902)
[13] Zhou H, Qi Z, Pei P, et al. Biocompatible nanomicelles for sensitive detection and photodynamic therapy of early-stage cancer. Biomater Sci. 2021;9(18):6227-6235. Published 2021 Sep 14. doi:10.1039/d1bm00847a(IF:6.843)
[14] Zhang L, Zhou J, Yan Y, et al. Excipient-free nanodispersion of 7-ethyl-10-hydroxycamptothecin exerts potent therapeutic effects against pancreatic cancer cell lines and patient-derived xenografts. Cancer Lett. 2019;465:36-44. doi:10.1016/j.canlet.2019.08.019(IF:6.508)
[15] Geng Y, Duan H, Xu L, et al. BMP-2 and VEGF-A modRNAs in collagen scaffold synergistically drive bone repair through osteogenic and angiogenic pathways. Commun Biol. 2021;4(1):82. Published 2021 Jan 19. doi:10.1038/s42003-020-01606-9(IF:6.268)
[16] Qiu J , Peng P , Xin M , et al. ZBTB20-mediated titanium particle-induced peri-implant osteolysis by promoting macrophage inflammatory responses. Biomater Sci. 2020;8(11):3147-3163. doi:10.1039/d0bm00147c(IF:6.183)
[17] Zhou C, Wang G, Jing W, Tan X, Guo H. Anticancer Properties and Mechanisms of Singly-Protonated Dehydronorcantharidin Silver Coordination Polymer in a Bladder Cancer Model. Front Pharmacol. 2021;12:618668. Published 2021 Feb 23. doi:10.3389/fphar.2021.618668(IF:5.811)
[18] Sheng Y, Yu H, Pan H, et al. Genome-Wide Analysis of the Gene Structure, Expression and Protein Interactions of the Peach (Prunus persica) TIFY Gene Family. Front Plant Sci. 2022;13:792802. Published 2022 Feb 17. doi:10.3389/fpls.2022.792802(IF:5.754)
[19] Jia MZ, Liu LY, Geng C, Jiang J. Activation of 1-Aminocyclopropane-1-Carboxylic Acid Synthases Sets Stomatal Density and Clustered Ratio on Leaf Epidermis of Arabidopsis in Response to Drought. Front Plant Sci. 2021;12:758785. Published 2021 Dec 6. doi:10.3389/fpls.2021.758785(IF:5.754)
[20] Xuan Z, Zhao L, Li Z, et al. EPS8L3 promotes hepatocellular carcinoma proliferation and metastasis by modulating EGFR dimerization and internalization. Am J Cancer Res. 2020;10(1):60-77. Published 2020 Jan 1. (IF:5.177)
[21] Chen G, Fan XY, Zheng XP, Jin YL, Liu Y, Liu SC. Human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells ameliorate insulin resistance via PTEN-mediated crosstalk between the PI3K/Akt and Erk/MAPKs signaling pathways in the skeletal muscles of db/db mice. Stem Cell Res Ther. 2020;11(1):401. Published 2020 Sep 16. doi:10.1186/s13287-020-01865-7(IF:5.116)
[22] Chen G, Fan XY, Zheng XP, Jin YL, Liu Y, Liu SC. Human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells ameliorate insulin resistance via PTEN-mediated crosstalk between the PI3K/Akt and Erk/MAPKs signaling pathways in the skeletal muscles of db/db mice. Stem Cell Res Ther. 2020;11(1):401. Published 2020 Sep 16. doi:10.1186/s13287-020-01865-7(IF:5.116)
[23] You D, Du D, Zhao X, Li X, Ying M, Hu X. Mitochondrial malic enzyme 2 promotes breast cancer metastasis via stabilizing HIF-1α under hypoxia. Chin J Cancer Res. 2021;33(3):308-322. doi:10.21147/j.issn.1000-9604.2021.03.03(IF:5.087)
[24] Qin L, Zhao R, Chen D, et al. Chimeric antigen receptor T cells targeting PD-L1 suppress tumor growth. Biomark Res. 2020;8:19. Published 2020 Jun 3. doi:10.1186/s40364-020-00198-0(IF:4.866)
[25] Zuo X, Xiang W, Li K, et al. MdGRF11, a growth-regulating factor, participates in the regulation of flowering time and interacts with MdTFL1/MdFT1 in apple. Plant Sci. 2022;321:111339. doi:10.1016/j.plantsci.2022.111339(IF:4.729)
[26] Yang X, Yu Q, Xu H, Zhou J. Upregulation of CD22 by Chidamide promotes CAR T cells functionality. Sci Rep. 2021;11(1):20637. Published 2021 Oct 19. doi:10.1038/s41598-021-00227-4(IF:4.380)
[27] Mei Z, Zhang K, Lam AK, et al. MUC1 as a target for CAR-T therapy in head and neck squamous cell carinoma. Cancer Med. 2020;9(2):640-652. doi:10.1002/cam4.2733(IF:3.357)
[28] Zhang Z, Liu L, Cao S, Zhu Y, Mei Q. Gene delivery of TIPE2 inhibits breast cancer development and metastasis via CD8+ T and NK cell-mediated antitumor responses. Mol Immunol. 2017;85:230-237. doi:10.1016/j.molimm.2017.03.007(IF:3.236)
[29] Yuan L, Zhou M, Huang D, et al. Resveratrol inhibits the invasion and metastasis of colon cancer through reversal of epithelial‑ mesenchymal transition via the AKT/GSK‑3β/Snail signaling pathway. Mol Med Rep. 2019;20(3):2783-2795. doi:10.3892/mmr.2019.10528(IF:2.952)
[30] Zhang C, Liu X, Chen F, et al. Gliotoxin destructs the pulmonary epithelium barrier function by reducing cofilin oligomer formation to promote the dissolution of actin stress fibers. Microb Pathog. 2018;123:169-176. doi:10.1016/j.micpath.2018.07.007(IF:2.332)

产品描述

D-荧光素（D-Luciferin）是荧光素酶（Luciferase）的常用底物，普遍用于整个生物技术领域，特别是体内活体成像技术。其作用机制是在ATP和荧光素酶的作用下，荧光素（底物）能够被氧化发光。当荧光素过量时，产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关性（见下图）。将携带荧光素酶编码基因（Luc）的质粒转染入细胞后，导入研究动物如大小鼠体内，之后注入荧光素，通过生物发光成像技术（BLI）来检测光强度变化，从而实时监测疾病发展状态或药物的治疗功效等。也可以利用ATP对此反应体系的影响，根据生物发光强度的变化来指示能量或生命体征。

D-荧光素钠盐 荧光素酶底物|D-Luciferin,Sodium Salt

D-荧光素也常用于体外研究，包括荧光素酶和ATP水平分析；报告基因分析；高通量测序和各种污染检测。目前市场上有三种产品形式，D-荧光素（游离酸），D-荧光素钠盐，以及D-荧光素钾盐。这三种产品主要的差别在于溶解特性上。D-荧光素（游离酸）水溶性以及缓冲体系的溶解性都很弱，除非溶于弱碱如NaOH和KOH溶液。溶于甲醇（10 mg/ml）和DMSO（50 mg/ml）。但钠盐和钾盐形式的D-荧光素能够非常容易且快速的溶入水或者缓冲液中，使用方便，溶剂无毒性，特别适合体内实验。配成液体后的这三种产品，在绝大多数的应用上都没有实质性的差别。

 

产品性质

中文别名（Chinese synonym）

D-荧光素钠盐；

英文别名（English synonym）

(S)-4,5-Dihydro-2-(6-hydroxy-2-benzothiazolyl)-4-thiazolecarboxylic acid sodium salt; D-Luciferin firefly, sodium salt monohydrate;

CAS号（CAS NO.）

103404-75-7

分子式（Formula）

NaC11H7N2O3S2 · H2O

分子量（Molecular weight）

302.3 g/mol

外观（Appearance）

淡黄色粉末

溶解性（Solubility）

溶于水（高达100 mg/ml）

纯度（Purity）（HPLC）

≥95.0%

 

运输和保存方法

室温运输。-20℃干燥避光保存，有效期2年。

 

使用方法

1．体外生物发光检测
1） 用蒸馏水溶解D-荧光素钠盐，配制成30mg/ml的储存液（200×）。混匀后立即使用或分装于-20℃或-80℃冻存，避免反复冻融。
2） 用预热好的组织培养基1:200稀释储存液，配制工作液（终浓度150µg/ml）。
3） 去除培养细胞的培养基。
4） 待图像分析前，向细胞内添加1×荧光素工作液，然后进行图像分析。

2．  活体成像分析
1） 用无菌的PBS（w/o Mg2+）或者DPBS（w/o Mg2+）配制D-荧光素钠盐工作液（15mg/ml），0.2µm滤膜过滤除菌。混匀后立即使用或分装于-20℃或-80℃冻存，避免反复冻融。一旦使用，放到4℃解冻，保持冰冷且避光。

2） 注射量取决于注射方式，具体如下：

注射方式

剂量

静脉注射（25-27gauge针头）

按10µl/g体重浓度，加入相应体积的15mg/ml荧光素工作液

腹腔注射（25-27gauge针头）

按10µl /g体重浓度，加入相应体积的15mg/ml荧光素工作液

肌肉注射（27gauge针头）

50µl，浓度为1-2mg/ml荧光素工作液

鼻内注射（pipette）

50µl，浓度为3mg/ml荧光素工作液

3） 注射入体内10-20 min（待光信号达到最强稳定平台期），再进行成像分析。

注：建议对每只动物模型都需要建立荧光素酶动力学曲线，从而确定最高信号检测时间和信号平台期。

 

注意事项

1) 本品（firefly luciferin）和甲虫荧光素（beetle luciferin）都是指化合物(S)-2-(6-Hydroxy-2-benzothiazolyl) -2-thiazoline-4-carboxylic acid，仅仅是不同公司在命名上的差异。
2) 本品保存和操作的过程中都要避光。另外水溶性储存液过滤除菌后，可以-20℃或-80℃分装冻存，避免反复冻融。
3) 注射方式，动物类型以及体重等都会影响信号的发射，因此建议每次实验都要做荧光素酶动力学曲线，确定最佳信号平台期和最佳的检测时间。
4) 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

HB220915

 

Q：荧光虫荧光素（ Firefly Luciferin）、甲虫荧光素（ Beetle Luciferin）和 D-Luciferin 有区别吗？

A：无区别。三者仅仅是不同公司在命名上的差异，均是化合物 (S)-2-(6-Hydroxy-2-benzothiazolyl)-2

-thiazoline-4-carboxylic acid

Q：该系列产品主要用于哪些应用？

A：除用于活体成像外，荧光素类产品还用于荧光素酶参与的其他应用中，如 体外报告基因检测、微生物/病毒监测、焦磷酸测序等

Q：荧光素钠颜料和 D-荧光素钠盐的区别？

A：荧光素钠颜料：可用于细胞通透性检测，通过检测 OD490 处吸光度值测定 颜料的通透性。 D-

荧光素钠盐：用于活体成像和报告基因系统，通过冷发光模块检测，不 需要激发光激发。

Q：荧光素钾盐、钠盐、自由酸区别？

A：三者的区别主要在于： 1）溶解性：盐形式易溶于水，其中钾盐溶解度为 60mg/ml，钠盐溶解度为 100mg/ml。自由酸不易溶于水，可用碳酸氢钠溶液弱碱调节溶解，其 在甲醇中的溶解度为10mg/ml，DMSO 中溶解度为 50mg/ml。 2）毒性方面：盐形式在使用过程中较方便，尤其是在体内成像实验中， 因其能够溶解在水中，反应毒性也会更小些（荧光素是一种由苯丙噻唑和 噻唑羧酸基团组成的低分子量有机化合物，有低毒性）。3）使用效果：无明显差异。在体内实验研究中，选用钾盐使用率较高。

Q：荧光素的纯度对实验有成影响吗？

A：有影响。99%以上的纯度较好。对于 99%纯度的荧光素，有 1%的固体杂质。若是这 1 g 的杂质溶解在25ml 的缓冲液中（该稀释比例是进行活体成像实验的标准稀释方法），此时杂质的浓度为 0.4 g/L。假 设杂质的分子量为 1000 g/mol,那么杂质的物质的量浓度为 400 μM，该浓度可能会抑制细胞内某些酶的作 用，并且有可能降低实验效果或对动物产生伤害。

Q：产品稳定性如何？

A：粉末避光保存于-20 或-70℃，有效期至少 1 年。

 

Q：活体成像底物作用原理？

A：D-荧光素（D-Luciferin）是荧光素酶（Luciferase）的常用底物。其作用机制是在 ATP 和荧光素酶的作用下，荧光素（底物）能够被氧化发光。当荧光素过量时，产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关性。2、天然腔肠素（Coelenterazine native）是海肾荧光素酶（Rluc）和 Gaussia 荧光素酶（Gluc） 等多种荧光素酶的作用底物。

Q：推荐仪器？多功能酶标仪能用吗？

A：推荐仪器：1、具有生物化学发光检测模块。荧光素产生的光可以被光度计或闪烁计数器检测。常见的活体成像仪器：如 IVIS® Lumina 小动物活体成像系统，德国 Bruker 公司的 In-Vivo Xtreme 多模式小动物活体成像仪。2、多功能酶标仪：需要和仪器厂家确认是否具体生物化学发光检测模块（注： 不能用荧光显微镜。）

Q：底物的激发波长和发射波长？

A：化学发光，无需激发波长。萤火虫荧光素发射波长是 560nm。海肾荧光素发射波长是 465 nm。

Q：底物可以进入活细胞中吗？

A：可以通过血脑屏障，胎盘屏障和血液测试屏障，也可以进入活细胞。

Q：荧光素类注射方式和用量？

A：下面建议浓度来源于文献：1）注射方式：可通过腹腔注射或尾静脉注射 2）注射量：科学的方法是根据动力学曲线评估注射剂量。建立最初尝试注射剂量为：150mg 底物/kg 小鼠体重。因此，购买量可按照上述方法计算：若 10 只小鼠，22 –25g，则需要底物 33 –37.5mg 。

Q：荧光素的发光特性如何？

A：荧光素腹腔注射老鼠后约 3 min 后，能够表达荧光素酶的细胞开始发光，10 min 后强度达到稳定的最高点，在最高点持续约 10 – 15 min 后开始衰减，可在注射后 10 -15 min 内检测。仅供参考，建议预实验建立荧光素酶 动力学曲线，从而确定最高信号检测时间和信号平台期

Q：活体成像实验，无效果的原因？

A：成功进行活体成像实验需要以下条件：目的组织或细胞表达荧光素酶基因；荧光素底物注射成功； 依赖于发光部位的组织厚度。若实验不成功，可从上述因素查找，荧光素酶基因是否表达，荧光素底物是否未正确注射，及发光部位较深等

Q：荧光素钾（钠）盐溶液如何配制？必须用不含钙离子和镁离 子的 DPBS 溶解吗？

A：1、下面建议浓度来源于文献：

1）储备液（体外实验用） 浓度 100mM，约相当于 30mg/mL。用无菌蒸馏水溶解。 建议：现配现用，若无条件，可分装保存。 长期保存可能会导致信号衰 减。

2）1×工作液（体外实验用） 浓度 0.5mM，约相当于 150ug/mL。用预热的培养基稀释储存液至 1×。建议：现配现用，若多余，则舍弃。不建议再次使用。

3）15mg/mL 储存液（动物实验用）不含钙离子和镁离子的 DPBS 溶解（因为一方面，钙镁离子通常对胰酶活 性有影响；另外一方面在活体成像实验时，Mg2+是催化荧光素底物氧化的 重要因素，而Ca2+是和腔肠素底物氧化有关的离子），混匀。0.22μM 滤器 过滤除菌。 建议：现配现用，长期保存可能会导致信号衰减。

  1. 除了 DPBS 外，还可以用其他缓冲液溶解荧光素底物，如生理盐水 Nacl 等。原则上避免溶液中的阳离子对实验造成影响。可参考相关文献操作。

Q：D-荧光素钠盐，对动物有毒副作用吗？

A：一般情况下，D-荧光素钠盐不会对动物产生毒副作用。

Q：荧光素钠盐，分解率是多少？

A：没有该信息。

 

 

[1] Guo Y, Guo Y, Chen C, et al. Circ3823 contributes to growth, metastasis and angiogenesis of colorectal cancer: involvement of miR-30c-5p/TCF7 axis. Mol Cancer. 2021;20(1):93. Published 2021 Jun 25. doi:10.1186/s12943-021-01372-0(IF:27.401)
[2] Wang Z, Yu L, Wang Y, et al. Dynamic Adjust of Non-Radiative and Radiative Attenuation of AIE Molecules Reinforces NIR-II Imaging Mediated Photothermal Therapy and Immunotherapy. Adv Sci (Weinh). 2022;9(8):e2104793. doi:10.1002/advs.202104793(IF:16.806)
[3] Liu Q, Sheng Z, Cheng C, et al. Anesthetic Propofol Promotes Tumor Metastasis in Lungs via GABAA R-Dependent TRIM21 Modulation of Src Expression. Adv Sci (Weinh). 2021;8(18):e2102079. doi:10.1002/advs.202102079(IF:16.806)
[4] Zhou M, Zhang J, Shen J, et al. Hydrogen sulfide-linked persulfidation of ABI4 controls ABA responses through the transactivation of MAPKKK18 in Arabidopsis. Mol Plant. 2021;14(6):921-936. doi:10.1016/j.molp.2021.03.007(IF:13.164)
[5] Wang J, Wang C, Li Y, et al. Potential of peptide-engineered exosomes with overexpressed miR-92b-3p in anti-angiogenic therapy of ovarian cancer. Clin Transl Med. 2021;11(5):e425. doi:10.1002/ctm2.425(IF:11.492)
[6] Mao Z, Wei X, Li L, et al. Arabidopsis cryptochrome 1 controls photomorphogenesis through regulation of H2A.Z deposition. Plant Cell. 2021;33(6):1961-1979. doi:10.1093/plcell/koab091(IF:11.277)
[7] Xu P, Chen H, Li T, et al. Blue light-dependent interactions of CRY1 with GID1 and DELLA proteins regulate gibberellin signaling and photomorphogenesis in Arabidopsis. Plant Cell. 2021;33(7):2375-2394. doi:10.1093/plcell/koab124(IF:11.277)
[8] Lin S, Wen Z, Li S, et al. LncRNA Neat1 promotes the macrophage inflammatory response and acts as a therapeutic target in titanium particle-induced osteolysis. Acta Biomater. 2022;142:345-360. doi:10.1016/j.actbio.2022.02.007(IF:8.947)
[9] Zhang Z, Zeng D, Zhang W, et al. Modulation of oxidative phosphorylation augments antineoplastic activity of mitotic aurora kinase inhibition. Cell Death Dis. 2021;12(10):893. Published 2021 Sep 30. doi:10.1038/s41419-021-04190-w(IF:8.469)
[10] Wang L, Tong X, Zhou Z, et al. Circular RNA hsa_circ_0008305 (circPTK2) inhibits TGF-β-induced epithelial-mesenchymal transition and metastasis by controlling TIF1γ in non-small cell lung cancer. Mol Cancer. 2018;17(1):140. Published 2018 Sep 27. doi:10.1186/s12943-018-0889-7(IF:7.776)
[11] Cao X, Xu P, Liu Y, et al. Arabidopsis cryptochrome 1 promotes stomatal development through repression of AGB1 inhibition of SPEECHLESS DNA-binding activity. J Integr Plant Biol. 2021;63(11):1967-1981. doi:10.1111/jipb.13168(IF:7.061)
[12] Du SS, Li L, Li L, et al. Photoexcited Cryptochrome2 Interacts Directly with TOE1 and TOE2 in Flowering Regulation. Plant Physiol. 2020;184(1):487-505. doi:10.1104/pp.20.00486(IF:6.902)
[13] Zhou H, Qi Z, Pei P, et al. Biocompatible nanomicelles for sensitive detection and photodynamic therapy of early-stage cancer. Biomater Sci. 2021;9(18):6227-6235. Published 2021 Sep 14. doi:10.1039/d1bm00847a(IF:6.843)
[14] Zhang L, Zhou J, Yan Y, et al. Excipient-free nanodispersion of 7-ethyl-10-hydroxycamptothecin exerts potent therapeutic effects against pancreatic cancer cell lines and patient-derived xenografts. Cancer Lett. 2019;465:36-44. doi:10.1016/j.canlet.2019.08.019(IF:6.508)
[15] Geng Y, Duan H, Xu L, et al. BMP-2 and VEGF-A modRNAs in collagen scaffold synergistically drive bone repair through osteogenic and angiogenic pathways. Commun Biol. 2021;4(1):82. Published 2021 Jan 19. doi:10.1038/s42003-020-01606-9(IF:6.268)
[16] Qiu J , Peng P , Xin M , et al. ZBTB20-mediated titanium particle-induced peri-implant osteolysis by promoting macrophage inflammatory responses. Biomater Sci. 2020;8(11):3147-3163. doi:10.1039/d0bm00147c(IF:6.183)
[17] Zhou C, Wang G, Jing W, Tan X, Guo H. Anticancer Properties and Mechanisms of Singly-Protonated Dehydronorcantharidin Silver Coordination Polymer in a Bladder Cancer Model. Front Pharmacol. 2021;12:618668. Published 2021 Feb 23. doi:10.3389/fphar.2021.618668(IF:5.811)
[18] Sheng Y, Yu H, Pan H, et al. Genome-Wide Analysis of the Gene Structure, Expression and Protein Interactions of the Peach (Prunus persica) TIFY Gene Family. Front Plant Sci. 2022;13:792802. Published 2022 Feb 17. doi:10.3389/fpls.2022.792802(IF:5.754)
[19] Jia MZ, Liu LY, Geng C, Jiang J. Activation of 1-Aminocyclopropane-1-Carboxylic Acid Synthases Sets Stomatal Density and Clustered Ratio on Leaf Epidermis of Arabidopsis in Response to Drought. Front Plant Sci. 2021;12:758785. Published 2021 Dec 6. doi:10.3389/fpls.2021.758785(IF:5.754)
[20] Xuan Z, Zhao L, Li Z, et al. EPS8L3 promotes hepatocellular carcinoma proliferation and metastasis by modulating EGFR dimerization and internalization. Am J Cancer Res. 2020;10(1):60-77. Published 2020 Jan 1. (IF:5.177)
[21] Chen G, Fan XY, Zheng XP, Jin YL, Liu Y, Liu SC. Human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells ameliorate insulin resistance via PTEN-mediated crosstalk between the PI3K/Akt and Erk/MAPKs signaling pathways in the skeletal muscles of db/db mice. Stem Cell Res Ther. 2020;11(1):401. Published 2020 Sep 16. doi:10.1186/s13287-020-01865-7(IF:5.116)
[22] Chen G, Fan XY, Zheng XP, Jin YL, Liu Y, Liu SC. Human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells ameliorate insulin resistance via PTEN-mediated crosstalk between the PI3K/Akt and Erk/MAPKs signaling pathways in the skeletal muscles of db/db mice. Stem Cell Res Ther. 2020;11(1):401. Published 2020 Sep 16. doi:10.1186/s13287-020-01865-7(IF:5.116)
[23] You D, Du D, Zhao X, Li X, Ying M, Hu X. Mitochondrial malic enzyme 2 promotes breast cancer metastasis via stabilizing HIF-1α under hypoxia. Chin J Cancer Res. 2021;33(3):308-322. doi:10.21147/j.issn.1000-9604.2021.03.03(IF:5.087)
[24] Qin L, Zhao R, Chen D, et al. Chimeric antigen receptor T cells targeting PD-L1 suppress tumor growth. Biomark Res. 2020;8:19. Published 2020 Jun 3. doi:10.1186/s40364-020-00198-0(IF:4.866)
[25] Zuo X, Xiang W, Li K, et al. MdGRF11, a growth-regulating factor, participates in the regulation of flowering time and interacts with MdTFL1/MdFT1 in apple. Plant Sci. 2022;321:111339. doi:10.1016/j.plantsci.2022.111339(IF:4.729)
[26] Yang X, Yu Q, Xu H, Zhou J. Upregulation of CD22 by Chidamide promotes CAR T cells functionality. Sci Rep. 2021;11(1):20637. Published 2021 Oct 19. doi:10.1038/s41598-021-00227-4(IF:4.380)
[27] Mei Z, Zhang K, Lam AK, et al. MUC1 as a target for CAR-T therapy in head and neck squamous cell carinoma. Cancer Med. 2020;9(2):640-652. doi:10.1002/cam4.2733(IF:3.357)
[28] Zhang Z, Liu L, Cao S, Zhu Y, Mei Q. Gene delivery of TIPE2 inhibits breast cancer development and metastasis via CD8+ T and NK cell-mediated antitumor responses. Mol Immunol. 2017;85:230-237. doi:10.1016/j.molimm.2017.03.007(IF:3.236)
[29] Yuan L, Zhou M, Huang D, et al. Resveratrol inhibits the invasion and metastasis of colon cancer through reversal of epithelial‑ mesenchymal transition via the AKT/GSK‑3β/Snail signaling pathway. Mol Med Rep. 2019;20(3):2783-2795. doi:10.3892/mmr.2019.10528(IF:2.952)
[30] Zhang C, Liu X, Chen F, et al. Gliotoxin destructs the pulmonary epithelium barrier function by reducing cofilin oligomer formation to promote the dissolution of actin stress fibers. Microb Pathog. 2018;123:169-176. doi:10.1016/j.micpath.2018.07.007(IF:2.332)

D-萤火虫荧光素游离酸 荧光素酶底物|D-Luciferin Firefly,Free Acid

发表于由

D-萤火虫荧光素游离酸 荧光素酶底物|D-Luciferin Firefly,Free Acid

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品描述

D-荧光素（D-Luciferin）是荧光素酶（Luciferase）的常用底物，普遍用于整个生物技术领域，特别是体内活体成像技术。其作用机制是在ATP和荧光素酶的作用下，荧光素（底物）能够被氧化发光。当荧光素过量时，产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关性（见下图）。将携带荧光素酶编码基因（Luc）的质粒转染入细胞后，导入研究动物如大、小鼠体内，之后注入荧光素，通过生物发光成像技术（BLI）来检测光强度变化，从而实时监测疾病发展状态或药物的治疗功效等。也可以利用ATP对此反应体系的影响，根据生物发光强度的变化来指示能量或生命体征。

 D-萤火虫荧光素游离酸 荧光素酶底物|D-Luciferin Firefly,Free Acid 

D-荧光素也常用于体外研究，包括荧光素酶和ATP水平分析、报告基因分析、高通量测序和各种污染检测。目前市场上有三种产品形式，D-荧光素（游离酸），D-荧光素钠盐，以及D-荧光素钾盐。这三种产品主要的差别在于溶解特性上。D-荧光素（游离酸）水溶性以及缓冲体系的溶解性都很弱，除非溶于弱碱如NaOH和KOH溶液。钠盐和钾盐形式的D-荧光素能够非常容易且快速的溶入水或者缓冲液中，使用方便，溶剂无毒性，特别适合体内实验。配成液体后的这三种产品，在绝大多数的应用上都没有实质性的差别。

 

产品性质

中文别名（Chinese synonym）

D-萤火虫荧光素游离酸；

英文别名（English synonym）

S)-4,5-Dihydro-2-(6-hydroxy-2-benzothiazolyl)-4-thiazolecarboxylic acid; D-Luciferin Firefly, free acid

CAS号（CAS NO.）

2591-17-5

分子式（Formula）

C11H8N2O3S2

分子量（Molecular weight）

280.33 g/mol

外观（Appearance）

类白色至浅黄色粉末

溶解性（Solubility）

本品难溶于水，可加入稀碱促进其溶解。

纯度（Purity）（HPLC）

≥95%

 

运输和保存方法

冰袋运输；-20℃干燥避光保存；有效期一年。

 

使用方法

1 体外生物发光检测

1）用稀碱（如NaOH，KOH溶液）溶解D-荧光素，游离酸，配制成30 mg/mL的储存液（200×），并调整pH至7.4。混匀

 

后立即使用或分装于-20℃或-80℃冻存，避免反复冻融。

【注】：如果有沉淀发生则需要调整pH至更高直至完全溶解。之后可以重新用酸性溶液来中和，调整至pH7.4。

2）用预热好的组织培养基1:200稀释储存液，配制工作液（终浓度150 µg/mL）。

3）去除培养细胞的培养基直至无残留。

4）待图像分析前，向细胞内添加1×荧光素工作液，然后进行图像分析（或者细胞放在37℃短时间孵育后检测可增强信号）。

2 活体成像分析

1）用稀碱（如NaOH，KOH溶液）配制D-荧光素工作液（15 mg/mL），并调节pH至7.4，0.2µm 滤膜过滤除菌。混匀后立即使用或分装于-20℃或-80℃冻存，避免反复冻融。一旦使用，放到4℃解冻，保持冰冷且避光。

2）注射量取决于注射方式，具体如下：

注射方式

剂量

静脉注射（25-27gauge 针头）

按 10 µL/g 体重浓度，加入相应体积的 15 mg/mL 荧光素工作液

腹腔注射（25-27gauge 针头）

按 10 µL/g 体重浓度，加入相应体积的 15 mg/mL 荧光素工作液

肌肉注射（27gauge 针头）

50 µL，浓度为1-2 mg/mL 荧光素工作液

鼻内注射（pipette）

50 µL，浓度为3 mg/mL 荧光素工作液

3）注射入体内10-20 min（待光信号达到最强稳定平台期），再进行成像分析。

【注】：建议对每只动物模型都需要建立荧光素酶动力学曲线，从而确定最高信号检测时间和信号平台期。

 

注意事项

1）本品（firefly luciferin）和甲虫荧光素（beetle luciferin）都是指化合物(S)-2-(6-Hydroxy-2-benzothiazolyl)-2-thiazoline-4-

carboxylic acid，仅仅是不同公司在命名上的差异。

2）本品保存和操作的过程中都要避光。另外储存液过滤除菌后，可以-20℃或-80℃分装冻存，避免反复冻融。如果有条件，对储存液充氮气或氩气（防止氧化），稳定性和保存时间更长，长达1年。

3）注射方式，动物类型以及体重等都会影响信号的发射，因此建议每次实验都要做荧光素酶动力学曲线，确定最佳信号平台期和最佳的检测时间。

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

5）本产品仅作科研用途！

 

HB220209

 

Q: 怎么配置这个无菌的可注射动物体内且 ph=7.4 的稀碱？

A: 过滤，。

 

[1] Ji C, Zhao M, Wang C, et al. Biocompatible Tantalum Nanoparticles as Radiosensitizers for Enhancing Therapy Efficacy in Primary Tumor and Metastatic Sentinel Lymph Nodes [published online ahead of print, 2022 Jun 6]. ACS Nano. 2022;10.1021/acsnano.2c02314. doi:10.1021/acsnano.2c02314(IF:15.881)
[2] Miao Z, Tian W, Ye Y, et al. Hsp90 induces Acsl4-dependent glioma ferroptosis via dephosphorylating Ser637 at Drp1. Cell Death Dis. 2022;13(6):548. Published 2022 Jun 13. doi:10.1038/s41419-022-04997-1(IF:8.469)
[3] Zhang L, Sun Y, Zhang XX, et al. Comparison of CD146 +/- mesenchymal stem cells in improving premature ovarian failure. Stem Cell Res Ther. 2022;13(1):267. Published 2022 Jun 21. doi:10.1186/s13287-022-02916-x(IF:6.832)
[4] Fu RJ, He W, Wang XB, et al. DNMT1-maintained hypermethylation of Krüppel-like factor 5 involves in the progression of clear cell renal cell carcinoma. Cell Death Dis. 2017;8(7):e2952. Published 2017 Jul 27. doi:10.1038/cddis.2017.323(IF:5.965)
[5] Xu P, Wu L, Cao M, et al. Identification of MBW Complex Components Implicated in the Biosynthesis of Flavonoids in Woodland Strawberry. Front Plant Sci. 2021;12:774943. Published 2021 Nov 8. doi:10.3389/fpls.2021.774943(IF:5.754)
[6] Bai S, Tao R, Yin L, et al. Two B-box proteins, PpBBX18 and PpBBX21, antagonistically regulate anthocyanin biosynthesis via competitive association with Pyrus pyrifolia ELONGATED HYPOCOTYL 5 in the peel of pear fruit. Plant J. 2019;100(6):1208-1223. doi:10.1111/tpj.14510(IF:5.726)
[7] Yang SX, Wu TT, Ding CH, Zhou PC, Chen ZZ, Gou JY. SAHH and SAMS form a methyl donor complex with CCoAOMT7 for methylation of phenolic compounds. Biochem Biophys Res Commun. 2019;520(1):122-127. doi:10.1016/j.bbrc.2019.09.101(IF:2.705)

产品描述

D-荧光素（D-Luciferin）是荧光素酶（Luciferase）的常用底物，普遍用于整个生物技术领域，特别是体内活体成像技术。其作用机制是在ATP和荧光素酶的作用下，荧光素（底物）能够被氧化发光。当荧光素过量时，产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关性（见下图）。将携带荧光素酶编码基因（Luc）的质粒转染入细胞后，导入研究动物如大、小鼠体内，之后注入荧光素，通过生物发光成像技术（BLI）来检测光强度变化，从而实时监测疾病发展状态或药物的治疗功效等。也可以利用ATP对此反应体系的影响，根据生物发光强度的变化来指示能量或生命体征。

 D-萤火虫荧光素游离酸 荧光素酶底物|D-Luciferin Firefly,Free Acid 

D-荧光素也常用于体外研究，包括荧光素酶和ATP水平分析、报告基因分析、高通量测序和各种污染检测。目前市场上有三种产品形式，D-荧光素（游离酸），D-荧光素钠盐，以及D-荧光素钾盐。这三种产品主要的差别在于溶解特性上。D-荧光素（游离酸）水溶性以及缓冲体系的溶解性都很弱，除非溶于弱碱如NaOH和KOH溶液。钠盐和钾盐形式的D-荧光素能够非常容易且快速的溶入水或者缓冲液中，使用方便，溶剂无毒性，特别适合体内实验。配成液体后的这三种产品，在绝大多数的应用上都没有实质性的差别。

 

产品性质

中文别名（Chinese synonym）

D-萤火虫荧光素游离酸；

英文别名（English synonym）

S)-4,5-Dihydro-2-(6-hydroxy-2-benzothiazolyl)-4-thiazolecarboxylic acid; D-Luciferin Firefly, free acid

CAS号（CAS NO.）

2591-17-5

分子式（Formula）

C11H8N2O3S2

分子量（Molecular weight）

280.33 g/mol

外观（Appearance）

类白色至浅黄色粉末

溶解性（Solubility）

本品难溶于水，可加入稀碱促进其溶解。

纯度（Purity）（HPLC）

≥95%

 

运输和保存方法

冰袋运输；-20℃干燥避光保存；有效期一年。

 

使用方法

1 体外生物发光检测

1）用稀碱（如NaOH，KOH溶液）溶解D-荧光素，游离酸，配制成30 mg/mL的储存液（200×），并调整pH至7.4。混匀

 

后立即使用或分装于-20℃或-80℃冻存，避免反复冻融。

【注】：如果有沉淀发生则需要调整pH至更高直至完全溶解。之后可以重新用酸性溶液来中和，调整至pH7.4。

2）用预热好的组织培养基1:200稀释储存液，配制工作液（终浓度150 µg/mL）。

3）去除培养细胞的培养基直至无残留。

4）待图像分析前，向细胞内添加1×荧光素工作液，然后进行图像分析（或者细胞放在37℃短时间孵育后检测可增强信号）。

2 活体成像分析

1）用稀碱（如NaOH，KOH溶液）配制D-荧光素工作液（15 mg/mL），并调节pH至7.4，0.2µm 滤膜过滤除菌。混匀后立即使用或分装于-20℃或-80℃冻存，避免反复冻融。一旦使用，放到4℃解冻，保持冰冷且避光。

2）注射量取决于注射方式，具体如下：

注射方式

剂量

静脉注射（25-27gauge 针头）

按 10 µL/g 体重浓度，加入相应体积的 15 mg/mL 荧光素工作液

腹腔注射（25-27gauge 针头）

按 10 µL/g 体重浓度，加入相应体积的 15 mg/mL 荧光素工作液

肌肉注射（27gauge 针头）

50 µL，浓度为1-2 mg/mL 荧光素工作液

鼻内注射（pipette）

50 µL，浓度为3 mg/mL 荧光素工作液

3）注射入体内10-20 min（待光信号达到最强稳定平台期），再进行成像分析。

【注】：建议对每只动物模型都需要建立荧光素酶动力学曲线，从而确定最高信号检测时间和信号平台期。

 

注意事项

1）本品（firefly luciferin）和甲虫荧光素（beetle luciferin）都是指化合物(S)-2-(6-Hydroxy-2-benzothiazolyl)-2-thiazoline-4-

carboxylic acid，仅仅是不同公司在命名上的差异。

2）本品保存和操作的过程中都要避光。另外储存液过滤除菌后，可以-20℃或-80℃分装冻存，避免反复冻融。如果有条件，对储存液充氮气或氩气（防止氧化），稳定性和保存时间更长，长达1年。

3）注射方式，动物类型以及体重等都会影响信号的发射，因此建议每次实验都要做荧光素酶动力学曲线，确定最佳信号平台期和最佳的检测时间。

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

5）本产品仅作科研用途！

 

HB220209

 

Q: 怎么配置这个无菌的可注射动物体内且 ph=7.4 的稀碱？

A: 过滤，。

 

[1] Ji C, Zhao M, Wang C, et al. Biocompatible Tantalum Nanoparticles as Radiosensitizers for Enhancing Therapy Efficacy in Primary Tumor and Metastatic Sentinel Lymph Nodes [published online ahead of print, 2022 Jun 6]. ACS Nano. 2022;10.1021/acsnano.2c02314. doi:10.1021/acsnano.2c02314(IF:15.881)
[2] Miao Z, Tian W, Ye Y, et al. Hsp90 induces Acsl4-dependent glioma ferroptosis via dephosphorylating Ser637 at Drp1. Cell Death Dis. 2022;13(6):548. Published 2022 Jun 13. doi:10.1038/s41419-022-04997-1(IF:8.469)
[3] Zhang L, Sun Y, Zhang XX, et al. Comparison of CD146 +/- mesenchymal stem cells in improving premature ovarian failure. Stem Cell Res Ther. 2022;13(1):267. Published 2022 Jun 21. doi:10.1186/s13287-022-02916-x(IF:6.832)
[4] Fu RJ, He W, Wang XB, et al. DNMT1-maintained hypermethylation of Krüppel-like factor 5 involves in the progression of clear cell renal cell carcinoma. Cell Death Dis. 2017;8(7):e2952. Published 2017 Jul 27. doi:10.1038/cddis.2017.323(IF:5.965)
[5] Xu P, Wu L, Cao M, et al. Identification of MBW Complex Components Implicated in the Biosynthesis of Flavonoids in Woodland Strawberry. Front Plant Sci. 2021;12:774943. Published 2021 Nov 8. doi:10.3389/fpls.2021.774943(IF:5.754)
[6] Bai S, Tao R, Yin L, et al. Two B-box proteins, PpBBX18 and PpBBX21, antagonistically regulate anthocyanin biosynthesis via competitive association with Pyrus pyrifolia ELONGATED HYPOCOTYL 5 in the peel of pear fruit. Plant J. 2019;100(6):1208-1223. doi:10.1111/tpj.14510(IF:5.726)
[7] Yang SX, Wu TT, Ding CH, Zhou PC, Chen ZZ, Gou JY. SAHH and SAMS form a methyl donor complex with CCoAOMT7 for methylation of phenolic compounds. Biochem Biophys Res Commun. 2019;520(1):122-127. doi:10.1016/j.bbrc.2019.09.101(IF:2.705)

腔肠素400a 天然荧光素荧光素酶底物|Coelenterazine 400a

发表于由

腔肠素400a 天然荧光素荧光素酶底物|Coelenterazine 400a

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

腔肠素（Coelenterazine）是自然界中资源最丰富的天然荧光素，是绝大多数海洋发光生物（超过75%）的光能贮存分子。腔肠素可作为许多荧光素酶的底物，比如海肾荧光素酶（Rluc），Gaussia分泌型荧光素酶（Gluc），以及包括水母发光蛋白（aequorin）和薮枝螅发光蛋白（Obelia）在内的光蛋白（Photoproteins）。其发光原理是：以腔肠素为底物的荧光素酶在有分子氧的条件下，氧化腔肠素，产生高能量的中间产物，并在此过程中发射蓝色光，峰值发射波长约为450~480 nm。

腔肠素作为水母发光蛋白复合物（Aequorin）的组成成分，只有与钙离子（Ca2+）结合后，才能被氧化生成高能量产物Coelenteramide，同时释放出CO2和蓝色荧光（~466 nm）。

其具有以下几个优点：

1）能检测较大范围的Ca2+浓度（0.1–100 μM）；

2）样品无自体荧光，背景荧光较低，尽管信号较荧光钙离子指示剂弱，但信噪比更高，因此具有较高灵敏度；

3）Aequorin能够稳定维持在细胞内，能够进行数小时至数天Ca2+的监测。

腔肠素具有能量转移（Bioluminescence Resonance Energy Transfer，BRET）的特性：在底物腔肠素存在的情况下，荧光素酶（如Rluc）催化底物发生蓝光，能量转移到EYFP（增强的黄色荧光蛋白），发出绿光（~530 nm）。通过Rluc融合蛋白和EYFP融合蛋白两者间的相互关系研究蛋白-蛋白之间的相互作用。BRET的信号可通过比较绿光和蓝光的量来进行测定，消减了因细胞数、细胞类型和其他实验变量而引起的数据变量。

 

主要应用

活体成像；报告基因检测；检测细胞/组织内活性氧（ROS）水平：细胞和组织内的超氧阴离子和过氧化亚硝基阴离子能够增强腔肠素在酶非依赖性的氧化体系中自发荧光；高通量筛选；监测活细胞内钙离子水平。

 

产品描述

腔肠素400a（Coelenterazine 400a）系天然腔肠素衍生物，是海肾荧光素酶（Rluc）的良好底物，但不能被Gaussia分泌型荧光素酶（Gluc）氧化。它的最大发射波长在400 nm左右，对GFP受体蛋白的信号干扰最小，使得其成为BRET研究的重要腔肠素类底物。

 

产品性质

英文别名（English synonym）

DeepBlueCTM; Di-dehydro Coelenterazine

CAS号（CAS NO.）

70217-82-2

分子式（Formula）

C26H21N3O

分子量（Molecular weight）

391.48 g/mol

外观（Appearance）

黄色至橘色粉末

溶解性（Solubility）

溶于甲醇和乙醇，不溶于DMSO

纯度（Purity）（TLC）

>98%

结构（Structure）

腔肠素400a 天然荧光素荧光素酶底物|Coelenterazine 400a

 

运输和保存方法

冰袋运输。粉末-20℃避光干燥保存，最好保存在惰性气体环境下，避免接触空气。有效期1年。

 

腔肠素400a工作液的配制

腔肠素400a溶解特性：不溶于水。目前毒性最低的溶剂是100%乙醇，可配制浓度为0.1-1 mg/ml。加入pH低于7.0的酸性缓冲液（碱性pH会快速降解底物）稀释成低浓度工作液。切忌溶于DMSO。

腔肠素400a保存特性：建议溶液现配现用！体外实验，需将稀释后的工作液室温放置20-30 min，方可稳定工作。该工作液可室温稳定放置3-4 h，有非常微弱的信号衰减发生。不建议储存液-20℃或更低温度保存，因为其高能量的二氧环丁酮结构即使在低温的情况下也会发生降解，导致荧光强度明显变弱。短时间保存条件：-70℃避光保存于塑料管内（溶液中不含有Ca2+），且有惰性气体保护。

腔肠素工作液的配制：称取1 mg腔肠素400a粉末溶解于1 ml乙醇（或甲醇）中配置成浓度为1 mg/ml的母液。在使用时需将母液用合适的缓冲液（比如PBS）稀释成需要浓度的工作液。比如常用的工作液浓度是100 μM，可使用391.5ul 的1 mg/ml的母液用PBS稀释到10ml，得到一个100uM的溶液。

 

BRET 生物发光共振能量转移（可根据具体实验发生变动）

详细步骤可参考文献：Gersting SW, et al. Bioluminescence resonance energy transfer:an emerging tool for the detection of protein-protein interaction in living cells. Methods Mol Biol. 815:253-63 (2012)。

本步骤以Rluc的融合蛋白作为能量供体，YFP的融合蛋白作为能量受体，两者同时电转化进入细胞，并通过加载腔肠素400a底物来启动氧化反应，通过分析两者BRET信号来研究两个蛋白之间的相互作用。

1. 按照正常流程将能表达两个融合蛋白的质粒，按照3:1的比例（YFP : Rluc）共电转染进入细胞。

2. 转染后24 h进行BRET信号的检测。吸去培养液（留约30 μl）后，将96孔板放到荧光酶标仪上。

3. 至少在测定前15 min准备腔肠素400a工作液。

4. 用超纯水清洗注射泵后，让泵开始自动吸取配制好的400a工作液，按照每孔70 µl工作液的量顺序加入，使得每孔中底物的终浓度为30 µM。进样结束后，孵育2 min。之后立即进行双波长荧光信号读数，即Rluc信号（485 nm）和BRET信号（535 nm）。

 

BRET信号值计算

为了能够进行数据评估，转染细胞的Rluc信号（485 nm）应当超过非转染对照细胞的（平均值+9×标准误差）的区间。

1. BRET–ratio（BRET信号比）基于以下等式进行计算，

R=（IA/ID）-cf

R代表BRET比值，ID表示受体YFP荧光信号的强度（535 nm），IA表示供体Rluc荧光信号的强度（485 nm），cf表示校准因子（BRETcontrol/Rluccontrol D），对照样本是指共转染YFP融合蛋白质粒和不含供体第二个研究蛋白的Rluc载体的细胞荧光信号。

2. 阳性对照，使用YFP-Rluc融合蛋白的BRET比值为1.0。

3. 若蛋白之间有阳性反应，必须检测到：8组蛋白样本中至少有一组能够产生超过设定阈值0.1以上的BRET信号比值。

 

注意事项

1. 粉末最好使用惰性气体（氮气或氩气），在密封良好的塑料管中避光保存于-20℃，长期保存于–70℃。管内即使存在少量空气，可能造成腔肠素cp氧化失活，造成在不同试验间的量化分析结果无法比较。

2. 本品接触空气，水或者任何氧化试剂会不稳定。

3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

4. 本产品仅作科研用途！

HB220606

 

Q：腹腔注射和尾静脉注射方式的区别是什么？

A：荧光素可通过腹腔注射或尾部静脉注射注入小鼠体内。对于腹腔注射来讲，扩散较慢，开始发光较慢，持续发光时间较长。对于荧光素的尾部静脉注射，扩散快，开始发光快，但发光持续时间较短。

Q：该系列产品主要用于哪些应用？

A：除用于活体成像外，荧光素类产品还用于荧光素酶参与的其他应用中，如体外报告基因检测、微生物/病毒监测、焦磷酸测序等。

Q：推荐仪器？多功能酶标仪能用吗？

A：推荐仪器：具有生物化学发光检测模块。荧光素产生的光可以被光度计或闪烁计数器检测。常见的活体成像仪器：如 IVIS® Lumina 小动物活体成像系统，德国 Bruker 公司的 In-Vivo Xtreme 多模式小动物活体成像仪。多功能酶标仪：需要和仪器厂家确认是否具体生物化学发光检测模块。注：不能用荧光显微镜。

Q：D-荧光素钠盐和天然腔肠素做烟草的成像，需要用什么溶液稀释？

A：水或PBS，不含钙镁离子就行。Mg2+是催化荧光素底物氧化的重要因素，而 Ca2+是和腔肠素底物氧化有关的离子。

Q：腔肠素的发光特性如何？

A：体外：细胞孵育 10-15min 后，立即检测。 体内：可在注射后 10-15 min 内检测。

仅供参考，建议预实验建立荧光素酶动力学曲线，从而确定最高信号检测时间和信号平台期。

腔肠素400a 天然荧光素荧光素酶底物|Coelenterazine 400a

暂无内容

腔肠素（Coelenterazine）是自然界中资源最丰富的天然荧光素，是绝大多数海洋发光生物（超过75%）的光能贮存分子。腔肠素可作为许多荧光素酶的底物，比如海肾荧光素酶（Rluc），Gaussia分泌型荧光素酶（Gluc），以及包括水母发光蛋白（aequorin）和薮枝螅发光蛋白（Obelia）在内的光蛋白（Photoproteins）。其发光原理是：以腔肠素为底物的荧光素酶在有分子氧的条件下，氧化腔肠素，产生高能量的中间产物，并在此过程中发射蓝色光，峰值发射波长约为450~480 nm。

腔肠素作为水母发光蛋白复合物（Aequorin）的组成成分，只有与钙离子（Ca2+）结合后，才能被氧化生成高能量产物Coelenteramide，同时释放出CO2和蓝色荧光（~466 nm）。

其具有以下几个优点：

1）能检测较大范围的Ca2+浓度（0.1–100 μM）；

2）样品无自体荧光，背景荧光较低，尽管信号较荧光钙离子指示剂弱，但信噪比更高，因此具有较高灵敏度；

3）Aequorin能够稳定维持在细胞内，能够进行数小时至数天Ca2+的监测。

腔肠素具有能量转移（Bioluminescence Resonance Energy Transfer，BRET）的特性：在底物腔肠素存在的情况下，荧光素酶（如Rluc）催化底物发生蓝光，能量转移到EYFP（增强的黄色荧光蛋白），发出绿光（~530 nm）。通过Rluc融合蛋白和EYFP融合蛋白两者间的相互关系研究蛋白-蛋白之间的相互作用。BRET的信号可通过比较绿光和蓝光的量来进行测定，消减了因细胞数、细胞类型和其他实验变量而引起的数据变量。

 

主要应用

活体成像；报告基因检测；检测细胞/组织内活性氧（ROS）水平：细胞和组织内的超氧阴离子和过氧化亚硝基阴离子能够增强腔肠素在酶非依赖性的氧化体系中自发荧光；高通量筛选；监测活细胞内钙离子水平。

 

产品描述

腔肠素400a（Coelenterazine 400a）系天然腔肠素衍生物，是海肾荧光素酶（Rluc）的良好底物，但不能被Gaussia分泌型荧光素酶（Gluc）氧化。它的最大发射波长在400 nm左右，对GFP受体蛋白的信号干扰最小，使得其成为BRET研究的重要腔肠素类底物。

 

产品性质

英文别名（English synonym）

DeepBlueCTM; Di-dehydro Coelenterazine

CAS号（CAS NO.）

70217-82-2

分子式（Formula）

C26H21N3O

分子量（Molecular weight）

391.48 g/mol

外观（Appearance）

黄色至橘色粉末

溶解性（Solubility）

溶于甲醇和乙醇，不溶于DMSO

纯度（Purity）（TLC）

>98%

结构（Structure）

腔肠素400a 天然荧光素荧光素酶底物|Coelenterazine 400a

 

运输和保存方法

冰袋运输。粉末-20℃避光干燥保存，最好保存在惰性气体环境下，避免接触空气。有效期1年。

 

腔肠素400a工作液的配制

腔肠素400a溶解特性：不溶于水。目前毒性最低的溶剂是100%乙醇，可配制浓度为0.1-1 mg/ml。加入pH低于7.0的酸性缓冲液（碱性pH会快速降解底物）稀释成低浓度工作液。切忌溶于DMSO。

腔肠素400a保存特性：建议溶液现配现用！体外实验，需将稀释后的工作液室温放置20-30 min，方可稳定工作。该工作液可室温稳定放置3-4 h，有非常微弱的信号衰减发生。不建议储存液-20℃或更低温度保存，因为其高能量的二氧环丁酮结构即使在低温的情况下也会发生降解，导致荧光强度明显变弱。短时间保存条件：-70℃避光保存于塑料管内（溶液中不含有Ca2+），且有惰性气体保护。

腔肠素工作液的配制：称取1 mg腔肠素400a粉末溶解于1 ml乙醇（或甲醇）中配置成浓度为1 mg/ml的母液。在使用时需将母液用合适的缓冲液（比如PBS）稀释成需要浓度的工作液。比如常用的工作液浓度是100 μM，可使用391.5ul 的1 mg/ml的母液用PBS稀释到10ml，得到一个100uM的溶液。

 

BRET 生物发光共振能量转移（可根据具体实验发生变动）

详细步骤可参考文献：Gersting SW, et al. Bioluminescence resonance energy transfer:an emerging tool for the detection of protein-protein interaction in living cells. Methods Mol Biol. 815:253-63 (2012)。

本步骤以Rluc的融合蛋白作为能量供体，YFP的融合蛋白作为能量受体，两者同时电转化进入细胞，并通过加载腔肠素400a底物来启动氧化反应，通过分析两者BRET信号来研究两个蛋白之间的相互作用。

1. 按照正常流程将能表达两个融合蛋白的质粒，按照3:1的比例（YFP : Rluc）共电转染进入细胞。

2. 转染后24 h进行BRET信号的检测。吸去培养液（留约30 μl）后，将96孔板放到荧光酶标仪上。

3. 至少在测定前15 min准备腔肠素400a工作液。

4. 用超纯水清洗注射泵后，让泵开始自动吸取配制好的400a工作液，按照每孔70 µl工作液的量顺序加入，使得每孔中底物的终浓度为30 µM。进样结束后，孵育2 min。之后立即进行双波长荧光信号读数，即Rluc信号（485 nm）和BRET信号（535 nm）。

 

BRET信号值计算

为了能够进行数据评估，转染细胞的Rluc信号（485 nm）应当超过非转染对照细胞的（平均值+9×标准误差）的区间。

1. BRET–ratio（BRET信号比）基于以下等式进行计算，

R=（IA/ID）-cf

R代表BRET比值，ID表示受体YFP荧光信号的强度（535 nm），IA表示供体Rluc荧光信号的强度（485 nm），cf表示校准因子（BRETcontrol/Rluccontrol D），对照样本是指共转染YFP融合蛋白质粒和不含供体第二个研究蛋白的Rluc载体的细胞荧光信号。

2. 阳性对照，使用YFP-Rluc融合蛋白的BRET比值为1.0。

3. 若蛋白之间有阳性反应，必须检测到：8组蛋白样本中至少有一组能够产生超过设定阈值0.1以上的BRET信号比值。

 

注意事项

1. 粉末最好使用惰性气体（氮气或氩气），在密封良好的塑料管中避光保存于-20℃，长期保存于–70℃。管内即使存在少量空气，可能造成腔肠素cp氧化失活，造成在不同试验间的量化分析结果无法比较。

2. 本品接触空气，水或者任何氧化试剂会不稳定。

3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

4. 本产品仅作科研用途！

HB220606

 

Q：腹腔注射和尾静脉注射方式的区别是什么？

A：荧光素可通过腹腔注射或尾部静脉注射注入小鼠体内。对于腹腔注射来讲，扩散较慢，开始发光较慢，持续发光时间较长。对于荧光素的尾部静脉注射，扩散快，开始发光快，但发光持续时间较短。

Q：该系列产品主要用于哪些应用？

A：除用于活体成像外，荧光素类产品还用于荧光素酶参与的其他应用中，如体外报告基因检测、微生物/病毒监测、焦磷酸测序等。

Q：推荐仪器？多功能酶标仪能用吗？

A：推荐仪器：具有生物化学发光检测模块。荧光素产生的光可以被光度计或闪烁计数器检测。常见的活体成像仪器：如 IVIS® Lumina 小动物活体成像系统，德国 Bruker 公司的 In-Vivo Xtreme 多模式小动物活体成像仪。多功能酶标仪：需要和仪器厂家确认是否具体生物化学发光检测模块。注：不能用荧光显微镜。

Q：D-荧光素钠盐和天然腔肠素做烟草的成像，需要用什么溶液稀释？

A：水或PBS，不含钙镁离子就行。Mg2+是催化荧光素底物氧化的重要因素，而 Ca2+是和腔肠素底物氧化有关的离子。

Q：腔肠素的发光特性如何？

A：体外：细胞孵育 10-15min 后，立即检测。 体内：可在注射后 10-15 min 内检测。

仅供参考，建议预实验建立荧光素酶动力学曲线，从而确定最高信号检测时间和信号平台期。

腔肠素400a 天然荧光素荧光素酶底物|Coelenterazine 400a

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ARE-Luc荧光素酶报告基因质粒(ARE Luciferase Reporter Plasmid)

发表于由

ARE-Luc荧光素酶报告基因质粒(ARE Luciferase Reporter Plasmid)

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品描述

 

ARE-Luc荧光素酶报告基因（报告基因质粒）（ARE luciferase reporter plasmid）是翊圣生物自主研发的用于检测ARE转录活性水平为目的的报告基因。ARE(antioxidant response element) 与Nrf2和NRF1转录因子结合，调节参与保护细胞免受氧化损伤的相关基因。

ARE报告基因主要应用于检测细胞的抗氧化水平或氧化应激状态、药物研究以及基因过表达和RNAi的表型分析等。

pGMARE-Lu是翊圣生物改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个ARE结合位点，可以高灵敏度地检测ARE的激活水平。同时，对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变，增加了质粒的转录因子结合特异性。由于质粒体积减小，使得ARE报告基因更易于转染。

 

质粒图谱

 

ARE-Luc荧光素酶报告基因质粒(ARE Luciferase Reporter Plasmid)

 

质粒元件信息

 

Antioxidant response element (ARE)

32-73

Minimal TA promoter (pTA)

102-124

Luciferase reporter gene

156-1818

SV40 late poly(A) signal

1853-2074

SV40 early promoter

2122-2540

Synthetic neomycin phosphotransferase(Neor) coding region

2565-3359

Synthetic poly(A) signal

3384-3432

Synthetic Beta-lactamase(Ampr) coding region

4547-5407

Synthetic poly(A) signal/transcriptional pause site

5512-5665

 

运输与保存方法

 

冰袋运输。-20ºC保存。

 

注意事项

 

1）本质粒未经翊圣生物允许不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。

2）为了您的健康，实验操作时请穿实验服和戴一次性手套。

 

 

 

HB190104

ARE-Luc荧光素酶报告基因质粒(ARE Luciferase Reporter Plasmid)

暂无内容

[1] Zhang W, Cheng C, Sha Z, et al. Rosmarinic acid prevents refractory bacterial pneumonia through regulating Keap1/Nrf2-mediated autophagic pathway and mitochondrial oxidative stress. Free Radic Biol Med. 2021;168:247-257. doi:10.1016/j.freeradbiomed.2021.03.038(IF:7.376)
[2] Zha W, Guan S, Liu N, et al. Let-7a inhibits Bcl-xl and YAP1 expression to induce apoptosis of trophoblast cells in early-onset severe preeclampsia. Sci Total Environ. 2020;745:139919. doi:10.1016/j.scitotenv.2020.139919(IF:6.551)
[3] Luo XB, Li LT, Xi JC, et al. Negative pressure promotes macrophage M1 polarization after Mycobacterium tuberculosis infection via the lncRNA XIST/microRNA-125b-5p/A20/NF-κB axis [published online ahead of print, 2022 May 17]. Ann N Y Acad Sci. 2022;10.1111/nyas.14781. doi:10.1111/nyas.14781(IF:5.691)
[4] Yan X, Wu H, Wu Z, et al. The New Synthetic H2S-Releasing SDSS Protects MC3T3-E1 Osteoblasts against H2O2-Induced Apoptosis by Suppressing Oxidative Stress, Inhibiting MAPKs, and Activating the PI3K/Akt Pathway. Front Pharmacol. 2017;8:07. Published 2017 Jan 20. doi:10.3389/fphar.2017.00007(IF:4.400)
[5] Sun D, Cui S, Ma H, et al. Salvianolate ameliorates renal tubular injury through the Keap1/Nrf2/ARE pathway in mouse kidney ischemia-reperfusion injury. J Ethnopharmacol. 2022;293:115331. doi:10.1016/j.jep.2022.115331(IF:4.360)
[6] Zhao B, Wang Z, Han J, Wei G, Yi B, Li Z. Rhizoma Paridis total saponins alleviate H2O2‑induced oxidative stress injury by upregulating the Nrf2 pathway. Mol Med Rep. 2020;21(1):220-228. doi:10.3892/mmr.2019.10827(IF:1.851)

产品描述

 

ARE-Luc荧光素酶报告基因（报告基因质粒）（ARE luciferase reporter plasmid）是翊圣生物自主研发的用于检测ARE转录活性水平为目的的报告基因。ARE(antioxidant response element) 与Nrf2和NRF1转录因子结合，调节参与保护细胞免受氧化损伤的相关基因。

ARE报告基因主要应用于检测细胞的抗氧化水平或氧化应激状态、药物研究以及基因过表达和RNAi的表型分析等。

pGMARE-Lu是翊圣生物改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个ARE结合位点，可以高灵敏度地检测ARE的激活水平。同时，对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变，增加了质粒的转录因子结合特异性。由于质粒体积减小，使得ARE报告基因更易于转染。

 

质粒图谱

 

ARE-Luc荧光素酶报告基因质粒(ARE Luciferase Reporter Plasmid)

 

质粒元件信息

 

Antioxidant response element (ARE)

32-73

Minimal TA promoter (pTA)

102-124

Luciferase reporter gene

156-1818

SV40 late poly(A) signal

1853-2074

SV40 early promoter

2122-2540

Synthetic neomycin phosphotransferase(Neor) coding region

2565-3359

Synthetic poly(A) signal

3384-3432

Synthetic Beta-lactamase(Ampr) coding region

4547-5407

Synthetic poly(A) signal/transcriptional pause site

5512-5665

 

运输与保存方法

 

冰袋运输。-20ºC保存。

 

注意事项

 

1）本质粒未经翊圣生物允许不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。

2）为了您的健康，实验操作时请穿实验服和戴一次性手套。

 

 

 

HB190104

ARE-Luc荧光素酶报告基因质粒(ARE Luciferase Reporter Plasmid)

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[1] Zhang W, Cheng C, Sha Z, et al. Rosmarinic acid prevents refractory bacterial pneumonia through regulating Keap1/Nrf2-mediated autophagic pathway and mitochondrial oxidative stress. Free Radic Biol Med. 2021;168:247-257. doi:10.1016/j.freeradbiomed.2021.03.038(IF:7.376)
[2] Zha W, Guan S, Liu N, et al. Let-7a inhibits Bcl-xl and YAP1 expression to induce apoptosis of trophoblast cells in early-onset severe preeclampsia. Sci Total Environ. 2020;745:139919. doi:10.1016/j.scitotenv.2020.139919(IF:6.551)
[3] Luo XB, Li LT, Xi JC, et al. Negative pressure promotes macrophage M1 polarization after Mycobacterium tuberculosis infection via the lncRNA XIST/microRNA-125b-5p/A20/NF-κB axis [published online ahead of print, 2022 May 17]. Ann N Y Acad Sci. 2022;10.1111/nyas.14781. doi:10.1111/nyas.14781(IF:5.691)
[4] Yan X, Wu H, Wu Z, et al. The New Synthetic H2S-Releasing SDSS Protects MC3T3-E1 Osteoblasts against H2O2-Induced Apoptosis by Suppressing Oxidative Stress, Inhibiting MAPKs, and Activating the PI3K/Akt Pathway. Front Pharmacol. 2017;8:07. Published 2017 Jan 20. doi:10.3389/fphar.2017.00007(IF:4.400)
[5] Sun D, Cui S, Ma H, et al. Salvianolate ameliorates renal tubular injury through the Keap1/Nrf2/ARE pathway in mouse kidney ischemia-reperfusion injury. J Ethnopharmacol. 2022;293:115331. doi:10.1016/j.jep.2022.115331(IF:4.360)
[6] Zhao B, Wang Z, Han J, Wei G, Yi B, Li Z. Rhizoma Paridis total saponins alleviate H2O2‑induced oxidative stress injury by upregulating the Nrf2 pathway. Mol Med Rep. 2020;21(1):220-228. doi:10.3892/mmr.2019.10827(IF:1.851)