genekam磁珠在医学中的应用

 

 

genekam磁珠在医学中的应用*

Genekam生物技术公司自2007年起就开始开发用于细胞培养,RNA / DNA分离,蛋白质分离,转染等不同磁珠的应用。初,Genekam仅携带分离试剂盒。今天的2019年,产品范围已扩大到涵盖不同领域,例如蛋白质纯化,细胞分离,下一代基因测序,内毒素去除和许多其他应用。Genekam致力于通过磁珠应用降低成本并提高产量。Genekam致力于开发磁珠的更多应用,这些磁珠是非常创新的,并且在当今的文献中还无法解决病毒学和免疫学的复杂问题。我们正在开发硬件解决方案,例如磁选机。这些磁选机的某些图片已经发布在Genekam网站上。磁珠解决方案可以是在自动机器中工作的下一代应用程序。那些打算使用磁性应用的人员,必须记住,实验室中的磁铁也需要采取预防措施,因为许多公司在出售磁性分离器时并未对其发出任何警告,例如,如果您用移动平板电脑或电话触摸磁性分离器,LCD可能会如果您离设备的磁场太近,则在拍摄此类隔板的照片时会发生这种情况。磁选机可能会干扰其他仪器的工作。因此,在实验室中设置一个特殊的区域,使该区域可以使用磁选机和颗粒。可以访问我们的网站以找到新的解决方案范围。大多数套件都可以使用,即 用户可以在到达时立即分离蛋白质或细胞。从血液中分离细胞将比标准实验室中使用的常规方法提供更多的输出。Genekam试剂盒可能有助于提疗法的开发和生产过程的生产力,这些新疗法包括CAR T细胞疗法,人单克隆抗体,药物分子和疫苗。

 

猫。
没有。
准备使用的
PCR试剂盒的名称
DOC 价钱*
SB0101 Genekam RNA磁分离试剂盒   100 149,-€
SB0100 Genekam DNA磁性分离试剂盒   100 99欧元
2个套件,后修改时间:2020-07-01 14:10:23 净价

 

这些可用于从不同来源(例如组织,颊拭子,血浆和血液)中分离DNA或RNA。不久,我们将介绍用于植物DNA / RNA分离的试剂盒。

货号。 准备使用的
PCR试剂盒的名称
DOC 价钱*
SB0123 Genekam人类T细胞分离试剂盒:磁选机,分离化学品5种分离   1个 599,-€
1个套件,后修改时间:2020-07-01 14:10:23 净价

可用于血液,骨髓和其他液体样本

猫。
没有。
准备使用的
PCR试剂盒的名称
DOC 价钱*
SB0124 Genekam人类T细胞分离试剂盒:磁选机,用于50 ml血液的分离化学品   1个 799,-€
SB0125 Genekam人类B细胞分离试剂盒:磁选机,分离化学品5种分离   1个 599,-€
SB0126 Genekam人类B细胞分离试剂盒:磁选机,用于50 ml血液的分离化学品   1个 799,-€
3个套件,后修改时间:2020-07-01 14:10:23 净价

可用于血液,骨髓和其他体液样本。

猫。
没有。
准备使用的
PCR试剂盒的名称
DOC 价钱*
SB0127 Genekam磁力分离器,用于1 x 2 ml管和0.2ml管,例如DNA / RNA分离   1个 39,-€
SB0128 Genekam磁力分离器,用于3种不同类型的试管,例如0.2、1和2ml试管,例如DNA / RNA分离   1个 79,-€
SB0129 Genekam磁力分离器,用于5个不同的试管,例如0、2、1、2ml试管,例如DNA / RNA分离   1个 129,-€
SB0130 Genekam磁力分离器,用于8个不同尺寸的试管,例如0.2、1、2 ml试管,例如DNA / RNA分离    1个 149,-€
SB0131 Genekam一根管的磁力分离器:15/50毫升   1个 159,-€
SB0132 Genekam磁力分离器3管:15/50毫升   1个 199,-€
SB0134 从100 ul或更多血液中分离Genekam小鼠T细胞:磁选机,分离化学品5分离物   1个 399,-€
SB0135 从100 ul或更多血液中分离Genekam小鼠B细胞:磁选机,分离化学品5分离物   1个 399,-€
SB0136 Genekam Service用您的抗体标记我们的磁珠,以分离其他细胞;小共轭   1个 199,-€
SB0137 Genekam磁力辅助转染:磁力分离器,化学试剂50次反应   50 199,-€
SB0138 用于流感病毒的Genekam磁性隔离试剂盒(磁性分离器,分离化学品)   50 呼叫
11个工具包,后修改时间:2020-07-01 14:10:23 净价

磁性细胞分离

从血液中分离磁性细胞:血液中有许多细胞,可以将其分离以进行各种实验,例如开发新的测定方法和细胞疗法。细胞的分离也可以通过磁场来完成。该方法非常简单,无需复杂而昂贵的仪器即可在实验室中进行。因此,Genekam生物技术公司已开发出许多解决方案。这些是在细胞上表达的不同标记,可以用作分离来源以获得纯种群。分离后,应进行各种实验,例如显微镜和流式细胞术检查,以确保细胞质量足以继续进行下一步工作。提供的解决方案是无菌的,因此在无菌条件下分离的细胞可用于细胞培养。这些分离的细胞可用于分子和免疫学分析。该试剂盒可用于从少至1毫升的血液中分离细胞。 

分离试剂盒包括:磁珠,Fc受体阻滞剂,白细胞富集溶液。 
该试剂盒还包含用于富集白细胞的成分,因此使用密度梯度法可以节省时间和金钱。但是,如果必须分离细胞,也可以使用密度梯度法。 

可选(单独购买):Mac Buffer,磁力分离器 

步骤:

  1. 富集白细胞
  2. 磁分离细胞
  3. 洗涤和收集

所有试剂盒均为无菌产品。如果用户要在无菌条件下工作,将会有分离的细胞作为无菌产品用于细胞培养和未来应用。

 

猫。
没有。
准备使用的
PCR试剂盒的名称
DOC 价钱*
STEM23 磁性分离CD4阳性细胞(通常是人T细胞;仅磁珠)   10 149,-€
STEM24 磁分离CD3阳性细胞(通常是人T细胞;仅磁珠)   10 149,-€
STEM25 磁性分离CD20阳性细胞(通常是人B细胞;仅磁珠)   10 149,-€
STEM26 CD19阳性细胞(通常是人B细胞;仅磁珠)的磁分离   10 149,-€
STEM27 磁分离CD8阳性细胞(通常是人B细胞;仅磁珠)   10 149,-€
STEM28 CD25阳性细胞(通常是人T细胞;仅磁珠)的磁分离   10 149,-€
STEM45 磁分离CD27阳性细胞(仅磁珠)   10 149,-€
STEM46 磁性分离CD34阳性细胞(仅磁珠)   10 149,-€
STEM47 磁分离CD38阳性细胞(仅磁珠)   10 149,-€
STEM48 CD40阳性细胞的磁分离(仅磁珠)   10 149,-€
STEM49 磁性分离CD45阳性细胞(仅磁珠)   10 149,-€
STEM50 CD90阳性细胞的磁分离(仅磁珠)   10 149,-€
STEM51 CD105阳性细胞的磁分离(仅磁珠)   10 149,-€
STEM52 CD66b阳性细胞的磁分离(仅磁珠)   10 149,-€
STEM53 磁分离CD14阳性细胞(仅磁珠)   10 149,-€
STEM54 磁性分离CD56阳性细胞(仅磁珠)   10 149,-€
STEM55 磁性分离CD44阳性细胞(仅磁珠)   10 149,-€
STEM56 CD133阳性细胞的磁分离(仅磁珠)   10 149,-€
STEM57 CD64阳性细胞的磁分离(仅磁珠)   10 149,-€
STEM58 CD117阳性细胞的磁分离(仅磁珠)   10 149,-€
STEM59 磁分离叶酸受体表达肿瘤细胞(仅磁珠)   10 199,-€
STEM60 磁分离VEGFR2 / CD39阳性细胞(内皮细胞)(仅磁珠)   10 199,-€
STEM61 磁性CD31阳性细胞(内皮细胞)(仅磁性珠)   10 199,-€
23个套件,后修改时间:2020-07-01 14:11:13 净价

 

该套件用于在实验室条件下磁珠分离死细胞和活细胞。该方法非常简单。将Genekam磁珠添加到您的细胞中,等待10-20分钟,然后用磁场分离细胞。Genekam珠与凋亡细胞相连。该产品是无菌的。之后,用户可以处理单元以用于进一步的应用。该产品可用于多种细胞,包括干细胞和精子。

猫。
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准备使用的
PCR试剂盒的名称
DOC 价钱*
SB029 凋亡细胞分离试剂盒(基于Annexin V;无菌)   10 150欧元
1个套件,后修改时间:2020-07-01 14:10:23 净价

磁珠转染

快速+++简单++与常规系统相比,转染率高很多倍++一次转染单个或多个基因+++难以转染单核细胞等难以转染的细胞的易转染+++ 

基因传递是将外源DNA引入宿主细胞的过程,是遗传修饰的重要步骤,并且是现代疗法(如CAR T细胞基因疗法,疫苗和重组蛋白开发)的基础,此基因转化成功的关键一直在开发安全,稳定和高效的基因递送系统。在过去的几十年中,已经开发了许多不同的基因递送方法,可以将其分为病毒和非病毒类型的载体系统。病毒介导的基因传递利用病毒将其DNA注入宿主细胞的能力。尽管病毒载体可以实现较高水平的转染效率,但它们仍具有许多缺点,包括潜在的毒性或免疫原性风险,扩大生产规模的困难,携带DNA超过一定大小的能力有限。因此,诸如Genekam磁珠之类的非病毒载体具有多种优势,例如小的宿主免疫反应,储存稳定性以及相对容易的生产和规模化,正在被开发为基因传递的替代方法。非病毒方法包括农杆菌介导的方法,化学方法(如脂质转染)和物理方法(如显微注射,基因枪,静水压,电穿孔,连续输注和超声处理)。随着纳米技术和分子生物学的发展,具有带正电荷的表面的纳米颗粒已显示出有望作为基因传递的非病毒载体。像Genekam磁珠这样的超顺磁性纳米粒子比其他粒子具有许多优势 因此,诸如Genekam磁珠之类的非病毒载体具有多种优势,例如小的宿主免疫反应,储存稳定性以及相对容易的生产和规模化,正在被开发为基因传递的替代方法。非病毒方法包括农杆菌介导的方法,化学方法(如脂质转染)和物理方法(如显微注射,基因枪,静水压,电穿孔,连续输注和超声处理)。随着纳米技术和分子生物学的发展,具有带正电荷的表面的纳米颗粒已显示出有望作为基因传递的非病毒载体。像Genekam磁珠这样的超顺磁性纳米粒子比其他粒子具有许多优势 因此,诸如Genekam磁珠之类的非病毒载体具有多种优势,例如小的宿主免疫反应,储存稳定性以及相对容易的生产和规模化,正在被开发为基因传递的替代方法。非病毒方法包括农杆菌介导的方法,化学方法(如脂质转染)和物理方法(如显微注射,基因枪,静水压,电穿孔,连续输注和超声处理)。随着纳米技术和分子生物学的发展,具有带正电荷的表面的纳米颗粒已显示出有望作为基因传递的非病毒载体。像Genekam磁珠这样的超顺磁性纳米粒子比其他粒子具有许多优势 具有几种优点,例如小的宿主免疫反应,贮存稳定性以及相对容易的生产和规模化,正被开发为基因传递的替代方法。非病毒方法包括农杆菌介导的方法,化学方法(如脂质转染)和物理方法(如显微注射,基因枪,静水压,电穿孔,连续输注和超声处理)。随着纳米技术和分子生物学的发展,具有带正电荷的表面的纳米颗粒已显示出有望作为基因传递的非病毒载体。像Genekam磁珠这样的超顺磁性纳米粒子比其他粒子具有许多优势 具有几种优点,例如小的宿主免疫反应,贮存稳定性以及相对容易的生产和规模化,正被开发为基因传递的替代方法。非病毒方法包括农杆菌介导的方法,化学方法(如脂质转染)和物理方法(如显微注射,基因枪,静水压,电穿孔,连续输注和超声处理)。随着纳米技术和分子生物学的发展,具有带正电荷的表面的纳米颗粒已显示出有望作为基因传递的非病毒载体。像Genekam磁珠这样的超顺磁性纳米粒子比其他粒子具有许多优势 非病毒方法包括农杆菌介导的方法,化学方法(如脂质转染)和物理方法(如显微注射,基因枪,静水压,电穿孔,连续输注和超声处理)。随着纳米技术和分子生物学的发展,具有带正电荷的表面的纳米颗粒已显示出有望作为基因传递的非病毒载体。像Genekam磁珠这样的超顺磁性纳米粒子比其他粒子具有许多优势 非病毒方法包括农杆菌介导的方法,化学方法(如脂质转染)和物理方法(如显微注射,基因枪,静水压,电穿孔,连续输注和超声处理)。随着纳米技术和分子生物学的发展,具有带正电荷的表面的纳米颗粒已显示出有望作为基因传递的非病毒载体。像Genekam磁珠这样的超顺磁性纳米粒子比其他粒子具有许多优势 具有带正电表面的纳米颗粒显示出有望作为基因传递的非病毒载体。像Genekam磁珠这样的超顺磁性纳米粒子比其他粒子具有许多优势 具有带正电表面的纳米颗粒显示出有望作为基因传递的非病毒载体。像Genekam磁珠这样的超顺磁性纳米粒子比其他粒子具有许多优势 

-壬病毒基因递送系统 

的消化-增强性 

承载能力-更高DNA 

-更强大渗透 

-低级花费 

当暴露于外部磁场来驱动和稳定的靶基因的有效表达-the能力.. 

-single以及可以传递多个基因-操作 

简便- 

高转染率 

Genekam磁珠磁化是一种简单,通用且高效的基因转移方法,该方法利用磁力促进与阳离子磁性纳米粒子相关的基因载体对靶细胞的吸收。将基因有效地传递到哺乳动物的体细胞核中是实现生殖单细胞克隆并使用体细胞核移植技术育种新品种动物的关键步骤。磁性纳米粒子作为基因载体的应用在许多领域中发展迅速,并且出版物的数量也在增加。 

该系统可用于不同的质粒,载体,例如腺病毒,逆转录病毒和原色病毒载体,反义以及PCR产物。它可以用于不同类型的细胞,如单核细胞,CHO,HELA,BHK,Vero,内皮细胞,淋巴细胞,成纤维细胞,软骨细胞,上皮细胞,肾细胞,肝细胞等。 

体外磁转染应牢记的一点: 

将非粘附细胞离心,可以向沉淀物中添加30 ul磁性nead DNA复合物,并使其混合30分钟。将它们吸移到将要施加磁场的板或烧瓶中。人们还可以使用涂层板,使这些细胞粘附在表面上。这是基于经验! 

转染时,贴壁细胞应生长至60-80%的融合度。 

转染需要每毫升2000至20000之间的细胞。将在无血清培养基中制备载体并将其添加到细胞中。应使用PBS清洗细胞,使它们不含血清和其他不必要的酶,这些酶可能会干扰整个过程。根据细胞种类和培养箱中的经验,将施加30分钟至8小时的磁场。之后,可以将培养基更改为血清培养基。 

每平方厘米空间所需的DNA约为25到250 ng。这可以帮助计算实验的总需求。 
 

猫。
没有。
准备使用的
PCR试剂盒的名称
DOC 价钱*
SB0183 用于转染的磁珠A型可进行2000次转染   200微升 99欧元
SB0184 用于转染的磁珠B型可进行2000次转染   200微升 159,-€
SB0185 用于转染的磁珠C型可进行2000次转染   200微升 199,-€
3个套件,后修改时间:2020-07-01 14:10:23 净价

磁珠抗体分离试剂盒

猫。
没有。
准备使用的
PCR试剂盒的名称
DOC 反应 价钱*
SB0142 磁珠抗体分离试剂盒   2 60,-€
SB0143 磁珠抗体分离试剂盒   10 120欧元
2个工具包,后修改时间:2017-11-26 14:23:37  

细胞分离

猫。
没有。
准备使用的
PCR试剂盒的名称
DOC 价钱*
SB0149 人T细胞(CD4阳性细胞)磁珠分离试剂盒   10 219,-€
SB0150 人T细胞(CD8阳性细胞)磁珠分离试剂盒   10 219,-€
SB0151 人T细胞(CD3阳性细胞)磁珠分离试剂盒   10 219,-€
SB0152 人B细胞(CD19阳性细胞)磁珠分离试剂盒   10 219,-€
SB0153 人B细胞(CD20阳性细胞)磁珠分离试剂盒   10 219,-€
SB0154 人B细胞(CD27阳性细胞)磁珠分离试剂盒   10 219,-€
SB0161 人CD34阳性细胞   10 219,-€
SB0162 人B细胞(CD38阳性细胞)   10 219,-€
SB0163 人B细胞(CD40阳性细胞)   10 219,-€
SB0164 人白细胞(CD45阳性细胞)   10 219,-€
10个套件,后修改时间:2020-07-01 14:10:48 净价

外来体

猫。
没有。
准备使用的
PCR试剂盒的名称
DOC 价钱*
SB0155 外来体磁珠分离试剂盒(通用)   10 220欧元
SB0156 外泌体磁珠分离试剂盒(基于一种标记物)   10 199,-€
2个套件,后修改时间:2020-07-01 14:10:23 净价

Genekam细胞捕手

猫。
没有。
准备使用的
PCR试剂盒的名称
DOC 价钱*
SB0179 Genekam磁珠(Genekam GFP细胞捕获器)   10 119,-€
SB0180 Genekam磁珠(Genekam GFP细胞捕获器)   100
SB0181 Genekam磁珠(Genekam RFP细胞捕集器)   10 139,-€
SB0182 Genekam磁珠(Genekam RFP细胞捕集器)   100
4个工具包,后修改时间:2020-07-01 14:10:23 净价

其他

猫。
没有。
准备使用的
PCR试剂盒的名称
DOC 反应 价钱*
SB0147S Genekam红细胞去除试剂盒   100毫升 100欧元
SB0147M Genekam红细胞去除试剂盒   200毫升 180,-€
SB0147 Genekam红血球去除试剂盒作为样品试剂盒(每个客户仅发货一个)   10毫升  30,-€
SB0146A Genekam内毒素去除试剂盒(无菌)   1毫升  75欧元
SB0146B Genekam内毒素去除试剂盒(无菌)   5毫升  300欧元
SB0146C Genekam内毒素去除试剂盒(无菌)   10毫升  500欧元
6个工具包,后修改时间:2019-02-23 13:22:09  

这些产品由德国Genekam Biotechnology AG开发和制造。 
*所有价格均为德国杜伊斯堡工厂出厂价,产品仅供研究使用

GST标签蛋白纯化磁珠 GSTSep Glutathione MagBeads

GST标签蛋白纯化磁珠 GSTSep Glutathione MagBeads

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品描述

 

GST标签蛋白纯化磁珠是一种专为高效、快速纯化谷胱甘肽巯基转移酶(GST)融合蛋白而设计的一种新型超顺磁性微球产品,具有快速磁响应性、丰富羟基官能团和粒径相对集中等特点。该磁珠可通过磁性分离方式直接从生物样品中一步纯化出高纯度的目标蛋白,极大地简化纯化工艺和提高纯化效率,适合科研和工业领域便捷地进行GST 融合蛋白的纯化。

本品特异性好,性价比高,可以一步从细菌、酵母菌或哺乳动物天然细胞裂解物中纯化谷胱甘肽-S-转移酶、谷胱甘肽依赖性蛋白和谷胱甘肽重组衍生物。GST是重组蛋白制备过程中常用的一种标签蛋白,以辅助目的蛋白表达、检测、纯化。

时,在使用磁性分离法的Pull-down实验中,充当“诱饵蛋白”的重组GST融合蛋白通过亲和作用与磁珠结合,当目标蛋白与固相载体混合时,就可被诱饵蛋白吸附,在磁力下,目标蛋白就从表达体系中分离出来,使用该磁珠进行GST Pull-down实验,由于磁性分离不需要多次离心和较长的孵育时间,与传统的层析法相比,操作更简单、快速和自动化。

 

产品性质

 

基质

磁性琼脂糖微球

配体

Glutathione (谷胱甘肽)

载量

5-10 mg GST标签融合蛋白/ mL磁珠

粒径

30-100 μm

磁珠浓度

磁珠悬浮于保护液中,含量为20%

储存缓冲液

20%乙醇的1×PBS

 

运输保存方法

 

冰袋运输。4℃长期储存,有效期2年。

 

注意事项

 

1.磁珠保存过程中避免冷冻干燥和高速离心等操作。

2.磁珠使用前,请充分震荡,使磁珠保持均匀的悬浮状态。

3.使用过的磁珠重复使用时,建议纯化同一种蛋白,纯化不同种蛋白时,建议使用新磁珠,以避免交叉污染。

4.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

5.本产品仅作科研用途!

 

使用方法

 

  • 缓冲液配制

1.平衡/洗杂液:PBS, pH 7.4 (140 mM NaCI, 2.7 mM KCI, 10 mM Na2HPO4, 1.8 mM KH2PO4, pH 7.4)

2.洗脱液:50 mM Tris-HCl, 10 mM-20 mM还原型谷胱甘肽,pH 8.0

二、样本制备

【注】样品在上样前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤,减少杂质。

2.1细菌或酵母表达的蛋白

1)将培养液转移到离心杯中,7,000 rpm (7,500 xg),离心15 min收集菌体,然后按照菌体:平衡液=1: 10 W/V)加入平衡液,加入终浓度为1 mMPMSF。加入溶菌酶,使其工作浓度为0.2-0.4 mg/mL。如果表达的宿主细胞内含pLysSpLysE可以不加溶菌酶

2)同时可加入其他蛋白酶抑制剂,但不能影响目的蛋白与磁珠的结合。

3)将菌体沉淀悬浮起来,(如果菌液浓度高,也可考虑加入10 μg/mL RNase A5 μg/mL DNase I,,冰上超声破碎细胞,至菌液基本保持澄清。

4)将澄清的破碎液转移至离心管中10,000 rpm (15,000 xg),4离心20-30 min 取上清,置于冰上备用或-20保存。

2.2酵母、昆虫和哺乳细胞分泌表达可溶性蛋白

1)将细胞培养液转移至离心杯5,000 rpm (3,800 xg),离心10 min收集菌体得上清即可直接使用

2)对于大量体积的上清,需加入硫酸铵沉淀浓缩后,然后Lysis Buffer透析后才能上样

三、磁珠准备

1.可根据目标蛋白产量和磁珠载量信息来准备适量的磁珠(磁珠体积为总体积的20%),将磁珠反复颠倒,充分混匀,使用移液器取适量的磁珠悬浮液,置于离心管中,将离心管置于磁分离器上,大约1 min待溶液变澄清后,用移液器吸弃清液。

2.将离心管从磁分离器上取下来,加入与悬浮液等体积的平衡液,使用枪头反复吹打5次,将离心管置于磁分离器上,大约1 min待溶液变澄清后,用移液器吸弃清液,重复洗涤2次。

四、GST标签蛋白纯化

1. 结合 备好的样本加入到处理好的磁珠中,反复颠倒混匀。将离心管置于混合仪上,室温孵育30 min以上(也可根据结合效果调整延长孵育时间

2. 洗杂 将离心管置于磁分离器,大约1 min待溶液变澄清后,用移液器移出上清液,保留,以备取样检测。向离心管中加入5倍悬浮液体积的洗杂液,使用枪头反复吹打5次,将离心管置于磁分离器上,大约1 min待溶液变澄清后,用移液器吸弃上清液。至少重复上述步骤2次。

3. 洗脱 在上述离心管中加入3-5倍磁珠体积的洗脱液,用移液器吹打5次,然后在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管,5-10 min后,置于磁分离器上,大约1 min,待溶液变澄清后,吸取上清液,收集洗脱组分,即为目标蛋白。重复操作两次,分别收集洗脱组分,留待检测。

4.磁珠保存 使用后的磁珠用1 mL洗脱液重悬磁珠,然后置于磁分离器上,大约1 min,待溶液变澄清后,吸弃上清液。该操作重复两次。 再加入1 mL平衡液,悬浮磁珠,然后置于磁分离器上,大约1 min,待溶液变澄清后,吸弃上清液。再加入4倍磁珠体积的20%乙醇,置于4℃保存。

五、Pull-Down 实验

1.磁珠结合诱饵蛋白 将含有GST标签诱饵蛋白的样品加入到备好的磁珠中,颠倒混匀。将离心管置于混合仪上,室温孵育30 min以上(时间可根据结合效果调整)。

2.洗杂 将离心管置于磁分离器,大约1min,待溶液变澄清后,用移液器移出上清液,保留,以备取样检测。向离心管中加入5倍悬浮液体积的洗杂液,使用枪头反复吹打5-10次,将离心管置于磁分离器上,大约1 min,待溶液变澄清后,用移液器吸弃上清液。重复上述步骤2次。 即得到GST诱饵蛋白-磁珠复合物。

3.目标蛋白与诱饵蛋白-磁珠复合物结合 将含有目标蛋白的样品加入到处理好的诱饵蛋白-磁珠复合物中,颠倒混匀。将离心管置于混合仪上,室温孵育30 min以上(时间根据结合效果调整)。

4.洗杂 将离心管置于磁分离器,大约1 min待溶液变澄清后,用移液器移出上清液,保留,以备取样检测。向离心管中加入5倍悬浮液体积的洗杂液,使用枪头反复吹打5-10次,将离心管置于磁分离器上,大约1 min,待溶液变澄清后,用移液器吸弃上清液。重复上述步骤2次。 目标蛋白通过与诱饵蛋白的结合,从混合体系中被捕获。

5.目的蛋白的洗脱  在上述离心管中加入3-5倍磁珠体积的洗脱液,用移液器吹打5次,然后在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管,5-10 min后, 置于磁分离器上,大约1 min待溶液变澄清后,吸取上清液,收集洗脱组分,即得到靶蛋白和目标蛋白复合物。再重复操作两次,分别收集洗脱组分,留待检测

 

 

HB220315

Q:目标蛋白回收率低怎么办?

A:1)延长粗蛋白与磁珠的孵育时间;

  2)适当降低样品溶液和Binding/Wash Buffer中的还原型谷胱甘肽浓度;

  3)添加合适的蛋白酶抑制剂,防止目标蛋白降解;

  4)增加磁珠用量;

  5)延长洗脱目标蛋白的时间或增加洗脱次数;

  6)在样品溶液和其它缓冲液中添加表面活性剂等物质。

Q:如何提高目标蛋白纯度?

A:1)适当提高样品溶液和Binding/Wash Buffer中的还原型谷胱甘肽浓度;

  2)在纯化过程中添加合适的蛋白酶抑制剂,防止目标蛋白降解;

  3)在样品溶液和缓冲液中加入表面活性剂等物质;

  4)延长清洗的时间,增加清洗次数。

GST标签蛋白纯化磁珠 GSTSep Glutathione MagBeads

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产品描述

 

GST标签蛋白纯化磁珠是一种专为高效、快速纯化谷胱甘肽巯基转移酶(GST)融合蛋白而设计的一种新型超顺磁性微球产品,具有快速磁响应性、丰富羟基官能团和粒径相对集中等特点。该磁珠可通过磁性分离方式直接从生物样品中一步纯化出高纯度的目标蛋白,极大地简化纯化工艺和提高纯化效率,适合科研和工业领域便捷地进行GST 融合蛋白的纯化。

本品特异性好,性价比高,可以一步从细菌、酵母菌或哺乳动物天然细胞裂解物中纯化谷胱甘肽-S-转移酶、谷胱甘肽依赖性蛋白和谷胱甘肽重组衍生物。GST是重组蛋白制备过程中常用的一种标签蛋白,以辅助目的蛋白表达、检测、纯化。

时,在使用磁性分离法的Pull-down实验中,充当“诱饵蛋白”的重组GST融合蛋白通过亲和作用与磁珠结合,当目标蛋白与固相载体混合时,就可被诱饵蛋白吸附,在磁力下,目标蛋白就从表达体系中分离出来,使用该磁珠进行GST Pull-down实验,由于磁性分离不需要多次离心和较长的孵育时间,与传统的层析法相比,操作更简单、快速和自动化。

 

产品性质

 

基质

磁性琼脂糖微球

配体

Glutathione (谷胱甘肽)

载量

5-10 mg GST标签融合蛋白/ mL磁珠

粒径

30-100 μm

磁珠浓度

磁珠悬浮于保护液中,含量为20%

储存缓冲液

20%乙醇的1×PBS

 

运输保存方法

 

冰袋运输。4℃长期储存,有效期2年。

 

注意事项

 

1.磁珠保存过程中避免冷冻干燥和高速离心等操作。

2.磁珠使用前,请充分震荡,使磁珠保持均匀的悬浮状态。

3.使用过的磁珠重复使用时,建议纯化同一种蛋白,纯化不同种蛋白时,建议使用新磁珠,以避免交叉污染。

4.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

5.本产品仅作科研用途!

 

使用方法

 

  • 缓冲液配制

1.平衡/洗杂液:PBS, pH 7.4 (140 mM NaCI, 2.7 mM KCI, 10 mM Na2HPO4, 1.8 mM KH2PO4, pH 7.4)

2.洗脱液:50 mM Tris-HCl, 10 mM-20 mM还原型谷胱甘肽,pH 8.0

二、样本制备

【注】样品在上样前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤,减少杂质。

2.1细菌或酵母表达的蛋白

1)将培养液转移到离心杯中,7,000 rpm (7,500 xg),离心15 min收集菌体,然后按照菌体:平衡液=1: 10 W/V)加入平衡液,加入终浓度为1 mMPMSF。加入溶菌酶,使其工作浓度为0.2-0.4 mg/mL。如果表达的宿主细胞内含pLysSpLysE可以不加溶菌酶

2)同时可加入其他蛋白酶抑制剂,但不能影响目的蛋白与磁珠的结合。

3)将菌体沉淀悬浮起来,(如果菌液浓度高,也可考虑加入10 μg/mL RNase A5 μg/mL DNase I,,冰上超声破碎细胞,至菌液基本保持澄清。

4)将澄清的破碎液转移至离心管中10,000 rpm (15,000 xg),4离心20-30 min 取上清,置于冰上备用或-20保存。

2.2酵母、昆虫和哺乳细胞分泌表达可溶性蛋白

1)将细胞培养液转移至离心杯5,000 rpm (3,800 xg),离心10 min收集菌体得上清即可直接使用

2)对于大量体积的上清,需加入硫酸铵沉淀浓缩后,然后Lysis Buffer透析后才能上样

三、磁珠准备

1.可根据目标蛋白产量和磁珠载量信息来准备适量的磁珠(磁珠体积为总体积的20%),将磁珠反复颠倒,充分混匀,使用移液器取适量的磁珠悬浮液,置于离心管中,将离心管置于磁分离器上,大约1 min待溶液变澄清后,用移液器吸弃清液。

2.将离心管从磁分离器上取下来,加入与悬浮液等体积的平衡液,使用枪头反复吹打5次,将离心管置于磁分离器上,大约1 min待溶液变澄清后,用移液器吸弃清液,重复洗涤2次。

四、GST标签蛋白纯化

1. 结合 备好的样本加入到处理好的磁珠中,反复颠倒混匀。将离心管置于混合仪上,室温孵育30 min以上(也可根据结合效果调整延长孵育时间

2. 洗杂 将离心管置于磁分离器,大约1 min待溶液变澄清后,用移液器移出上清液,保留,以备取样检测。向离心管中加入5倍悬浮液体积的洗杂液,使用枪头反复吹打5次,将离心管置于磁分离器上,大约1 min待溶液变澄清后,用移液器吸弃上清液。至少重复上述步骤2次。

3. 洗脱 在上述离心管中加入3-5倍磁珠体积的洗脱液,用移液器吹打5次,然后在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管,5-10 min后,置于磁分离器上,大约1 min,待溶液变澄清后,吸取上清液,收集洗脱组分,即为目标蛋白。重复操作两次,分别收集洗脱组分,留待检测。

4.磁珠保存 使用后的磁珠用1 mL洗脱液重悬磁珠,然后置于磁分离器上,大约1 min,待溶液变澄清后,吸弃上清液。该操作重复两次。 再加入1 mL平衡液,悬浮磁珠,然后置于磁分离器上,大约1 min,待溶液变澄清后,吸弃上清液。再加入4倍磁珠体积的20%乙醇,置于4℃保存。

五、Pull-Down 实验

1.磁珠结合诱饵蛋白 将含有GST标签诱饵蛋白的样品加入到备好的磁珠中,颠倒混匀。将离心管置于混合仪上,室温孵育30 min以上(时间可根据结合效果调整)。

2.洗杂 将离心管置于磁分离器,大约1min,待溶液变澄清后,用移液器移出上清液,保留,以备取样检测。向离心管中加入5倍悬浮液体积的洗杂液,使用枪头反复吹打5-10次,将离心管置于磁分离器上,大约1 min,待溶液变澄清后,用移液器吸弃上清液。重复上述步骤2次。 即得到GST诱饵蛋白-磁珠复合物。

3.目标蛋白与诱饵蛋白-磁珠复合物结合 将含有目标蛋白的样品加入到处理好的诱饵蛋白-磁珠复合物中,颠倒混匀。将离心管置于混合仪上,室温孵育30 min以上(时间根据结合效果调整)。

4.洗杂 将离心管置于磁分离器,大约1 min待溶液变澄清后,用移液器移出上清液,保留,以备取样检测。向离心管中加入5倍悬浮液体积的洗杂液,使用枪头反复吹打5-10次,将离心管置于磁分离器上,大约1 min,待溶液变澄清后,用移液器吸弃上清液。重复上述步骤2次。 目标蛋白通过与诱饵蛋白的结合,从混合体系中被捕获。

5.目的蛋白的洗脱  在上述离心管中加入3-5倍磁珠体积的洗脱液,用移液器吹打5次,然后在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管,5-10 min后, 置于磁分离器上,大约1 min待溶液变澄清后,吸取上清液,收集洗脱组分,即得到靶蛋白和目标蛋白复合物。再重复操作两次,分别收集洗脱组分,留待检测

 

 

HB220315

Q:目标蛋白回收率低怎么办?

A:1)延长粗蛋白与磁珠的孵育时间;

  2)适当降低样品溶液和Binding/Wash Buffer中的还原型谷胱甘肽浓度;

  3)添加合适的蛋白酶抑制剂,防止目标蛋白降解;

  4)增加磁珠用量;

  5)延长洗脱目标蛋白的时间或增加洗脱次数;

  6)在样品溶液和其它缓冲液中添加表面活性剂等物质。

Q:如何提高目标蛋白纯度?

A:1)适当提高样品溶液和Binding/Wash Buffer中的还原型谷胱甘肽浓度;

  2)在纯化过程中添加合适的蛋白酶抑制剂,防止目标蛋白降解;

  3)在样品溶液和缓冲液中加入表面活性剂等物质;

  4)延长清洗的时间,增加清洗次数。

GST标签蛋白纯化磁珠 GSTSep Glutathione MagBeads

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His标签蛋白纯化磁珠 HisSep Ni-NTA MagBeads

His标签蛋白纯化磁珠 HisSep Ni-NTA MagBeads

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

His-tag蛋白纯化磁珠是一种高容量的新型磁性微球产品,用于快速、高效的纯化 His标签融合蛋白。磁珠在磁场作用下直接从生物样品中可一步纯化出高达95%纯度的目的蛋白,极大的简化了纯化工艺和提高纯化效率。将含有His标签蛋白的细胞裂解物添加到MagBeads 中,让蛋白质与充分结合然后可从磁珠中洗脱分离目的蛋白。

与传统柱层析方法相比,使用磁珠纯化His标签蛋白无需控制上样流速和多次离心样品,也不需要昂贵的层析和离心设备样品与磁珠的结合以及目的蛋白与磁珠的分离简单、快捷,而且更容易实现高通量、自动化的蛋白纯化方法。适合科研和工业客户高通量地进行组氨酸标签蛋白的纯化。

该磁珠4%琼脂糖凝胶为基质通过化学方法偶联了四配位的氮川三乙酸(NTA),螯合镍离子(Ni2+)后,可以形成非常稳定的八面体结构,镍离子处于八面体的中心,这样的结构很有效的保护了镍离子免受小分子的进攻更加稳定

His标签蛋白纯化磁珠广泛适用于细菌、酵母、昆虫和哺乳动物细胞等分泌或胞内表达的可溶性组氨酸标签蛋白,也可用于变性蛋白的纯化(包涵体需变性后再进行纯化

 

产品性质

基质

磁性琼脂糖微球

载量

> 40 mg 6×His-tagged protein/mL磁珠

粒径

30-100 μm

磁珠浓度

磁珠悬浮于保护液中,含量为20%V/V)

储存缓冲液

20%乙醇的1×PBS

 

运输保存方法

冰袋运输。4℃长期储存,有效期2年。

 

注意事项

1.磁珠保存过程中避免冷冻干燥和高速离心等操作。

2.磁珠使用前,请充分震荡,使磁珠保持均匀的悬浮状态。

3.使用过的磁珠重复使用时,建议纯化同一种蛋白,纯化不同种蛋白时,建议使用新磁珠,以避免交叉污染。

4.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

5.本产品仅作科研用途!

 

使用方法

一、缓冲液配制

1.缓冲液使用基本原理咪唑上样,高咪唑洗脱,或者高pH上样,低pH洗脱。

2.Buffer在使用前最好用0.22 μm或者0.45 μm滤膜过滤除菌。

3.可溶性蛋白纯化所需缓冲液及配方详见1包涵体蛋白纯化所需缓冲液及配方详见2和表3

 

二、样本制备

2.1细菌或酵母表达的蛋白

1)将培养液转移到离心杯中,7,000 rpm (7,500 xg)离心15 min收集菌体,然后按照菌体:Lysis Buffer=1: 10 W/V加入Lysis Buffer加入终浓度为1 mMPMSF同时可加入其他蛋白酶抑制剂,但不能影响目的蛋白与磁珠的结合。

2)加入溶菌酶,使其工作浓度为0.2-0.4 mg/mL如果表达的宿主细胞内含pLysSpLysE可以不加溶菌酶

3)将菌体沉淀悬浮起来,(如果菌液浓度高,也可考虑加入10 μg/mL RNase A5 μg/mL DNase I,,冰上超声破碎细胞,至菌液基本保持澄清。

4)将澄清的破碎液转移至离心管中10,000 rpm (15,000 xg)4离心20-30 min 取上清,置于冰上备用或-20保存。

2.2酵母、昆虫和哺乳细胞分泌表达可溶性蛋白

1)将细胞培养液转移至离心杯5,000 rpm (3,800 xg)离心10 min收集菌体得上清,如上清中不含EDTA组氨酸和还原剂等物质,即可直接使用;如含有EDTA组氨酸和还原剂等物质,需用Lysis Buffer透析才能上样

2)对于大量体积的上清,需加入硫酸铵沉淀浓缩后,然后Lysis Buffer透析后才能上样

2.3包涵体蛋白纯化(变性条件)

1)将培养液转移到离心杯中,7,000 rpm (7,500 xg)离心15 min收集菌体,去掉上清。

2)按照菌体:Lysis buffer不含8M尿素=1:10 (W/V)菌体悬浮起来,混匀,冰浴超声破碎。

3)将破碎液转移至离心管中,10,000 rpm (15,000 xg)4离心20-30 min去掉上清,步骤23可以重复一次。

4按照菌体:Lysis buffer(含8M尿素=1:10 (w/v)的比例将包涵体充分悬浮。

 

三、磁珠预处理

3.1 准备

磁珠充分混匀,使用移液器取适量的磁珠悬浮液,置于离心管中,将离心管置于磁力架上,待溶液变澄清后,用移液器吸弃上清

3.2平衡

将离心管从磁力架上取下来,加入与悬浮液等体积的Lysis Buffer使用枪头反复吹打5-10次,将离心管置于磁分离器上,待溶液变澄清后,用移液器吸弃清液,重复洗涤2次。

 

四、磁珠与目的蛋白结合

4.1 结合

含有目的蛋白的上清液加入到处理好的磁珠中,颠倒混匀。将离心管置于混合仪上,室温旋转孵育30 min (如果目标蛋白不稳定,建议2-8下孵育1 h)。

4.2 洗杂

将离心管置于磁分离器,待溶液变澄清后,用移液器移出上清液,保留上清液,以备取样检测。向离心管中加入2倍悬浮液体积的Wash Buffer使用枪头反复吹打5-10次,将离心管置于磁分离器上,待溶液变澄清后,用移液器吸取上清液,保留,以备取样检测。重复上述步骤2次。

4.3 洗脱

建议将3-5倍磁珠体积的Elution Buffer加入到离心管中,使用移液器轻轻吹打3-5次,混匀,将离心管置于磁分离器上,待溶液变澄清后,用移液器吸取上清液,即为目的蛋白。如有需要可以重复上述步骤1次,以提高目的蛋白的回收量。用户也可根据实验结果调整缓冲液中的咪唑浓度

 

五、磁珠保存

1. 向装有磁珠的离心管中加入1 mL Elution Buffer用移液器反复吹打3-5次,使磁珠充分悬浮然后置于磁分离器,吸弃上清,重复该操作2次。

2. 向离心管中加入1 mL去离子水,用移液器反复吹打3-5次,使磁珠充分悬浮,然后置于磁分离器,吸弃上清,重复该操作2次。

3. 向离心管中加入含20%乙醇的1×PBS使总体积为磁珠初始悬浮液体积,保存于2-8

 

六、SDS-PAGE 检测

将纯化得到的样品(包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分)使用SDS-PAGE检测纯化效果

 

1. 可溶性His标签蛋白纯化所需缓冲液及配方

缓冲液名称

配方

配制1L溶液所需各种试剂量

Lysis Buffer

50 mM NaH2PO4

300 mM NaCl

10 mM imidazole

NaOHpH8.00.22 µm0.45 µm过滤除菌

NaH2PO4 ·2H2O    7.80 g

NaCl             17.54 g

Imidazole         0.68 g

 

Wash Buffer

50 mM NaH2PO4 

300 mM NaCl

20 mM imidazole

NaOHpH8.00.22 µm0.45 µm过滤除菌

NaH2PO4 ·2H2O    7.80 g

NaCl             17.54 g

Imidazole         1.36 g

 

Elution Buffer

50 mM NaH2PO4 

300 mM NaCl

250 mM imidazole

NaOHpH8.00.22 µm0.45 µm过滤除菌

NaH2PO4 ·2H2O    7.80 g

NaCl             17.54 g

Imidazole         17.0 g

 

以上缓冲液适用于多数His标签蛋白的纯化,客户根据实验结果调整缓冲液中的咪唑浓度。

 

2. 包涵体His标签蛋白纯化所需缓冲液及配方,pH洗脱方式

缓冲液名称

配方

配制1L溶液所需各种试剂量

Lysis Buffer

8 M Urea

100 mM NaH2PO4 

100 mM Tris·HCl

盐酸溶液调pH8.00.22 µm0.45 µm过滤除菌

Urea             480.50 g

NaH2PO4 ·H2O     13.80 g

Tris·Cl            12.10 g

 

Wash Buffer

8 M Urea

100 mM NaH2PO4 

100 mM Tris·HCl

盐酸溶液调pH6.30.22 µm0.45 µm过滤除菌

Urea             480.50 g

NaH2PO4 ·H2O     13.80 g

Tris·Cl            12.10 g

Elution Buffer

8 M Urea

100 mM NaH2PO4 

100 mM Tris·HCl

盐酸溶液调pH4.50.22 µm0.45 µm过滤除菌

Urea             480.50 g

NaH2PO4 ·H2O     13.80 g

Tris·Cl            12.10 g

 

 

3. 包涵体His标签蛋白纯化所需缓冲液及配方,咪唑洗脱方式

缓冲液名称

配方

配制1L溶液所需各种试剂量

 

 

Lysis Buffer

8 M Urea

50 mM NaH2PO4 

300 mM NaCl

10 mM imidazole

NaOHpH8.00.22 µm0.45 µm过滤除菌

Urea             480.50 g

NaH2PO4 ·2H2O    7.80 g

NaCl             17.54 g

Imidazole         0.68 g

 

 

Wash Buffer

8 M Urea

50 mM NaH2PO4 

300 mM NaCl

20 mM imidazole

NaOHpH8.00.22 µm0.45 µm过滤除菌

Urea             480.50 g

NaH2PO4 ·2H2O    7.80 g

NaCl             17.54 g

Imidazole         1.36 g

 

 

 

Elution Buffer

8 M Urea

50 mM NaH2PO4 

300 mM NaCl

250 mM imidazole

NaOHpH8.00.22 µm0.45 µm过滤除菌

Urea             480.50 g

NaH2PO4 ·2H2O    7.80 g

NaCl             17.54 g

Imidazole         17.0 g

 

4. Ni NTA Magarose Beads试剂耐受情况

试剂种类

浓度

还原剂

5 mM DTE

1 mM DTT

20 mM β-mercaptoethanol

5 mM TCEP

10 mM reduced glutathione

变性剂

8 M urea

6 M Gua-HCl

去污剂

2% TritonTM X-100, nonionic

2% TweenTM20, nonionic

2% NP-40, nonionic

2% Cholate, anionic

1% CHAPS, zwitterionic

其他类

500 mM imidazole

20% ethanol

50% glycerol

100 mM Na2SO4

1.5 M NaCl

1 mM EDTA

60 mM citrate

 

HB220315

 

Q:目标蛋白回收率低怎么办?

A:1)延长粗蛋白与磁珠的孵育时间;​

  2)适当降低样品溶液和Binding/Wash Buffer中的Imidazole浓度;

  3)添加合适的蛋白酶抑制剂,防止目标蛋白降解;

  4)增加磁珠用量;

  5)延长洗脱目标蛋白的时间或增加洗脱次数;

  6)在样品溶液和其它缓冲液中添加表面活性剂等物质。

Q:如何提高目标蛋白纯度?

A:1)适当提高样品溶液和Binding/Wash Buffer中的Imidazole和NaCl浓度;

  2)在纯化过程中添加合适的蛋白酶抑制剂,防止目标蛋白降解;

  3)在样品溶液和缓冲液中加入表面活性剂等物质;

  4)延长清洗的时间,增加清洗次数;

  5)采用梯度Imidazole浓度洗脱目标蛋白。

Q:是否有测试结果

A:有,见下图

His标签蛋白纯化磁珠 HisSep Ni-NTA MagBeads

[1] Xu G, Han S, Huo C, et al. Signaling specificity in the c-di-GMP-dependent network regulating antibiotic synthesis in Lysobacter. Nucleic Acids Res. 2018;46(18):9276-9288. doi:10.1093/nar/gky803(IF:11.561)

His-tag蛋白纯化磁珠是一种高容量的新型磁性微球产品,用于快速、高效的纯化 His标签融合蛋白。磁珠在磁场作用下直接从生物样品中可一步纯化出高达95%纯度的目的蛋白,极大的简化了纯化工艺和提高纯化效率。将含有His标签蛋白的细胞裂解物添加到MagBeads 中,让蛋白质与充分结合然后可从磁珠中洗脱分离目的蛋白。

与传统柱层析方法相比,使用磁珠纯化His标签蛋白无需控制上样流速和多次离心样品,也不需要昂贵的层析和离心设备样品与磁珠的结合以及目的蛋白与磁珠的分离简单、快捷,而且更容易实现高通量、自动化的蛋白纯化方法。适合科研和工业客户高通量地进行组氨酸标签蛋白的纯化。

该磁珠4%琼脂糖凝胶为基质通过化学方法偶联了四配位的氮川三乙酸(NTA),螯合镍离子(Ni2+)后,可以形成非常稳定的八面体结构,镍离子处于八面体的中心,这样的结构很有效的保护了镍离子免受小分子的进攻更加稳定

His标签蛋白纯化磁珠广泛适用于细菌、酵母、昆虫和哺乳动物细胞等分泌或胞内表达的可溶性组氨酸标签蛋白,也可用于变性蛋白的纯化(包涵体需变性后再进行纯化

 

产品性质

基质

磁性琼脂糖微球

载量

> 40 mg 6×His-tagged protein/mL磁珠

粒径

30-100 μm

磁珠浓度

磁珠悬浮于保护液中,含量为20%V/V)

储存缓冲液

20%乙醇的1×PBS

 

运输保存方法

冰袋运输。4℃长期储存,有效期2年。

 

注意事项

1.磁珠保存过程中避免冷冻干燥和高速离心等操作。

2.磁珠使用前,请充分震荡,使磁珠保持均匀的悬浮状态。

3.使用过的磁珠重复使用时,建议纯化同一种蛋白,纯化不同种蛋白时,建议使用新磁珠,以避免交叉污染。

4.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

5.本产品仅作科研用途!

 

使用方法

一、缓冲液配制

1.缓冲液使用基本原理咪唑上样,高咪唑洗脱,或者高pH上样,低pH洗脱。

2.Buffer在使用前最好用0.22 μm或者0.45 μm滤膜过滤除菌。

3.可溶性蛋白纯化所需缓冲液及配方详见1包涵体蛋白纯化所需缓冲液及配方详见2和表3

 

二、样本制备

2.1细菌或酵母表达的蛋白

1)将培养液转移到离心杯中,7,000 rpm (7,500 xg)离心15 min收集菌体,然后按照菌体:Lysis Buffer=1: 10 W/V加入Lysis Buffer加入终浓度为1 mMPMSF同时可加入其他蛋白酶抑制剂,但不能影响目的蛋白与磁珠的结合。

2)加入溶菌酶,使其工作浓度为0.2-0.4 mg/mL如果表达的宿主细胞内含pLysSpLysE可以不加溶菌酶

3)将菌体沉淀悬浮起来,(如果菌液浓度高,也可考虑加入10 μg/mL RNase A5 μg/mL DNase I,,冰上超声破碎细胞,至菌液基本保持澄清。

4)将澄清的破碎液转移至离心管中10,000 rpm (15,000 xg)4离心20-30 min 取上清,置于冰上备用或-20保存。

2.2酵母、昆虫和哺乳细胞分泌表达可溶性蛋白

1)将细胞培养液转移至离心杯5,000 rpm (3,800 xg)离心10 min收集菌体得上清,如上清中不含EDTA组氨酸和还原剂等物质,即可直接使用;如含有EDTA组氨酸和还原剂等物质,需用Lysis Buffer透析才能上样

2)对于大量体积的上清,需加入硫酸铵沉淀浓缩后,然后Lysis Buffer透析后才能上样

2.3包涵体蛋白纯化(变性条件)

1)将培养液转移到离心杯中,7,000 rpm (7,500 xg)离心15 min收集菌体,去掉上清。

2)按照菌体:Lysis buffer不含8M尿素=1:10 (W/V)菌体悬浮起来,混匀,冰浴超声破碎。

3)将破碎液转移至离心管中,10,000 rpm (15,000 xg)4离心20-30 min去掉上清,步骤23可以重复一次。

4按照菌体:Lysis buffer(含8M尿素=1:10 (w/v)的比例将包涵体充分悬浮。

 

三、磁珠预处理

3.1 准备

磁珠充分混匀,使用移液器取适量的磁珠悬浮液,置于离心管中,将离心管置于磁力架上,待溶液变澄清后,用移液器吸弃上清

3.2平衡

将离心管从磁力架上取下来,加入与悬浮液等体积的Lysis Buffer使用枪头反复吹打5-10次,将离心管置于磁分离器上,待溶液变澄清后,用移液器吸弃清液,重复洗涤2次。

 

四、磁珠与目的蛋白结合

4.1 结合

含有目的蛋白的上清液加入到处理好的磁珠中,颠倒混匀。将离心管置于混合仪上,室温旋转孵育30 min (如果目标蛋白不稳定,建议2-8下孵育1 h)。

4.2 洗杂

将离心管置于磁分离器,待溶液变澄清后,用移液器移出上清液,保留上清液,以备取样检测。向离心管中加入2倍悬浮液体积的Wash Buffer使用枪头反复吹打5-10次,将离心管置于磁分离器上,待溶液变澄清后,用移液器吸取上清液,保留,以备取样检测。重复上述步骤2次。

4.3 洗脱

建议将3-5倍磁珠体积的Elution Buffer加入到离心管中,使用移液器轻轻吹打3-5次,混匀,将离心管置于磁分离器上,待溶液变澄清后,用移液器吸取上清液,即为目的蛋白。如有需要可以重复上述步骤1次,以提高目的蛋白的回收量。用户也可根据实验结果调整缓冲液中的咪唑浓度

 

五、磁珠保存

1. 向装有磁珠的离心管中加入1 mL Elution Buffer用移液器反复吹打3-5次,使磁珠充分悬浮然后置于磁分离器,吸弃上清,重复该操作2次。

2. 向离心管中加入1 mL去离子水,用移液器反复吹打3-5次,使磁珠充分悬浮,然后置于磁分离器,吸弃上清,重复该操作2次。

3. 向离心管中加入含20%乙醇的1×PBS使总体积为磁珠初始悬浮液体积,保存于2-8

 

六、SDS-PAGE 检测

将纯化得到的样品(包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分)使用SDS-PAGE检测纯化效果

 

1. 可溶性His标签蛋白纯化所需缓冲液及配方

缓冲液名称

配方

配制1L溶液所需各种试剂量

Lysis Buffer

50 mM NaH2PO4

300 mM NaCl

10 mM imidazole

NaOHpH8.00.22 µm0.45 µm过滤除菌

NaH2PO4 ·2H2O    7.80 g

NaCl             17.54 g

Imidazole         0.68 g

 

Wash Buffer

50 mM NaH2PO4 

300 mM NaCl

20 mM imidazole

NaOHpH8.00.22 µm0.45 µm过滤除菌

NaH2PO4 ·2H2O    7.80 g

NaCl             17.54 g

Imidazole         1.36 g

 

Elution Buffer

50 mM NaH2PO4 

300 mM NaCl

250 mM imidazole

NaOHpH8.00.22 µm0.45 µm过滤除菌

NaH2PO4 ·2H2O    7.80 g

NaCl             17.54 g

Imidazole         17.0 g

 

以上缓冲液适用于多数His标签蛋白的纯化,客户根据实验结果调整缓冲液中的咪唑浓度。

 

2. 包涵体His标签蛋白纯化所需缓冲液及配方,pH洗脱方式

缓冲液名称

配方

配制1L溶液所需各种试剂量

Lysis Buffer

8 M Urea

100 mM NaH2PO4 

100 mM Tris·HCl

盐酸溶液调pH8.00.22 µm0.45 µm过滤除菌

Urea             480.50 g

NaH2PO4 ·H2O     13.80 g

Tris·Cl            12.10 g

 

Wash Buffer

8 M Urea

100 mM NaH2PO4 

100 mM Tris·HCl

盐酸溶液调pH6.30.22 µm0.45 µm过滤除菌

Urea             480.50 g

NaH2PO4 ·H2O     13.80 g

Tris·Cl            12.10 g

Elution Buffer

8 M Urea

100 mM NaH2PO4 

100 mM Tris·HCl

盐酸溶液调pH4.50.22 µm0.45 µm过滤除菌

Urea             480.50 g

NaH2PO4 ·H2O     13.80 g

Tris·Cl            12.10 g

 

 

3. 包涵体His标签蛋白纯化所需缓冲液及配方,咪唑洗脱方式

缓冲液名称

配方

配制1L溶液所需各种试剂量

 

 

Lysis Buffer

8 M Urea

50 mM NaH2PO4 

300 mM NaCl

10 mM imidazole

NaOHpH8.00.22 µm0.45 µm过滤除菌

Urea             480.50 g

NaH2PO4 ·2H2O    7.80 g

NaCl             17.54 g

Imidazole         0.68 g

 

 

Wash Buffer

8 M Urea

50 mM NaH2PO4 

300 mM NaCl

20 mM imidazole

NaOHpH8.00.22 µm0.45 µm过滤除菌

Urea             480.50 g

NaH2PO4 ·2H2O    7.80 g

NaCl             17.54 g

Imidazole         1.36 g

 

 

 

Elution Buffer

8 M Urea

50 mM NaH2PO4 

300 mM NaCl

250 mM imidazole

NaOHpH8.00.22 µm0.45 µm过滤除菌

Urea             480.50 g

NaH2PO4 ·2H2O    7.80 g

NaCl             17.54 g

Imidazole         17.0 g

 

4. Ni NTA Magarose Beads试剂耐受情况

试剂种类

浓度

还原剂

5 mM DTE

1 mM DTT

20 mM β-mercaptoethanol

5 mM TCEP

10 mM reduced glutathione

变性剂

8 M urea

6 M Gua-HCl

去污剂

2% TritonTM X-100, nonionic

2% TweenTM20, nonionic

2% NP-40, nonionic

2% Cholate, anionic

1% CHAPS, zwitterionic

其他类

500 mM imidazole

20% ethanol

50% glycerol

100 mM Na2SO4

1.5 M NaCl

1 mM EDTA

60 mM citrate

 

HB220315

 

Q:目标蛋白回收率低怎么办?

A:1)延长粗蛋白与磁珠的孵育时间;​

  2)适当降低样品溶液和Binding/Wash Buffer中的Imidazole浓度;

  3)添加合适的蛋白酶抑制剂,防止目标蛋白降解;

  4)增加磁珠用量;

  5)延长洗脱目标蛋白的时间或增加洗脱次数;

  6)在样品溶液和其它缓冲液中添加表面活性剂等物质。

Q:如何提高目标蛋白纯度?

A:1)适当提高样品溶液和Binding/Wash Buffer中的Imidazole和NaCl浓度;

  2)在纯化过程中添加合适的蛋白酶抑制剂,防止目标蛋白降解;

  3)在样品溶液和缓冲液中加入表面活性剂等物质;

  4)延长清洗的时间,增加清洗次数;

  5)采用梯度Imidazole浓度洗脱目标蛋白。

Q:是否有测试结果

A:有,见下图

His标签蛋白纯化磁珠 HisSep Ni-NTA MagBeads

[1] Xu G, Han S, Huo C, et al. Signaling specificity in the c-di-GMP-dependent network regulating antibiotic synthesis in Lysobacter. Nucleic Acids Res. 2018;46(18):9276-9288. doi:10.1093/nar/gky803(IF:11.561)

NHS活化磁珠(NHS-Activated MagBeads) nhs磁珠

NHS活化磁珠(NHS-Activated MagBeads) nhs磁珠

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

NHS-Activated MagBeads 是一种预活化的聚合物磁性微球,表面为NHS 基团修饰,能够与含氨基的蛋白或多肽的偶联,其主要用于亲和纯化或者分析检测抗体、抗原和其他生物分子。为任何所需蛋白质偶联到磁珠表面提供了一种便利的方式。与传统的羧基、氨基磁珠相比,表面含NHS基团的磁珠无需事先采EDC/NHS或戊二醛进行活化,只需简单地将含氨基的生物配体溶解于偶联缓冲液中,将蛋白溶液与磁珠孵育2-4h便可将生物配体,通过 NHS-酯化学共价偶联到磁珠上。这一过程不需要危险化学品或冗长的反应方案,具有操作简单、偶联条件温和、生物配体偶联快速高效的优点。

活化的磁珠含有能与伯胺反应以形成稳定的酰胺键的 N-羟基琥珀酰亚胺 (NHS) 功能基团。一旦它们共价连接,固定的蛋白不会从磁珠表面浸出。在实验中使用制备的磁珠时,非特异性结合可忽略不计,因为在偶联程序中,非反应 NHS-酯基团被彻底封闭。NHS 活化磁珠可通过手动磁力架进行偶联和处理。偶联后,制备的磁珠通常用于亲和纯化程序。

该磁珠适用于含氨基的蛋白、抗体、酶、多肽、核酸等生物分子的共价偶联。偶联后,制备的磁珠可应用于免疫检测、免疫沉淀、免疫共沉淀、蛋白/抗体分离纯化等实验。该产品生物配基偶联效率高,可高效简单偶联且共价偶联稳定,可避免抗体与目标蛋白的共洗脱,其实际使用效果可替代DynaBeads Antibody Coupling kit

 

产品性质

基质

聚合物磁性微球

偶联量

>10 μg IgG/mg 介质

磁珠浓度

10 mg/mL

微球粒径

1 μm

储存缓冲液

100%异丙醇

 

运输保存方法

冰袋运输。-20储存,有效期2年。

 

注意事项

1.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

2.本产品仅作科研用途!

 

使用方法

一、缓冲液配制

所用水和缓冲液在使用之前建议用0.22 μm0.45 μm滤膜过滤。

清洗液:1 mM HCI

偶联液:0.2 M NaHCO3, 0.5 M NaCI, pH8.0

封闭液:0.5 M 乙醇胺,0.5 M NaCI, pH8.3 0.1 M Tris, pH8.5

清洗液10.1 M乙酸乙酸钠,0.5 M NaCI, pH3.0

清洗液 20.1 M Tris-HCI, 0.5 M NaCI, pH8.0

保护液: PBS , 0.01% Tween-20,0.02% NaN3

偶联液可以选择碳酸盐、磷酸盐等不含氨基的缓冲液体系。缓冲液体系中加入一定浓度的盐离子减少非特异性吸附。

 

二、样本制备

样品用偶联液溶解,浓度约5-10 mg/ml

 

三、抗原偶联

1 .取适量磁珠,吸去保护液,用1 mM HCI清洗液清洗一次,再用偶联液清洗一次。磁珠加入清洗液混匀后立刻放在磁力架上吸附,吸弃上清。可以选用预冷的溶液快速清洗,减少预活化介质的水解。

2. 溶解好的样品加入至清洗好的磁珠中,磁珠:样品溶液体积比约1:1-2

3. 28°C振荡反应2-4 h4°C过夜。确保磁珠悬浮起来,否则会大大影响偶联效率。

4. 反应完后收集偶联样品,以便检测偶联效率。去离子水清洗磁珠,加入2磁珠体积的封闭液,28°C振荡反应1 h

偶联后无法用紫外吸收测定上清蛋白浓度,建议用电泳或者BCA定量法检测偶联效率。

5. 将上述反应体系取出,流干其中的封闭液,用3磁珠体积的去离子水清洗磁珠,清洗液1、去离子水、清洗液2和去离子水重复冲洗2 次,然后以10 mg/ml的浓度保存在保护液中,于2-8°C保存。

 

四、纯化流程

以磁珠偶联抗体纯化抗原为例纯化步骤。

4.1缓冲液的准备

【注】所用水和缓冲液在使用之前建议用0.22 μm0.45 μm滤膜过滤。

平衡/洗杂液:0.15 M NaCI, 20 mM Na2HPO4, pH 7.0

洗脱液:0.1 M甘氨酸,pH 3.0

中和液1 M Tris-HCI, pH 8.5

4.2磁珠预处理  将偶联好的磁珠混合均匀,取计算量(根据上样量和磁珠载量计算)的磁珠悬浮液(后文均以100 μL为例),转移至离心管中,放置在磁分离器上,静置大约1 min待溶液变澄清后,用移液器吸弃上清液。再将离心管从磁分离器上取下来,加入与所取磁珠悬浮液等体积(100 μL)的平衡液,使用枪头反复吹打5次,将离心管置于磁分离器上,大约1min待溶液变澄清后,用移液器吸弃上清液,重复洗涤2次。

4.3样品吸附  在预处理的磁珠中加入样品溶液,漩涡振荡均匀,在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管,使样品和磁珠充分接触并吸附,混合30 min以上,置于磁分离器上,大约1min待溶液变澄清后,吸弃上清液。

4.4洗杂  向离心管中加入初始磁珠悬浮液5倍体积(500 μL的洗杂液,振荡悬浮,混合1-2 min然后置于磁分离器上,大约1 min待溶液变澄清后,吸弃上清液。该操作重复两次。

4.5洗脱  在上述离心管中加入3-5倍悬浮液体积300-500 μL的洗脱液,用移液器吹打5次,然后在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管5-10 min后,置于磁分离器上,大约1 min待溶液变澄清后,吸取上清液,收集洗脱组分,即为目标蛋白。

4.6洗脱组分中和  向洗脱组分中加入洗脱体积十分之一的中和液,调节pH值至7.0-8.0

4.7磁珠保存  使用后的磁珠用1 mL洗脱液重悬磁珠,然后置于磁分离器上,大约1 min待溶液变澄清后,吸弃上清液。该操作重复两次。再加入1 mL 平衡液,悬浮磁珠,然后置于磁分离器上,大约1min,待溶液变澄清后,吸弃上清液。加入保护液至磁珠浓度为10 mg/mL, 置于28保存。

 

HB220324

 

Q:这种NHS聚合物的磁珠和NHS琼脂糖的磁珠的区别?

A:两者都是表面为NHS基团修饰的磁珠,能够与氨基的蛋白和其他分子形成稳定的肽键,用于亲和纯化或者分析检测抗体、抗原和其他生物分子。聚合物的磁珠一般粒径较小,为1-2μm,主要用于分析检测领域(如体外诊断、微生物检测、免疫沉淀、免疫共沉淀等);而NHS琼脂糖磁珠是以天然的亲水性高分子琼脂糖为基材的多孔微球,粒径为30~100μm,主要用于分离纯化领域(如蛋白分离纯化、抗体分离纯化)。

Q:磁性微球可以反复使用吗?

A:偶联配体后可以反复使用。但不能更换配体。

Q:为什么储存温度是-20℃,偶联配体后保存温度又是2-8℃?

A:未使用的产品保护液是异丙醇,可以在-20℃中保存不结冰,偶联蛋白后为考虑蛋白稳定性且反复冻融影响填料性能,选择2-8℃保存。

Q:样品浓度达不到5mg/ml一般卖的抗体是1mg/ml可以吗?0.2mg/ml的抗体也可以偶联吗

A:1mg/ml的浓度也是可以偶联的0.2mg/ml浓度有点低,看下是否能超滤浓缩低浓度样品的偶联效率无法作保证推荐用于偶联的抗体浓度>1mg/ml。

Q:NHS预活化磁珠的这个清洗液1PH能改吗,一定要PH为3吗

A:也可以用0.1M 甘氨酸,ph3.0作为清洗液。一般选择这个条件是模拟抗体纯化洗脱液的条件,先进行几次清洗 将结合力弱的蛋白去除,避免后续使用过程中的配体脱落。

Q:在文库的接头上偶连氨基后,是否能和NHS磁珠进行共价结合呢?有偶联方法吗

A:这个理论上是可行的,关于这方面的应用我们暂时没有数据积累。这个与说明书中蛋白偶联步骤基本一致。样品需在不含伯氨基的离子缓冲液中,磁珠按照说明书中清洗步骤先用稀盐酸清洗然后用偶联液清洗,清洗结束后立即与样品混合接触,28℃偶联4h左右。样品浓度要求以及单位体积磁珠偶联的量,暂无数据。

Q:客户做的是蛋白质组学,蛋白溶液里会含有DNA,RNA,会干扰蛋白吸附吗?含核酸样品的偶联中 如何消除核酸样品的干扰

A:不能这样操作的,DNA,RNA会有干扰一般我们只用于纯品的偶联如果是在NHS磁珠上先固定这蛋白对应的抗体,然后通过抗体结合蛋白, 可以去除多余的核酸。

Q:清洗液10.1 M乙酸乙酸钠,0.5 M NaCI, pH3.0清洗液 20.1 M Tris-HCI, 0.5 M NaCI, pH8.0,这两个清洗液只使用一个可以吗

A:不可以,这个是模拟纯化条件的平衡和洗脱

Q:1mM Hcl或者欧联液清洗的目的?活化磁珠?2,如果加入PEG和nacl,磁珠是还有可能和蛋白偶联?

A:稀盐酸是清洗去除磁珠保护液。PEG和氯化钠理论不影响NHS偶联。

NHS活化磁珠(NHS-Activated MagBeads) nhs磁珠

暂无内容

NHS-Activated MagBeads 是一种预活化的聚合物磁性微球,表面为NHS 基团修饰,能够与含氨基的蛋白或多肽的偶联,其主要用于亲和纯化或者分析检测抗体、抗原和其他生物分子。为任何所需蛋白质偶联到磁珠表面提供了一种便利的方式。与传统的羧基、氨基磁珠相比,表面含NHS基团的磁珠无需事先采EDC/NHS或戊二醛进行活化,只需简单地将含氨基的生物配体溶解于偶联缓冲液中,将蛋白溶液与磁珠孵育2-4h便可将生物配体,通过 NHS-酯化学共价偶联到磁珠上。这一过程不需要危险化学品或冗长的反应方案,具有操作简单、偶联条件温和、生物配体偶联快速高效的优点。

活化的磁珠含有能与伯胺反应以形成稳定的酰胺键的 N-羟基琥珀酰亚胺 (NHS) 功能基团。一旦它们共价连接,固定的蛋白不会从磁珠表面浸出。在实验中使用制备的磁珠时,非特异性结合可忽略不计,因为在偶联程序中,非反应 NHS-酯基团被彻底封闭。NHS 活化磁珠可通过手动磁力架进行偶联和处理。偶联后,制备的磁珠通常用于亲和纯化程序。

该磁珠适用于含氨基的蛋白、抗体、酶、多肽、核酸等生物分子的共价偶联。偶联后,制备的磁珠可应用于免疫检测、免疫沉淀、免疫共沉淀、蛋白/抗体分离纯化等实验。该产品生物配基偶联效率高,可高效简单偶联且共价偶联稳定,可避免抗体与目标蛋白的共洗脱,其实际使用效果可替代DynaBeads Antibody Coupling kit

 

产品性质

基质

聚合物磁性微球

偶联量

>10 μg IgG/mg 介质

磁珠浓度

10 mg/mL

微球粒径

1 μm

储存缓冲液

100%异丙醇

 

运输保存方法

冰袋运输。-20储存,有效期2年。

 

注意事项

1.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

2.本产品仅作科研用途!

 

使用方法

一、缓冲液配制

所用水和缓冲液在使用之前建议用0.22 μm0.45 μm滤膜过滤。

清洗液:1 mM HCI

偶联液:0.2 M NaHCO3, 0.5 M NaCI, pH8.0

封闭液:0.5 M 乙醇胺,0.5 M NaCI, pH8.3 0.1 M Tris, pH8.5

清洗液10.1 M乙酸乙酸钠,0.5 M NaCI, pH3.0

清洗液 20.1 M Tris-HCI, 0.5 M NaCI, pH8.0

保护液: PBS , 0.01% Tween-20,0.02% NaN3

偶联液可以选择碳酸盐、磷酸盐等不含氨基的缓冲液体系。缓冲液体系中加入一定浓度的盐离子减少非特异性吸附。

 

二、样本制备

样品用偶联液溶解,浓度约5-10 mg/ml

 

三、抗原偶联

1 .取适量磁珠,吸去保护液,用1 mM HCI清洗液清洗一次,再用偶联液清洗一次。磁珠加入清洗液混匀后立刻放在磁力架上吸附,吸弃上清。可以选用预冷的溶液快速清洗,减少预活化介质的水解。

2. 溶解好的样品加入至清洗好的磁珠中,磁珠:样品溶液体积比约1:1-2

3. 28°C振荡反应2-4 h4°C过夜。确保磁珠悬浮起来,否则会大大影响偶联效率。

4. 反应完后收集偶联样品,以便检测偶联效率。去离子水清洗磁珠,加入2磁珠体积的封闭液,28°C振荡反应1 h

偶联后无法用紫外吸收测定上清蛋白浓度,建议用电泳或者BCA定量法检测偶联效率。

5. 将上述反应体系取出,流干其中的封闭液,用3磁珠体积的去离子水清洗磁珠,清洗液1、去离子水、清洗液2和去离子水重复冲洗2 次,然后以10 mg/ml的浓度保存在保护液中,于2-8°C保存。

 

四、纯化流程

以磁珠偶联抗体纯化抗原为例纯化步骤。

4.1缓冲液的准备

【注】所用水和缓冲液在使用之前建议用0.22 μm0.45 μm滤膜过滤。

平衡/洗杂液:0.15 M NaCI, 20 mM Na2HPO4, pH 7.0

洗脱液:0.1 M甘氨酸,pH 3.0

中和液1 M Tris-HCI, pH 8.5

4.2磁珠预处理  将偶联好的磁珠混合均匀,取计算量(根据上样量和磁珠载量计算)的磁珠悬浮液(后文均以100 μL为例),转移至离心管中,放置在磁分离器上,静置大约1 min待溶液变澄清后,用移液器吸弃上清液。再将离心管从磁分离器上取下来,加入与所取磁珠悬浮液等体积(100 μL)的平衡液,使用枪头反复吹打5次,将离心管置于磁分离器上,大约1min待溶液变澄清后,用移液器吸弃上清液,重复洗涤2次。

4.3样品吸附  在预处理的磁珠中加入样品溶液,漩涡振荡均匀,在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管,使样品和磁珠充分接触并吸附,混合30 min以上,置于磁分离器上,大约1min待溶液变澄清后,吸弃上清液。

4.4洗杂  向离心管中加入初始磁珠悬浮液5倍体积(500 μL的洗杂液,振荡悬浮,混合1-2 min然后置于磁分离器上,大约1 min待溶液变澄清后,吸弃上清液。该操作重复两次。

4.5洗脱  在上述离心管中加入3-5倍悬浮液体积300-500 μL的洗脱液,用移液器吹打5次,然后在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管5-10 min后,置于磁分离器上,大约1 min待溶液变澄清后,吸取上清液,收集洗脱组分,即为目标蛋白。

4.6洗脱组分中和  向洗脱组分中加入洗脱体积十分之一的中和液,调节pH值至7.0-8.0

4.7磁珠保存  使用后的磁珠用1 mL洗脱液重悬磁珠,然后置于磁分离器上,大约1 min待溶液变澄清后,吸弃上清液。该操作重复两次。再加入1 mL 平衡液,悬浮磁珠,然后置于磁分离器上,大约1min,待溶液变澄清后,吸弃上清液。加入保护液至磁珠浓度为10 mg/mL, 置于28保存。

 

HB220324

 

Q:这种NHS聚合物的磁珠和NHS琼脂糖的磁珠的区别?

A:两者都是表面为NHS基团修饰的磁珠,能够与氨基的蛋白和其他分子形成稳定的肽键,用于亲和纯化或者分析检测抗体、抗原和其他生物分子。聚合物的磁珠一般粒径较小,为1-2μm,主要用于分析检测领域(如体外诊断、微生物检测、免疫沉淀、免疫共沉淀等);而NHS琼脂糖磁珠是以天然的亲水性高分子琼脂糖为基材的多孔微球,粒径为30~100μm,主要用于分离纯化领域(如蛋白分离纯化、抗体分离纯化)。

Q:磁性微球可以反复使用吗?

A:偶联配体后可以反复使用。但不能更换配体。

Q:为什么储存温度是-20℃,偶联配体后保存温度又是2-8℃?

A:未使用的产品保护液是异丙醇,可以在-20℃中保存不结冰,偶联蛋白后为考虑蛋白稳定性且反复冻融影响填料性能,选择2-8℃保存。

Q:样品浓度达不到5mg/ml一般卖的抗体是1mg/ml可以吗?0.2mg/ml的抗体也可以偶联吗

A:1mg/ml的浓度也是可以偶联的0.2mg/ml浓度有点低,看下是否能超滤浓缩低浓度样品的偶联效率无法作保证推荐用于偶联的抗体浓度>1mg/ml。

Q:NHS预活化磁珠的这个清洗液1PH能改吗,一定要PH为3吗

A:也可以用0.1M 甘氨酸,ph3.0作为清洗液。一般选择这个条件是模拟抗体纯化洗脱液的条件,先进行几次清洗 将结合力弱的蛋白去除,避免后续使用过程中的配体脱落。

Q:在文库的接头上偶连氨基后,是否能和NHS磁珠进行共价结合呢?有偶联方法吗

A:这个理论上是可行的,关于这方面的应用我们暂时没有数据积累。这个与说明书中蛋白偶联步骤基本一致。样品需在不含伯氨基的离子缓冲液中,磁珠按照说明书中清洗步骤先用稀盐酸清洗然后用偶联液清洗,清洗结束后立即与样品混合接触,28℃偶联4h左右。样品浓度要求以及单位体积磁珠偶联的量,暂无数据。

Q:客户做的是蛋白质组学,蛋白溶液里会含有DNA,RNA,会干扰蛋白吸附吗?含核酸样品的偶联中 如何消除核酸样品的干扰

A:不能这样操作的,DNA,RNA会有干扰一般我们只用于纯品的偶联如果是在NHS磁珠上先固定这蛋白对应的抗体,然后通过抗体结合蛋白, 可以去除多余的核酸。

Q:清洗液10.1 M乙酸乙酸钠,0.5 M NaCI, pH3.0清洗液 20.1 M Tris-HCI, 0.5 M NaCI, pH8.0,这两个清洗液只使用一个可以吗

A:不可以,这个是模拟纯化条件的平衡和洗脱

Q:1mM Hcl或者欧联液清洗的目的?活化磁珠?2,如果加入PEG和nacl,磁珠是还有可能和蛋白偶联?

A:稀盐酸是清洗去除磁珠保护液。PEG和氯化钠理论不影响NHS偶联。

NHS活化磁珠(NHS-Activated MagBeads) nhs磁珠

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链霉亲和素(SAV)免疫磁珠 Streptavidin(SAV) MagBeads 生物素结合蛋白质

链霉亲和素(SAV)免疫磁珠 Streptavidin(SAV) MagBeads 生物素结合蛋白质

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品简介

 

链霉亲和素(streptavidin)是一种来源于阿维丁链霉菌由四个相同亚基组成的生物素结合蛋白质,每个亚基均有一个与生物素有高亲和力的结合位点。生物学上常将链霉亲和素包被在磁珠上,借助链霉亲和素-生物素高亲和力结合特性,结合生物素化蛋白、多肽、及非蛋白质(如各种DNA、RNA分子)等分子,进而从混合体系中快速分离生物素化成分,进行如亲和纯化,细胞分离,DNA探针分析和mRNA分离等多方面应用。

翌圣streptavidin(SAV)MagBeads是将链霉亲和素(streptavidin)通过化学方法固定在聚合物磁性微球上,应用生物素与链霉亲和素之间的相互作用来实现固定化生物素或生物化的蛋白、抗体等物质的目的。

 

产品信息

 

货号

47503JP03 / 47503JP08

规格

1 mL /5×1 mL

 

产品性质

 

基质(Matrix  spherical

聚合物磁性微球

配体(Ligand)

链霉亲和素

结合能力(Binding Capacity

20 µg biotinylated IgG /mg磁珠

径(Particle size)

1 µm

磁珠浓度Concentration

10 mg/mL

储存缓冲液(Storage Buffer)

PBS, 0.01% Tween-20, 0.02% NaN3

 

储存条件

 

2~8℃保存,有效期2年。

 

使用说明

 

一、磁珠准备

  1. Streptavidin (SAV) MagBeads颠倒或漩涡混合均匀。
  2. 100 μL Streptavidin (SAV) MagBeads加入新的离心管中。放置在磁分离器上,待溶液变澄清后,用移液器吸弃保护液。
  3. 将离心管从磁分离器上取下来,加入500 μL清洗缓冲液,混匀,放置在磁分离器上,收集磁珠,用移液器吸弃保护液。重复洗2次。

推荐清洗缓冲液:

核酸样品:TJP缓冲液  抗体/蛋白样品:PBS缓冲液, pH7.4

二、生物素化分子固定

  1. 需要准备的试剂

生物素化样品平衡/洗杂液:

核酸样品:TJP缓冲液  抗体/蛋白样品:PBS缓冲液, pH7.4

 

    2.操作流程

a.  加入100 μL平衡液(2.1)将磁珠悬浮。

b.  加入适量生物素化样品溶液,充分混匀。

c.  室温孵育1h以上(具体时间根据结合效果调整),可以振荡或漩涡混合均匀。

d.  将离心管置于磁分离器上,待磁珠全部吸附后,吸弃上清液。如有需要可留做进一步检测。

e.  加入1 mL洗杂液2.1混合均匀,置于磁分离器上,待磁珠全部吸附后,吸弃上清液。重复洗杂至少3次。

f.  用下游实验用的溶液,将固定好生物素化分子的磁珠重新悬浮至合适浓度,以备后续使用。下面以固定抗体后纯化抗原为例

三、抗原的纯化

  1. 试剂准备

生物素化抗体

平衡液/洗杂液:PBS缓冲液, pH7.4

洗脱液:0.1 M Glycine-HCl, pH 2.5-2.8

中和液:1M Tris-HCl, pH 8.5

  1. 纯化流程
  1. 100 μL的磁珠(步骤2中已经固定好生物素抗体的磁珠)加入离心管,置于磁分离器上,待磁珠全部吸附后,吸弃上清液。
  2. 加入1mL平衡液(3.1)混合均匀,置于磁分离器上,待磁珠全部吸附后,吸弃上清液。重复洗杂至少3次。
  3. 向上一步准备好的磁珠中,加入抗原样品轻轻的混合均匀,体积不足200 μL用抗原溶液补足。室温孵育30 min以上或者4℃过夜,确保磁珠充分悬浮以免影响吸附效果。
  4. 加入1mL洗杂液(3.1)混合均匀,置于磁分离器上,待磁珠全部吸附后,吸弃上清液。重复洗杂至少3次。
  5. 加入300-500 μL洗脱液(3.1)混合均匀,室温孵育5 min。
  6. 将离心管置于磁分离器上,待磁珠全部吸附后,吸取含抗原样品的上清液。如有需要可留做进一步检测。
  7. 加入洗脱体积十分之一的中和液中和。100 μL洗脱液中加入10 μL中和液中和。
  8. 如有需要可重复步骤eg两次,增加洗脱效率。

 

注意事项

 

  1. 免疫磁珠易沉降聚集,因此产品使用前要剧烈振荡或超声处理。
  2. 本产品仅作科研用途
  3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

 

Ver.CN20231108

 

链霉亲和素(SAV)免疫磁珠 Streptavidin(SAV) MagBeads 生物素结合蛋白质

暂无内容

[1] Sun J, Shi Y, Shi H, et al. Intracellular Low Iron Exerts Anti-BK Polyomavirus Effect by Inhibiting the Protein Synthesis of Exogenous Genes. Microbiol Spectr. 2021;9(3):e0109421. doi:10.1128/Spectrum.01094-21(IF:7.171)
[2] Liu Y, Fan J, Yan Y, et al. JMY expression by Sertoli cells contributes to mediating spermatogenesis in mice. FEBS J. 2020;287(24):5478-5497. doi:10.1111/febs.15328(IF:4.392)
[3] Li J, Yang Q, Zhang Y, Huang K, Sun R, Zhao Q. Compound F779-0434 causes synthetic lethality in BRCA2-deficient cancer cells by disrupting RAD52-ssDNA association. RSC Adv. 2018;8(34):18859-18869. Published 2018 May 23. doi:10.1039/c8ra01919c(IF:2.936)

产品简介

 

链霉亲和素(streptavidin)是一种来源于阿维丁链霉菌由四个相同亚基组成的生物素结合蛋白质,每个亚基均有一个与生物素有高亲和力的结合位点。生物学上常将链霉亲和素包被在磁珠上,借助链霉亲和素-生物素高亲和力结合特性,结合生物素化蛋白、多肽、及非蛋白质(如各种DNA、RNA分子)等分子,进而从混合体系中快速分离生物素化成分,进行如亲和纯化,细胞分离,DNA探针分析和mRNA分离等多方面应用。

翌圣streptavidin(SAV)MagBeads是将链霉亲和素(streptavidin)通过化学方法固定在聚合物磁性微球上,应用生物素与链霉亲和素之间的相互作用来实现固定化生物素或生物化的蛋白、抗体等物质的目的。

 

产品信息

 

货号

47503JP03 / 47503JP08

规格

1 mL /5×1 mL

 

产品性质

 

基质(Matrix  spherical

聚合物磁性微球

配体(Ligand)

链霉亲和素

结合能力(Binding Capacity

20 µg biotinylated IgG /mg磁珠

径(Particle size)

1 µm

磁珠浓度Concentration

10 mg/mL

储存缓冲液(Storage Buffer)

PBS, 0.01% Tween-20, 0.02% NaN3

 

储存条件

 

2~8℃保存,有效期2年。

 

使用说明

 

一、磁珠准备

  1. Streptavidin (SAV) MagBeads颠倒或漩涡混合均匀。
  2. 100 μL Streptavidin (SAV) MagBeads加入新的离心管中。放置在磁分离器上,待溶液变澄清后,用移液器吸弃保护液。
  3. 将离心管从磁分离器上取下来,加入500 μL清洗缓冲液,混匀,放置在磁分离器上,收集磁珠,用移液器吸弃保护液。重复洗2次。

推荐清洗缓冲液:

核酸样品:TJP缓冲液  抗体/蛋白样品:PBS缓冲液, pH7.4

二、生物素化分子固定

  1. 需要准备的试剂

生物素化样品平衡/洗杂液:

核酸样品:TJP缓冲液  抗体/蛋白样品:PBS缓冲液, pH7.4

 

    2.操作流程

a.  加入100 μL平衡液(2.1)将磁珠悬浮。

b.  加入适量生物素化样品溶液,充分混匀。

c.  室温孵育1h以上(具体时间根据结合效果调整),可以振荡或漩涡混合均匀。

d.  将离心管置于磁分离器上,待磁珠全部吸附后,吸弃上清液。如有需要可留做进一步检测。

e.  加入1 mL洗杂液2.1混合均匀,置于磁分离器上,待磁珠全部吸附后,吸弃上清液。重复洗杂至少3次。

f.  用下游实验用的溶液,将固定好生物素化分子的磁珠重新悬浮至合适浓度,以备后续使用。下面以固定抗体后纯化抗原为例

三、抗原的纯化

  1. 试剂准备

生物素化抗体

平衡液/洗杂液:PBS缓冲液, pH7.4

洗脱液:0.1 M Glycine-HCl, pH 2.5-2.8

中和液:1M Tris-HCl, pH 8.5

  1. 纯化流程
  1. 100 μL的磁珠(步骤2中已经固定好生物素抗体的磁珠)加入离心管,置于磁分离器上,待磁珠全部吸附后,吸弃上清液。
  2. 加入1mL平衡液(3.1)混合均匀,置于磁分离器上,待磁珠全部吸附后,吸弃上清液。重复洗杂至少3次。
  3. 向上一步准备好的磁珠中,加入抗原样品轻轻的混合均匀,体积不足200 μL用抗原溶液补足。室温孵育30 min以上或者4℃过夜,确保磁珠充分悬浮以免影响吸附效果。
  4. 加入1mL洗杂液(3.1)混合均匀,置于磁分离器上,待磁珠全部吸附后,吸弃上清液。重复洗杂至少3次。
  5. 加入300-500 μL洗脱液(3.1)混合均匀,室温孵育5 min。
  6. 将离心管置于磁分离器上,待磁珠全部吸附后,吸取含抗原样品的上清液。如有需要可留做进一步检测。
  7. 加入洗脱体积十分之一的中和液中和。100 μL洗脱液中加入10 μL中和液中和。
  8. 如有需要可重复步骤eg两次,增加洗脱效率。

 

注意事项

 

  1. 免疫磁珠易沉降聚集,因此产品使用前要剧烈振荡或超声处理。
  2. 本产品仅作科研用途
  3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

 

Ver.CN20231108

 

链霉亲和素(SAV)免疫磁珠 Streptavidin(SAV) MagBeads 生物素结合蛋白质

暂无内容

[1] Sun J, Shi Y, Shi H, et al. Intracellular Low Iron Exerts Anti-BK Polyomavirus Effect by Inhibiting the Protein Synthesis of Exogenous Genes. Microbiol Spectr. 2021;9(3):e0109421. doi:10.1128/Spectrum.01094-21(IF:7.171)
[2] Liu Y, Fan J, Yan Y, et al. JMY expression by Sertoli cells contributes to mediating spermatogenesis in mice. FEBS J. 2020;287(24):5478-5497. doi:10.1111/febs.15328(IF:4.392)
[3] Li J, Yang Q, Zhang Y, Huang K, Sun R, Zhao Q. Compound F779-0434 causes synthetic lethality in BRCA2-deficient cancer cells by disrupting RAD52-ssDNA association. RSC Adv. 2018;8(34):18859-18869. Published 2018 May 23. doi:10.1039/c8ra01919c(IF:2.936)

蛋白A/G免疫磁珠 重组蛋白A/G|Protein A/G MagBeads(IP Grade)

蛋白A/G免疫磁珠 重组蛋白A/G|Protein A/G MagBeads(IP Grade)

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品简介

 

rProtein A/G免疫沉淀磁珠使用“纳米表面生物技术”(S-TEC),将rProtein A/G高密度定向包被到粒径为200 nm的纳米磁珠表面,纳米级磁珠提供的超大比表面积,具有更多的结合位点、更高的抗体结合能力和极低的蛋白非特异性吸附率,一步纯化即可从血清样品中分离出纯度>90%的抗体,使用简便有效。

天然蛋白A(Protein A)是一种发现于金黄色葡萄球菌的细胞壁表面蛋白,天然蛋白G(Protein G)是一种分离自G型或C型链球菌属的细胞表面蛋白,二者功能相似,主要通过与免疫球蛋白(Ig)的Fc区相互作用,可结合大多数哺乳动物的IgG,但在两者结合特异性上有所不同。rProtein A/G免疫磁珠同时共价偶联了蛋白A和蛋白G,比单独的蛋白A或者蛋白G都有更广的结合范围,实用性更高。同时,本品使用的是基因改造后的蛋白A和蛋白G,不仅维持其本身的Ig亲和特性,同时也去除了天然蛋白本身的非主要结合域以降低非特异性结合。本品适用的范围广泛,可应用于细胞裂解液、细胞分泌液上清、血清、动物腹水以及其它的免疫抗原等样本。

 

产品信息

 

货号

36417JP03 / 36417JP08

规格

1 mL /5 mL

 

产品性质

 

基质(Matrix  spherical

硅基磁珠

配体(Ligand)

重组蛋白A/G

结合能力(Binding Capacity

≥0.7 mhIgG /mg磁珠

径(Particle size)

200 nm

磁珠浓度Concentration

10 mg/mL

应用Application

IP、COIP、CHIP、RIP等

 

储存条件

 

2~8℃保存,有效期2年。

 

使用说明

 

工作液浓度应根据具体实验确定,建议进行预实验摸索最佳实验浓度。

  1. 缓冲液配制

【注】建议以下缓冲液在使用前用 0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜过滤。

裂解缓冲液:0.15 M NaCl, 50 mM Tris-HCl, 1% NP-40, pH7.4WB/IP裂解液(Cat#20118JP)

平衡/结合/洗杂缓冲液:0.15 M NaCl, 20 mM Na2HPO4, pH7.0

交联缓冲液:0.2 M 三乙醇胺,pH8.2

中和缓冲液:1 M Tris-HCl,pH 8.5

洗脱缓冲液:0.1 M甘氨酸,pH 3.0

交联剂:DMP(Dimetyl pimelimidate dihydrochloride)

终止液:50 mM Tris-HClpH 7.5

  1. 抗原样品制备

本操作说明书提供以下四种样品处理方法,建议您根据不同来源的抗原样品选择适当的方式进行预处理,使待检测抗原释放至样品溶液中。

血清样品处理:若目标蛋白丰度较高, 建议用结合缓冲液稀释血清样品至目标蛋白终浓度为10-100 µg/mL,置于冰上备用(或置于-20℃长期保存)。

悬浮细胞样品处理:离心收集细胞(4℃, 1000g, 5 min),用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250 μL裂解液的比例加入含蛋白酶抑制剂的裂解液裂解液在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1 mM混匀后置于冰上处理10 min;离心收集上清液(4℃, 14000g, 10 min),置于冰上备用(或置于-20℃长期保存)。

贴壁细胞样品处理:移去培养基,用PBS清洗细胞遍;用细胞刮棒刮脱细胞,收集至1.5mL EP管内按照6孔板每孔加入150-250 μL裂解液的比例加入含蛋白酶抑制剂的裂解液裂解液在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1 mM用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。混匀后置于冰上处理10 min;离心收集上清液(4℃, 14000g, 10 min),置于冰上备用(或置于-20℃长期保存)。

大肠杆菌样品处理 离心收集大肠杆菌(4℃, 12000g, 2 min),弃上清后称重, 按每克(湿重)菌体10 mL的比例用1×PBS洗涤2次;按每克(湿重)菌体5-10 mL的比例加入结合缓冲液,同时加入蛋白酶抑制剂,重悬菌体,超声裂解细胞,离心收集上清(4℃, 17000g, 10 min)。

  1.  磁珠预处理
  1. 将磁珠漩涡振荡1 min,使其充分混悬;
  2. 50 µL磁珠悬液置于1.5 mL EP管中放置在磁分离器上,待溶液变澄清后,用移液器吸弃保护液。
  3. 加入200 µL结合缓冲液洗涤,进行磁性分离,吸弃上清,重复1次。

4.  抗体吸附

1)  加入目标抗体溶液5-25 µg抗体总量),充分混匀,体积不足500 µL时用平衡液补足。

2)  室温孵育 10 min,可以振荡或漩涡混合均匀。

3)  EP 管置于磁分离器上,待磁珠全部吸附后,吸弃上清液。如需要可留做进一步检测。

4)  加入500 μL 洗杂液混合均匀,置于磁分离器上,待磁珠全部吸附后,吸弃上清液。重复洗杂至少 3次。 

5.  抗体交联 (备选)

1)如果需要将抗体和目标抗原复合物共同洗脱,请忽略本步骤,直接进行操作6。 50μL-1mL 磁珠量均可以按照以下步骤操作,无需额外增加交联液体积。

2)加入 1 mL交联液,振荡悬浮,置于磁分离器上,大约1 min,待溶液变澄清后,吸弃上清液。该操作重复两次。

3)再加入1mL含有20 mM DMP(dimetylpimelimidate dihydrochloride)的交联液, 此试剂需要现用现配。振荡悬浮,在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管, 促使溶液和磁珠充分接触,约30 min后,置于磁分离器上,大约 1 min,待溶液变澄清后,吸弃上清液。

4)使用1 mL终止液悬浮磁珠,终止交联反应,在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管,促使溶液和磁珠充分接触,约15 min后,置于磁分离器上,大约 1 min,待溶液变澄清后,吸弃上清液。

5)加入1 mL平衡液,颠倒混匀,置于磁分离器上,大约 1 min,待溶液变澄清后,吸弃上清液。再重复两次。 

6.  抗原结合反应

1)  加入含有抗原的样品(通常100-1000 μL),用移液器轻轻吹打使抗原与磁珠-抗体复合物均匀分散。

2)  在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管 10 min,使抗原与抗体充分结合,如结合力较弱则可在室温下反应1h或者在4℃下反应过夜。

3)  上述完成抗原吸附的磁珠-抗体-抗原复合物进行磁性分离,收集上清液,以备后续检测。

4)  向离心管中加入1 mL洗杂液,用移液器轻轻吹打使磁珠-抗体-抗原复合物均匀分散,然后进行磁性分离,弃上清液;从磁分离器上取下离心管,再重复洗涤两次。

 7.抗原洗脱

A. 变性洗脱 此方法洗脱的样品适用于SDS-PAGE检测。

1) 从磁分离器上取下离心管,向其中加入25μL 1×SDS-PAGE Loading Buffer 混合均匀, 95℃加热 5min。

2) 置于磁性分离器上,进行磁性分离,收集上清液进行SDS-PAGE检测。

B. 非变性洗脱

1) 向磁珠-抗体-抗原复合物中加入300 μL洗脱液,混合均匀,室温孵育10 min。

2) 置于磁性分离器上,进行磁性分离,收集洗脱液至新的 EP 管中。

3) 重复步骤 1)和2),收集洗脱液,与2)中洗脱液混合,加入中和液中和至 pH7.0-8.0。

 

注意事项

 

1. 本产品仅作科研用途

2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

 

Ver.CN20231212

Q:该产品可主要用于哪些样品?

A:本品适用的范围广泛,可应用于细胞裂解液、细胞分泌液上清、血清、动物腹水以及其它的免疫抗原等样本。

Q:工作液应配置多少浓度?

A:工作液浓度应根据具体实验确定,建议进行预实验摸索最佳实验浓度。

Q:血清样品可以稀释吗?

A:可以。若目标蛋白丰度较高,建议用结合缓冲液稀释血清样品至目标蛋白终浓度为10-100µg/mL,置于冰上备用(或置于-20℃长期保存)。

Q:抗原变性洗脱的样品可以用于 SDS-PAGE 检测吗?

A:可以。

Q:说明书中COIP实验操作中取适量磁珠是要加多少量

A:一般磁珠的量是根据自己要做的样品的量决定。最小的常用COIP体系为:20ul磁珠混悬液+5ug抗体+总体积500ul 总蛋白浓度1mg/ml的裂解液混合孵育。

[1] Jiang Y, Guo H, Tong T, et al. lncRNA lnc-POP1-1 upregulated by VN1R5 promotes cisplatin resistance in head and neck squamous cell carcinoma through interaction with MCM5. Mol Ther. 2022;30(1):448-467. doi:10.1016/j.ymthe.2021.06.006(IF:11.454)
[2] Cen Y, Zou X, Zhong Q, et al. The TIAR-mediated Nrf2 response to oxidative stress is mediated through the Nrf2 noncoding 3'untranslated region in Spodoptera litura. Free Radic Biol Med. 2022;184:17-29. doi:10.1016/j.freeradbiomed.2022.03.016(IF:7.376)
[3] Zhenzhen L, Wenting L, Jianmin Z, et al. miR-146a-5p/TXNIP axis attenuates intestinal ischemia-reperfusion injury by inhibiting autophagy via the PRKAA/mTOR signaling pathway. Biochem Pharmacol. 2022;197:114839. doi:10.1016/j.bcp.2021.114839(IF:5.858)
[4] Meng J, Zhang C, Wang D, Zhu L, Wang L. Mitochondrial GCN5L1 regulates cytosolic redox state and hepatic gluconeogenesis via glycerol phosphate shuttle GPD2 [published online ahead of print, 2022 Jun 28]. Biochem Biophys Res Commun. 2022;621:1-7. doi:10.1016/j.bbrc.2022.06.092(IF:3.575)
[5] Chen P, Wang L, Long YB, et al. E2F4 regulates the cell cycle and DNA replication in the silkworm, Bombyx mori. Insect Sci. 2022;29(4):1006-1016. doi:10.1111/1744-7917.12991(IF:3.262)
[6] Xiao Q, Dong ZQ, Zhu Y, et al. Bombyx mori Nucleopolyhedrovirus (BmNPV) Induces G2/M Arrest to Promote Viral Multiplication by Depleting BmCDK1. Insects. 2021;12(12):1098. Published 2021 Dec 8. doi:10.3390/insects12121098(IF:2.769)
[7] Chen Y, Tang J, Lu T, Liu F. CAPN1 promotes malignant behavior and erlotinib resistance mediated by phosphorylation of c-Met and PIK3R2 via degrading PTPN1 in lung adenocarcinoma. Thorac Cancer. 2020;11(7):1848-1860. doi:10.1111/1759-7714.13465(IF:2.610)
[8] Mao H, Zhang X, Yin L, Ji X, Huang C, Wu Q. Silencing of circ_0007299 suppresses proliferation, migration, and invasiveness and promotes apoptosis of ectopic endometrial stromal cells in endometriosis via miR-424-5p-dependent modulation of CREB1 [published online ahead of print, 2022 Jun 16]. Arch Gynecol Obstet. 2022;10.1007/s00404-022-06650-w. doi:10.1007/s00404-022-06650-w(IF:2.344)

产品简介

 

rProtein A/G免疫沉淀磁珠使用“纳米表面生物技术”(S-TEC),将rProtein A/G高密度定向包被到粒径为200 nm的纳米磁珠表面,纳米级磁珠提供的超大比表面积,具有更多的结合位点、更高的抗体结合能力和极低的蛋白非特异性吸附率,一步纯化即可从血清样品中分离出纯度>90%的抗体,使用简便有效。

天然蛋白A(Protein A)是一种发现于金黄色葡萄球菌的细胞壁表面蛋白,天然蛋白G(Protein G)是一种分离自G型或C型链球菌属的细胞表面蛋白,二者功能相似,主要通过与免疫球蛋白(Ig)的Fc区相互作用,可结合大多数哺乳动物的IgG,但在两者结合特异性上有所不同。rProtein A/G免疫磁珠同时共价偶联了蛋白A和蛋白G,比单独的蛋白A或者蛋白G都有更广的结合范围,实用性更高。同时,本品使用的是基因改造后的蛋白A和蛋白G,不仅维持其本身的Ig亲和特性,同时也去除了天然蛋白本身的非主要结合域以降低非特异性结合。本品适用的范围广泛,可应用于细胞裂解液、细胞分泌液上清、血清、动物腹水以及其它的免疫抗原等样本。

 

产品信息

 

货号

36417JP03 / 36417JP08

规格

1 mL /5 mL

 

产品性质

 

基质(Matrix  spherical

硅基磁珠

配体(Ligand)

重组蛋白A/G

结合能力(Binding Capacity

≥0.7 mhIgG /mg磁珠

径(Particle size)

200 nm

磁珠浓度Concentration

10 mg/mL

应用Application

IP、COIP、CHIP、RIP等

 

储存条件

 

2~8℃保存,有效期2年。

 

使用说明

 

工作液浓度应根据具体实验确定,建议进行预实验摸索最佳实验浓度。

  1. 缓冲液配制

【注】建议以下缓冲液在使用前用 0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜过滤。

裂解缓冲液:0.15 M NaCl, 50 mM Tris-HCl, 1% NP-40, pH7.4WB/IP裂解液(Cat#20118JP)

平衡/结合/洗杂缓冲液:0.15 M NaCl, 20 mM Na2HPO4, pH7.0

交联缓冲液:0.2 M 三乙醇胺,pH8.2

中和缓冲液:1 M Tris-HCl,pH 8.5

洗脱缓冲液:0.1 M甘氨酸,pH 3.0

交联剂:DMP(Dimetyl pimelimidate dihydrochloride)

终止液:50 mM Tris-HClpH 7.5

  1. 抗原样品制备

本操作说明书提供以下四种样品处理方法,建议您根据不同来源的抗原样品选择适当的方式进行预处理,使待检测抗原释放至样品溶液中。

血清样品处理:若目标蛋白丰度较高, 建议用结合缓冲液稀释血清样品至目标蛋白终浓度为10-100 µg/mL,置于冰上备用(或置于-20℃长期保存)。

悬浮细胞样品处理:离心收集细胞(4℃, 1000g, 5 min),用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250 μL裂解液的比例加入含蛋白酶抑制剂的裂解液裂解液在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1 mM混匀后置于冰上处理10 min;离心收集上清液(4℃, 14000g, 10 min),置于冰上备用(或置于-20℃长期保存)。

贴壁细胞样品处理:移去培养基,用PBS清洗细胞遍;用细胞刮棒刮脱细胞,收集至1.5mL EP管内按照6孔板每孔加入150-250 μL裂解液的比例加入含蛋白酶抑制剂的裂解液裂解液在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1 mM用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。混匀后置于冰上处理10 min;离心收集上清液(4℃, 14000g, 10 min),置于冰上备用(或置于-20℃长期保存)。

大肠杆菌样品处理 离心收集大肠杆菌(4℃, 12000g, 2 min),弃上清后称重, 按每克(湿重)菌体10 mL的比例用1×PBS洗涤2次;按每克(湿重)菌体5-10 mL的比例加入结合缓冲液,同时加入蛋白酶抑制剂,重悬菌体,超声裂解细胞,离心收集上清(4℃, 17000g, 10 min)。

  1.  磁珠预处理
  1. 将磁珠漩涡振荡1 min,使其充分混悬;
  2. 50 µL磁珠悬液置于1.5 mL EP管中放置在磁分离器上,待溶液变澄清后,用移液器吸弃保护液。
  3. 加入200 µL结合缓冲液洗涤,进行磁性分离,吸弃上清,重复1次。

4.  抗体吸附

1)  加入目标抗体溶液5-25 µg抗体总量),充分混匀,体积不足500 µL时用平衡液补足。

2)  室温孵育 10 min,可以振荡或漩涡混合均匀。

3)  EP 管置于磁分离器上,待磁珠全部吸附后,吸弃上清液。如需要可留做进一步检测。

4)  加入500 μL 洗杂液混合均匀,置于磁分离器上,待磁珠全部吸附后,吸弃上清液。重复洗杂至少 3次。 

5.  抗体交联 (备选)

1)如果需要将抗体和目标抗原复合物共同洗脱,请忽略本步骤,直接进行操作6。 50μL-1mL 磁珠量均可以按照以下步骤操作,无需额外增加交联液体积。

2)加入 1 mL交联液,振荡悬浮,置于磁分离器上,大约1 min,待溶液变澄清后,吸弃上清液。该操作重复两次。

3)再加入1mL含有20 mM DMP(dimetylpimelimidate dihydrochloride)的交联液, 此试剂需要现用现配。振荡悬浮,在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管, 促使溶液和磁珠充分接触,约30 min后,置于磁分离器上,大约 1 min,待溶液变澄清后,吸弃上清液。

4)使用1 mL终止液悬浮磁珠,终止交联反应,在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管,促使溶液和磁珠充分接触,约15 min后,置于磁分离器上,大约 1 min,待溶液变澄清后,吸弃上清液。

5)加入1 mL平衡液,颠倒混匀,置于磁分离器上,大约 1 min,待溶液变澄清后,吸弃上清液。再重复两次。 

6.  抗原结合反应

1)  加入含有抗原的样品(通常100-1000 μL),用移液器轻轻吹打使抗原与磁珠-抗体复合物均匀分散。

2)  在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管 10 min,使抗原与抗体充分结合,如结合力较弱则可在室温下反应1h或者在4℃下反应过夜。

3)  上述完成抗原吸附的磁珠-抗体-抗原复合物进行磁性分离,收集上清液,以备后续检测。

4)  向离心管中加入1 mL洗杂液,用移液器轻轻吹打使磁珠-抗体-抗原复合物均匀分散,然后进行磁性分离,弃上清液;从磁分离器上取下离心管,再重复洗涤两次。

 7.抗原洗脱

A. 变性洗脱 此方法洗脱的样品适用于SDS-PAGE检测。

1) 从磁分离器上取下离心管,向其中加入25μL 1×SDS-PAGE Loading Buffer 混合均匀, 95℃加热 5min。

2) 置于磁性分离器上,进行磁性分离,收集上清液进行SDS-PAGE检测。

B. 非变性洗脱

1) 向磁珠-抗体-抗原复合物中加入300 μL洗脱液,混合均匀,室温孵育10 min。

2) 置于磁性分离器上,进行磁性分离,收集洗脱液至新的 EP 管中。

3) 重复步骤 1)和2),收集洗脱液,与2)中洗脱液混合,加入中和液中和至 pH7.0-8.0。

 

注意事项

 

1. 本产品仅作科研用途

2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

 

Ver.CN20231212

Q:该产品可主要用于哪些样品?

A:本品适用的范围广泛,可应用于细胞裂解液、细胞分泌液上清、血清、动物腹水以及其它的免疫抗原等样本。

Q:工作液应配置多少浓度?

A:工作液浓度应根据具体实验确定,建议进行预实验摸索最佳实验浓度。

Q:血清样品可以稀释吗?

A:可以。若目标蛋白丰度较高,建议用结合缓冲液稀释血清样品至目标蛋白终浓度为10-100µg/mL,置于冰上备用(或置于-20℃长期保存)。

Q:抗原变性洗脱的样品可以用于 SDS-PAGE 检测吗?

A:可以。

Q:说明书中COIP实验操作中取适量磁珠是要加多少量

A:一般磁珠的量是根据自己要做的样品的量决定。最小的常用COIP体系为:20ul磁珠混悬液+5ug抗体+总体积500ul 总蛋白浓度1mg/ml的裂解液混合孵育。

[1] Jiang Y, Guo H, Tong T, et al. lncRNA lnc-POP1-1 upregulated by VN1R5 promotes cisplatin resistance in head and neck squamous cell carcinoma through interaction with MCM5. Mol Ther. 2022;30(1):448-467. doi:10.1016/j.ymthe.2021.06.006(IF:11.454)
[2] Cen Y, Zou X, Zhong Q, et al. The TIAR-mediated Nrf2 response to oxidative stress is mediated through the Nrf2 noncoding 3'untranslated region in Spodoptera litura. Free Radic Biol Med. 2022;184:17-29. doi:10.1016/j.freeradbiomed.2022.03.016(IF:7.376)
[3] Zhenzhen L, Wenting L, Jianmin Z, et al. miR-146a-5p/TXNIP axis attenuates intestinal ischemia-reperfusion injury by inhibiting autophagy via the PRKAA/mTOR signaling pathway. Biochem Pharmacol. 2022;197:114839. doi:10.1016/j.bcp.2021.114839(IF:5.858)
[4] Meng J, Zhang C, Wang D, Zhu L, Wang L. Mitochondrial GCN5L1 regulates cytosolic redox state and hepatic gluconeogenesis via glycerol phosphate shuttle GPD2 [published online ahead of print, 2022 Jun 28]. Biochem Biophys Res Commun. 2022;621:1-7. doi:10.1016/j.bbrc.2022.06.092(IF:3.575)
[5] Chen P, Wang L, Long YB, et al. E2F4 regulates the cell cycle and DNA replication in the silkworm, Bombyx mori. Insect Sci. 2022;29(4):1006-1016. doi:10.1111/1744-7917.12991(IF:3.262)
[6] Xiao Q, Dong ZQ, Zhu Y, et al. Bombyx mori Nucleopolyhedrovirus (BmNPV) Induces G2/M Arrest to Promote Viral Multiplication by Depleting BmCDK1. Insects. 2021;12(12):1098. Published 2021 Dec 8. doi:10.3390/insects12121098(IF:2.769)
[7] Chen Y, Tang J, Lu T, Liu F. CAPN1 promotes malignant behavior and erlotinib resistance mediated by phosphorylation of c-Met and PIK3R2 via degrading PTPN1 in lung adenocarcinoma. Thorac Cancer. 2020;11(7):1848-1860. doi:10.1111/1759-7714.13465(IF:2.610)
[8] Mao H, Zhang X, Yin L, Ji X, Huang C, Wu Q. Silencing of circ_0007299 suppresses proliferation, migration, and invasiveness and promotes apoptosis of ectopic endometrial stromal cells in endometriosis via miR-424-5p-dependent modulation of CREB1 [published online ahead of print, 2022 Jun 16]. Arch Gynecol Obstet. 2022;10.1007/s00404-022-06650-w. doi:10.1007/s00404-022-06650-w(IF:2.344)

ProcartaPlex品牌代理

ProcartaPlex 品牌介绍

简要描述:

ProcartaPlex™是Affmetrix公司基于Luminex的xMAP技术平台而开发的全面、高效的多因子免疫检测试剂,可用于多种物种的检测:人、大鼠、小鼠、非人灵长类动物、猪、狗。

ProcartaPlex

 

ProcartaPlex™是Affmetrix公司基于Luminex的xMAP技术平台而开发的全面、高效的多因子免疫检测试剂,可用于多种物种的检测:人、大鼠、小鼠、非人灵长类动物、猪、狗。

 

ProcartaPlex™多因子检测使用磁珠,通过荧光染色的方法对磁珠进行编码,应用时把针对不同检测物的编码磁珠混匀,再加入微量待检测样本(血清、血浆、细胞培养上清液),在悬液中靶分子与磁珠表面交联的捕获分子发生特异性结合,用Luminex仪器读板,进行分类和定量。 

 

ProcartaPlex™多因子免疫检测技术仅需25-50uL样本,即可在单个样本中同时检测分析多达100种分析物,从而获得多种因子含量结果。广泛应用于免于医学、病理与药理、药物筛选及疫苗开发等研究中。

 

原核生物rRNA(核糖体RNA)去除试剂盒(含纯化磁珠)|Prokaryote rRNA Removal Kit

原核生物rRNA(核糖体RNA)去除试剂盒(含纯化磁珠)|Prokaryote rRNA Removal Kit

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

 

Hieff NGS® MagSP rRNA Removal Kit (Prokaryote) with purification beads是利用链霉亲和素标记的磁珠去除原核生物(细菌和古生菌通用)来源总RNA中的核糖体RNA以保留信使RNA(mRNA)和其他非编码RNA。该试剂盒对于完整和部分降解的总RNA均具有良好的rRNA去除效果。经rRNA去除所获得的RNA样本可用于高通量测序分析的mRNA和非编码RNA,可显著提高测序结果中有效数据比例,也可用于cDNA合成及其它下游应用。

 

适用范围

适用于原核生物(细菌和古生菌通用)来源的10 ng~1 μg 总RNA样品若实验时去除单一物种rRNA,总RNA量不能超过200 ng,推荐使用100-200 ng

 

产品组分

组分编号和名称

12265ES04

12265ES24

12265ES96

BOX I

12265-A

PM, Probe Mix

13.5 μL

80 μL

317 μL

BOX II

12265-B

HB, Hybridization buffer

25 μL

150 μL

600 μL

12265-C

DB, Depletion buffer

800 μL

4.6 mL

18.5 mL

12265-D

SMB, Streptavidin-coated magnetic beads

176 μL

1056 μL

4.23 mL

12265-E

PB, Purification beads

795 μL

4.75 mL

19 mL

 

储存条件

试剂盒BOXI(Probe Mix)-25~-15℃保存,BOXII2~8℃保存,有效期1年。

 

注意事项

1. 请使用无RNase污染的耗材,并对实验区域定期进行清理,推荐使用Thermo Fisher公司的RNAZapTM高效核酸去除喷雾去除RNA酶污染。

2. RNA样品应不含基因组DNA污染,若样品中有gDNA残留,应先进行DNase I消化并纯化后再用于本试剂盒。

3. 使用前,磁珠需提前平衡至室温。

4. RNA投入量为10 ng- 1000 ng,但当实验时去除单一物种rRNA,总RNA量不能超过200 ng,推荐使用100-200 ng

5. 在操作过程种,避免EP管或PCR管管盖开封(孵育过程中)或长时间处于室温状态。

6.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

7.本产品仅用作科研用途!

 

自备材料

1. qRT-PCR质检rRNA去除效率:Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix(No Rox)(Cat#11201)或其他等效产品;

2. 其他材料: 无水乙醇、无菌超纯水、低吸附枪头、PCR管、磁力架、PCR仪等。

 

操作步骤

1. 探针杂交

1.1 将探针、Streptavidin-coated magnetic beads和杂交Buffer从-20°C 取出,解冻后颠倒混匀,探针置于冰上放置,其余试剂平衡至室温备用。

1.2 准备RNA样品:根据投入量和样品浓度,计算RNA取样体积,用Nuclease free H2O稀释至12 μL。

1.3 按照表1于200 μL PCR管中配制rRNA去除反应体系。

1 探针杂交反应体系

名称

体积(μL)

Hybridization Buffer

5

Probe Mix

3

Total RNA*

12(10 ng~1 μg)

Total

20

*注:若为单一物种,Total RNA总量不能超过200 ng,推荐使用100-200 ng。
1.4 使用移液器轻轻吹打混匀,瞬离将反应液离心至管底。

1.5 将上述 PCR 管置于PCR仪中,按照表2所示反应程序,进行探针杂交反应。

2 探针杂交反应程序

温度

时间

热盖105°C

On

68℃

10 min

68℃-37℃

0.1℃/s

37℃*

2 min

*注:采用梯度退火之后,需要尽快进入下一操作步骤,严禁PCR程序中出现4℃ hold,否则会影响去除效果。
2. 链酶亲和素磁珠准备

2.1低速涡旋振荡链酶亲和素磁珠使磁珠重悬。

2.2 使用移液器轻轻吹打混匀,瞬离将反应液离心至管底。

2.3 吸取40 μL Streptavidin-coated magnetic beads于新的PCR管中,将PCR管置于磁力架上,静置2 min;。

2.4待溶液澄清后,去掉所有上清液。

2.5向PCR管中加入80 μL Depletion buffer后,用移液器吹打10次混匀。

2.6将PCR管置于磁力架上,静置2 min,待溶液澄清后,去上清。

2.7向PCR管中加入80 μL Depletion buffer后,用移液器吹打10次混匀。

3. rRNA去除

3.1瞬离将步骤1中杂交样品离心至管底。

3.2 将步骤2中的链酶亲和素磁珠加入步骤1的样品中,用移液器吹打10次混匀后,置于PCR仪中,按照表3所示反应程序,进行探针捕获。

3 rRNA去除反应程序

温度

时间

热盖105°C

On

37℃

15 min

50℃

5 min

*立即进入下一步骤

*注:去除反应程序完成后,需要尽快进入下一操作步骤,严禁PCR程序中出现4℃ hold,否则会影响去除效果。
3.3 瞬离将反应液离心至管底

3.4 将样品管置于磁力架上,静置2 min。

3.5 待溶液澄清后,小心转移上清至新的PCR管中。

3.6 将PCR管置于磁力架上,静置2 min,待溶液澄清后,小心转移上清至新的PCR管中(建议)。

4. RNA纯化

4.1 准备工作:将Purification beads由冰箱中取出,室温平衡至少30 min。用Nuclease free H2O配制 80%乙醇。

4.2 涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证充分混匀。

4.3 吸取 180 μL Purification beads至上一步产物中,移液器充分吹打混匀,室温孵育 5 min。

4.4 将PCR管置于磁力架中分离磁珠和液体,待溶液澄清后(约3 min),小心移除上清。

4.5 保持PCR管始终置于磁力架中,加入 200 μL Nuclease free H2O新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠,室温孵育 30 sec 后,小心移除上清。

4.6 重复步骤 4.5,总计漂洗两次。用 10 μL移液器吸干净残留液体。

4.7 保持 PCR 管始终置于磁力架中,室温下开盖干燥磁珠(5~10 min)。

4.8 RNA洗脱:将PCR 管从磁力架上取下,加入 11 μL Nuclease free H2O(或使用适合下游实验的相应体积Nuclease free H2O或洗脱缓冲液),使用移液器轻轻吹打至充分混匀,室温静置 5 min。

4.9 将 PCR管短暂离心并置于磁力架中静置,待溶液澄清后(约3 min),小心移取 10 μL上清(可根据步骤4.8选择的实际洗脱体积进行相应调整)至新的Nuclease free PCR 管中。

【注】洗脱后的样品请立即进行下游实验,或置于-80℃存放。

Ver.CN20230316 

原核生物rRNA(核糖体RNA)去除试剂盒(含纯化磁珠)|Prokaryote rRNA Removal Kit

暂无内容

原核生物rRNA(核糖体RNA)去除试剂盒(含纯化磁珠)|Prokaryote rRNA Removal Kit

暂无内容

 

Hieff NGS® MagSP rRNA Removal Kit (Prokaryote) with purification beads是利用链霉亲和素标记的磁珠去除原核生物(细菌和古生菌通用)来源总RNA中的核糖体RNA以保留信使RNA(mRNA)和其他非编码RNA。该试剂盒对于完整和部分降解的总RNA均具有良好的rRNA去除效果。经rRNA去除所获得的RNA样本可用于高通量测序分析的mRNA和非编码RNA,可显著提高测序结果中有效数据比例,也可用于cDNA合成及其它下游应用。

 

适用范围

适用于原核生物(细菌和古生菌通用)来源的10 ng~1 μg 总RNA样品若实验时去除单一物种rRNA,总RNA量不能超过200 ng,推荐使用100-200 ng

 

产品组分

组分编号和名称

12265ES04

12265ES24

12265ES96

BOX I

12265-A

PM, Probe Mix

13.5 μL

80 μL

317 μL

BOX II

12265-B

HB, Hybridization buffer

25 μL

150 μL

600 μL

12265-C

DB, Depletion buffer

800 μL

4.6 mL

18.5 mL

12265-D

SMB, Streptavidin-coated magnetic beads

176 μL

1056 μL

4.23 mL

12265-E

PB, Purification beads

795 μL

4.75 mL

19 mL

 

储存条件

试剂盒BOXI(Probe Mix)-25~-15℃保存,BOXII2~8℃保存,有效期1年。

 

注意事项

1. 请使用无RNase污染的耗材,并对实验区域定期进行清理,推荐使用Thermo Fisher公司的RNAZapTM高效核酸去除喷雾去除RNA酶污染。

2. RNA样品应不含基因组DNA污染,若样品中有gDNA残留,应先进行DNase I消化并纯化后再用于本试剂盒。

3. 使用前,磁珠需提前平衡至室温。

4. RNA投入量为10 ng- 1000 ng,但当实验时去除单一物种rRNA,总RNA量不能超过200 ng,推荐使用100-200 ng

5. 在操作过程种,避免EP管或PCR管管盖开封(孵育过程中)或长时间处于室温状态。

6.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

7.本产品仅用作科研用途!

 

自备材料

1. qRT-PCR质检rRNA去除效率:Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix(No Rox)(Cat#11201)或其他等效产品;

2. 其他材料: 无水乙醇、无菌超纯水、低吸附枪头、PCR管、磁力架、PCR仪等。

 

操作步骤

1. 探针杂交

1.1 将探针、Streptavidin-coated magnetic beads和杂交Buffer从-20°C 取出,解冻后颠倒混匀,探针置于冰上放置,其余试剂平衡至室温备用。

1.2 准备RNA样品:根据投入量和样品浓度,计算RNA取样体积,用Nuclease free H2O稀释至12 μL。

1.3 按照表1于200 μL PCR管中配制rRNA去除反应体系。

1 探针杂交反应体系

名称

体积(μL)

Hybridization Buffer

5

Probe Mix

3

Total RNA*

12(10 ng~1 μg)

Total

20

*注:若为单一物种,Total RNA总量不能超过200 ng,推荐使用100-200 ng。
1.4 使用移液器轻轻吹打混匀,瞬离将反应液离心至管底。

1.5 将上述 PCR 管置于PCR仪中,按照表2所示反应程序,进行探针杂交反应。

2 探针杂交反应程序

温度

时间

热盖105°C

On

68℃

10 min

68℃-37℃

0.1℃/s

37℃*

2 min

*注:采用梯度退火之后,需要尽快进入下一操作步骤,严禁PCR程序中出现4℃ hold,否则会影响去除效果。
2. 链酶亲和素磁珠准备

2.1低速涡旋振荡链酶亲和素磁珠使磁珠重悬。

2.2 使用移液器轻轻吹打混匀,瞬离将反应液离心至管底。

2.3 吸取40 μL Streptavidin-coated magnetic beads于新的PCR管中,将PCR管置于磁力架上,静置2 min;。

2.4待溶液澄清后,去掉所有上清液。

2.5向PCR管中加入80 μL Depletion buffer后,用移液器吹打10次混匀。

2.6将PCR管置于磁力架上,静置2 min,待溶液澄清后,去上清。

2.7向PCR管中加入80 μL Depletion buffer后,用移液器吹打10次混匀。

3. rRNA去除

3.1瞬离将步骤1中杂交样品离心至管底。

3.2 将步骤2中的链酶亲和素磁珠加入步骤1的样品中,用移液器吹打10次混匀后,置于PCR仪中,按照表3所示反应程序,进行探针捕获。

3 rRNA去除反应程序

温度

时间

热盖105°C

On

37℃

15 min

50℃

5 min

*立即进入下一步骤

*注:去除反应程序完成后,需要尽快进入下一操作步骤,严禁PCR程序中出现4℃ hold,否则会影响去除效果。
3.3 瞬离将反应液离心至管底

3.4 将样品管置于磁力架上,静置2 min。

3.5 待溶液澄清后,小心转移上清至新的PCR管中。

3.6 将PCR管置于磁力架上,静置2 min,待溶液澄清后,小心转移上清至新的PCR管中(建议)。

4. RNA纯化

4.1 准备工作:将Purification beads由冰箱中取出,室温平衡至少30 min。用Nuclease free H2O配制 80%乙醇。

4.2 涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证充分混匀。

4.3 吸取 180 μL Purification beads至上一步产物中,移液器充分吹打混匀,室温孵育 5 min。

4.4 将PCR管置于磁力架中分离磁珠和液体,待溶液澄清后(约3 min),小心移除上清。

4.5 保持PCR管始终置于磁力架中,加入 200 μL Nuclease free H2O新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠,室温孵育 30 sec 后,小心移除上清。

4.6 重复步骤 4.5,总计漂洗两次。用 10 μL移液器吸干净残留液体。

4.7 保持 PCR 管始终置于磁力架中,室温下开盖干燥磁珠(5~10 min)。

4.8 RNA洗脱:将PCR 管从磁力架上取下,加入 11 μL Nuclease free H2O(或使用适合下游实验的相应体积Nuclease free H2O或洗脱缓冲液),使用移液器轻轻吹打至充分混匀,室温静置 5 min。

4.9 将 PCR管短暂离心并置于磁力架中静置,待溶液澄清后(约3 min),小心移取 10 μL上清(可根据步骤4.8选择的实际洗脱体积进行相应调整)至新的Nuclease free PCR 管中。

【注】洗脱后的样品请立即进行下游实验,或置于-80℃存放。

Ver.CN20230316 

原核生物rRNA(核糖体RNA)去除试剂盒(含纯化磁珠)|Prokaryote rRNA Removal Kit

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原核生物rRNA(核糖体RNA)去除试剂盒(含纯化磁珠)|Prokaryote rRNA Removal Kit

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哺乳动物rRNA(核糖体RNA)去除试剂盒(含纯化磁珠)|Mammal rRNA Removal Kit

哺乳动物rRNA(核糖体RNA)去除试剂盒(含纯化磁珠)|Mammal rRNA Removal Kit

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

 

Hieff NGS® MagSP rRNA Removal Kit (Mammal) with purification beads是利用链霉亲和素标记的磁珠去除哺乳动物来源总RNA中的核糖体RNA以保留信使RNA(mRNA)和其他非编码RNA。该试剂盒对于完整和部分降解的总RNA均具有良好的rRNA去除效果。经rRNA去除所获得的RNA样本可用于高通量测序分析的mRNA和非编码RNA,可显著提高测序结果中有效数据比例,也可用于cDNA合成及其它下游应用。

 

适用范围

适用于哺乳动物来源的10 ng~1 μg 总RNA样品。

 

产品组分

组分编号和名称

12266ES04

12266ES24

12266ES96

BOX I

12266-A

PM, Probe Mix

13.5 μL

80 μL

317 μL

BOX II

12266-B

HB, Hybridization buffer

25 μL

150 μL

600 μL

12266-C

DB, Depletion buffer

800 μL

4.6 mL

18.5 mL

12266-D

SMB, Streptavidin-coated magnetic beads

176 μL

1056 μL

4.23 mL

12266-E

PB, Purification beads

795 μL

4.75 mL

19 mL

 

储存条件

试剂盒BOXI(Probe Mix)-25~-15℃保存,BOXII2~8℃保存,有效期1年。

 

注意事项

1. 请使用无RNase污染的耗材,并对实验区域定期进行清理,推荐使用Thermo Fisher公司的RNAZapTM高效核酸去除喷雾去除RNA酶污染。

2. RNA样品应不含基因组DNA污染,若样品中有gDNA残留,应先进行DNase I消化并纯化后再用于本试剂盒。

3. 使用前,磁珠需提前平衡至室温。

4. RNA投入量为10 ng- 1000 ng。

5. 在操作过程种,避免EP管或PCR管管盖开封(孵育过程中)或长时间处于室温状态。

6.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

7.本产品仅用作科研用途!

 

自备材料

1. qRT-PCR质检rRNA去除效率:Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix(No Rox)(Cat#11201)或其他等效产品;

2. 其他材料: 无水乙醇、无菌超纯水、低吸附枪头、PCR管、磁力架、PCR仪等。

 

操作步骤

1. 探针杂交

1.1 将探针、Streptavidin-coated magnetic beads和杂交Buffer从-20°C 取出,解冻后颠倒混匀,探针置于冰上放置,其余试剂平衡至室温备用。

1.2 准备RNA样品:根据投入量和样品浓度,计算RNA取样体积,用Nuclease free H2O稀释至12 μL。

1.3 按照表1于200 μL PCR管中配制rRNA去除反应体系。

1 探针杂交反应体系

名称

体积(μL)

Hybridization Buffer

5

Probe Mix

3

Total RNA

12(10 ng~1 μg)

Total

20

1.4 使用移液器轻轻吹打混匀,瞬离将反应液离心至管底。

1.5 将上述 PCR 管置于PCR仪中,按照表2所示反应程序,进行探针杂交反应。

2 探针杂交反应程序

温度

时间

热盖105°C

On

68℃

10 min

68℃-37℃

0.1℃/s

37℃*

2 min

*注:采用梯度退火之后,需要尽快进入下一操作步骤,严禁PCR程序中出现4℃ hold,否则会影响去除效果。
2. 链酶亲和素磁珠准备

2.1低速涡旋振荡链酶亲和素磁珠使磁珠重悬。

2.2 使用移液器轻轻吹打混匀,瞬离将反应液离心至管底。

2.3 吸取40 μL Streptavidin-coated magnetic beads于新的PCR管中,将PCR管置于磁力架上,静置2 min;。

2.4待溶液澄清后,去掉所有上清液。

2.5向PCR管中加入80 μL Depletion buffer后,用移液器吹打10次混匀。

2.6将PCR管置于磁力架上,静置2 min,待溶液澄清后,去上清。

2.7向PCR管中加入80 μL Depletion buffer后,用移液器吹打10次混匀。

3. rRNA去除

3.1瞬离将步骤1中杂交样品离心至管底。

3.2 将步骤2中的链酶亲和素磁珠加入步骤1的样品中,用移液器吹打10次混匀后,置于PCR仪中,按照表3所示反应程序,进行探针捕获。

3 rRNA去除反应程序

温度

时间

热盖105°C

On

37℃

15 min

50℃

5 min

*立即进入下一步骤

*注:去除反应程序完成后,需要尽快进入下一操作步骤,严禁PCR程序中出现4℃ hold,否则会影响去除效果。
3.3 瞬离将反应液离心至管底

3.4 将样品管置于磁力架上,静置2 min。

3.5 待溶液澄清后,小心转移上清至新的PCR管中。

3.6 将PCR管置于磁力架上,静置2 min,待溶液澄清后,小心转移上清至新的PCR管中(建议)。

4. RNA纯化

4.1 准备工作:将Purification beads由冰箱中取出,室温平衡至少30 min。用Nuclease free H2O配制 80%乙醇。

4.2 涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证充分混匀。

4.3 吸取 180 μL Purification beads至上一步产物中,移液器充分吹打混匀,室温孵育 5 min。

4.4 将PCR管置于磁力架中分离磁珠和液体,待溶液澄清后(约3 min),小心移除上清。

4.5 保持PCR管始终置于磁力架中,加入 200 μL Nuclease free H2O新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠,室温孵育 30 sec 后,小心移除上清。

4.6 重复步骤 4.5,总计漂洗两次。用 10 μL移液器吸干净残留液体。

4.7 保持 PCR 管始终置于磁力架中,室温下开盖干燥磁珠(5~10 min)。

4.8 RNA洗脱:将PCR 管从磁力架上取下,加入 11 μL Nuclease free H2O(或使用适合下游实验的相应体积Nuclease free H2O或洗脱缓冲液),使用移液器轻轻吹打至充分混匀,室温静置 5 min。

4.9 将 PCR管短暂离心并置于磁力架中静置,待溶液澄清后(约3 min),小心移取 10 μL上清(可根据步骤4.8选择的实际洗脱体积进行相应调整)至新的Nuclease free PCR 管中。

【注】洗脱后的样品请立即进行下游实验,或置于-80℃存放。

Ver.CN20230316

哺乳动物rRNA(核糖体RNA)去除试剂盒(含纯化磁珠)|Mammal rRNA Removal Kit

暂无内容

哺乳动物rRNA(核糖体RNA)去除试剂盒(含纯化磁珠)|Mammal rRNA Removal Kit

暂无内容

 

Hieff NGS® MagSP rRNA Removal Kit (Mammal) with purification beads是利用链霉亲和素标记的磁珠去除哺乳动物来源总RNA中的核糖体RNA以保留信使RNA(mRNA)和其他非编码RNA。该试剂盒对于完整和部分降解的总RNA均具有良好的rRNA去除效果。经rRNA去除所获得的RNA样本可用于高通量测序分析的mRNA和非编码RNA,可显著提高测序结果中有效数据比例,也可用于cDNA合成及其它下游应用。

 

适用范围

适用于哺乳动物来源的10 ng~1 μg 总RNA样品。

 

产品组分

组分编号和名称

12266ES04

12266ES24

12266ES96

BOX I

12266-A

PM, Probe Mix

13.5 μL

80 μL

317 μL

BOX II

12266-B

HB, Hybridization buffer

25 μL

150 μL

600 μL

12266-C

DB, Depletion buffer

800 μL

4.6 mL

18.5 mL

12266-D

SMB, Streptavidin-coated magnetic beads

176 μL

1056 μL

4.23 mL

12266-E

PB, Purification beads

795 μL

4.75 mL

19 mL

 

储存条件

试剂盒BOXI(Probe Mix)-25~-15℃保存,BOXII2~8℃保存,有效期1年。

 

注意事项

1. 请使用无RNase污染的耗材,并对实验区域定期进行清理,推荐使用Thermo Fisher公司的RNAZapTM高效核酸去除喷雾去除RNA酶污染。

2. RNA样品应不含基因组DNA污染,若样品中有gDNA残留,应先进行DNase I消化并纯化后再用于本试剂盒。

3. 使用前,磁珠需提前平衡至室温。

4. RNA投入量为10 ng- 1000 ng。

5. 在操作过程种,避免EP管或PCR管管盖开封(孵育过程中)或长时间处于室温状态。

6.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

7.本产品仅用作科研用途!

 

自备材料

1. qRT-PCR质检rRNA去除效率:Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix(No Rox)(Cat#11201)或其他等效产品;

2. 其他材料: 无水乙醇、无菌超纯水、低吸附枪头、PCR管、磁力架、PCR仪等。

 

操作步骤

1. 探针杂交

1.1 将探针、Streptavidin-coated magnetic beads和杂交Buffer从-20°C 取出,解冻后颠倒混匀,探针置于冰上放置,其余试剂平衡至室温备用。

1.2 准备RNA样品:根据投入量和样品浓度,计算RNA取样体积,用Nuclease free H2O稀释至12 μL。

1.3 按照表1于200 μL PCR管中配制rRNA去除反应体系。

1 探针杂交反应体系

名称

体积(μL)

Hybridization Buffer

5

Probe Mix

3

Total RNA

12(10 ng~1 μg)

Total

20

1.4 使用移液器轻轻吹打混匀,瞬离将反应液离心至管底。

1.5 将上述 PCR 管置于PCR仪中,按照表2所示反应程序,进行探针杂交反应。

2 探针杂交反应程序

温度

时间

热盖105°C

On

68℃

10 min

68℃-37℃

0.1℃/s

37℃*

2 min

*注:采用梯度退火之后,需要尽快进入下一操作步骤,严禁PCR程序中出现4℃ hold,否则会影响去除效果。
2. 链酶亲和素磁珠准备

2.1低速涡旋振荡链酶亲和素磁珠使磁珠重悬。

2.2 使用移液器轻轻吹打混匀,瞬离将反应液离心至管底。

2.3 吸取40 μL Streptavidin-coated magnetic beads于新的PCR管中,将PCR管置于磁力架上,静置2 min;。

2.4待溶液澄清后,去掉所有上清液。

2.5向PCR管中加入80 μL Depletion buffer后,用移液器吹打10次混匀。

2.6将PCR管置于磁力架上,静置2 min,待溶液澄清后,去上清。

2.7向PCR管中加入80 μL Depletion buffer后,用移液器吹打10次混匀。

3. rRNA去除

3.1瞬离将步骤1中杂交样品离心至管底。

3.2 将步骤2中的链酶亲和素磁珠加入步骤1的样品中,用移液器吹打10次混匀后,置于PCR仪中,按照表3所示反应程序,进行探针捕获。

3 rRNA去除反应程序

温度

时间

热盖105°C

On

37℃

15 min

50℃

5 min

*立即进入下一步骤

*注:去除反应程序完成后,需要尽快进入下一操作步骤,严禁PCR程序中出现4℃ hold,否则会影响去除效果。
3.3 瞬离将反应液离心至管底

3.4 将样品管置于磁力架上,静置2 min。

3.5 待溶液澄清后,小心转移上清至新的PCR管中。

3.6 将PCR管置于磁力架上,静置2 min,待溶液澄清后,小心转移上清至新的PCR管中(建议)。

4. RNA纯化

4.1 准备工作:将Purification beads由冰箱中取出,室温平衡至少30 min。用Nuclease free H2O配制 80%乙醇。

4.2 涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证充分混匀。

4.3 吸取 180 μL Purification beads至上一步产物中,移液器充分吹打混匀,室温孵育 5 min。

4.4 将PCR管置于磁力架中分离磁珠和液体,待溶液澄清后(约3 min),小心移除上清。

4.5 保持PCR管始终置于磁力架中,加入 200 μL Nuclease free H2O新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠,室温孵育 30 sec 后,小心移除上清。

4.6 重复步骤 4.5,总计漂洗两次。用 10 μL移液器吸干净残留液体。

4.7 保持 PCR 管始终置于磁力架中,室温下开盖干燥磁珠(5~10 min)。

4.8 RNA洗脱:将PCR 管从磁力架上取下,加入 11 μL Nuclease free H2O(或使用适合下游实验的相应体积Nuclease free H2O或洗脱缓冲液),使用移液器轻轻吹打至充分混匀,室温静置 5 min。

4.9 将 PCR管短暂离心并置于磁力架中静置,待溶液澄清后(约3 min),小心移取 10 μL上清(可根据步骤4.8选择的实际洗脱体积进行相应调整)至新的Nuclease free PCR 管中。

【注】洗脱后的样品请立即进行下游实验,或置于-80℃存放。

Ver.CN20230316

哺乳动物rRNA(核糖体RNA)去除试剂盒(含纯化磁珠)|Mammal rRNA Removal Kit

暂无内容

哺乳动物rRNA(核糖体RNA)去除试剂盒(含纯化磁珠)|Mammal rRNA Removal Kit

暂无内容

白纹伊蚊rRNA(核糖体RNA)去除试剂盒(含纯化磁珠)|Aedes albopictus rRNA Removal Kit

白纹伊蚊rRNA(核糖体RNA)去除试剂盒(含纯化磁珠)|Aedes albopictus rRNA Removal Kit

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

 

Hieff NGS® MagSP rRNA Removal Kit (Aedes albopictus) with purification beads是利用链霉亲和素标记的磁珠去除白纹伊蚊来源总RNA中的核糖体RNA以保留信使RNA(mRNA)和其他非编码RNA。该试剂盒对于完整和部分降解的总RNA均具有良好的rRNA去除效果。经rRNA去除所获得的RNA样本可用于高通量测序分析的mRNA和非编码RNA,可显著提高测序结果中有效数据比例,也可用于cDNA合成及其它下游应用。

 

适用范围

适用于白纹伊蚊来源的10 ng~1 μg 总RNA样品。

 

产品组分

组分编号和名称

12290ES04

12290ES24

12290ES96

BOX I

12290-A

PM, Probe Mix

13.5 μL

80 μL

317 μL

BOX II

12290-B

HB, Hybridization buffer

25 μL

150 μL

600 μL

12290-C

DB, Depletion buffer

800 μL

4.6 mL

18.5 mL

12290-D

SMB, Streptavidin-coated magnetic beads

176 μL

1056 μL

4.23 mL

12290-E

PB, Purification beads

795 μL

4.75 mL

19 mL

 

储存条件

试剂盒BOXI(Probe Mix)-25~-15℃保存,BOXII2~8℃保存,有效期1年。

 

注意事项

1. 请使用无RNase污染的耗材,并对实验区域定期进行清理,推荐使用Thermo Fisher公司的RNAZapTM高效核酸去除喷雾去除RNA酶污染。

2. RNA样品应不含基因组DNA污染,若样品中有gDNA残留,应先进行DNase I消化并纯化后再用于本试剂盒。

3. 使用前,磁珠需提前平衡至室温。

4. RNA投入量为10 ng- 1000 ng。

5. 在操作过程种,避免EP管或PCR管管盖开封(孵育过程中)或长时间处于室温状态。

6.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

7.本产品仅用作科研用途!

 

自备材料

1. qRT-PCR质检rRNA去除效率:Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix(No Rox)(Cat#11201)或其他等效产品;

2. 其他材料: 无水乙醇、无菌超纯水、低吸附枪头、PCR管、磁力架、PCR仪等。

 

操作步骤

1. 探针杂交

1.1 将探针、Streptavidin-coated magnetic beads和杂交Buffer从-20°C 取出,解冻后颠倒混匀,探针置于冰上放置,其余试剂平衡至室温备用。

1.2 准备RNA样品:根据投入量和样品浓度,计算RNA取样体积,用Nuclease free H2O稀释至12 μL。

1.3 按照表1于200 μL PCR管中配制rRNA去除反应体系。

1 探针杂交反应体系

名称

体积(μL)

Hybridization Buffer

5

Probe Mix

3

Total RNA

12(10 ng~1 μg)

Total

20

1.4 使用移液器轻轻吹打混匀,瞬离将反应液离心至管底。

1.5 将上述 PCR 管置于PCR仪中,按照表2所示反应程序,进行探针杂交反应。

2 探针杂交反应程序

温度

时间

热盖105°C

On

68℃

10 min

68℃-37℃

0.1℃/s

37℃*

2 min

*注:采用梯度退火之后,需要尽快进入下一操作步骤,严禁PCR程序中出现4℃ hold,否则会影响去除效果。
2. 链酶亲和素磁珠准备

2.1低速涡旋振荡链酶亲和素磁珠使磁珠重悬。

2.2 使用移液器轻轻吹打混匀,瞬离将反应液离心至管底。

2.3 吸取40 μL Streptavidin-coated magnetic beads于新的PCR管中,将PCR管置于磁力架上,静置2 min;。

2.4待溶液澄清后,去掉所有上清液。

2.5向PCR管中加入80 μL Depletion buffer后,用移液器吹打10次混匀。

2.6将PCR管置于磁力架上,静置2 min,待溶液澄清后,去上清。

2.7向PCR管中加入80 μL Depletion buffer后,用移液器吹打10次混匀。

3. rRNA去除

3.1瞬离将步骤1中杂交样品离心至管底。

3.2 将步骤2中的链酶亲和素磁珠加入步骤1的样品中,用移液器吹打10次混匀后,置于PCR仪中,按照表3所示反应程序,进行探针捕获。

3 rRNA去除反应程序

温度

时间

热盖105°C

On

37℃

15 min

50℃

5 min

*立即进入下一步骤

*注:去除反应程序完成后,需要尽快进入下一操作步骤,严禁PCR程序中出现4℃ hold,否则会影响去除效果。
3.3 瞬离将反应液离心至管底

3.4 将样品管置于磁力架上,静置2 min。

3.5 待溶液澄清后,小心转移上清至新的PCR管中。

3.6 将PCR管置于磁力架上,静置2 min,待溶液澄清后,小心转移上清至新的PCR管中(建议)。

4. RNA纯化

4.1 准备工作:将Purification beads由冰箱中取出,室温平衡至少30 min。用Nuclease free H2O配制 80%乙醇。

4.2 涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证充分混匀。

4.3 吸取 180 μL Purification beads至上一步产物中,移液器充分吹打混匀,室温孵育 5 min。

4.4 将PCR管置于磁力架中分离磁珠和液体,待溶液澄清后(约3 min),小心移除上清。

4.5 保持PCR管始终置于磁力架中,加入 200 μL Nuclease free H2O新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠,室温孵育 30 sec 后,小心移除上清。

4.6 重复步骤 4.5,总计漂洗两次。用 10 μL移液器吸干净残留液体。

4.7 保持 PCR 管始终置于磁力架中,室温下开盖干燥磁珠(5~10 min)。

4.8 RNA洗脱:将PCR 管从磁力架上取下,加入 11 μL Nuclease free H2O(或使用适合下游实验的相应体积Nuclease free H2O或洗脱缓冲液),使用移液器轻轻吹打至充分混匀,室温静置 5 min。

4.9 将 PCR管短暂离心并置于磁力架中静置,待溶液澄清后(约3 min),小心移取 10 μL上清(可根据步骤4.8选择的实际洗脱体积进行相应调整)至新的Nuclease free PCR 管中。

【注】洗脱后的样品请立即进行下游实验,或置于-80℃存放。

Ver.CN20230316

白纹伊蚊rRNA(核糖体RNA)去除试剂盒(含纯化磁珠)|Aedes albopictus rRNA Removal Kit

暂无内容

白纹伊蚊rRNA(核糖体RNA)去除试剂盒(含纯化磁珠)|Aedes albopictus rRNA Removal Kit

暂无内容

 

Hieff NGS® MagSP rRNA Removal Kit (Aedes albopictus) with purification beads是利用链霉亲和素标记的磁珠去除白纹伊蚊来源总RNA中的核糖体RNA以保留信使RNA(mRNA)和其他非编码RNA。该试剂盒对于完整和部分降解的总RNA均具有良好的rRNA去除效果。经rRNA去除所获得的RNA样本可用于高通量测序分析的mRNA和非编码RNA,可显著提高测序结果中有效数据比例,也可用于cDNA合成及其它下游应用。

 

适用范围

适用于白纹伊蚊来源的10 ng~1 μg 总RNA样品。

 

产品组分

组分编号和名称

12290ES04

12290ES24

12290ES96

BOX I

12290-A

PM, Probe Mix

13.5 μL

80 μL

317 μL

BOX II

12290-B

HB, Hybridization buffer

25 μL

150 μL

600 μL

12290-C

DB, Depletion buffer

800 μL

4.6 mL

18.5 mL

12290-D

SMB, Streptavidin-coated magnetic beads

176 μL

1056 μL

4.23 mL

12290-E

PB, Purification beads

795 μL

4.75 mL

19 mL

 

储存条件

试剂盒BOXI(Probe Mix)-25~-15℃保存,BOXII2~8℃保存,有效期1年。

 

注意事项

1. 请使用无RNase污染的耗材,并对实验区域定期进行清理,推荐使用Thermo Fisher公司的RNAZapTM高效核酸去除喷雾去除RNA酶污染。

2. RNA样品应不含基因组DNA污染,若样品中有gDNA残留,应先进行DNase I消化并纯化后再用于本试剂盒。

3. 使用前,磁珠需提前平衡至室温。

4. RNA投入量为10 ng- 1000 ng。

5. 在操作过程种,避免EP管或PCR管管盖开封(孵育过程中)或长时间处于室温状态。

6.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

7.本产品仅用作科研用途!

 

自备材料

1. qRT-PCR质检rRNA去除效率:Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix(No Rox)(Cat#11201)或其他等效产品;

2. 其他材料: 无水乙醇、无菌超纯水、低吸附枪头、PCR管、磁力架、PCR仪等。

 

操作步骤

1. 探针杂交

1.1 将探针、Streptavidin-coated magnetic beads和杂交Buffer从-20°C 取出,解冻后颠倒混匀,探针置于冰上放置,其余试剂平衡至室温备用。

1.2 准备RNA样品:根据投入量和样品浓度,计算RNA取样体积,用Nuclease free H2O稀释至12 μL。

1.3 按照表1于200 μL PCR管中配制rRNA去除反应体系。

1 探针杂交反应体系

名称

体积(μL)

Hybridization Buffer

5

Probe Mix

3

Total RNA

12(10 ng~1 μg)

Total

20

1.4 使用移液器轻轻吹打混匀,瞬离将反应液离心至管底。

1.5 将上述 PCR 管置于PCR仪中,按照表2所示反应程序,进行探针杂交反应。

2 探针杂交反应程序

温度

时间

热盖105°C

On

68℃

10 min

68℃-37℃

0.1℃/s

37℃*

2 min

*注:采用梯度退火之后,需要尽快进入下一操作步骤,严禁PCR程序中出现4℃ hold,否则会影响去除效果。
2. 链酶亲和素磁珠准备

2.1低速涡旋振荡链酶亲和素磁珠使磁珠重悬。

2.2 使用移液器轻轻吹打混匀,瞬离将反应液离心至管底。

2.3 吸取40 μL Streptavidin-coated magnetic beads于新的PCR管中,将PCR管置于磁力架上,静置2 min;。

2.4待溶液澄清后,去掉所有上清液。

2.5向PCR管中加入80 μL Depletion buffer后,用移液器吹打10次混匀。

2.6将PCR管置于磁力架上,静置2 min,待溶液澄清后,去上清。

2.7向PCR管中加入80 μL Depletion buffer后,用移液器吹打10次混匀。

3. rRNA去除

3.1瞬离将步骤1中杂交样品离心至管底。

3.2 将步骤2中的链酶亲和素磁珠加入步骤1的样品中,用移液器吹打10次混匀后,置于PCR仪中,按照表3所示反应程序,进行探针捕获。

3 rRNA去除反应程序

温度

时间

热盖105°C

On

37℃

15 min

50℃

5 min

*立即进入下一步骤

*注:去除反应程序完成后,需要尽快进入下一操作步骤,严禁PCR程序中出现4℃ hold,否则会影响去除效果。
3.3 瞬离将反应液离心至管底

3.4 将样品管置于磁力架上,静置2 min。

3.5 待溶液澄清后,小心转移上清至新的PCR管中。

3.6 将PCR管置于磁力架上,静置2 min,待溶液澄清后,小心转移上清至新的PCR管中(建议)。

4. RNA纯化

4.1 准备工作:将Purification beads由冰箱中取出,室温平衡至少30 min。用Nuclease free H2O配制 80%乙醇。

4.2 涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证充分混匀。

4.3 吸取 180 μL Purification beads至上一步产物中,移液器充分吹打混匀,室温孵育 5 min。

4.4 将PCR管置于磁力架中分离磁珠和液体,待溶液澄清后(约3 min),小心移除上清。

4.5 保持PCR管始终置于磁力架中,加入 200 μL Nuclease free H2O新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠,室温孵育 30 sec 后,小心移除上清。

4.6 重复步骤 4.5,总计漂洗两次。用 10 μL移液器吸干净残留液体。

4.7 保持 PCR 管始终置于磁力架中,室温下开盖干燥磁珠(5~10 min)。

4.8 RNA洗脱:将PCR 管从磁力架上取下,加入 11 μL Nuclease free H2O(或使用适合下游实验的相应体积Nuclease free H2O或洗脱缓冲液),使用移液器轻轻吹打至充分混匀,室温静置 5 min。

4.9 将 PCR管短暂离心并置于磁力架中静置,待溶液澄清后(约3 min),小心移取 10 μL上清(可根据步骤4.8选择的实际洗脱体积进行相应调整)至新的Nuclease free PCR 管中。

【注】洗脱后的样品请立即进行下游实验,或置于-80℃存放。

Ver.CN20230316

白纹伊蚊rRNA(核糖体RNA)去除试剂盒(含纯化磁珠)|Aedes albopictus rRNA Removal Kit

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