产品描述

ER-Tracker探针是一系列具有细胞膜透过性，对活细胞内质网具有高度选择性的探针，不像传统的DiOC6(3)，该系列探针几乎不对线粒体着色，且在较低浓度即可实现对内质网的染色，且对细胞几乎无毒性。使用以下提供的优化步骤对活细胞染色后用醛固定，可以部分保留活细胞的染色特征。

本品为ER-Tracker Blue-White DPX，Ex= 374 nm，Em= 430-640 nm，蓝色荧光，属于DapoxylTM(DPX)家族成员之一。DPX系列染料均具有长发射波长、高吸光系数、高量子产量、较大斯托克司频移等特点。但这些染料具有环境敏感性，会随之出现极性增强、最大荧光波长偏移到更高波长处、量子产量下降等现象。

本品为溶于DMSO的1 mM ER-Tracker Blue-White DPX储存液，推荐工作浓度为100 nM-1 μM。

产品性质

运输和保存方法

冰袋运输。≤-20℃避干燥保存，一年效期。避免反复冻融。

注意事项

1）避免反复冻融，可根据单次用量分装保存。避免将本品储存于无霜冰箱。

2）DMSO有毒，请小心操作。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

4）本产品仅作科研用途！

使用方法

本实验方案经牛肺动脉内皮细胞优化，且已被其他常规细胞系验证。但不同的细胞类型其最佳使用条件不同，还需用户根据该方案进行进一步优化。

1. 试剂准备

使用前将ER-Tracker Blue-White DPX回温至室温，并简短离心使该DMSO溶液至管底。

2. 细胞样品处理及染色

2.1 将1 mM ER-Tracker Blue-White DPX储存液按照实验要求稀释至工作浓度，推荐工作浓度100 nM-1µM。建议在不影响实验结果的前提下尽量使用较低浓度探针，以避免由于浓度过高染色导致的假象。

注：使用含Ca2+、Mg2+ Hank’s 平衡盐溶液（HBSS/Ca/Mg）稀释该探针进行染色，可得到最佳实验结果。

2.2 染色

对于贴壁细胞，吸除培养皿中培养基，用HBSS清洗细胞，加入预热的染料工作液于37℃孵育细胞15-30 min。吸除染色液，加入不含探针的新鲜培养液，并在荧光显微镜下观察细胞。
        注：由于ER-Tracker Blue-White DPX探针具有较高光敏感性，会产生波动较大的发射吸收峰值，使用长通DAPI滤光片效果最理想。 另，操作过程中需尽量避光。

细胞如需固定，请参考以下步骤。

3． 细胞固定及透化处理

3.1 固定细胞：用4%甲醛于37℃固定细胞10-20 min。

注：已染色细胞用醛固定后，仅部分ER-Tracker Blue-White DPX留在细胞内，荧光信号会有部分衰减。

3.2 （可选）透化处理：若细胞还需进行后续染色，需对细胞利用0.2% TritonX-100 透化10 min。

3.3 清洗观察细胞：细胞固定后，可用合适缓冲液进行清洗，每次5 min，共2次。镜检即可。

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[1] Zhou C, Li J, Du J, et al. HMGCS1 drives drug-resistance in acute myeloid leukemia through endoplasmic reticulum-UPR-mitochondria axis. Biomed Pharmacother. 2021;137:111378. doi:10.1016/j.biopha.2021.111378(IF:6.530)
[2] Guo X, Lu D, Zhang D, et al. Curved corannulene dually targets mitochondria and endoplasmic reticulum, and initiates apoptosis via localized ROS induction upon light triggering. Mater Sci Eng C Mater Biol Appl. 2020;106:110227. doi:10.1016/j.msec.2019.110227(IF:4.959)
[3] Zhao M , Gao Y , Ye S , et al. A light-up near-infrared probe with aggregation-induced emission characteristics for highly sensitive detection of alkaline phosphatase. Analyst. 2019;144(21):6262-6269. doi:10.1039/c9an01505a(IF:4.019)
[4] Wang XH, Yin S, Ou XH, Luo SM. Increase of mitochondria surrounding spindle causes mouse oocytes arrested at metaphase I stage. Biochem Biophys Res Commun. 2020;527(4):1043-1049. doi:10.1016/j.bbrc.2020.05.037(IF:2.985)

产品描述

ER-Tracker探针是一系列具有细胞膜透过性，对活细胞内质网具有高度选择性的探针，不像传统的DiOC6(3)，该系列探针几乎不对线粒体着色，且在较低浓度即可实现对内质网的染色，且对细胞几乎无毒性。使用以下提供的优化步骤对活细胞染色后用醛固定，可以部分保留活细胞的染色特征。

本品为ER-Tracker Green (BODIPY^® FL Glibenclamide)，由绿色荧光染料BODIPY^® FL和 Glibenclamide 偶联而成，其Ex= 504 nm，Em= 511nm。格列本脲（Glibenclamide, glyburide），一种常用降血糖药物，在胰岛β细胞、胰岛素的分泌、心肌衰竭细胞功能以及心律不齐的研究等方面具有重要科研用途。格列本脲高度结合ATP-敏感型K+通道的磺脲受体，且本受体富集存在内质网上，因此适合用作内质网荧光探针。

本品为溶于DMSO的1mM ER-Tracker Green (BODIPY® FL Glibenclamide)储存液，推荐工作浓度为～1μM。

产品性质

运输和保存方法

冰袋运输。≤-20℃避光干燥保存，至少六个月有效。避免反复冻融。

注意事项

1）避免反复冻融，可根据单次用量分装保存。避免将本品储存于无霜冰箱。

2）DMSO有毒，请小心操作。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

4）本产品仅作科研用途！

使用方法

本实验方案经牛肺动脉内皮细胞优化，且已被其他常规细胞系验证。但不同的细胞类型其最佳使用条件不同，还需用户根据该方案进行进一步优化。

1. 试剂准备

使用前将ER-Tracker Green (BODIPY^® FL Glibenclamide)回温至室温，并简短离心使该DMSO溶液至管底。

2.  细胞样品处理及染色

2.1 将1mM ER-Tracker Green (BODIPY® FL Glibenclamide)储存液按照实验要求稀释至工作浓度，推荐工作浓度为～1µM。建议在不影响实验结果的前提下尽量使用较低浓度探针，以避免由于浓度过高染色导致的假象。

注：使用含Ca2+、Mg2+ Hank’s 平衡盐溶液（HBSS/Ca/Mg）稀释该探针进行染色，可得到最佳实验结果。

2.2 染色

对于贴壁细胞，吸除培养皿中培养基，用HBSS清洗细胞，加入预热的染料工作液于37℃孵育细胞15-30min。吸除染色液，加入不含探针的新鲜培养液，并在荧光显微镜下观察细胞。

细胞如需固定，请参考以下步骤。

3．细胞固定

3.1 固定细胞：用4%甲醛于37℃固定细胞2min。

注：已染色细胞用醛固定后，仅部分ER-Tracker Green (BODIPY^® FL Glibenclamide)留在细胞内，荧光信号会有部分衰减。

3.2 清洗观察细胞：细胞固定后，可用合适缓冲液进行清洗，每次5min，共2次。清洗后可对细胞进行后续封片、镜检或进一步染色。

注：不建议对细胞进行透化处理，因为经Triton X-100透化后，无信号保留。

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Q：我们的 40741 线粒体探针可以用于流式实验吗？

A：可以。

Q：请问做流式用哪个通道检测？

A：PE或FL2通道。

[1] Zhou F, Hong Y, Liang R, et al. Rapid printing of bio-inspired 3D tissue constructs for skin regeneration. Biomaterials. 2020;258:120287. doi:10.1016/j.biomaterials.2020.120287(IF:10.317)
[2] Guo WY, Li RR, Fu YX, et al. Pyroglutamate Aminopeptidase I Promotes Hepatocellular Carcinoma via IL-6/STAT3 Activation as Revealed by a Specific Biosensor. Anal Chem. 2021;93(39):13311-13318. doi:10.1021/acs.analchem.1c03011(IF:6.986)
[3] Li J, Qi F, Su H, et al. GRP75-faciliated Mitochondria-associated ER Membrane (MAM) Integrity controls Cisplatin-resistance in Ovarian Cancer Patients. Int J Biol Sci. 2022;18(7):2914-2931. Published 2022 Apr 11. doi:10.7150/ijbs.71571(IF:6.582)
[4] Zhang XJ, Liu MH, Luo YS, et al. Novel dual-mode antitumor chlorin-based derivatives as potent photosensitizers and histone deacetylase inhibitors for photodynamic therapy and chemotherapy. Eur J Med Chem. 2021;217:113363. doi:10.1016/j.ejmech.2021.113363(IF:6.514)
[5] Yu Z, Zhou J, Ji X, et al. Discovery of a Monoiodo Aza-BODIPY Near-Infrared Photosensitizer: in vitro and in vivo Evaluation for Photodynamic Therapy. J Med Chem. 2020;63(17):9950-9964. doi:10.1021/acs.jmedchem.0c00882(IF:6.205)
[6] Zhang Q, Mao S, Khan M, et al. In Situ Partial Treatment of Single Cells by Laminar Flow in the "Open Space". Anal Chem. 2019;91(2):1644-1650. doi:10.1021/acs.analchem.8b05313(IF:6.042)
[7] Yang Y, Chen HY, Hao H, Wang KJ. The Anticancer Activity Conferred by the Mud Crab Antimicrobial Peptide Scyreprocin through Apoptosis and Membrane Disruption. Int J Mol Sci. 2022;23(10):5500. Published 2022 May 14. doi:10.3390/ijms23105500(IF:5.924)
[8] Wang H, Zhang Z, Guan J, Lu W, Zhan C. Unraveling GLUT-mediated transcytosis pathway of glycosylated nanodisks. Asian J Pharm Sci. 2021;16(1):120-128. doi:10.1016/j.ajps.2020.07.001(IF:3.968)

产品描述

ER-Tracker探针是一系列具有细胞膜透过性，对活细胞内质网具有高度选择性的探针，不像传统的DiOC6(3)，该系列探针几乎不对线粒体着色，且在较低浓度即可实现对内质网的染色，且对细胞几乎无毒性。使用以下提供的优化步骤对活细胞染色后用醛固定，可以部分保留活细胞的染色特征。

本品为，由红色荧光染料BODIPY^® TR和 Glibenclamide 偶联而成，其Ex= 587 nm，Em= 615 nm。格列本脲（Glibenclamide, glyburide），一种常用降血糖药物，在胰岛β细胞、胰岛素的分泌、心肌衰竭细胞功能以及心律不齐的研究等方面具有重要科研用途。格列本脲高度结合ATP-敏感型K+通道的磺脲受体，且本受体富集存在内质网上，因此适合用作内质网荧光探针。

本品为溶于DMSO的1 mMER-Tracker Red (BODIPY^® TR Glibenclamide)储存液，推荐工作浓度为～1 μM。

产品性质

运输和保存方法

冰袋运输。≤-20℃避光干燥保存，至少六个月有效。避免反复冻融。

注意事项

1）避免反复冻融，可根据单次用量分装保存。避免将本品储存于无霜冰箱。

2）DMSO有毒，请小心操作。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

4）本产品仅作科研用途！

使用方法

本实验方案经牛肺动脉内皮细胞优化，且已被其他常规细胞系验证。但不同的细胞类型其最佳使用条件不同，还需用户根据该方案进行进一步优化。

1. 试剂准备

使用前将ER-Tracker Red (BODIPY^® TR Glibenclamide)回温至室温，并简短离心使该DMSO溶液至管底。

2.  细胞样品处理及染色

2.1 将1 mM ER-Tracker Red (BODIPY^® TR Glibenclamide)储存液按照实验要求稀释至工作浓度，推荐工作浓度为～1 µM。建议在不影响实验结果的前提下尽量使用较低浓度探针，以避免由于浓度过高染色导致的假象。

注：使用含Ca2+、Mg2+ Hank’s 平衡盐溶液（HBSS/Ca/Mg）稀释该探针进行染色，可得到最佳实验结果。

2.2 染色

对于贴壁细胞，吸除培养皿中培养基，用HBSS清洗细胞，加入预热的染料工作液于37℃孵育细胞15-30 min。吸除染色液，加入不含探针的新鲜培养液，并在荧光显微镜下观察细胞。

细胞如需固定，请参考以下步骤。

3．细胞固定

3.1 固定细胞：用4%甲醛于37℃固定细胞2 min。

注：已染色细胞用醛固定后，仅部分ER-Tracker Red (BODIPY^® TR Glibenclamide)留在细胞内，荧光信号会有部分衰减。

3.2 清洗观察细胞：细胞固定后，可用合适缓冲液进行清洗，每次5 min，共2次。清洗后可对细胞进行后续封片、镜检或进一步染色。

注：不建议对细胞进行透化处理，因为经Triton X-100透化后，无信号保留。

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Q: 请问HBSS 里面的钙镁离子在里面起到什么作用？

A: 有利于维持细胞状态，利于后续的染色。

Q: 请问固定后的死细胞还能染上吗？

A: 该探针主要染的是活细胞的内质网，固定样本基本染不上色。

Q: 染色之后可以加抗荧光淬灭剂防止荧光淬灭吗？

A: 活细胞的染色，不需要加抗荧光淬灭封片液。

Q: 固定后的荧光还会淬灭么？或者说可以维持多长时间？

A: ER-Tracker Red 按照后附的使用说明染色后，用甲醛等固定后染色效果可以被部分保留， 荧光均会有淬灭的现象的。具体的荧光维持时间这边没有数据给您参考。

Q: 请问 mito-tracker green 和 ER-traker red 是同时染还是分开依次染，染完后荧光可持续多久（也就是在多长时间内还可以检测）？

A: 建议分开依次染色，荧光均存在淬灭的现象，染色完建议尽快检测，一般 1 小时内检测荧光强度基本变化不大。

[1] Zhou F, Hong Y, Liang R, et al. Rapid printing of bio-inspired 3D tissue constructs for skin regeneration. Biomaterials. 2020;258:120287. doi:10.1016/j.biomaterials.2020.120287(IF:10.317)
[2] Wu T, Wang X, Cheng J, et al. Nitrogen-doped graphene quantum dots induce ferroptosis through disrupting calcium homeostasis in microglia. Part Fibre Toxicol. 2022;19(1):22. Published 2022 Mar 24. doi:10.1186/s12989-022-00464-z(IF:9.400)
[3] Fu C, Zhan J, Huai J, et al. Furin-instructed molecular self-assembly actuates endoplasmic reticulum stress-mediated apoptosis for cancer therapy. Nanoscale. 2020;12(22):12126-12132. doi:10.1039/d0nr00151a(IF:7.790)
[4] Li B, Huang J, Liu J, et al. Discovery of a Nur77-mediated cytoplasmic vacuolation and paraptosis inducer (4-PQBH) for the treatment of hepatocellular carcinoma. Bioorg Chem. 2022;121:105651. doi:10.1016/j.bioorg.2022.105651(IF:5.275)