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无血清培养基使用方法

发表于由

经历了天然培养基、合成培养基后，无血清培养基和无血清培养成为当今细胞培养领域的一大趋势。采用无血清培养可降低生产成本，简化分离纯化步骤，避免病毒污染造成的危害。

    无血清培养基是不需要添加血清就可以维持细胞在体外较长时间生长繁殖的合成培养基。但是它们可能包含个别蛋白或大量蛋白组分。虽然基础培养基加少量血清所 配制的*培养基可以满足大部分细胞培养的要求，但对有些实验却不适合，如观察一种生长因子对某种细胞的作用，这时需要排除其他生长因子的干扰作用。而血 清中可能含有各种生长因子；又如需要测定某种细胞在培养过程中分泌某种物质的能力；或者要大规模的培养某种细胞，以获得它们的分泌产物。因此研制出无血清 培养基一直是生物科学工作者努力的目标。

无血清培养基的基本配方

基本成分为基础培养基及添加组分两大部分。用于生物制药和疫苗生产的细胞在体外培养时，多数呈贴壁生长或兼性贴壁生长；而当其在无血清、无蛋白培养基中生长时，由于缺乏血清中的各种粘附贴壁因子如纤粘连蛋白、层粘连蛋白、胶原、玻表粘连蛋白，细胞往往以悬浮形式生长。

添加组分包括以下几大类物质：

（1）促贴壁物质：许多细胞必须贴壁才能生长，这种情况下无血清培养基中一定要添加促贴壁和扩展因子，一般为细胞外基质，如纤连蛋白、层粘连蛋白 等。它们还是重要的分裂素以及维持正常细胞功能的分化因子，对许多细胞的繁殖和分化，起着重要作用。纤连蛋白主要促进来自中胚层细胞的贴壁与分化，这些细 胞包括成纤维细胞、肉瘤细胞、粒细胞、肾上皮细胞、肾上腺皮质细胞、CHO细胞、成肌细胞等。

（2）促生长因子及激素：针对不同细胞添加不同的生长因子。激素也是刺激细胞生长、维持细胞功能的重要物质，有些激素是许多细胞*的，如胰岛素。

（3）酶抑制剂：培养贴壁生长的细胞，需要用胰酶消化传代，在无血清培养基中*须含酶抑制剂，以终止酶的消化作用，达到保护细胞的目的。zui常用的是大豆胰酶；抑制剂。

（4）结合蛋白和转运蛋白：常见如转铁蛋白和牛血清白蛋白。牛血清白蛋白的添加比较大，可增加培养基的粘度，保护细胞免受机械损伤。许多旋转式培养的无血清培养基都含有牛血清白蛋白。

（5）微量元素：硒是zui常见的。

使用方法

目前，血清仍是动物细胞培养中zui基本的的添加物，尤其是在原代培养或者细胞生长状况不良时，常常会先使用有血清的培养液进行培养，待细胞生长旺盛以 后，再换成无血清培养液。细胞转入无血清培养基培养要有一个适应过程，一般要逐步降低血清浓度，从10%减少到5%，3%，1%，直至无血清培养。在降低 过程中要注意观察细胞形态是否发生变化，是否有部分细胞死亡，存活细胞是否还保持原有的功能和生物学特性等。在实验后这些细胞一般不再继续保留，很少有细 胞能够长期培养于无血清培养基而不发生改变的。细胞转入无血清培养之前，要留有种子细胞，种子细胞按常规培养于含血清的培养基中，以保证细胞的特性不发生 变化。

为了使细胞适应无血清培养，关键的是使所培养细胞：
●处于对数生长中期
●>90% 活细胞率
●适应时以较高的起始细胞接种

有两种方法使细胞适应无血清培养基:

1. 直接适应——细胞从添加血清的培养基转换到无血清培养基中。
一些类型细胞可直接从包含血清的培养基适应无血清培养基。对于直接适应，接种细胞密度应该:2.5×105~3.5×105细胞/ml。当细胞密度达到 1×106~3×106细胞/ml时，传代培养细胞。当细胞密度在培养4到7天后达到2×106~4×106细胞/ml时，细胞*适应了无血清培养基。 每隔3~5天，当细胞密度达到1×106~3×106细胞/ml，细胞活率在90％时，贮备的适应了无血清培养基的细胞培养物应该再次传代培养。

2. 连续适应——分好几步把细胞从添加血清的培养基转换到无血清培养基（SFM）中，与直接适应相比较，连续适应趋向对于细胞更加温和一些。
●以2倍正常接种密度接种生长活跃的细胞培养物到75%有血清培养基：25％SFM 混合培养基中，传代培养。
●当细胞密度>5×105细胞/ml时，以2×105到3×105细胞/ml细胞密度，在有血清培养基：SFM为50∶50的混合培养基中传代培养。
●以2×106到3×106细胞/ml细胞密度，25％有血清培养基和75% SFM中传代培养。
●当细胞密度达到1×106到3×106细胞/ml（接种后4到6天），在100％SFM培养基中传代培养。
●每隔3到5天，当细胞密度达到1×106到3×106细胞/ml，细胞活率在90％时，贮备的适应了无血清培养基的细胞培养物应该再次传代培养。
建议备份前一次混合培养的培养物，直到每一次细胞适应了新的混合培养基。每一次减少血清前，可能需要在SFM/有血清混合培养基中进行几次传代。

  在适应过程中，不要让细胞生长过度。这将增加选择亚群的可能性。需要注意，与有血清培养基相比，大部分SFM包含非常少的蛋白质，因而更易于受外界因 素的影响。细胞培养适应替代血清：许多细胞利用连续适应方法能很好的适应，用包含FBS的的培养基和包含有替代血清的培养基1∶1（v∶v）的混合培养基 培养细胞。通过下列的混合培养基的方式，连续几代减少当前培养基的量：1∶2，1∶4，1∶16和100％替代培养基。每次适应改变血清比例时，传代细胞 2到3次。培养可以直接从FBS转换到替代血清。一开始就使用相同于FBS的浓度的替代物或血清，生长的延迟可能会发生，4允许进行2到3次的传代，使生 长率恢复到以前的水平。特别需要强调的是：配制无血清培养液必须使用高质量的水，如石英玻璃蒸馏器经三次蒸馏或超纯水净化装置制备的水。因为无血清培养基 缺乏了血清中天然成分中和毒素、保护细胞的大分子，既便水中的有毒物质含量甚微，也可能对细胞产生致死性损害。这是无血清培养能否成功的关键因素之一。

无血清培养基的优点
 
●增加确定性
●性能更加一致
●容易进行纯化和下游加工
●细胞功能的评估
●增强生长和/或产量
●生理反应性的较好对照
●增强细胞内中介物的检测

上海金畔生物科技有限公司

Sigma去糖基化试剂盒 使用心得

发表于由

Sigma去糖基化试剂盒

Sigma-Aldrich 的天然蛋白去糖基化试剂盒（Native Protein Deglycosylation Kit，货号NDEGLY）可在天然条件下去除糖蛋白上的N连接寡糖。糖基化蛋白修饰通常位于折叠蛋白中不容易接近的位置，因此在未变性的情况下，不大可 能通过标准的肽N- 糖苷酶 F（PNGase F）处理来去除。如果您的下游分析需要折叠蛋白（如酶学分析或蛋白相互作用分析），那么这个试剂盒也许适合您。

此试剂盒包含了内糖苷酶F1、F2和F3，以及相应的反应缓冲液。与PNGase F相比，这些内糖苷酶对蛋白构象没那么敏感，更适合在蛋白未变性的情况下去除各种N连接寡糖。这三种内糖苷酶有着不同的连接特异性。F1能够去除低聚甘露 糖和混合寡糖结构，而F2和F3则分别能去除两个分支和三个分支的结构。

此试剂盒在去糖基化上的效果如何呢？美国西北大学的博士生A. Caulfield介绍了他的使用心得。

据Caulfield介绍，他们想要确定目的蛋白在去糖基化之后的生物学活性。糖基化的 去除可通过Western blot来评估，即蛋白条带的分子量减少。他们的目的蛋白包含N连接糖基化。此蛋白在HEK 293细胞中产生，并利用其N端的FLAG标签来纯化。之前他们试过PNGase，但无法让目的蛋白去糖基化。

在这一实验中，他们将2 ug目的蛋白与0.02个单位的内糖苷酶F1、F2或F3及其相应的缓冲液混合，在37°C孵育4小时。之后通过标准的SDS-PAGE和Western blot来评估去糖基化的程度。

正如他们预计的那样，蛋白被去糖基化，且各个样品之间的结果相当一致。有趣的是，内糖苷酶F1对他们的蛋白起作用，而F2和F3则*没效果。Caulfield认为，了解哪种酶能使蛋白去糖基化，将带来一些有关寡糖链性质的信息。

Caulfield认为这一试剂盒简单易用，适用于所有研究蛋白糖基化的研究人员。当然，随着蛋白底物不同，反应条件可能也需要调整。

Sigma-Aldrich提供了多种去糖基化试剂盒，包括GlycoProfile I In-Gel Deglycosylation Kit、GlycoProfile II Enzymatic In-Solution Deglycosylation Kit、GlycoProfile IV Chemical Deglycosylation Kit等，适用于溶液或PAGE胶中的糖蛋白，与下游多个分析（如质谱分析或功能研究）兼容。

尼龙毛柱使用方法

发表于由

上海金畔生物科技有限公司尼龙毛/尼龙毛柱专业代理

如果您需要产品折扣和，欢迎点击与我们相关工作人员

 

尼龙毛柱​操作方法：

 

　1.秤取1.5g尼龙毛装入20-30ml玻璃容器或注射器内，填料的体积控制在15毫升左右。因为尼龙毛的松紧关系到T细胞的回收率，所以要特别注意。注射器下端配接5厘米左右长的带有弹簧夹的橡皮管。

   2. 加入大量的PBS平衡柱子后，用铝箔包裹，并置于适当的容器内，高压灭菌15分钟。

（商品化尼龙毛柱以上步骤可以省略，经过PBS平衡后可以直接进行下列步骤。）

　3. 灭菌的尼龙毛柱垂直固定后放于超净台内，顶部以铝箔覆盖，避免污染。

　4. 注射器下端，橡皮管，弹簧夹用*消毒。打开弹簧夹调节流速在大约3-4ml/min。

　5.首先，加入3-4倍柱体的无血培养基平衡，之后加入相同体积的含有血清的培养基平衡（上述培养基都要预热），zui后等培养基液面接近柱填料液面时，关闭弹簧夹。

　6. 样本细胞悬浮液浓度控制在约5×108cells/ml，上样量一般是1/3-1/5柱体积。样品加入之后，再加入少量培养液，然后关闭弹簧夹。

　7.覆盖铝箔，垂直固定，置于消毒过的容器中，于培养箱内37℃孵育1小时。此过程中柱子必须要保持垂直状态。

　8. 从培养箱中拿出柱子，置于超净台内，除去铝箔。接上按照4.中的方法消毒的弹簧夹和橡皮管，加入适当体积经37℃预热的培养基，打开弹簧夹控制流速在3-4 mL/min，流出约5ml之后，流出的培养液基变得不透明，此时其中含有T细胞，收集这一部分培养基。

　9. 基本上何时结束收集取决于流出液体中细胞的浓度，实际上，收集的量达到一个柱体积时就可以停止收集，因为即使收集更多的量，回收率几乎不会增加。

　10.上述操作后，细胞的

　回收率为： 15~20 %

    T细胞含量： 85~95 %

　B细胞污染率： 1 5 %

　多数细胞被确定为T细胞。

       （注）收集粘附于尼龙毛上的细胞时，将T细胞收集完毕后的尼龙毛再无菌操作的状态下取出，转移到适当的容器中，用镊子小心的将尼龙毛松开，粘附的细胞可以洗到培养基中。或者将注射器芯插入注射器内，通过压力使的粘附的细胞随着液体流出。

 

尼龙毛柱是免疫学中一种用于分离T细胞的分离柱。忧郁在研究体内及体外的免疫系统时，分离淋巴细胞群是一个关键步骤。而市场上并没有针对B细胞的特异性抗血清，所以分离淋巴细胞中的T细胞并不是十分方便。T细胞尼龙毛分离法利用了尼龙毛对B细胞的亲和力，从而使T细胞在没有严重损伤的情况下达到的足够的纯度。该方法不像流式和磁珠费用昂贵，而且操作简便，所需要的条件也不高，是一种非常实用的方法。

订货信息： 全部现货   75折*

 

21759-1 Nylon Wool Fiber, Sterile   3400 1 pkg polysiences
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18369-10 Nylon Wool Fiber   1054 10g polysiences

 

逆转录酶（AMV）使用说明

发表于由

反转录酶(reverse transcriptase,也可写成逆转录酶) 又称为依赖RNA 的DNA 聚合酶。1970 年Temin 等在致癌RNA 病毒中发现了一种特殊的DNA 聚合酶，该酶以RNA 为模板，以dNTP 为底物，tRNA( 主要是色氨酸tRNA) 为引物，在tRNA 3'-OH 末端上，根据碱基配对的原则，按5'-3'方向合成一条与RNA 模板互补的DNA 单链，这条DNA 单链叫做互补DNA (complementary DNA，CDNA)。

反转录酶（Reverse transcriptase）是以RNA为模板指导三磷酸脱氧核苷酸合成互补DNA（cDNA）的酶。哺乳类C型病毒的反转录酶和鼠类B型病毒的反转录酶都是一条多肽链。鸟类RNA病毒的反转录酶则由两上亚基结构。真核生物中也都分离出具有不同结构的反转录酶。

AMV是一种逆转录酶的名称。amv逆转录酶分离自禽类成髓细胞瘤病毒，其方法由houts等人的方法改进而来。分离得到的酶是分子量为157kd的αβ全酶。amv逆转录酶经高度纯化，*无核酸酶污染。amv逆转录酶可用于cdna合成，也可用于rna和dna的双脱氧测序。amv逆转录酶以总rnd或polya+rnd为模板，具有以rna为模板的dna聚合酶活性，dna为模板的dna聚合酶活性和rnaseh酶活性，

AMV逆转录酶

适反应温度在42-55℃，高可达60℃，如果使用焦磷酸钠，适温度为37-41℃。rtt反应缓冲液根据不同用途可以作为5x或10x反应液使用，同时可抑制rnaseh酶活性。按照标准使用方法可以得到长至10-12kbcdna。rt007amv逆转录酶比普通amv逆转录酶和mmlv逆转录酶能耐受更高的温度和合成更长的cdna。

 

基本资料

编辑

反应温度：42-60℃产物长度：10-12kb

来源：禽畜源，全酶

反应效率：5u/reaction

rnaseh活性：弱，被抑制

特点

编辑

1．高灵敏度2、高得率

3．高达60℃的反应温度可有效打开rna二级结构

4．可合成长至10-12kb的cdna

5．rt反应液可适用不同用途

 

逆转录酶（AMV）使用方法

solarbio逆转录酶

货号：RT1060
规格：200U/500U/1000U
保存:-20℃保存，避免反复冻融，保质期为2年。
产品内容

 

产品简介：
逆转录酶（AMV）从AvianMyeloblastosisVirus分离出来，经过高度纯化，不含核酸酶。可用于合成一链cDNA、制作cDNA探针、RNA转录、测序和RNA的逆转录反应。

逆转录酶（AMV）一个活性单位U定义为：在37℃，10min条件下，使1nmol的脱氧核糖核酸掺入酸性沉淀物质所需的酶量。

使用说明：
合成一链cDNA的步骤
以下试剂客户自己提供
dNTPs(10mM)

引物（OligodT（18）或随机引物或特异性引物

无核酸酶双蒸水
RNA模板
RNase抑制剂

RT反应（20μl体系）：
1．使用前每个组份轻轻混匀，然后2000rpm离心20s；
2．取灭过菌且无核酸酶的0.2mlPCR管，依次加入

2~5μgRNAXμl
引物*1μl

引物*：OligodT18(10μM)或随机引物(50ng/μl)或特异性引物(2μM)】
dNTPs(10mM)1μl
补加无核酸酶的双蒸水至总体积15.5μl

3. 65度保温 5min 然后冰浴5min;

4.往步骤3的pcr管中依次加入下列组份

RNase 抑制剂（40u/ul）    0.5ul

10*AMV reaction buffer   2ul

DTT  (200mm)  1ul

逆转录酶（AMV）     1UL

5.轻轻混匀后，然后2000rpm离心20s

6. 现在42度保温1hr ,然后70度保温15min,

7.上述产物可立即进行下一步的pcr反应或-20度保存。

 

 

AMV 逆转录酶

英文名称： AMV Reverse Transcriptase 总访问： 213
国产/进口： 进口 半年访问： 125
产地/品牌： 美国 Life Sciences Advanced Technologie 产品类别： 其他生物试剂
规       格： 50,000 U
货       号： AMV 007

 

LifeSci AMV 逆转录酶
一、公司介绍
Life Sciences Advanced Technologies 成立于1975年，是世界上一家生产AMV反转录酶的厂商。LSAT的AMV反转录酶因为其高灵敏度和有竞争力的价格体系，已经被许多世界有名的测序公司用于他们的反转录试剂盒产品。
Life Sciences Advanced Technologies在分子诊断试剂和酶类的开发研究上处于世界*地位。
Life Sciences Advanced Technologies决心在两个方面帮助人类疾病的诊断：提供应用基因测序诊断慢性复杂疾病的反转录试剂盒里的AMV反转录酶和传染病现场诊断的NASBA试剂盒。
 
二、产品推荐
1. RTHSA34
产品描述：
作为CDNA文库构建试剂盒的配套产品用于基因测序，浓度为35,000 U/ml。该款反转录酶已经被位居世界前三的的一家测序公司用于他们的反转录试剂盒，可实现17.5 U / cDNA逆转录和低于1 ng的RNA序列转录。
产品优势：
•仅需要0.5ul的酶对于每个cDNA文库试剂盒，有效控制反应体系，用于后续的扩增等
•每个cDNA文库试剂盒只需要17.5U, 相对于其他使用200单位的逆转录酶，可以节省50%以上的成本。
• amv 效率是Invitrogen superscriptase (一款MMLV 反转录酶)的11倍，是NEB和Promega 同款AMV的4倍。
2.AMV 007
产品描述：
主要应用于RT-PCR反应的AMV反转录酶，已广泛应用于许多生物技术实验室，浓度是20,000 U/ml。终端用户使用2.5 U 就能完成一个RT-PCR反应。
产品优势：
•用2.5U就能完成一个反应，有些中国用户，将其20000单位/ml的产品稀释到5000 U /ml，这样客户使用0.5 ul 就能完成一个RT-PCR反应。
•一个RT – pcr反应只需要2.5 U，相比NEB和Promega 的AMV RT，可以节省75%的成本。
3. BRT121
产品描述：
作为一种低无机磷酸盐的反转录酶，适用于进行下游克隆过程中的CDNA合成，因为一般情况下较高的无机磷酸盐浓度对磷酸转移反应有抑制作用。常用的可选浓度为5,000 Units/mL。

PHAGOTEST试剂盒使用说明

发表于由

1. 试剂盒简介
PHAGOTEST试剂盒，用于定量检测全血中白细胞吞噬功能。试剂盒中包括FITC荧光标记的调理大肠杆菌，细胞发生吞噬作用对FITC标记的大肠杆菌进行摄取。采用流式细胞仪测定具有吞噬功能的细胞（粒细胞和单核细胞）总百分以及细胞的吞噬活性（每个细胞吞噬的细菌数目）。
试剂盒可以考察药物是否引起机体细胞吞噬作用改变。异常的吞噬作用通常会发生在多种临床疾病，例如，中性粒细胞自身缺陷，免疫球蛋白及补体缺陷等。先天性缺陷，例如白细胞整合素缺陷，肌动蛋白功能障碍等，均会到导致感染的风险增加以至于引起中性粒细胞吞噬功能的缺陷。获得性缺陷相关的吞噬作用的改变通常发生在外科创伤，糖尿病，肾衰竭，全身性感染和急性胰腺炎等。吞噬功能的降低还会发生在烧伤感染的病人，AIDS病人，老年人，新生儿，采用糖皮质激素或者麻醉药治疗的病人等。
在一些体外或者体内试验中，可以观察到多种免疫调节剂，例如白介素-2，干扰素-γ，植物提取素等可以增强中性粒细胞和单核细胞的吞噬功能。
试剂盒不仅适用于人的血样，同样也适用于大小鼠，兔，狗，牛及其他种属。
2. 材料和试剂
2.1 试剂盒包括以下试剂
 REAG A（ 试剂A）
1x洗液：将1整瓶REAG A粉末溶解在1L的双蒸水中。
 REAG B（试剂B）
1瓶（2mL），1x浓度的稳定且用FITC标记的调理大肠杆菌（E.coli），大约2×109个菌/mL。
 REAG C（试剂C）
1瓶（10 mL），1x浓度的淬灭溶液，用于淬灭在细胞外的细菌荧光表达，蓝色溶液。
 REAG D（试剂D）
1瓶（20 mL）的裂解液（10x储备液浓度）。在使用前用双蒸水按1:10进行稀释，配制成1x的裂解液，用于裂解红细胞和固定白细胞。
 REAG E（试剂E）
1瓶（20 mL），1x浓度的DNA染液（粉色溶液），用于流式细胞仪分析时区别细菌和白细胞。

储存条件和稳定性：试剂盒需要在2-8℃避光条件。使用前将大肠杆菌（REAG B）充分涡旋混匀或者用针抽吸使其分散。试剂内含有防腐剂，但是不会吞噬功能的检测。试剂的有效期同试剂盒包装上标明一致。
2.2 试剂盒未包括以下材料，但需要准备
 血液采集用的肝素化抗凝管。
 12×75 mm的一次性试管（BD公司的Falcon管，货号：352052）和合适数量的试管架。
 500 mL和1000 mL的试剂瓶，用于保存1x洗液和1x裂解液。
 带盖的冰浴盒。
 双蒸水或者注射用水，用于配制1x洗液和1x裂解液。
 合适量程的移液器（20-200 μL, 100-1000 μL），一次性枪头。
 连续加样器和枪头。
 水浴锅。
 数字式温度计。
 涡旋器
 冷冻离心机（配有12×75 mm的吊杯）。
 488 nm激发波长（氩离子激光）的流式细胞仪。
3. 操作过程
2.1 准备
 配制1x洗液。
 根据测试的样本量配制1x裂解液（试剂D）， 2mL/测试样。
 准备冰浴。
 预热水浴锅至37℃，温度必须控制！
 开启流式细胞仪，用校准微球（beads）进行校准。
3.2 样本处理
3.2.1 加样
将肝素化抗凝的全血涡旋混匀后，在5 mL试管（Falcon管）底部各加100 μL全血。一般取2支试管，其中1支为阴性对照管，另1支为测试管。将所有试管放入冰浴中10 min，使血样降低温度至0℃。
注意：勿将血液残留在试管壁上。不要使用EDTA或者柠檬酸抗凝管采集全血。
3.2.2 激活
涡旋混匀已经预冷的大肠杆菌（REAG B），每支试管（即阴性对照管和测试管）中均加入20 μL的REAG B。
3.2.3 孵育
所有试管再次混匀后，阴性对照管置于冰上；测试管则置于37°C水浴中，孵育10 min。孵育时间和温度必须严格监控，水浴箱必须盖住
3.2.4 淬灭
孵育结束后，将同一试管架上所有样本同时拿出水浴箱，放置于冰上阻止吞噬过程，在所有试管加入100 μL冰冷的淬灭溶液（REAG C），冰上操作，涡旋混匀。
3.2.5 洗涤
每支试管加入3 mL 1x洗液（REAG A），涡旋混匀，离心细胞（5 min，250xg，2-8°C）。去除上清液。
再洗一次。每支试管加入3 mL 1x洗液（REAG A），涡旋混匀，离心细胞（5 min，250xg，2-8°C）。去除上清液。
3.2.6 裂解和固定
每支试管加入2 mL预热至室温的1x 裂解液（REAG D），涡旋混匀，室温避光孵育20 min。离心（5 min，250xg，2-8°C），去除上清液。
3.2.7 洗涤
每支试管加入3 mL 1x洗液（REAG A），涡旋混匀，离心细胞（5 min，250xg，2-8°C）。去除上清液。
3.2.8 DNA染色
每支试管加入200 μL DNA染液（REAG E），混匀，避光冰浴10 min后，在60 min内完成流式细胞仪分析。
4. 流式细胞仪分析
采用蓝绿激发光的488nm的氩离子激光器。
 设定1个gate在FL2的直方图（红色荧光），圈定含有人类二倍体细胞相同DNA的细胞群（用于排除细菌，见英文原版图Fig. A）
每个样本收集10,000-15,000 白细胞。
 数据评估
对发生吞噬作用细胞（粒细胞和单核细胞）的百分比和其平均荧光强度（细胞吞噬细菌数量）进行分析。在散点图 lin FSC/lin SSC中圈定所要检测细胞群（粒细胞，单核细胞），见英文原版图Fig.2A，2C；并对其绿色荧光强度的FL1的直方图进行分析，见英文原版图Fig.2B，2D。
阴性对照管（在FL1坐标轴上设定maker，使1~3%的细胞在阳性区域。
测试管中发生吞噬作用的细胞显示在marker内，为的阳性细胞，平均荧光强度与每个白细胞吞噬的细菌数量相关。
5. 注意事项（Remarks）
 肝素化抗凝的全血需要在采集后24 h进行处理，在处理前在室温条件下保存。
 嗜酸性粒细胞（过敏及寄生虫感染时数量增多）显示自体荧光增长，在0°C 时的阴性对照分析会被显示出来。
 吞噬细胞在37°C的大小和颗粒度会与阴性对照的样本不同，这一点在圈定细胞区域的时候要注意。另外，细胞可能会由于在37°C条件下的自体溶解或者粘附在塑料表面而丢失减少。
 在建立试验方法时，采用重复管是非常有用的。
 提供的试验方法是在*条件下（如，调理的大肠杆菌等）考察样本的吞噬功能。在正常人体给药后进行体内或者体外吞噬功能检测时通常只有一定程度增加。
进行体外试验检测药物作用时，可进行时间依赖性动力学试验（与大肠杆菌孵育2.5或者5 min）或者稀释菌液（1：4或者1:8）
 大肠杆菌已经受调理素的作用过的，但是全血中的血清还会对其有一定的影响。所以当采用除全血样本以外的样本，如HL-60 （人早幼粒白血病细胞），分离的单核细胞，巨噬细胞与大肠杆菌孵育时，孵育体系可加入5-20% 胎牛血清或者人血清。同时也可能有必要延长孵育时间（60 min-240 min）。
 未受调理素作用的FITC标记的大肠杆菌（REAG F，试剂盒未包括），可用于检测病人血清使细菌受调理素作用的能力。
6. 其他限制（Limitations）
 每个实验室需要根据自己实验条件建立的自己的参考值范围。
 样本需要至少有95%的活细胞且需要*被抗凝。含有衰老的细胞和未*抗凝的血样可能导致非特异染色，可能是由于血小板的凝集和死细胞的泄漏的DNA引起的。
 大肠杆菌（大约4 x 107/20μL）与白细胞（在100 μL全血）的比例为50:1（假设白细胞为8000个/μL），比例为80:1（假设白细胞为5000个/μL）。当样本的白细胞数量与正常范围不同时（4000-10000）需要根据其数量加入相应数量的大肠杆菌。
 样本在未加入DNA染液（REAG E）上流式细胞仪检测前，在冰上放置24 h是稳定的，但是荧光强度会系统性的丢失。
7. 关于进行定量分析的重要的说明（important instruction for quantitative analysis）
 吞噬过程是主要依赖于温度，所以在整个样本处理过程中样本的温度，孵育条件的温度是需要严格遵守。温度计应采用可以显示小数点后一位的型号。
 实验的可重复性和标准化操作是非常重要的，所以需要严格按照试剂说明书和自己改动步骤（如果有改动）进行操作。
 任何流式细胞仪的改动都要考虑，因为这会影响到“Geomean”的值，所以使用校准微球（beads）对流式细胞仪进行每日的校准是非常有必要的。
 

dbiosys Montage Opus365使用方法

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dbiosys Montage Opus365使用方法

Antigen Retrieval System
Operator Manual

dbiosys AR365操作流程：
开始运行
1.将电源线插入墙上的插座，确保电源供应
220V–240V交流50Hz/60Hz。这是我们的默认电源
3.确保橡胶密封垫和压力调节器清洁干净
准确定位
2.可能需要一个升压变压器或转换器来转换
来自本地电压和频率220V–240V AC 50Hz/60Hz

Diagnostic BioSystems

开始工作
将500-600ml去离子水添加到可拆卸的加热室中
2.将24个滑架放入抗原回收罐内
可拆卸加热室（4个滑轨/AR罐可安装
容纳）
1.将所需的抗原提取液添加到抗原提取液中
储罐（约200-250ml）
3.将盖子放在仪器上，顺时针转动，直至其锁定
将盖安装到位（锁销应卡入位）
8.数字显示屏将显示第一个循环的运行时间
抗原提取系统
4.确保压力调节器旋钮关闭
5.选择所需循环（使用循环按钮最多5个循环）
温度时间周期
抗原提取系统
6.按下启动按钮以设置温度和正时
温度时间周期
抗原提取系统
7.设置每个循环所需的温度和正时
温度时间周期
抗原提取系统
9.按开始按钮开始跑步
温度时间周期
抗原提取系统
10.等待运行完成
抗原提取系统
完成跑步
1.运行完成后，警报将发出嘟嘟声
2.如果需要在运行中间停止循环，请按下停止按钮。
停止
温度时间周期
抗原提取系统
开始
3.关闭蒙太奇作品的电源™ 365
4.从腔室中取出载玻片并冷却20分钟
在室温下加载到加热室之前的分钟
12.等待5分钟释放压力，或等待20分钟释放压力
在打开盖子之前，应自行释放压力
11.运行完成后，关闭电源

Molzym UMD试管使用方法

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Molzym UMD试管使用方法

液体样本的采集、储存和运输说明

交付的样本储存容器UMD管设计用于储存0.4 mL至2.0 mL新鲜采集的临床样本。可使用UMD试管储存的液体样本包括EDTA或柠檬酸盐稳定的全血、支气管肺泡灌洗(BAL)、腹水  液体，  脑脊髓的  液体  (CSF)，  胸膜的  液体，  和  滑膜的  液体。  以下  UMD试管含有甘油，作为保护细胞免受冷冻破裂的一种手段。

由于检测方法的普遍性和灵敏度，采样是细菌和真菌感染因子下游分子分析的关键步骤。该区域皮肤表面灭菌的国家指南  的穿刺应仔细遵循，以防止皮肤微生物序列扩增产生假阳性信号。

 

储存和稳定性

UMD-试管（不含样品）为  稳定  at  房间  温度  (+18  to  +25°C)  持续36个月。

立即将灌装样本的UMD-管储存在-70至-80 ℃下。灌装管稳定  长达6个月。

 

材料：

  • 无菌注射器
  • 对于血液采样：市售无菌采血管，含抗凝剂（未提供，例如K-EDTA S-Monovette series,Sarstedt,Germany）。
  • 层流工作站。在开始从细胞和DNA中去污之前，进行灭菌和UV辐照。工作期间必须关闭UV。遵循制造商的说明。
  • 1x涡旋仪。
  • 耗材：精密移液器和无菌移液器吸头(1000µl)，用于移取液体样本至UMD试管中；一次性实验服、手套、袖套、Bouffant盖；塑料废物容器和废液（血液）。

 

说明：

  • 对穿刺区域的皮肤表面进行灭菌。
  • 用无菌注射器或无菌商业采集系统采集液体样品。
  • 使用含抗凝剂的采血管采集血样。颠倒采血管数次，混匀。不能使用凝结的血液。
  • 在无菌条件下将样本直接转移至UMD试管中，或将注射器或采集管运输至实验室进行立即处理。
  • 在无菌条件下（在层流工作站下操作），用移液管吸取0.4 mL至2.0 mL液体样品至UMD试管中；仅使用经过灭菌的消耗品和手套，以防止污染。

请勿使UMD管过载，多只能使用2.0 mL！

  • 全速涡旋UMD试管10-15秒。将样本与甘油混合直至均质化非常重要。
  • 记录试管上显示的样品ID或用自己的样品ID标记试管
  • 立即将灌装后的UMD试管置于-70 °C至-80 °C条件下储存长达6个月。
  • 将样本置于干冰上，在适当的聚苯乙烯箱中运输至UMD试管中。请每天使用5 kg干冰运输。

incyto ISF-361-3使用方法

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incyto使用BT（生物技术），NT（纳米技术）和IT（信息技术）的各种方法研究细胞。INCYTO是通过整合这些技术实现的下一代分析/实验仪器的新品牌。

incyto ISF-361-3使用方法

SpheroFilm

 

ISF-361-3 (Well I.D. : 300㎛)

Gallery 1

 

  • ISF-361-3 (Well I.D. : 300㎛)

 

 

 

 

 

上海金畔生物售后保障

保证

上海金畔生物所有产品都是自运营的，我们已经跟国外多家厂方建立品牌推广合作关系,获得对方的支持和；确保货物的来源； 正规报关，提供13%增值税发票。

及时交付

上海金畔生物的运营团队都是有着多年经验的成员，他们熟悉海外采购、仓储物流、报关等环节；上海金畔生物的进口速度比传统企业提高了50%以上， 部分产品甚至能做到7-10天到货。

轻松采购

上海金畔生物的价格是真实透明的，并且具有很大的价格优势，不需要繁杂的询价比价；

售后申请

上海金畔生物提供的产品在使用过程中如因产品质量问题有售后需求时， 上海金畔生物产品顾问会时间为您处理。

gracebio硅胶隔离器使用说明书

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 gracebio硅胶隔离器使用说明书

1.去除两个表面的聚乙烯内衬，并将硅胶置于不粘表面之上，例如Kimwipe。将内衬留在一个表面上不允许硅胶符合玻璃表面的形状，并可能导致泄漏。检查粘贴在隔离器上的材料表面是否存在微粒，如果存在，使用一片胶带将其去除。
2.将玻璃显微镜载玻片或盖玻片放在硅胶垫片上，压在玻璃上形成密封。通过玻璃检查密封性，并局部按压玻璃以清除任何残留气泡。请勿按压硅胶表面，因为这可能使材料变形，从而使玻璃的密封件松弛并破裂。当应用玻璃以45度角降低其以轻轻挤出玻璃和硅胶之间的空气时，也可能有帮助，注意不要拉伸硅胶。
3.将标本和/或试剂添加到隔离区域。从边缘开始处理滑块，注意不要用手指接触硅胶垫片，因为这可能会使密封松动。
4.轻轻放入有盖的器皿中，防止蒸发。

 5.从载玻片和盖玻片上取下硅胶隔离器非粘性硅胶隔离器只需将其剥离，就可以很容易地从载玻片或盖玻片上取下。
通过缓慢小心地将其取下，可以从载玻片上取下粘性硅胶隔离器，以避免打破玻璃。
注意：如果您的应用需要使用粘合剂隔离器，建议使用载玻片代替盖玻片（粘合剂隔离器不能从玻璃盖玻片上取下）。
非粘性硅胶隔离器对潮湿和干燥表面均密封良好。在干燥的玻璃表面上形成密封。硅胶隔离器可以作为增加隔离器深度的一种方法。
用清洁剂和水清洗，清洁非粘性隔离器，以供重复使用。储存时干净且不起毛。
可使用胶带对硅胶表面进行“点清洗”。

 

应用领域

  • 高分辨率显微镜  
  • 荧光成像
  • 免疫组织化学
  • 细胞培养

 

CultureWell™可重复使用的垫片

CW-2R-1.0，直径2-15mm X深度1mm，250-400UL，仅垫片，非灭菌-10包

$ 22.00

SKU：103210-S

 10包

 试用装2件

 

confirmbiosciences NicConfirm使用方法

发表于由

confirmbiosciences NicConfirm使用方法

使用 NicConfirm®，很容易保持无烟环境。

为了获得快速准确的结果，NicConfirm® 是先进的尼古丁检测解决方案。口拭子药物检测用于尼古丁代谢物的即时检测正变得越来越流行。我们的非侵入性 NicConfirm® 唾液检测可快速识别药物滥用，且样本掺假风险为零。

 

 

这种定性唾液药物测试在 10 min 内检测尼古丁代谢产物可替宁的存在。NicConfirm® 可在直接监督下使用，以消除标本掺假风险。

 

产品运输尺寸

• 16″x 14″x 6″ 英寸-2 lb（一盒 = 25 件）

• 18″x 17″x12″ 英寸-15 lb（四个包装盒 = 100 件装置）

 

使用说明：

开封前将小袋恢复至室温。从密封袋中取出试验器械并尽快使用。

 

使用提供的采样拭子，从密封袋中取出拭子，让献血者在口腔内（脸颊、口香糖、舌头上下）清扫数次，然后将拭子留在口中，直至采样拭子上的指示窗显示饱和度指示条上的颜色。(a)

 

将试验器械放在干净平整的表面上。从口腔中取出采样拭子，并首先将海绵拧入筛选装置中。轻轻缓慢旋转，直至收集器盖与器械紧密密封。(b)

 

试验过程中，保持试验器械直立并置于平整表面上。等待线条颜色信号出现在结果区域。(c)