标签归档：ultranuclease

UltraNuclease（M） ELISA Kit

发表于由

UltraNuclease（M） ELISA Kit

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

 

UltraNuclease (M) ELISA Kit是一款针对Benzonase®核酸内切酶的ELISA残留检测试剂盒，该试剂盒能够特异性检测工艺中残留的Benzonase®核酸内切酶。

本试剂盒应用双抗夹心酶联免疫检测（ELISA）的实验原理，将Reference Standard（36702-B）和待测样品加入预包被抗Benzonase®核酸内切酶抗体的Pre-coated microtiter strips（36702-A），然后加入稀释后的生物素标记的酶检测抗体（36702-C），最后加入 Streptavidin-HRP（SA-HRP）（36702-D），形成抗体+抗原+抗体‐Biotin+ SA‐HRP 复合物，洗板后加入 TMB Substrate（36702–H）显色。TMB 在 HRP 酶的催化下由无色转化成蓝色并在Stop Solution（36702-I）的作用下最终转换成黄色。黄色的深浅与样品中被检测到的酶量呈正相关。

 

产品信息

货号

36702ES48 / 36702ES96

规格

48 T / 96 T

检测范围

0.047-3 ng/mL

检测方法

双抗夹心法

检测时长

3.5小时

灵敏度

0.044ng/mL

回收率

75 – 125%

板内差

<10%

板间差

<15%

 

实验数据

  1. 标曲数据

典型的参考标准曲线如下（以下标准曲线图仅供参考，应以同次实验标准品所绘标准曲线计算样本含量）：

UltraNuclease（M） ELISA Kit

图1：典型标准曲线图

表1 典型标准曲线数据

标曲（ng/mL）

OD

平均OD

3.000

2.353

2.328

2.340

1.500

1.502

1.500

1.501

0.750

0.891

0.886

0.888

0.375

0.492

0.513

0.503

0.188

0.291

0.309

0.300

0.094

0.181

0.191

0.186

0.047

0.120

0.118

0.119

0.000

0.081

0.073

0.077
  1. 检测流程图

 

UltraNuclease（M） ELISA Kit

图2：实验步骤流程简图

 

Ver.CN20230605

UltraNuclease（M） ELISA Kit

暂无内容

UltraNuclease（M） ELISA Kit

暂无内容

 

UltraNuclease (M) ELISA Kit是一款针对Benzonase®核酸内切酶的ELISA残留检测试剂盒，该试剂盒能够特异性检测工艺中残留的Benzonase®核酸内切酶。

本试剂盒应用双抗夹心酶联免疫检测（ELISA）的实验原理，将Reference Standard（36702-B）和待测样品加入预包被抗Benzonase®核酸内切酶抗体的Pre-coated microtiter strips（36702-A），然后加入稀释后的生物素标记的酶检测抗体（36702-C），最后加入 Streptavidin-HRP（SA-HRP）（36702-D），形成抗体+抗原+抗体‐Biotin+ SA‐HRP 复合物，洗板后加入 TMB Substrate（36702–H）显色。TMB 在 HRP 酶的催化下由无色转化成蓝色并在Stop Solution（36702-I）的作用下最终转换成黄色。黄色的深浅与样品中被检测到的酶量呈正相关。

 

产品信息

货号

36702ES48 / 36702ES96

规格

48 T / 96 T

检测范围

0.047-3 ng/mL

检测方法

双抗夹心法

检测时长

3.5小时

灵敏度

0.044ng/mL

回收率

75 – 125%

板内差

<10%

板间差

<15%

 

实验数据

  1. 标曲数据

典型的参考标准曲线如下（以下标准曲线图仅供参考，应以同次实验标准品所绘标准曲线计算样本含量）：

UltraNuclease（M） ELISA Kit

图1：典型标准曲线图

表1 典型标准曲线数据

标曲（ng/mL）

OD

平均OD

3.000

2.353

2.328

2.340

1.500

1.502

1.500

1.501

0.750

0.891

0.886

0.888

0.375

0.492

0.513

0.503

0.188

0.291

0.309

0.300

0.094

0.181

0.191

0.186

0.047

0.120

0.118

0.119

0.000

0.081

0.073

0.077
  1. 检测流程图

 

UltraNuclease（M） ELISA Kit

图2：实验步骤流程简图

 

Ver.CN20230605

UltraNuclease（M） ELISA Kit

暂无内容

UltraNuclease（M） ELISA Kit

暂无内容

全能核酸酶(同Benzonase核酸酶)|UltraNuclease GMP-grade-

发表于由

全能核酸酶(同Benzonase核酸酶)|UltraNuclease GMP-grade-金畔生物

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

UltraNuclease（全能核酸酶），又称非限制性核酸内切酶、广谱核酸酶；是一种来源于Serratia Marcescen的非特异性核酸内切酶，可在链内任意核苷酸间进行切割，将核酸完全消化成2-5个碱基长度的5'-单磷酸寡核苷酸，能够在非常广泛的条件下（6 M Urea，0.1 M Guanidine HCl，0.4% Triton X–100，0.1% SDS，1 mM EDTA，1 mM PMSF）降解各种形式的（双链，单链，线状，环状，天然或变性）DNA和RNA，广泛用于去除生物制品中的核酸。

本品经基因工程改造在Escherichia coli (E. coli)中表达纯化并在GMP环境下制备，不仅可在科学研究中降低细胞上清和细胞裂解液的粘度，提高蛋白纯化效率及功能研究；还可以应用在病毒纯化、疫苗生产、蛋白和多糖类制药工业作为宿主残留核酸去除试剂，将宿主残留核酸降至皮克（pg）级别从而提高生物制品功效和安全性；并且可以有效防止细胞治疗和疫苗研究中人外周血单核细胞（PBMC）的结团。

本品以无菌液体酶的形式提供，储存于缓冲液（20 mM Tris-HCl pH 8.0，2 mM MgCl2，20 mM NaCl，50%甘油）中，无色透明液体。

 

产品性质

来源

E. coli

分子量（Molecular Weight）

26.5 kDa

等电点

6.85

纯度（Purity）

≥ 99%（SDS-PAGE）

酶活（Enzyme Activity）

250-300 U/μL

比活（Specific Activity）

≥ 1.5×106 U/mg蛋白

最适pH（Optimum pH）

8.0（工作范围pH 6-10）

最适温度（Optimum Temperature）

37℃（工作范围0-42℃）

辅助因子（Cofactor）

1-10 mM Mg2+

蛋白酶活性（Protease）

阴性

无菌检查（Sterility）

阴性

内毒素（Endotoxin）

< 0.25 EU/1000 U

宿主蛋白残留（Host protein）

< 10 ppm（μg/mL）

储存缓冲液（Storage Buffer）

20 mM Tris-HCl pH 8.0，2 mM MgCl2，20 mM NaCl，50%甘油

活性单位定义（Unit Definition）

在37℃，pH 8.0反应条件下，2.625 mL反应体系中，在30 min内使△A260吸收值变化1.0（相当于完全消化37 μg鲑鱼精DNA成为寡核苷酸）所用的酶量定义为一个活性单位（U）。

 

运输和保存方法

干冰运输。-15℃ ~ -25℃保存，有效期2年。若是打开包装后并4℃放置超过一周，建议过滤除菌防止微生物污染。

 

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

推荐使用条件

条件参数

最佳条件

有效条件

Mg2+

1-5 mM

1-10 mM

pH

8-9

6-10

温度

37℃

0-42℃

DTT

0-100 mM

>0 mM

巯基乙醇

0-100 mM

>0 mM

单价阳离子

0-20 mM

0-150 mM

磷酸根离子

0-10 mM

0-100 mM

在最佳条件下推荐的使用量及处理时间（37℃，2mM Mg2+，pH 8.0）

UltraNuclease用量（终浓度）

处理时间

0.25 U/mL

> 10 h

2.5 U/mL

> 4 h

25 U/mL

30 min

 

使用方法

1、 样本准备

贴壁细胞：去除培养基，用PBS清洗细胞，去除上清。

悬浮细胞：离心收集细胞，用PBS清洗细胞，6,000 rpm 离心10 min，收集沉淀。

大肠杆菌：离心收集菌体，用PBS清洗1次，8,000 rpm 离心5 min，收集沉淀。

2、样品处理

   将收集到的细胞沉淀按照质量（g）与体积（mL）比1：(10~20) 的比例进行裂解处理，也可通过在冰上或室温通过机械或化学方法裂解细胞（1 g细胞约为109个）。

3、酶的添加

1）添加适量MgCl2将反应体系中的Mg2+ 浓度调整在1-5 mM范围内，将pH调整成8-9。

2）按照250 Units消化1 g细胞沉淀的比例添加UltraNuclease，37℃孵育30min以上。也可以跟据上表中的推荐使用量自行选定添加方案，在一定范围内增加酶量，消化所需时间相应减少。

【注】全能核酸酶的酶活受离子浓度、反应温度及pH等因素的影响，初次使用时建议摸索最适浓度。

4、上清获取

以12,000 rpm的转速离心30min获得细胞裂解液上清，再进行后续相关实验。

【注】若溶液为高盐溶液，偏酸性或者偏碱性，含有较高浓度的去垢剂、变性剂，应适当增加酶的用量或延长孵育时间。

HB220729

 

 

Q：全能核酸酶储存条件是什么？

A：保存于-20℃。储存 Buffer：20mM Tris-HCl pH8.0，50 mM NaCl，2mM MgCl2， 50% glycerin。

Q：反应pH 应在什么范围？

A：建议反应体系pH 值为 6~8

Q：反应中需不需要加Mg2+？

A：反应中Mg2+的终浓度为 5~10mM。

Q：样本黏度高，不易过柱，怎么办？

A：细胞破碎后由于含有大量 DNA 和 RNA，黏度很高，过柱不容易。解决的方法有两种：（1）用核酸酶。（2）也可以用高压匀浆。都可以达到降低黏度的作用。差别在于：用核酸酶，DNA 和RNA 可以绛解成小片段或单核苷酸；高压匀浆用机械剪切力将 DNA和 RNA 处理成较大的片断。超声波处理在处理小量表达的时候问题不大，但做大量蛋白表达的时候有困难。核酸酶的另外一个重要应用是：若你的目的蛋白是 DNA 结合蛋白，那么纯化的时候最好先用核酸酶处理。

Q：这个对于细胞培养基该怎么使用呢？Ph改变后会影响酶条件反应条件吧？（你们最优的条件是啥？影响因素多吗？）

A：细胞培养使用步骤可以参考说明书，有详细说明，全能核酸酶影响酶效的因素有很多，一下数据可以参考。

Q：为啥你们的酶活是一个区间？默克是一个大于250u/μl？

A：我我们对于酶活进行了区间测定，为了更准确的使客户有精确使用量，默克的是一个大于250u。

Q：你们的纯度确定和默克的区别？HPLC有什么优势吗？

A：我们的纯度测定是采用高相液相的方式（HPLC），默克的采用是SDS测定，纯度都大于99%。行业一般认为HPLC的方式会比SDS的方式更为准确些。

全能核酸酶(同Benzonase核酸酶)|UltraNuclease GMP-grade-

暂无内容

UltraNuclease（全能核酸酶），又称非限制性核酸内切酶、广谱核酸酶；是一种来源于Serratia Marcescen的非特异性核酸内切酶，可在链内任意核苷酸间进行切割，将核酸完全消化成2-5个碱基长度的5'-单磷酸寡核苷酸，能够在非常广泛的条件下（6 M Urea，0.1 M Guanidine HCl，0.4% Triton X–100，0.1% SDS，1 mM EDTA，1 mM PMSF）降解各种形式的（双链，单链，线状，环状，天然或变性）DNA和RNA，广泛用于去除生物制品中的核酸。

本品经基因工程改造在Escherichia coli (E. coli)中表达纯化并在GMP环境下制备，不仅可在科学研究中降低细胞上清和细胞裂解液的粘度，提高蛋白纯化效率及功能研究；还可以应用在病毒纯化、疫苗生产、蛋白和多糖类制药工业作为宿主残留核酸去除试剂，将宿主残留核酸降至皮克（pg）级别从而提高生物制品功效和安全性；并且可以有效防止细胞治疗和疫苗研究中人外周血单核细胞（PBMC）的结团。

本品以无菌液体酶的形式提供，储存于缓冲液（20 mM Tris-HCl pH 8.0，2 mM MgCl2，20 mM NaCl，50%甘油）中，无色透明液体。

 

产品性质

来源

E. coli

分子量（Molecular Weight）

26.5 kDa

等电点

6.85

纯度（Purity）

≥ 99%（SDS-PAGE）

酶活（Enzyme Activity）

250-300 U/μL

比活（Specific Activity）

≥ 1.5×106 U/mg蛋白

最适pH（Optimum pH）

8.0（工作范围pH 6-10）

最适温度（Optimum Temperature）

37℃（工作范围0-42℃）

辅助因子（Cofactor）

1-10 mM Mg2+

蛋白酶活性（Protease）

阴性

无菌检查（Sterility）

阴性

内毒素（Endotoxin）

< 0.25 EU/1000 U

宿主蛋白残留（Host protein）

< 10 ppm（μg/mL）

储存缓冲液（Storage Buffer）

20 mM Tris-HCl pH 8.0，2 mM MgCl2，20 mM NaCl，50%甘油

活性单位定义（Unit Definition）

在37℃，pH 8.0反应条件下，2.625 mL反应体系中，在30 min内使△A260吸收值变化1.0（相当于完全消化37 μg鲑鱼精DNA成为寡核苷酸）所用的酶量定义为一个活性单位（U）。

 

运输和保存方法

干冰运输。-15℃ ~ -25℃保存，有效期2年。若是打开包装后并4℃放置超过一周，建议过滤除菌防止微生物污染。

 

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

推荐使用条件

条件参数

最佳条件

有效条件

Mg2+

1-5 mM

1-10 mM

pH

8-9

6-10

温度

37℃

0-42℃

DTT

0-100 mM

>0 mM

巯基乙醇

0-100 mM

>0 mM

单价阳离子

0-20 mM

0-150 mM

磷酸根离子

0-10 mM

0-100 mM

在最佳条件下推荐的使用量及处理时间（37℃，2mM Mg2+，pH 8.0）

UltraNuclease用量（终浓度）

处理时间

0.25 U/mL

> 10 h

2.5 U/mL

> 4 h

25 U/mL

30 min

 

使用方法

1、 样本准备

贴壁细胞：去除培养基，用PBS清洗细胞，去除上清。

悬浮细胞：离心收集细胞，用PBS清洗细胞，6,000 rpm 离心10 min，收集沉淀。

大肠杆菌：离心收集菌体，用PBS清洗1次，8,000 rpm 离心5 min，收集沉淀。

2、样品处理

   将收集到的细胞沉淀按照质量（g）与体积（mL）比1：(10~20) 的比例进行裂解处理，也可通过在冰上或室温通过机械或化学方法裂解细胞（1 g细胞约为109个）。

3、酶的添加

1）添加适量MgCl2将反应体系中的Mg2+ 浓度调整在1-5 mM范围内，将pH调整成8-9。

2）按照250 Units消化1 g细胞沉淀的比例添加UltraNuclease，37℃孵育30min以上。也可以跟据上表中的推荐使用量自行选定添加方案，在一定范围内增加酶量，消化所需时间相应减少。

【注】全能核酸酶的酶活受离子浓度、反应温度及pH等因素的影响，初次使用时建议摸索最适浓度。

4、上清获取

以12,000 rpm的转速离心30min获得细胞裂解液上清，再进行后续相关实验。

【注】若溶液为高盐溶液，偏酸性或者偏碱性，含有较高浓度的去垢剂、变性剂，应适当增加酶的用量或延长孵育时间。

HB220729

 

 

Q：全能核酸酶储存条件是什么？

A：保存于-20℃。储存 Buffer：20mM Tris-HCl pH8.0，50 mM NaCl，2mM MgCl2， 50% glycerin。

Q：反应pH 应在什么范围？

A：建议反应体系pH 值为 6~8

Q：反应中需不需要加Mg2+？

A：反应中Mg2+的终浓度为 5~10mM。

Q：样本黏度高，不易过柱，怎么办？

A：细胞破碎后由于含有大量 DNA 和 RNA，黏度很高，过柱不容易。解决的方法有两种：（1）用核酸酶。（2）也可以用高压匀浆。都可以达到降低黏度的作用。差别在于：用核酸酶，DNA 和RNA 可以绛解成小片段或单核苷酸；高压匀浆用机械剪切力将 DNA和 RNA 处理成较大的片断。超声波处理在处理小量表达的时候问题不大，但做大量蛋白表达的时候有困难。核酸酶的另外一个重要应用是：若你的目的蛋白是 DNA 结合蛋白，那么纯化的时候最好先用核酸酶处理。

Q：这个对于细胞培养基该怎么使用呢？Ph改变后会影响酶条件反应条件吧？（你们最优的条件是啥？影响因素多吗？）

A：细胞培养使用步骤可以参考说明书，有详细说明，全能核酸酶影响酶效的因素有很多，一下数据可以参考。

Q：为啥你们的酶活是一个区间？默克是一个大于250u/μl？

A：我我们对于酶活进行了区间测定，为了更准确的使客户有精确使用量，默克的是一个大于250u。

Q：你们的纯度确定和默克的区别？HPLC有什么优势吗？

A：我们的纯度测定是采用高相液相的方式（HPLC），默克的采用是SDS测定，纯度都大于99%。行业一般认为HPLC的方式会比SDS的方式更为准确些。

全能核酸酶(同Benzonase核酸酶)|UltraNuclease GMP-grade-

暂无内容

UltraNuclease全能核酸酶(同benzonase nuclease全能核酸酶)-

发表于由

UltraNuclease全能核酸酶(同benzonase nuclease全能核酸酶)-金畔生物

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品描述

UltraNuclease（全能核酸酶），又称非限制性核酸内切酶、广谱核酸酶；是一种来源于Serratia Marcescen的非特异性核酸内切酶，可在链内任意核苷酸间进行切割，将核酸完全消化成2-5个碱基长度的5'-单磷酸寡核苷酸，能够在非常广泛的条件下（6 M Urea，0.1 M Guanidine HCl，0.4% Triton X-100，0.1% SDS，1 mM EDTA，1 mM PMSF）降解各种形式的（双链，单链，线状，环状，天然或变性）DNA和RNA，广泛用于去除生物制品中的核酸。

本品经基因工程改造在Escherichia coli (E. coli)中表达纯化，纯度≥ 99%，可用于科学研究中降低细胞上清和细胞裂解液的粘度，提高蛋白纯化效率及功能研究，并且可以有效防止细胞治疗和疫苗研究中人外周血单核细胞（PBMC）的结团。

本品以无菌液体酶的形式提供，储存于缓冲液（20 mM Tris-HCl pH 8.0，2 mM MgCl2，20 mM NaCl，50% Glycerol）中，无色透明液体。

 

产品性质

来源

E. coli

分子量（Molecular Weight）

26.5 kDa

等电点

6.85

纯度（Purity）

≥ 99%（HPLC）

酶活（Enzyme Activity）

250-300 U/μL

比活（Specific Activity）

≥ 1.5×106 U/mg蛋白

最适pH（Optimum pH）

8.0（工作范围pH 6-10）

最适温度（Optimum Temperature）

37℃（工作范围0-42℃）

辅助因子（Cofactor）

1-10 mM Mg2+

储存缓冲液（Storage Buffer）

20 mM Tris-HCl pH8.0，2 mM MgCl2，20 mM NaCl，50% Glycerol

活性单位定义（Unit Definition）

在37℃，pH 8.0反应条件下，2.625 mL反应体系中，在30 min内使△A260吸收值变化1.0（相当于完全消化37 μg鲑鱼精DNA成为寡核苷酸）所用的酶量定义为一个活性单位（U）。

 

运输和保存方法

干冰运输。-15℃ ~ -25℃保存，有效期2年。

 

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2）本产品仅作科研用途！

 

推荐使用条件

条件参数

最佳条件

有效条件

 Mg2+

1-5 mM

1-10 mM

pH

8-9

6-10

温度

37℃

0-42℃

DTT

0-100 mM

>0 mM

巯基乙醇

0-100 mM

>0 mM

单价阳离子

0-20 mM

0-150 mM

磷酸根离子

0-10 mM

0-100 mM

在最佳条件下推荐的使用量及处理时间（37℃，2 mM Mg2+，pH 8.0）

UltraNuclease用量（终浓度）

处理时间

0.25 U/mL

> 10 h

2.5 U/mL

> 4 h

25 U/mL

30 min

 

使用方法

1、 样本准备

贴壁细胞：去除培养基，用PBS清洗细胞，去除上清。

悬浮细胞：离心收集细胞，用PBS清洗细胞，6,000 rpm 离心10 min，收集沉淀。

大肠杆菌：离心收集菌体，用PBS清洗1次，8,000 rpm 离心5 min，收集沉淀。

2、样品处理

   将收集到的细胞沉淀按照质量（g）与体积（mL）比1：(10~20) 的比例进行裂解处理，也可通过在冰上或室温通过机械或化学方法裂解细胞（1 g细胞约为109个）。

3、酶的添加

1）添加适量MgCl2将反应体系中的Mg2+ 浓度调整在1-5 mM范围内，将pH调整成8-9。

2）按照250 Units消化1 g细胞沉淀的比例添加UltraNuclease，37℃孵育30min以上。也可以跟据上表中的推荐使用量自行选定添加方案，在一定范围内增加酶量，消化所需时间相应减少。

【注】全能核酸酶的酶活受离子浓度、反应温度及pH等因素的影响，初次使用时建议摸索最适浓度。

4、上清获取

以12,000 rpm的转速离心30min获得细胞裂解液上清，再进行后续相关实验。

【注】若溶液为高盐溶液，偏酸性或者偏碱性，含有较高浓度的去垢剂、变性剂，应适当增加酶的用量或延长孵育时间。

HB220729

Q：稀释后每次用多少量，如何试梯度？起始加多少

A：看不同的实验要求，添加量可以按照 1/100-1/10000 之间。

Q：反应抑制因子有哪些？

A：在含有以下物质，Benzonase 的活性会降低 50%或以上：>150mM 一价阳离子，>100mM  磷酸盐，>100mM  硫酸铵，>100mM  盐酸胍，>0.1%SDS，>1%Triton X-100，>1%Tween 20。

Q：哪些溶液可以作为反应缓冲液？

A：常用生物缓冲液，如TBS、MOPS（pH6-8）等。

Q：怎样灭活 Benzonase 核酸酶？且如何去除？

A：采用 EDTA 螯合金属离子（浓度大于6 mM)会可逆地抑制 Benzonase 核酸酶活性，极端条件会造成不可逆失活，例如：100mM-NaOH，70℃处理 30min 等。Benzonase 核酸酶可采用阴离子交换柱或气相色谱法从目的产物中分离出去，由于这种核酸内切酶及其稳定，建议在终产物要求排除核酸酶的应用中不要使用Benzonase 核酸酶。

Q：全能核酸酶可否用于加入全血中，后续客户用于直接提取核酸，但有些全血会有结块拉丝的情况出现，A260/230比值偏大？

A：我们目前没有客户这样做过，如果为了处理细胞结团，加进去反应后通过换液就可以把全能核酸酶给去掉；工业上病毒纯化中过柱可以把全能核酸酶去掉。您这个加了后进行核酸提取，不能保证全能核酸酶完全去除干净，一旦有残留，提取的核酸都会被切割降解。70℃30min可以灭活，不确定对您血液样本是否有影响，按说明书的条件是1ul全能核酸酶相当于可以处理10的9次方个细胞，200ul全血不知道有多少细胞没做过全血的，无法推荐，您可以拉梯度看看。

 

[1] Lin J, Chen Z, Yang L, et al. Cas9/AAV9-Mediated Somatic Mutagenesis Uncovered the Cell-Autonomous Role of Sarcoplasmic/Endoplasmic Reticulum Calcium ATPase 2 in Murine Cardiomyocyte Maturation. Front Cell Dev Biol. 2022;10:864516. Published 2022 Apr 1. doi:10.3389/fcell.2022.864516(IF:6.684)
[2] Kang D, Liu Y, Song Y, Fang B, Zhang Q, Hu L. Triptolide Shows High Sensitivity and Low Toxicity Against Acute Myeloid Leukemia Cell Lines Through Inhibiting WSTF-RNAPII Complex. Front Oncol. 2022;12:811850. Published 2022 Feb 16. doi:10.3389/fonc.2022.811850(IF:6.244)

产品描述

UltraNuclease（全能核酸酶），又称非限制性核酸内切酶、广谱核酸酶；是一种来源于Serratia Marcescen的非特异性核酸内切酶，可在链内任意核苷酸间进行切割，将核酸完全消化成2-5个碱基长度的5'-单磷酸寡核苷酸，能够在非常广泛的条件下（6 M Urea，0.1 M Guanidine HCl，0.4% Triton X-100，0.1% SDS，1 mM EDTA，1 mM PMSF）降解各种形式的（双链，单链，线状，环状，天然或变性）DNA和RNA，广泛用于去除生物制品中的核酸。

本品经基因工程改造在Escherichia coli (E. coli)中表达纯化，纯度≥ 99%，可用于科学研究中降低细胞上清和细胞裂解液的粘度，提高蛋白纯化效率及功能研究，并且可以有效防止细胞治疗和疫苗研究中人外周血单核细胞（PBMC）的结团。

本品以无菌液体酶的形式提供，储存于缓冲液（20 mM Tris-HCl pH 8.0，2 mM MgCl2，20 mM NaCl，50% Glycerol）中，无色透明液体。

 

产品性质

来源

E. coli

分子量（Molecular Weight）

26.5 kDa

等电点

6.85

纯度（Purity）

≥ 99%（HPLC）

酶活（Enzyme Activity）

250-300 U/μL

比活（Specific Activity）

≥ 1.5×106 U/mg蛋白

最适pH（Optimum pH）

8.0（工作范围pH 6-10）

最适温度（Optimum Temperature）

37℃（工作范围0-42℃）

辅助因子（Cofactor）

1-10 mM Mg2+

储存缓冲液（Storage Buffer）

20 mM Tris-HCl pH8.0，2 mM MgCl2，20 mM NaCl，50% Glycerol

活性单位定义（Unit Definition）

在37℃，pH 8.0反应条件下，2.625 mL反应体系中，在30 min内使△A260吸收值变化1.0（相当于完全消化37 μg鲑鱼精DNA成为寡核苷酸）所用的酶量定义为一个活性单位（U）。

 

运输和保存方法

干冰运输。-15℃ ~ -25℃保存，有效期2年。

 

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2）本产品仅作科研用途！

 

推荐使用条件

条件参数

最佳条件

有效条件

 Mg2+

1-5 mM

1-10 mM

pH

8-9

6-10

温度

37℃

0-42℃

DTT

0-100 mM

>0 mM

巯基乙醇

0-100 mM

>0 mM

单价阳离子

0-20 mM

0-150 mM

磷酸根离子

0-10 mM

0-100 mM

在最佳条件下推荐的使用量及处理时间（37℃，2 mM Mg2+，pH 8.0）

UltraNuclease用量（终浓度）

处理时间

0.25 U/mL

> 10 h

2.5 U/mL

> 4 h

25 U/mL

30 min

 

使用方法

1、 样本准备

贴壁细胞：去除培养基，用PBS清洗细胞，去除上清。

悬浮细胞：离心收集细胞，用PBS清洗细胞，6,000 rpm 离心10 min，收集沉淀。

大肠杆菌：离心收集菌体，用PBS清洗1次，8,000 rpm 离心5 min，收集沉淀。

2、样品处理

   将收集到的细胞沉淀按照质量（g）与体积（mL）比1：(10~20) 的比例进行裂解处理，也可通过在冰上或室温通过机械或化学方法裂解细胞（1 g细胞约为109个）。

3、酶的添加

1）添加适量MgCl2将反应体系中的Mg2+ 浓度调整在1-5 mM范围内，将pH调整成8-9。

2）按照250 Units消化1 g细胞沉淀的比例添加UltraNuclease，37℃孵育30min以上。也可以跟据上表中的推荐使用量自行选定添加方案，在一定范围内增加酶量，消化所需时间相应减少。

【注】全能核酸酶的酶活受离子浓度、反应温度及pH等因素的影响，初次使用时建议摸索最适浓度。

4、上清获取

以12,000 rpm的转速离心30min获得细胞裂解液上清，再进行后续相关实验。

【注】若溶液为高盐溶液，偏酸性或者偏碱性，含有较高浓度的去垢剂、变性剂，应适当增加酶的用量或延长孵育时间。

HB220729

Q：稀释后每次用多少量，如何试梯度？起始加多少

A：看不同的实验要求，添加量可以按照 1/100-1/10000 之间。

Q：反应抑制因子有哪些？

A：在含有以下物质，Benzonase 的活性会降低 50%或以上：>150mM 一价阳离子，>100mM  磷酸盐，>100mM  硫酸铵，>100mM  盐酸胍，>0.1%SDS，>1%Triton X-100，>1%Tween 20。

Q：哪些溶液可以作为反应缓冲液？

A：常用生物缓冲液，如TBS、MOPS（pH6-8）等。

Q：怎样灭活 Benzonase 核酸酶？且如何去除？

A：采用 EDTA 螯合金属离子（浓度大于6 mM)会可逆地抑制 Benzonase 核酸酶活性，极端条件会造成不可逆失活，例如：100mM-NaOH，70℃处理 30min 等。Benzonase 核酸酶可采用阴离子交换柱或气相色谱法从目的产物中分离出去，由于这种核酸内切酶及其稳定，建议在终产物要求排除核酸酶的应用中不要使用Benzonase 核酸酶。

Q：全能核酸酶可否用于加入全血中，后续客户用于直接提取核酸，但有些全血会有结块拉丝的情况出现，A260/230比值偏大？

A：我们目前没有客户这样做过，如果为了处理细胞结团，加进去反应后通过换液就可以把全能核酸酶给去掉；工业上病毒纯化中过柱可以把全能核酸酶去掉。您这个加了后进行核酸提取，不能保证全能核酸酶完全去除干净，一旦有残留，提取的核酸都会被切割降解。70℃30min可以灭活，不确定对您血液样本是否有影响，按说明书的条件是1ul全能核酸酶相当于可以处理10的9次方个细胞，200ul全血不知道有多少细胞没做过全血的，无法推荐，您可以拉梯度看看。

 

[1] Lin J, Chen Z, Yang L, et al. Cas9/AAV9-Mediated Somatic Mutagenesis Uncovered the Cell-Autonomous Role of Sarcoplasmic/Endoplasmic Reticulum Calcium ATPase 2 in Murine Cardiomyocyte Maturation. Front Cell Dev Biol. 2022;10:864516. Published 2022 Apr 1. doi:10.3389/fcell.2022.864516(IF:6.684)
[2] Kang D, Liu Y, Song Y, Fang B, Zhang Q, Hu L. Triptolide Shows High Sensitivity and Low Toxicity Against Acute Myeloid Leukemia Cell Lines Through Inhibiting WSTF-RNAPII Complex. Front Oncol. 2022;12:811850. Published 2022 Feb 16. doi:10.3389/fonc.2022.811850(IF:6.244)