genaxxon M3009.0250说明书
SNP Pol DNA-Polymerase
货号： M3009.0250
运输：湿冰运输，-20°C 储存
SNP Pol DNA 聚合酶可轻松、可靠和快速地特异性区分等位基因，例如 B. 使用 CRISPR/Cas9 设定点突变，检测错误的 CRISPR/Cas9 产品或验证测序结果。SNP Pol DNA 聚合酶高度特异性地识别引物-模板复合物是否错配。错配（点突变）必须位于引物的 3′ 端。因此，突变等位基因可以与野生型等位基因*区分开来——无需测序，因为聚合酶在错配的情况下根本不会扩增。
只需将引物放在假定的点突变上（重要提示：点突变必须位于 3′ 末端），聚合酶将以 * 的准确度检测该区域的错配：如果碱基与引物的 3′ 末端互补在 DNA 上 – 链显示突变而引物没有，则不会发生扩增 – 快速 * 确定！
因此，SNP Pol DNA 聚合酶可用于以简单、省时且经济高效的方式筛选点突变。
变体SNP PolTaq DNA 聚合酶 >具有 5′-3′ 核酸酶活性，因此可以与特定的引物探针一起使用，例如 Taqman® 探针或分子信标。
以*提供一次性测试样品。在德国境内运送时无运费！测试样品价格将在产品订购时退还。
描述
SNP Pol DNA 聚合酶（单核苷酸的高区分度）) 是一种高度选择性的 DNA 聚合酶。专为等位基因特异性鉴别而开发，需要非常高的鉴别率（high discriction）：例如用于等位基因特异性PCR（ASA；AS-PCR）、等位基因特异性引物延伸（AS-PEX）、SNP分析、基因分型或甲基化特异性 PCR (MSP)。许多 DNA 聚合酶耐受错配的引物-模板复合物。另一方面，SNP Pol DNA 聚合酶可以特异性地区分它们（高度区分），并且只提供具有匹配引物对的靶向 PCR 产物！Genaxxon SNP Pol 和 SNP PolTaq DNA 聚合酶使用等位基因特异性 PCR 可以高达 * 区分两个等位基因，并且在简单的 qPCR 之后，可以清楚地说明存在哪些等位基因。
使用等位基因特异性 PCR，可以量化野生型序列池或背景中的突变率。NGS确定的突变频率也可以使用等位基因特异性 PCR 和 SNP Pol DNA 聚合酶进行验证。SNP PolTaq DNA 聚合酶非常适合分析液体活检样本。有了它，可以很好地分析和量化癌症突变的存在和频率。
图片： SNP Pol DNA聚合酶的应用实例
我们建议使用短扩增子（约 60-200 bp）的引物以获得最佳结果。更长的扩增子也是可能的。
在较长的扩增子 >500 bp 的情况下，可能需要添加镁 (+0.5 – 1.5mM)。
故障排除：
PCR 30 个循环后没有条带！
缺失或弱波段情况下的优化过程
– 实时 PCR 方法
– 检查 dNTP 浓度。这应该在 200 到 300 µM 之间（在 PCR 中）。
– 增加循环次数（至少 35，最好等于 40）
测试优化 –
循环次数 在终点检测中，30 次循环并不总是足以生成清晰可见的条带。例如，如果基线少于 200 个 DNA 拷贝。因此，测试应使用实时 PCR 运行，或设置五个平行 PCR，其中一个在五个不同循环后从 PCR 设备中移除（示例如下）。
终点检测：
与 SNP Pol DNA 聚合酶平行设置五个相同的 PCR 反应。
在 20、25、30、35 和 40 个循环时，从循环仪中取出一个 PCR 管，最后将所有五个反应加载到琼脂糖凝胶上。
这可以很容易地查看针对给定应用（起始材料、目标、引物）的 PCR 中的最佳循环数。
使用细胞裂解物的 SNP Pol PCR
动物细胞和大肠杆菌可直接用于使用 SNP Pol DNA 聚合酶的 PCR！不需要单独的裂解或蛋白酶 K 消化。
程序 PCR 方法：
1. 每批 PCR 需要 50 – 500 个细胞！
2. 用引物和缓冲液制备 PCR 混合物并放在冰上！
3. 将挑取的菌落直接放入 10-20µL 水中（无需单独裂解，无需蛋白酶 K 消化），
短暂涡旋（5 秒），然后将此细胞悬液直接加入 PCR 反应混合物中，例如
用于 PCR 的 10µL 细胞悬液 -接近 20µL 总体积。初始变性时间2-3分钟
即可，必要时可延长至5分钟。
每个反应最多 100 个拷贝的基因组 DNA 相对较低，但应该仍然有效。
这种细胞悬液的其余部分也可以冷冻起来进行进一步测试。
可选：
4. 如果可能：进行实时 PCR！
SNP Pol DNA 聚合酶(M3009 >)或(M3061 >)可与非特异性荧光染料（例如来自 Genaxxon 或 SybrGreen® 的Green DNA Dye >）一起用于实时 PCR。当使用特定的 PCR 探针时，只能使用 SNP PolTaq DNA 聚合酶，因为只有它具有 5′-3′ 外切核酸酶活性。
凭借我们的高品质dNTP 作为一组（M3015.4100 和 M3015.0250）>或作为混合物（M3016.1010）>或我们的DNA 标记 >和我们廉价的标准琼脂糖 >我们为您提供更多用于 PCR 的产品。
SNP Pol DNA 聚合酶的应用领域
– 点突变的监测、验证和检测
– 识别正确或错误的 CRISPR/Cas9 产品
– 测序结果的验证/验证
– 突变的量化（例如 NGS 结果）
– 通过等位基因检测 SNP-特异性扩增 (ASA) / 等位基因特异性 PCR
– 亚硫酸氢盐处理的 DNA（CpG 甲基化侧）后的甲基化特异性 PCR (MSP)
– HLA 基因分型
– 微测序
– 使用水解探针的实时 PCR
– 实时多重 PCR
-秀丽隐杆线虫中的 DamID-seq 数据。
Sharma R、Ritler D、Meister P.
秀丽隐杆线虫发育过程中核组织 DNA 腺嘌呤甲基转移酶鉴定分析工具。创世纪。2016 年 2 月 4 日。doi：10.1002/dvg.22925。
– 使用 SNPase DNA 聚合酶进行微测序 SNP 基因分型可以通过以下所述的程序进行：
Lovmar L、Fredriksson M、Liljedahl U、Sigurdsson S、Syvänen AC。
通过微测序和微阵列进行的定量评估揭示了全基因组扩增 DNA 的准确多重 SNP 基因分型。核酸研究 2003；31:e129 。
– HiDi DNA 聚合酶的等位基因特异性错配选择性
Drum M、Kranaster R、Ewald C、Blasczyk R、Marx A (2014) 水生栖热菌 DNA 聚合酶的变体在等位基因和甲基化特异性扩增中的应用具有更高的选择性。公共科学图书馆一号 9(5)：e96640。doi:10.1371/journal.pone.0096640