氨基鬼笔环肽 Amino-Phalloidin鬼笔环肽
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鬼笔环肽（Phalloidin）是一种来源于毒蕈类鬼笔鹅膏（Amanita phalloides）的环状七肽毒素，以高亲和力（Kd= 20 nM）选择性结合于丝状肌动蛋白F-actin，而不会与单体肌动蛋白G-actin结合，通常用来标记组织切片、细胞培养物或无细胞体系中的F-actin，从而对F-actin进行定性和定量分析。另外，鬼笔环肽衍生物也以相近的亲和力结合于大小纤维，无论是动植物来源的肌肉细胞或非肌肉细胞，按照每一个肌动蛋白亚基约与一个鬼笔环肽分子的计量比结合。且非特异性结合几乎可忽略，染色区域和非染色区域辨识度非常明显。因此，鬼笔环肽衍生物特别适合替代肌动蛋白（Actin）抗体进行相关研究。另外鬼笔环肽衍生物很小，直径约12-15Å，分子量＜2000 Daltons，未标记肌动蛋白（Actin）的许多生理特性都得以维持，比如，同肌动蛋白结合蛋白如肌球蛋白，原肌球蛋白，DNase I等仍能发生反应；鬼笔环肽标记的纤维丝仍可穿透固相肌球蛋白基质；以及甘油抽提的肌纤维标记后仍可收缩等。
鬼笔环肽（Phalloidin）的结合阻止丝状肌动蛋白（微丝）的解离，稳定微丝结构，从而破坏微丝的聚合-去聚合的动态平衡。此特性使得肌动蛋白聚合发生的临界浓度（CC）降至＜1 µg/mL，因此，可用作一种聚合促进剂。此外，鬼笔环肽还可抑制F-actin的ATP水解活性。
本品为功能基团Amino偶联的鬼笔环肽，经本品结合后的F-actin仍能维持actin自身具有的许多生物学特性。且本品的结合没有物种差异性，适用性广泛。
产品性质
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英文别名（English synonym） |
[Leu(4-OH,5-NH2)7]Phalloidin |
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分子式（Molecular Formula） |
C35H49N9O10S |
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分子量（Molecular Weight） |
787.88 |
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多肽序列（Sequence） |
Bicyclic(Ala-DThr-Cys-cis-4-hydroxy-Pro-Ala-2-mercapto-Trp-4-hydroxy-5-amino-Leu)(S-3 to 6) |
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溶解性（Solubility） |
溶于DMSO |
运输与保存方法
冰袋运输。收到货后-20℃避光干燥保存，1年有效。
注意事项
1）鬼笔环肽具有毒性，需小心操作（对人的半数致死剂量LD50约2mg/kg）。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
3）本产品仅作科研用途！
工作液准备
本品以冻干粉形式提供，分子量为787.88，总量为1 mg。可先用甲醇或者DMSO充分溶解配制成20~100µM的储存液。如，加入12.6923 mL甲醇到1 mg氨基-鬼笔环肽即得到100 µM等量的储存液，根据单次使用量，进行小量分装，-20℃冻存，一年稳定。开始实验前，使用1×PBS缓冲液稀释储存液到需要的工作浓度。工作液现配现用。
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HB180709
鬼笔环肽（Phalloidin）是一种来源于毒蕈类鬼笔鹅膏（Amanita phalloides）的环状七肽毒素，以高亲和力（Kd= 20 nM）选择性结合于丝状肌动蛋白F-actin，而不会与单体肌动蛋白G-actin结合，通常用来标记组织切片、细胞培养物或无细胞体系中的F-actin，从而对F-actin进行定性和定量分析。另外，鬼笔环肽衍生物也以相近的亲和力结合于大小纤维，无论是动植物来源的肌肉细胞或非肌肉细胞，按照每一个肌动蛋白亚基约与一个鬼笔环肽分子的计量比结合。且非特异性结合几乎可忽略，染色区域和非染色区域辨识度非常明显。因此，鬼笔环肽衍生物特别适合替代肌动蛋白（Actin）抗体进行相关研究。另外鬼笔环肽衍生物很小，直径约12-15Å，分子量＜2000 Daltons，未标记肌动蛋白（Actin）的许多生理特性都得以维持，比如，同肌动蛋白结合蛋白如肌球蛋白，原肌球蛋白，DNase I等仍能发生反应；鬼笔环肽标记的纤维丝仍可穿透固相肌球蛋白基质；以及甘油抽提的肌纤维标记后仍可收缩等。
鬼笔环肽（Phalloidin）的结合阻止丝状肌动蛋白（微丝）的解离，稳定微丝结构，从而破坏微丝的聚合-去聚合的动态平衡。此特性使得肌动蛋白聚合发生的临界浓度（CC）降至＜1 µg/mL，因此，可用作一种聚合促进剂。此外，鬼笔环肽还可抑制F-actin的ATP水解活性。
本品为功能基团Amino偶联的鬼笔环肽，经本品结合后的F-actin仍能维持actin自身具有的许多生物学特性。且本品的结合没有物种差异性，适用性广泛。
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分子式（Molecular Formula） |
C35H49N9O10S |
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分子量（Molecular Weight） |
787.88 |
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多肽序列（Sequence） |
Bicyclic(Ala-DThr-Cys-cis-4-hydroxy-Pro-Ala-2-mercapto-Trp-4-hydroxy-5-amino-Leu)(S-3 to 6) |
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溶解性（Solubility） |
溶于DMSO |
运输与保存方法
冰袋运输。收到货后-20℃避光干燥保存，1年有效。
注意事项
1）鬼笔环肽具有毒性，需小心操作（对人的半数致死剂量LD50约2mg/kg）。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
3）本产品仅作科研用途！
工作液准备
本品以冻干粉形式提供，分子量为787.88，总量为1 mg。可先用甲醇或者DMSO充分溶解配制成20~100µM的储存液。如，加入12.6923 mL甲醇到1 mg氨基-鬼笔环肽即得到100 µM等量的储存液，根据单次使用量，进行小量分装，-20℃冻存，一年稳定。开始实验前，使用1×PBS缓冲液稀释储存液到需要的工作浓度。工作液现配现用。
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鬼笔环肽FAQ
Q：为什么我激发后荧光很快就猝灭了？
A：1.可能是使用浓度过高造成，可以再适当降低一些试剂浓度；可以在寻找视野时使用低能量的激光，待找到合适视野时使用高能量激光激发观察。2.鬼笔环肽不能和点击反应（例：EDU）共染色，否则鬼笔环肽没荧光信号。
Q：该试剂可以应用于组织切片吗？
A: 如果细胞和组织用诸如二甲苯或丙酮溶剂（例如在组织切片的脱蜡期间）处理时，可能会阻止鬼笔环肽与F-肌动蛋白结合。应用时，对于无需有机溶剂洗涤的冷冻切片可用石蜡代替，也可使用抗肌动蛋白抗体。
Q：每次是添加多少试剂量（工作液）进行荧光显微镜检测？
A：建议添加的量是能够完全浸没细胞即可，不同的细胞染色情况不同，相应鬼笔环肽使用量也需根据不同情况而定。
Q：几种不同的鬼笔环肽的区别是什么，如何选择？
A：是荧光基团的不同，激发出的荧光颜色不同，用于区分共染时其他荧光染料的荧光颜色，对于选择需要机器满足激发和发射波长要求。
Q：细胞处理时，须用BSA封闭吗？
A：是的，这样做可以降低背景色。
Q：鬼笔环肽染色存在种属区分吗？
A：对于动物活细胞染色，不区分种属。
Q：想染植物细胞微丝，鬼笔环肽能不能使用？
A：由于植物含细胞壁，因此在未破坏细胞壁时染色进入细胞内较为困难，因此对于含细胞壁细胞染色可以去除细胞壁制备原生质体进行染色。
Q：染色后多久进行上机观察检测，可以放置过夜吗？
A：不推荐，染色后应尽量在60min内完成上机观察和检测过程。
Q：关于几种产品的状态及含量问题介绍？
A：iFluor系列的40737、40762、40736均为粉末，40734和40735均为液体形式提供。对于300T的含量不是指含有300ul，具体的300T是指能检测300次左右。
Q：iFluor系列粉末应该如何稀释成储液和工作液？
A：使用前将本品回温至室温并简短离心，加入30 μL DMSO使其充分溶解，混匀即可获得1000×iFluor标记鬼笔环肽母液，再按照具体使用浓度配置工作液。
Q：我用鬼笔环肽染效小鼠的巨噬细胞，发现鬼笔环肽没有进入巨噬细胞中，而是在巨噬细胞的表面，有什么更好的建议嘛？
A：巨噬细胞染色效果较差一些，建议客户延长透化时间，例如用丙酮（≤-20℃）脱水或者用 0.5% Triton X-100溶液透化处理10-15min。
Q：鬼笔环肽可以染活细胞，以及染色后可以用流式检测嘛？
A：可以染活细胞，并在60min以内上机，通过流式检测。
Q：鬼笔环肽可以双标染色吗？
A：可以，例如可以与DAPI 溶液对细胞核进行复染。
Q：鬼笔环肽可以跟免疫荧光同时做吗？
A：不可以，因为进行免疫荧光染色时，需要过夜、时间较长，而鬼笔环肽的荧光检测时间最好在60min以内，随着时间的推移，鬼笔环肽的荧光信号逐渐减弱，甚至检测不到荧光信号。
Q：我的细胞过表达G-actin，会不会影响鬼笔环肽的染色效果？
A：不会影响鬼笔环肽的染色效果。因为鬼笔环肽只选择性结合于丝状肌动蛋白F-actin，而不会与单体肌动蛋白 G-actin结合。
Q：可以用那些溶液来固定细胞，要注意什么？
A：可以用溶于PBS的4%多聚甲醛溶液进行细胞固定，固定时避免固定剂中含有甲醇成分，因为甲醇在固定过程中可能破坏肌动蛋白F-actin。
Q：鬼笔环肽染色后，封片保存在4度冰箱一段时间后，再检测信号可以嘛？
A：不建议客户这样操作，因为封片后鬼笔环肽的荧光信号会逐渐减弱。建议客户现加现测。
Q：鬼笔环肽的选择？
A：微丝（F-actin）探针 G-actin探针。
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货号 |
产品名称 |
荧光 |
Ex/Em (nm) |
能否固定 |
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40733ES03 |
Amino-Phalloidin 氨基鬼笔环肽 |
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40734ES80 |
TRITC Phalloidin 罗丹明标记鬼笔环肽 |
红色 |
545/570 |
是 |
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40735ES80 |
FITC Phalloidin FITC标记鬼笔环肽 |
绿色 |
496/516 |
是 |
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绿色 |
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是 |
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橘色 |
556/574 |
是 |
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40762ES75 |
iFluor™ 647 phalloidin iFluor™ 647标记鬼笔环肽（远红） |
远红 |
650/665 |
是 |
[1] Gao Y, Wang Z, Hao Q, et al. Loss of ERα induces amoeboid-like migration of breast cancer cells by downregulating vinculin. Nat Commun. 2017;8:14483. Published 2017 Mar 7. doi:10.1038/ncomms14483(IF:12.124)
