标签归档：缓冲液

ampliqon PCR缓冲液简介

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ampliqon PCR缓冲液简介

一个最佳的缓冲系统对于成功进行PCR至关重要。可靠的PCR结果取决于许多因素：DNA和引物的质量以及PCR仪器本身。

Ampliqon开发了不同的基于Tris的缓冲溶液，以满足PCR应用中的不同要求。缓冲液通常以包含15mM MgCl2的10x配方提供。Ampliqon缓冲液也不含Mg2+和Tween 20。

通过在Ampliqon的DNA聚合酶产品中选择合适的DNA聚合酶/缓冲液组合或基于缓冲液的最佳Master Mix，可以实现缓冲液的便利性和用户灵活性。所有Ampliqon DNA聚合酶和主混合物都有不同的缓冲液选项，可以轻松选择DNA聚合酶和缓冲液的正确组合或正确的主混合物，以匹配不同的PCR应用和PCR检测条件。

PCR缓冲液

10倍铵缓冲液

大多数PCR应用推荐使用铵缓冲液。这导致PCR产物的高产率，并将优化Mg2+浓度或退火温度的需要降低。

特征

促进大多数DNA模板的扩增

高产量

高度特异性

底漆退火温度公差

10倍缓冲器

有4种配方：

15mM MgCl2，

无Mg2+

不含吐温

无Mg2++无吐温

说明

铵缓冲液在广泛的退火温度和Mg2+浓度范围内促进高特异性。铵缓冲液在处理困难的模板时也很有效，例如富含GC的DNA序列。

提示-选择正确的缓冲区

如果您需要在PCR设置中优化Mg2+浓度，特别是如果您的应用要求Mg2+浓度低于1.5mM，建议使用无Mg2+缓冲液。

无洗涤剂缓冲液推荐用于自动化和涉及荧光光谱的下游应用。

AMPLIQON-PCR缓冲系统的性能

铵缓冲液：最少需要优化。

大范围的Mg2+浓度和温度导致特定产品的高产率（1.5-2.5车道和57-66车道）

标准缓冲区：需要优化。

Mg2+浓度和温度的窄范围导致特定的产物。（1.5-2.0车道和60-66车道）

组合缓冲区：需要优化。

Mg2+浓度和温度的窄范围导致特定产品的高产率。（1.5车道和60-66车道）

ENG9.TEMPase和所示缓冲液的PCR扩增实例在所示Mg2+浓度或温度下使用。第一部分显示了60°C下0.5-4.5 mM MgCl2的Mg2+稀释系列。第二部分显示了1.5 mM MgCl2下51-66°C的温度梯度。M：标记。

10x Ammonium Buffer

15 mM MgCl2

  • A301103 3 x 1.5 ml

  • A301110 10 x 1.5 ml

  • A301156 6 x 5 ml

Mg2+ free

  • A301203 3 x 1.5 ml

  • A301210 10 x 1.5 ml

  • A301256 6 x 5 ml

Tween free

  • A301403 3 x 1.5 ml

  • A301410 10 x 1.5 ml

  • A301456 6 x 5 ml

Mg2+ free, Tween free

  • A301503 3 x 1.5 ml

  • A301510 10 x 1.5 ml

  • A301556 6 x 5 ml

agrisera AS08 300提取缓冲液说明书

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agrisera AS08 300提取缓冲液说明书

 

1 | PEB (4x) | protein extraction buffer

 AS08 300 |提取缓冲液，用于从植物组织和藻类/细菌细胞中定量分离总可溶性/膜蛋白，优化用于变性条件下的后续western blot检测

 

 

数量 5 x 2 ml（4x储备液）多可分离75种植物材料（对于100 mg新鲜重量，使用500 µl 1x PEB）或190种藻类材料（对于总4-10 µg的细胞量，使用200 µl 1x PEB）叶绿素）

存储 在室温下稳定至少1个月；在4°C下短期存储（6个月），在-20°C下长期存储（1年或更长时间）

经过测试的应用 蛋白质提取

 确认反应性 PEB已在来自高等植物，苔藓，地衣，藻类，硅藻，鞭毛藻，蓝细菌的各种物种和组织上进行了测试。提取物可以使用去污剂（LDS）兼容的方法进行定量，并且在随后的SDS PAGE凝胶电泳，蛋白质印迹和免疫沉淀（IP）中已显示出高度可重复和定量的结果。

 应用实例 

开始之前，
通过在无菌去离子水中稀释4x储备液为所有样品准备足够的1x PEB（1x PEB的pH值应在8.25至8.75之间）。建议在准备立即使用的1x PEB时，从新鲜原料中加入蛋白酶抑制剂（此缓冲液不提供），以增加提取物中未降解蛋白质的产量。我们建议从新鲜制备的50x储备液（以1x PEB）中加入1:50体积/体积，以得到制造商推荐的所需终浓度（例如，罗氏公司的Pefabloc SC为0.1 mg / ml）。
 

所需1x PEB的总体积取决于样品类型和所用组织的数量：对于100 mg新鲜植物组织，我们建议使用500 µl 1x PEB。对于藻类样品（相当于4-10 µg总叶绿素），我们建议200 µl 1x PEB。已发现将样品体积保持在0.2-0.5 ml范围内有助于获得更好的提取结果，不建议将样品体积增大。
 

材料准备

植物组织：称重并在液氮中速冻，并在-80°C下储存直至加工。
藻类培养物：离心形成沉淀或在过滤器（例如GF / F或聚碳酸酯）上收集并在-80°C冷冻直至进行处理。

 萃取

1个  

用杵将预冷冻的研钵中的液态N 2中的冷冻物质研磨成细粉，然后转移到1.5毫升试管中

在研磨过程中随时保持物料冷却，避免溢出

2  

加入1x PEB，立即将样品冷冻在液体N 2中

对于100 mg植物组织为500 µl，对于细胞为200 µl（对应于4-10 µg总叶绿素）；保持试管直立以将样品固定在试管底部

3  

小心地对样品进行超声处理，直到样品融化为止，立即将样品重新浸入液体N 2中以避免加热

使用微超声仪（例如Branson Ultrasonics 450型）在约30％的低设置下可获得佳结果；也可以使用水浴超声仪，尽管这可能导致可再现的蛋白质回收率略有降低；

4  

根据不同的物种重复超声处理（3），置于冰上，直到处理完所有样品

对于高等植物，2-3个周期，蓝细菌3个周期，衣藻2个周期，异源，Thalassiosira和Trichodesmium 1个周期

5  

将样品以10000 xg离心3分钟以除去不溶物和未破碎的细胞，沉淀应为白色/浅灰色

沉淀物呈深绿色表示不是佳破碎方法，需要使用新样品调整提取条件（例如，改进研磨和/或重复超声处理步骤）

6  

用移液管将上清液转移到新管中，注意不要带走杂物

预计该植物的上清液约为400 µl，蓝藻/藻类样品的约为150 µl；用移液器收集上清液，因为2 x 200（或2 x 75 µl）降低了干扰沉淀的碎片的风险

蛋白质测定
使用去污剂相容性测定法测定回收的上清液的总蛋白质含量。根据所用物种的数量和/或组织，您可能期望蛋白质含量为1.5-6 µg / µl。

储存
蛋白质提取物可在+ 4°C下保存24小时，或在-20°C / -80°C下保存长达6/12个月。我们建议分装样品。重新冷冻蛋白质样品可能会导致降解/聚集。

装载在凝胶上
应将新鲜制备的还原剂（例如二硫苏糖醇，终浓度为50 mM）添加到准备装载的体积中。在70°C加热5分钟，短暂旋转并加样在凝胶上。0.5-5 µg /泳道的蛋白质负荷应足以满足大多数Western Blot应用的要求。

 附加信息 

缓冲液成分（4x）：包含〜40％v / v甘油[HOCH 2 CH（OH）CH 2 OH]，Tris-HCl [NH 2 C（CH 2 OH）3·HCl] pH 8.5，LDS [CH 3（ CH 2）11 OSO 3 Li]，EDTA [（HO 2 CCH 2）2 NCH 2 CH 2 N（CH 2 CO 2 H）2]
 

建议在准备立即使用的1x PSB时包括新鲜制备的蛋白酶抑制剂（此缓冲液不提供）。
 

PEB已针对从植物/藻类组织中提取全蛋白质提取物的定量小规模制备进行了优化。使用以下描述的程序进行提取将获得大的蛋白质产量，并减少蛋白质的降解和聚集。

提取物可使用与​​去污剂（LDS）兼容的方法进行定量，并在随后的SDS PAGE凝胶电泳，蛋白质印迹和免疫沉淀中显示出高度可重复和定量的结果。

PEB已在来自高等植物，苔藓，地衣，藻类，硅藻，鞭毛藻和蓝细菌的多种物种和组织上进行了测试。

 

 背景 

PEB是一种提取缓冲液，用于破坏和溶解植物组织和藻类细胞中的总蛋白。与其他破坏细胞的方法相比，将阴离子去污剂LDS与推荐的程序（超声处理和冷冻/融化循环的组合）结合使用可增加溶解和未降解蛋白质的数量（请参阅参考资料）。对于1-2个样品，推荐步骤的预计动手时间为20-30分钟。预期的产量将为1.5-6 µg / µl总蛋白（从标准程序中回收），具体取决于原料，例如其生物学阶段，使用的均质化方法（打浆机与超声处理）。

 

 

 

德国sartorius赛多利斯PB-10/C标准型PH计

发表于由

德国sartorius赛多利斯PB-10/C标准型PH计

品牌 Sartorius

德国sartorius赛多利斯PB-10/C标准型PH计
● 全自动温度补偿
● 自动识别3组16种缓冲液
● 全自动显示电极斜率及使用状态
● 稳定符号,表示读数已达稳定
● **多3点校准存储
● 同步显示pH、温度和缓冲液
● 校准只需按一个键,简单方便
● 直接以mV或pH方式读取测量值
● 配送三合一电极

德国sartorius赛多利斯PB-10/C标准型PH计

主要特点：

  • 自动温度补偿，多3点校准存储
  • 全自动显示电极斜率及使用状态
  • 自动识别3组16种缓冲液
  • 校准只需按一个键,简单方便
  • 稳定符号,表示读数已达稳定
  • 同步显示pH、温度和缓冲液
  • 直接以mV或pH方式读取测量值
  • 仪表保修期2年

技术参数：

型号名称：德国sartorius赛多利斯PB-10/C标准型PH计

PH测量范围：0~14.00 pH

PH分辨率：+0.01

PH精度：+0.01

mV测量范围（mv)：+1500.0

mV分辨率(mv)：+0.1

mV精度(mv)：+0.4

温度范围（℃）：-5.0~105.0

温度可读性（℃）：+0.1

温度精度（℃）：+0.2

校准点：多3种缓冲液

自动识别缓冲液：16种

自动温度补偿(ATC)：有

显示电极斜率：有

接口：BNC

订货信息

标准型PH计 说明
PB-10/C ph/mv/温度：0-+14.00ph,三合一ph电极，多功能支架
电极 PY-ASI 三合一ph电极，塑料体，凝胶，常规测量
PY-PG 二合一ph电极，玻璃体，凝胶，常规测量
PY-P11-2S 三合一ph电极，玻璃体，可填充3MKCL电解液，所有测量，兼容TRIS
PY-PN 二合一ph电极塑料体，凝胶，常规测量
PY-T02 温度电极

德国sartorius赛多利斯PB-10/C标准型PH计

5×Hifair®超逆转录酶反应缓冲液Ultra Reverse Transcriptase Reaction Buffer

发表于由

5×Hifair®超逆转录酶反应缓冲液Ultra Reverse Transcriptase Reaction Buffer

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

 

5×Hifair® Ultra Reverse Transcriptase Reaction Buffer可与Hifair® Ultra Reverse Transcriptase（400 U/μL）（Cat#14605）配套使用，为逆转录创造最佳条件。

 

产品组分

组分编号

组分名称

产品编号/规格

15664ES08

15664ES25

15664ES50 

15664

5×Hifair® Ultra Reverse Transcriptase Reaction Buffer

5 mL

25 mL

50 mL

 

产品应用

全长cDNA文库构建；终点法PCR；实时定量PCR等。

 

运输与保存方法

干冰运输，-20℃保存，有效期1年。

 

注意事项

1）请保持实验区域洁净；操作时需穿戴干净的手套、口罩；实验所用耗材均需保证RNase free，以防止RNase污染。

2）所有操作均应在冰上进行，防止RNA降解。

3）为保证高效率逆转录，建议使用高质量的RNA样本。

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

5）本产品仅作科研用途！

 

第一链cDNA合成操作步骤

1. RNA变性（此步为可选步骤，RNA变性有助于打开二级结构，可在很大程度上提高第一链cDNA的产量。）

组分

使用量

RNase–free H2O

to 13 μL

Oligo (dT)18 (50 μM)

or Random Primers (50 μM)  

or Gene Specific Primers (2 μM)

1 μL

or 1 μL

or 1 μL

模板RNA

Total RNA: 10 pg -5 μg或mRNA:10 pg-500 ng

65℃加热5 min，迅速置于冰上冷却2 min。简短离心收集反应液后加入下表中的逆转录反应液，并用移液器轻轻吹打混匀。

2. 逆转录反应体系配制（20 μL体系）

组分

使用量

上一步的反应液

13 μL

5×Hifair® Ultra Reverse Transcriptase Reaction Buffer

4 μL

dNTP Mix (10 mM)

1 μL

Hifair® Ultra Reverse Transcriptase（400 U/μL）（Cat#14605）

200 U

RNase inhibitor (40 U/µL)

1 μL

3. 逆转录程序设置

温度

时间

25℃

5 min

55℃

15–30 min

85℃

5 min

【注】：1）当使用Random Primers时，需25℃，孵育5 min；若使用Oligo (dT)18或Gene Specific Primers，此步可省略；

2）逆转录温度：推荐使用55℃；对于高GC含量模板或者复杂模板，可将逆转录温度提高到60℃；

3) 可将逆转录时间延长到45-60min，有助于提高产量；

4）85℃加热5 min，目的是使逆转录酶失活。

※ 逆转录产物可立即用于后续PCR或qPCR反应，也可-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。

HB221114

5×Hifair®超逆转录酶反应缓冲液Ultra Reverse Transcriptase Reaction Buffer

暂无内容

5×Hifair®超逆转录酶反应缓冲液Ultra Reverse Transcriptase Reaction Buffer

暂无内容

 

5×Hifair® Ultra Reverse Transcriptase Reaction Buffer可与Hifair® Ultra Reverse Transcriptase（400 U/μL）（Cat#14605）配套使用，为逆转录创造最佳条件。

 

产品组分

组分编号

组分名称

产品编号/规格

15664ES08

15664ES25

15664ES50 

15664

5×Hifair® Ultra Reverse Transcriptase Reaction Buffer

5 mL

25 mL

50 mL

 

产品应用

全长cDNA文库构建；终点法PCR；实时定量PCR等。

 

运输与保存方法

干冰运输，-20℃保存，有效期1年。

 

注意事项

1）请保持实验区域洁净；操作时需穿戴干净的手套、口罩；实验所用耗材均需保证RNase free，以防止RNase污染。

2）所有操作均应在冰上进行，防止RNA降解。

3）为保证高效率逆转录，建议使用高质量的RNA样本。

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

5）本产品仅作科研用途！

 

第一链cDNA合成操作步骤

1. RNA变性（此步为可选步骤，RNA变性有助于打开二级结构，可在很大程度上提高第一链cDNA的产量。）

组分

使用量

RNase–free H2O

to 13 μL

Oligo (dT)18 (50 μM)

or Random Primers (50 μM)  

or Gene Specific Primers (2 μM)

1 μL

or 1 μL

or 1 μL

模板RNA

Total RNA: 10 pg -5 μg或mRNA:10 pg-500 ng

65℃加热5 min，迅速置于冰上冷却2 min。简短离心收集反应液后加入下表中的逆转录反应液，并用移液器轻轻吹打混匀。

2. 逆转录反应体系配制（20 μL体系）

组分

使用量

上一步的反应液

13 μL

5×Hifair® Ultra Reverse Transcriptase Reaction Buffer

4 μL

dNTP Mix (10 mM)

1 μL

Hifair® Ultra Reverse Transcriptase（400 U/μL）（Cat#14605）

200 U

RNase inhibitor (40 U/µL)

1 μL

3. 逆转录程序设置

温度

时间

25℃

5 min

55℃

15–30 min

85℃

5 min

【注】：1）当使用Random Primers时，需25℃，孵育5 min；若使用Oligo (dT)18或Gene Specific Primers，此步可省略；

2）逆转录温度：推荐使用55℃；对于高GC含量模板或者复杂模板，可将逆转录温度提高到60℃；

3) 可将逆转录时间延长到45-60min，有助于提高产量；

4）85℃加热5 min，目的是使逆转录酶失活。

※ 逆转录产物可立即用于后续PCR或qPCR反应，也可-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。

HB221114

5×Hifair®超逆转录酶反应缓冲液Ultra Reverse Transcriptase Reaction Buffer

暂无内容

5×Hifair®超逆转录酶反应缓冲液Ultra Reverse Transcriptase Reaction Buffer

暂无内容

第三代逆转录酶缓冲液|5×Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase Buffer

发表于由

第三代逆转录酶缓冲液|5×Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase Buffer

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

5×Hifair® Ⅲ Buffer 可与Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase (Cat#14601)配套使用，为逆转录创造最佳条件。

 

产品组分

组分编号

组分名称

产品编号/规格

15662ES03

15662ES08 

15662ES50 

15662-A

5×Hifair® Ⅲ Buffer

1 mL

5 mL

50 mL

 

产品应用

全长cDNA文库构建；终点法PCR；实时定量PCR等。

 

运输与保存方法

冰袋运输。-20℃保存，有效期1年。

 

注意事项

1）请保持实验区域洁净；操作时需穿戴干净的手套、口罩；实验所用耗材均需保证RNase free，以防止RNase污染。

2）所有操作均应在冰上进行，防止RNA降解。

3）为保证高效率逆转录，建议使用高质量的RNA样本。

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

5）本产品仅作科研用途！

 

第一链cDNA合成操作步骤

1. RNA变性（此步为可选步骤，RNA变性有助于打开二级结构，可在很大程度上提高第一链cDNA的产量。）

组分

使用量

RNase–free H2O

to 13 μL

Oligo (dT)18 (50 μM)

or Random Primers (50 μM)  

or Gene Specific Primers (2 μM)

1 μL

or 1 μL

or 1 μL

模板RNA

Total RNA: 10 pg -5 μg或mRNA:10 pg-500 ng

65℃加热5 min，迅速置于冰上冷却2 min。简短离心收集反应液后加入下表中的逆转录反应液，并用移液器轻轻吹打混匀。

2. 逆转录反应体系配制（20 μL体系）

组分

使用量

上一步的反应液

13 μL

5×Hifair® Ⅲ Buffer

4 μL

dNTP Mix (10 mM)

1 μL

Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase (800 U/μL) (Cat#14601)

200 U

RNase inhibitor (40 U/µL)

1 μL

3. 逆转录程序设置

温度

时间

25℃

5 min

55℃

15–30 min

85℃

5 min

【注】：1）当使用Random Primers时，需25℃，孵育5 min；若使用Oligo (dT)18或Gene Specific Primers，此步可省略；

2）逆转录温度：推荐使用55℃；对于高GC含量模板或者复杂模板，可将逆转录温度提高到60℃；

3) 可将逆转录时间延长到45-60min，有助于提高产量；

4）85℃加热5 min，目的是使逆转录酶失活。

※ 逆转录产物可立即用于后续PCR或qPCR反应，也可-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。

HB220615

第三代逆转录酶缓冲液|5×Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase Buffer

暂无内容

第三代逆转录酶缓冲液|5×Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase Buffer

暂无内容

5×Hifair® Ⅲ Buffer 可与Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase (Cat#14601)配套使用，为逆转录创造最佳条件。

 

产品组分

组分编号

组分名称

产品编号/规格

15662ES03

15662ES08 

15662ES50 

15662-A

5×Hifair® Ⅲ Buffer

1 mL

5 mL

50 mL

 

产品应用

全长cDNA文库构建；终点法PCR；实时定量PCR等。

 

运输与保存方法

冰袋运输。-20℃保存，有效期1年。

 

注意事项

1）请保持实验区域洁净；操作时需穿戴干净的手套、口罩；实验所用耗材均需保证RNase free，以防止RNase污染。

2）所有操作均应在冰上进行，防止RNA降解。

3）为保证高效率逆转录，建议使用高质量的RNA样本。

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

5）本产品仅作科研用途！

 

第一链cDNA合成操作步骤

1. RNA变性（此步为可选步骤，RNA变性有助于打开二级结构，可在很大程度上提高第一链cDNA的产量。）

组分

使用量

RNase–free H2O

to 13 μL

Oligo (dT)18 (50 μM)

or Random Primers (50 μM)  

or Gene Specific Primers (2 μM)

1 μL

or 1 μL

or 1 μL

模板RNA

Total RNA: 10 pg -5 μg或mRNA:10 pg-500 ng

65℃加热5 min，迅速置于冰上冷却2 min。简短离心收集反应液后加入下表中的逆转录反应液，并用移液器轻轻吹打混匀。

2. 逆转录反应体系配制（20 μL体系）

组分

使用量

上一步的反应液

13 μL

5×Hifair® Ⅲ Buffer

4 μL

dNTP Mix (10 mM)

1 μL

Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase (800 U/μL) (Cat#14601)

200 U

RNase inhibitor (40 U/µL)

1 μL

3. 逆转录程序设置

温度

时间

25℃

5 min

55℃

15–30 min

85℃

5 min

【注】：1）当使用Random Primers时，需25℃，孵育5 min；若使用Oligo (dT)18或Gene Specific Primers，此步可省略；

2）逆转录温度：推荐使用55℃；对于高GC含量模板或者复杂模板，可将逆转录温度提高到60℃；

3) 可将逆转录时间延长到45-60min，有助于提高产量；

4）85℃加热5 min，目的是使逆转录酶失活。

※ 逆转录产物可立即用于后续PCR或qPCR反应，也可-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。

HB220615

第三代逆转录酶缓冲液|5×Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase Buffer

暂无内容

第三代逆转录酶缓冲液|5×Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase Buffer

暂无内容

第五代耐热逆转录酶缓冲液 10×Hifair®V Buffer

发表于由

第五代耐热逆转录酶缓冲液 10×Hifair®V Buffer

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

10 × Hifair® V Buffer可与Hifair® V Reverse Transcriptase (Cat#14603)配套使用，为逆转录反应创造最佳条件。

 

产品组分

编号

组分

产品编号/规格

15661ES03

15661ES08

15661ES50

15661-A

10 × Hifair® V Buffer

1 mL

5 mL

50 mL

 

产品应用

一步法RT-qPCR；基因克隆；荧光定量。

 

运输与保存方法

冰袋运输。-20℃保存，有效期3年。

 

使用方法

本品在逆转录反应体系中终浓度为1 × Hifair® V Buffer即可。

 

注意事项

1. 请保持实验区域洁净；操作时需穿戴干净的手套、口罩；实验所用耗材均需保证RNase free，以防止RNase污染；

2. 所有操作均应在冰上进行，防止RNA降解；

3. 为保证高效率逆转录，建议使用高质量的RNA样本；

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

 

逆转录实验案例

第一链cDNA合成操作步骤

1. RNA变性（此步为可选步骤，RNA变性有助于打开二级结构，可在很大程度上提高第一链cDNA的产量）

组分

使用量

RNase free ddH2O

to 13 μL

Oligo (dT)18 (50 μM)

1 μL

or Random Primers (50 μM)

or 1 μL

or Gene Specific Primers (2 μM)

or 1 μL

模板RNA

Total RNA: 1 ng -5 μg或mRNA:1-500 ng

65℃加热5 min，迅速置于冰上冷却2 min。简短离心收集反应液后，加入下表中的逆转录反应液，并轻轻吹打混匀。

2. 逆转录反应体系配制（20 μL体系）

组分

使用量

上一步的反应液

13 μL

10 × Hifair® V Buffer

2 μL

dNTP Mix (10 mM)

1 μL

Hifair® V Reverse Transcriptase (1000 U/μL) (Cat#14603)

0.2 μL

RNase inhibitor (40 U/µL)

1 μL

RNase free ddH2O

to 20 μL

3. 逆转录程序设置

温度

时间

25℃

5 min

42℃

15-30 min

85℃

5 min

【注】1）当使用Random Primers时，需25℃，孵育5 min；若使用Oligo (dT)18或Gene Specific Primers，此步可省略。

2）逆转录温度：推荐使用42℃。对于高GC含量模板或者复杂二级结构的模板，可将逆转录温度提高至50-55℃。

3）85℃加热5 min，目的是使逆转录酶失活。

※ 逆转录产物可立即用于后续PCR或qPCR反应，也可-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。

※ 该逆转录酶也适用于一步法RT-qPCR，推荐每25 μL反应体系，添加10-20 U逆转录酶，也可根据实际情况逐步增加逆转录酶用量。

 

HB220614

第五代耐热逆转录酶缓冲液 10×Hifair®V Buffer

暂无内容

第五代耐热逆转录酶缓冲液 10×Hifair®V Buffer

暂无内容

10 × Hifair® V Buffer可与Hifair® V Reverse Transcriptase (Cat#14603)配套使用，为逆转录反应创造最佳条件。

 

产品组分

编号

组分

产品编号/规格

15661ES03

15661ES08

15661ES50

15661-A

10 × Hifair® V Buffer

1 mL

5 mL

50 mL

 

产品应用

一步法RT-qPCR；基因克隆；荧光定量。

 

运输与保存方法

冰袋运输。-20℃保存，有效期3年。

 

使用方法

本品在逆转录反应体系中终浓度为1 × Hifair® V Buffer即可。

 

注意事项

1. 请保持实验区域洁净；操作时需穿戴干净的手套、口罩；实验所用耗材均需保证RNase free，以防止RNase污染；

2. 所有操作均应在冰上进行，防止RNA降解；

3. 为保证高效率逆转录，建议使用高质量的RNA样本；

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

 

逆转录实验案例

第一链cDNA合成操作步骤

1. RNA变性（此步为可选步骤，RNA变性有助于打开二级结构，可在很大程度上提高第一链cDNA的产量）

组分

使用量

RNase free ddH2O

to 13 μL

Oligo (dT)18 (50 μM)

1 μL

or Random Primers (50 μM)

or 1 μL

or Gene Specific Primers (2 μM)

or 1 μL

模板RNA

Total RNA: 1 ng -5 μg或mRNA:1-500 ng

65℃加热5 min，迅速置于冰上冷却2 min。简短离心收集反应液后，加入下表中的逆转录反应液，并轻轻吹打混匀。

2. 逆转录反应体系配制（20 μL体系）

组分

使用量

上一步的反应液

13 μL

10 × Hifair® V Buffer

2 μL

dNTP Mix (10 mM)

1 μL

Hifair® V Reverse Transcriptase (1000 U/μL) (Cat#14603)

0.2 μL

RNase inhibitor (40 U/µL)

1 μL

RNase free ddH2O

to 20 μL

3. 逆转录程序设置

温度

时间

25℃

5 min

42℃

15-30 min

85℃

5 min

【注】1）当使用Random Primers时，需25℃，孵育5 min；若使用Oligo (dT)18或Gene Specific Primers，此步可省略。

2）逆转录温度：推荐使用42℃。对于高GC含量模板或者复杂二级结构的模板，可将逆转录温度提高至50-55℃。

3）85℃加热5 min，目的是使逆转录酶失活。

※ 逆转录产物可立即用于后续PCR或qPCR反应，也可-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。

※ 该逆转录酶也适用于一步法RT-qPCR，推荐每25 μL反应体系，添加10-20 U逆转录酶，也可根据实际情况逐步增加逆转录酶用量。

 

HB220614

第五代耐热逆转录酶缓冲液 10×Hifair®V Buffer

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第五代耐热逆转录酶缓冲液 10×Hifair®V Buffer

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Tris碱(Tris Base) 三(羟甲基)氨基甲烷 配置TE缓冲液/TAE缓冲液/TBE缓冲液|CAS 77-86-1

发表于由

Tris碱(Tris Base) 三(羟甲基)氨基甲烷 配置TE缓冲液/TAE缓冲液/TBE缓冲液|CAS 77-86-1

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

Tris base，即Tris 碱，中文名也称为三（羟甲基）氨基甲烷，即生物化学和分子生物学中常常被配制成多种缓冲液，例如：Tris-EDTA（TE缓冲液），多用于核酸的纯化和储存，保护其不被核酸酶降解；Tris acetate-EDTA（TAE缓冲液）和Tris borate-EDTA（TBE缓冲液）普遍用作凝胶配制缓冲液以及电泳缓冲液。 

产品性质

中文别名（Chinese synonym）

2-氨基-2-(羟甲基)-1,3-丙二醇；Tris 碱；氨基丁三醇；三(羟甲基)氨基甲烷；  

英文别名（English synonym）

THAM; Trizma base;Trometamol; Tris(hydroxymethyl)aminomethane;2-Amino-2-(hydroxymethyl)-1,3-propanediol;

CAS号（CAS NO.）

77-86-1

分子式（Formula）

NH2C(CH2OH)3

分子量（Molecular weight）

121.14 g/mol

外观（Appearance）

白色结晶粉末至针状结晶

熔点（Melting point）

168-172℃

溶解性（Solubility）

溶于水

结构式（Structure）

Tris碱(Tris Base) 三(羟甲基)氨基甲烷 配置TE缓冲液/TAE缓冲液/TBE缓冲液|CAS 77-86-1

运输和保存方法

常温运输和保存即可。有效期2年。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）本产品仅作科研用途！

HB181120

 

Q：试剂储存条件，4 度保存时间久了会有样的后果？

A：常温保存即可

Q：多用于核酸的纯化和储存，保护其不被核酸酶降解，原理是什么？

A：EDTA 会螯合金属离子，核酸酶发挥活性需要金属离子，可以防止核酸被降解。

 

Tris碱(Tris Base) 三(羟甲基)氨基甲烷 配置TE缓冲液/TAE缓冲液/TBE缓冲液|CAS 77-86-1

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Tris base，即Tris 碱，中文名也称为三（羟甲基）氨基甲烷，即生物化学和分子生物学中常常被配制成多种缓冲液，例如：Tris-EDTA（TE缓冲液），多用于核酸的纯化和储存，保护其不被核酸酶降解；Tris acetate-EDTA（TAE缓冲液）和Tris borate-EDTA（TBE缓冲液）普遍用作凝胶配制缓冲液以及电泳缓冲液。 

产品性质

中文别名（Chinese synonym）

2-氨基-2-(羟甲基)-1,3-丙二醇；Tris 碱；氨基丁三醇；三(羟甲基)氨基甲烷；  

英文别名（English synonym）

THAM; Trizma base;Trometamol; Tris(hydroxymethyl)aminomethane;2-Amino-2-(hydroxymethyl)-1,3-propanediol;

CAS号（CAS NO.）

77-86-1

分子式（Formula）

NH2C(CH2OH)3

分子量（Molecular weight）

121.14 g/mol

外观（Appearance）

白色结晶粉末至针状结晶

熔点（Melting point）

168-172℃

溶解性（Solubility）

溶于水

结构式（Structure）

Tris碱(Tris Base) 三(羟甲基)氨基甲烷 配置TE缓冲液/TAE缓冲液/TBE缓冲液|CAS 77-86-1

运输和保存方法

常温运输和保存即可。有效期2年。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）本产品仅作科研用途！

HB181120

 

Q：试剂储存条件，4 度保存时间久了会有样的后果？

A：常温保存即可

Q：多用于核酸的纯化和储存，保护其不被核酸酶降解，原理是什么？

A：EDTA 会螯合金属离子，核酸酶发挥活性需要金属离子，可以防止核酸被降解。

 

Tris碱(Tris Base) 三(羟甲基)氨基甲烷 配置TE缓冲液/TAE缓冲液/TBE缓冲液|CAS 77-86-1

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Glycine甘氨酸电泳缓冲液 甘氨酸|Glycine|CAS 56-40-6

发表于由

Glycine甘氨酸电泳缓冲液 甘氨酸|Glycine|CAS 56-40-6

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

产品描述

甘氨酸（Glycine，简写为Gly或G）是普遍发现于蛋白质的20种氨基酸中最简单的一种，为人体非必需氨基酸。生化试验中常用作各种缓冲液的配制，包括PAGE胶的电泳缓冲液，以及WB的电转缓冲液。另外，在中枢神经系统尤其是脊髓中，甘氨酸是一种重要的抑制性神经神经递质（Inhibitory neurotransmitter）和NMDA受体的变构调节剂。

产品性质

中文别名（Chinese synonym）

乙氨酸；氨基乙酸；氨基醋酸；

英文别名（English synonym）

Aminoacetic acid; Aminoethanoic Acid; Glycocoll;

CAS号（CAS NO.）

56-40-6

分子式（Formula）

C2H5NO2

分子量（Molecular weight）

75.07 g/mol

溶解性（Solubility）

溶于水（100 mg/mL）

结构式（Structure）

Glycine甘氨酸电泳缓冲液 甘氨酸|Glycine|CAS 56-40-6 

运输和保存方法

常温运输和保存。有效期3年。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）本产品仅作科研用途！

相关产品

产品名称

产品编号

规格

Tris Base 三(羟甲基)氨基甲烷

60102JP76

500 g

60102JP80

1 kg

60102JP90

5×1 kg

60102JP90

1桶（25 kg）

Tricine 三(羟甲基)甲基甘氨酸

60109JP25

25 g

60109JP60

500 g

Tris-HCl 三（羟甲基）氨基甲烷盐酸盐 (超纯)

60113JP60

100 g

60113JP76

500 g

HB201204

Q:配制的电泳液颜色变黄了？

A: 不影响电泳效果，可以继续用。

[1] Wang X, Qin X, Yan M, et al. Loss of exosomal miR-3188 in cancer-associated fibroblasts contributes to HNC progression. J Exp Clin Cancer Res. 2019;38(1):151. Published 2019 Apr 8. doi:10.1186/s13046-019-1144-9(IF:11.161)
[2] Deng G, Wu C, Rong X, et al. Ameliorative effect of deoxyvasicine on scopolamine-induced cognitive dysfunction by restoration of cholinergic function in mice. Phytomedicine. 2019;63:153007. doi:10.1016/j.phymed.2019.153007(IF:4.180)
[3] Li SP, Wang YW, Qi SL, et al. Analogous β-Carboline Alkaloids Harmaline and Harmine Ameliorate Scopolamine-Induced Cognition Dysfunction by Attenuating Acetylcholinesterase Activity, Oxidative Stress, and Inflammation in Mice. Front Pharmacol. 2018;9:346. Published 2018 Apr 10. doi:10.3389/fphar.2018.00346(IF:3.831)

产品描述

甘氨酸（Glycine，简写为Gly或G）是普遍发现于蛋白质的20种氨基酸中最简单的一种，为人体非必需氨基酸。生化试验中常用作各种缓冲液的配制，包括PAGE胶的电泳缓冲液，以及WB的电转缓冲液。另外，在中枢神经系统尤其是脊髓中，甘氨酸是一种重要的抑制性神经神经递质（Inhibitory neurotransmitter）和NMDA受体的变构调节剂。

产品性质

中文别名（Chinese synonym）

乙氨酸；氨基乙酸；氨基醋酸；

英文别名（English synonym）

Aminoacetic acid; Aminoethanoic Acid; Glycocoll;

CAS号（CAS NO.）

56-40-6

分子式（Formula）

C2H5NO2

分子量（Molecular weight）

75.07 g/mol

溶解性（Solubility）

溶于水（100 mg/mL）

结构式（Structure）

Glycine甘氨酸电泳缓冲液 甘氨酸|Glycine|CAS 56-40-6 

运输和保存方法

常温运输和保存。有效期3年。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）本产品仅作科研用途！

相关产品

产品名称

产品编号

规格

Tris Base 三(羟甲基)氨基甲烷

60102JP76

500 g

60102JP80

1 kg

60102JP90

5×1 kg

60102JP90

1桶（25 kg）

Tricine 三(羟甲基)甲基甘氨酸

60109JP25

25 g

60109JP60

500 g

Tris-HCl 三（羟甲基）氨基甲烷盐酸盐 (超纯)

60113JP60

100 g

60113JP76

500 g

HB201204

Q:配制的电泳液颜色变黄了？

A: 不影响电泳效果，可以继续用。

[1] Wang X, Qin X, Yan M, et al. Loss of exosomal miR-3188 in cancer-associated fibroblasts contributes to HNC progression. J Exp Clin Cancer Res. 2019;38(1):151. Published 2019 Apr 8. doi:10.1186/s13046-019-1144-9(IF:11.161)
[2] Deng G, Wu C, Rong X, et al. Ameliorative effect of deoxyvasicine on scopolamine-induced cognitive dysfunction by restoration of cholinergic function in mice. Phytomedicine. 2019;63:153007. doi:10.1016/j.phymed.2019.153007(IF:4.180)
[3] Li SP, Wang YW, Qi SL, et al. Analogous β-Carboline Alkaloids Harmaline and Harmine Ameliorate Scopolamine-Induced Cognition Dysfunction by Attenuating Acetylcholinesterase Activity, Oxidative Stress, and Inflammation in Mice. Front Pharmacol. 2018;9:346. Published 2018 Apr 10. doi:10.3389/fphar.2018.00346(IF:3.831)

50×TAE溶液|50×TAE Buffer 配制电泳凝胶缓冲液(EDTA缓冲液)

发表于由

50×TAE溶液|50×TAE Buffer 配制电泳凝胶缓冲液(EDTA缓冲液)

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

TAE即Tris acetate-EDTA buffer，常用于琼脂糖和聚丙烯酰胺核酸的电泳实验。可用作电泳以及凝胶配制缓冲液。本品是50倍浓缩的TAE，使用时需用去离子水稀释到1×TAE工作液即可。

产品组分

1×TAE工作液中含有40 mM Tris-Acetate和1 mM EDTA，pH 8.3。

运输与保存方法

室温运输和保存。有效期1年。
 

注意事项

1. 若产品出现沉淀析出，请置于37℃水浴使其溶解，不影响使用。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
3. 本产品仅作科研用途！
 

相关产品

产品名称

货号

规格

YeaRed Nucleic Acid Gel Stain (10,000× in Water)
YeaRed核酸染料（10,000× 水溶液）HOT

10202JP76

500 μL

Agarose琼脂糖HOT

10208JP60/76

100/500 g

2000 DNA Marker HOT

10501JP60/80

100/1000 T

6× DNA Loading Buffer 6×DNA上样缓冲液

10213JP08

1 ml×5

HB190615

50×TAE溶液|50×TAE Buffer 配制电泳凝胶缓冲液(EDTA缓冲液)

暂无内容

[1] Shao Y, Lu N, Xue X, Qin Z. Creating functional chromosome fusions in yeast with CRISPR-Cas9. Nat Protoc. 2019;14(8):2521-2545. doi:10.1038/s41596-019-0192-0(IF:11.334)

TAE即Tris acetate-EDTA buffer，常用于琼脂糖和聚丙烯酰胺核酸的电泳实验。可用作电泳以及凝胶配制缓冲液。本品是50倍浓缩的TAE，使用时需用去离子水稀释到1×TAE工作液即可。

产品组分

1×TAE工作液中含有40 mM Tris-Acetate和1 mM EDTA，pH 8.3。

运输与保存方法

室温运输和保存。有效期1年。
 

注意事项

1. 若产品出现沉淀析出，请置于37℃水浴使其溶解，不影响使用。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
3. 本产品仅作科研用途！
 

相关产品

产品名称

货号

规格

YeaRed Nucleic Acid Gel Stain (10,000× in Water)
YeaRed核酸染料（10,000× 水溶液）HOT

10202JP76

500 μL

Agarose琼脂糖HOT

10208JP60/76

100/500 g

2000 DNA Marker HOT

10501JP60/80

100/1000 T

6× DNA Loading Buffer 6×DNA上样缓冲液

10213JP08

1 ml×5

HB190615

50×TAE溶液|50×TAE Buffer 配制电泳凝胶缓冲液(EDTA缓冲液)

暂无内容

[1] Shao Y, Lu N, Xue X, Qin Z. Creating functional chromosome fusions in yeast with CRISPR-Cas9. Nat Protoc. 2019;14(8):2521-2545. doi:10.1038/s41596-019-0192-0(IF:11.334)

10×TBST缓冲液 TBST(10X)浓缩液

发表于由

10×TBST缓冲液 TBST(10X)浓缩液

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

本试剂TBST (10X)，可以用于免疫印迹(Immunoblot, 即Western blot或WB)、免疫荧光(Immunofluorescence, IF)、免疫组化(Immunohistochemistry, IHC)和免疫细胞化学(Immunocytochemistry, IC)等实验中封闭液的配制、一抗或二抗的配制、一抗或二抗孵育后的洗涤等。封闭和洗涤可以降低背景，增强信噪比。

本产品为10X浓缩液，使用时须用蒸馏水或去离子水溶解配制成1X后使用。TBST (10X)溶液中含有250 mM Tris, 1500mM NaCl,0.5%的Tween-20，pH7.5±0.1 (25℃)。

对于Western blot实验中膜的洗涤，按照每张膜洗涤需要5-10 mL TBST (1X)计算，每100 mL TBST (10X)可以洗涤100-200次；对于免疫染色等实验，按照每个样品洗涤需要0.2-1 mL TBSTw(1X)计算，每100 mL TBST (10X)可以洗涤1000-5000个样品。

 

运输和保存方法

室温运输，4℃保存，一年有效。-20℃可以长期保存，室温保存一个月内有效。

 

注意事项

本TBST (10X)配制成TBSTw(1X)后，宜4℃保存，并在一个月内用完。如果室温保存，宜在一周内用完。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

本产品仅作科研用途！

 

HB220223

10×TBST缓冲液 TBST(10X)浓缩液

暂无内容

[1] Zhang Y, Xia Q, Li Y, et al. CD44 Assists the Topical Anti-Psoriatic Efficacy of Curcumin-Loaded Hyaluronan-Modified Ethosomes: A New Strategy for Clustering Drug in Inflammatory Skin. Theranostics. 2019;9(1):48-64. Published 2019 Jan 1. doi:10.7150/thno.29715(IF:8.063)
[2] Li S, Ding J, Wang Y, Wang X, Lv L. CD155/TIGIT signaling regulates the effector function of tumor-infiltrating CD8+ T cell by NF-κB pathway in colorectal cancer. J Gastroenterol Hepatol. 2022;37(1):154-163. doi:10.1111/jgh.15730(IF:4.029)
[3] Li Y, Qin G, Du J, Yue P, Zhang Y, Hou N. circRNA LDLRAD3 Enhances the Malignant Behaviors of NSCLC Cells via the miR-20a-5p-SLC7A5 Axis Activating the mTORC1 Signaling Pathway. J Healthc Eng. 2022;2022:2373580. Published 2022 Jan 6. doi:10.1155/2022/2373580(IF:2.682)

本试剂TBST (10X)，可以用于免疫印迹(Immunoblot, 即Western blot或WB)、免疫荧光(Immunofluorescence, IF)、免疫组化(Immunohistochemistry, IHC)和免疫细胞化学(Immunocytochemistry, IC)等实验中封闭液的配制、一抗或二抗的配制、一抗或二抗孵育后的洗涤等。封闭和洗涤可以降低背景，增强信噪比。

本产品为10X浓缩液，使用时须用蒸馏水或去离子水溶解配制成1X后使用。TBST (10X)溶液中含有250 mM Tris, 1500mM NaCl,0.5%的Tween-20，pH7.5±0.1 (25℃)。

对于Western blot实验中膜的洗涤，按照每张膜洗涤需要5-10 mL TBST (1X)计算，每100 mL TBST (10X)可以洗涤100-200次；对于免疫染色等实验，按照每个样品洗涤需要0.2-1 mL TBSTw(1X)计算，每100 mL TBST (10X)可以洗涤1000-5000个样品。

 

运输和保存方法

室温运输，4℃保存，一年有效。-20℃可以长期保存，室温保存一个月内有效。

 

注意事项

本TBST (10X)配制成TBSTw(1X)后，宜4℃保存，并在一个月内用完。如果室温保存，宜在一周内用完。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

本产品仅作科研用途！

 

HB220223

10×TBST缓冲液 TBST(10X)浓缩液

暂无内容

[1] Zhang Y, Xia Q, Li Y, et al. CD44 Assists the Topical Anti-Psoriatic Efficacy of Curcumin-Loaded Hyaluronan-Modified Ethosomes: A New Strategy for Clustering Drug in Inflammatory Skin. Theranostics. 2019;9(1):48-64. Published 2019 Jan 1. doi:10.7150/thno.29715(IF:8.063)
[2] Li S, Ding J, Wang Y, Wang X, Lv L. CD155/TIGIT signaling regulates the effector function of tumor-infiltrating CD8+ T cell by NF-κB pathway in colorectal cancer. J Gastroenterol Hepatol. 2022;37(1):154-163. doi:10.1111/jgh.15730(IF:4.029)
[3] Li Y, Qin G, Du J, Yue P, Zhang Y, Hou N. circRNA LDLRAD3 Enhances the Malignant Behaviors of NSCLC Cells via the miR-20a-5p-SLC7A5 Axis Activating the mTORC1 Signaling Pathway. J Healthc Eng. 2022;2022:2373580. Published 2022 Jan 6. doi:10.1155/2022/2373580(IF:2.682)