第五代耐热逆转录酶缓冲液 10×Hifair®V Buffer
产品说明书
FAQ
COA
已发表文献
10 × Hifair® V Buffer可与Hifair® V Reverse Transcriptase (Cat#14603)配套使用，为逆转录反应创造最佳条件。
产品组分
|
编号 |
组分 |
产品编号/规格 |
||
|
15661ES03 |
15661ES08 |
15661ES50 |
||
|
15661-A |
10 × Hifair® V Buffer |
1 mL |
5 mL |
50 mL |
产品应用
一步法RT-qPCR；基因克隆；荧光定量。
运输与保存方法
冰袋运输。-20℃保存，有效期3年。
使用方法
本品在逆转录反应体系中终浓度为1 × Hifair® V Buffer即可。
注意事项
1. 请保持实验区域洁净；操作时需穿戴干净的手套、口罩；实验所用耗材均需保证RNase free，以防止RNase污染；
2. 所有操作均应在冰上进行，防止RNA降解；
3. 为保证高效率逆转录，建议使用高质量的RNA样本；
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
逆转录实验案例
第一链cDNA合成操作步骤
1. RNA变性（此步为可选步骤，RNA变性有助于打开二级结构，可在很大程度上提高第一链cDNA的产量）
|
组分 |
使用量 |
|
RNase free ddH2O |
to 13 μL |
|
Oligo (dT)18 (50 μM) |
1 μL |
|
or Random Primers (50 μM) |
or 1 μL |
|
or Gene Specific Primers (2 μM) |
or 1 μL |
|
模板RNA |
Total RNA: 1 ng -5 μg或mRNA:1-500 ng |
65℃加热5 min，迅速置于冰上冷却2 min。简短离心收集反应液后，加入下表中的逆转录反应液，并轻轻吹打混匀。
2. 逆转录反应体系配制（20 μL体系）
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组分 |
使用量 |
|
上一步的反应液 |
13 μL |
|
10 × Hifair® V Buffer |
2 μL |
|
dNTP Mix (10 mM) |
1 μL |
|
Hifair® V Reverse Transcriptase (1000 U/μL) (Cat#14603) |
0.2 μL |
|
RNase inhibitor (40 U/µL) |
1 μL |
|
RNase free ddH2O |
to 20 μL |
3. 逆转录程序设置
|
温度 |
时间 |
|
25℃ |
5 min |
|
42℃ |
15-30 min |
|
85℃ |
5 min |
【注】1）当使用Random Primers时，需25℃，孵育5 min；若使用Oligo (dT)18或Gene Specific Primers，此步可省略。
2）逆转录温度：推荐使用42℃。对于高GC含量模板或者复杂二级结构的模板，可将逆转录温度提高至50-55℃。
3）85℃加热5 min，目的是使逆转录酶失活。
※ 逆转录产物可立即用于后续PCR或qPCR反应，也可-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。
※ 该逆转录酶也适用于一步法RT-qPCR，推荐每25 μL反应体系，添加10-20 U逆转录酶，也可根据实际情况逐步增加逆转录酶用量。
HB220614
10 × Hifair® V Buffer可与Hifair® V Reverse Transcriptase (Cat#14603)配套使用，为逆转录反应创造最佳条件。
产品组分
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编号 |
组分 |
产品编号/规格 |
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15661ES03 |
15661ES08 |
15661ES50 |
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15661-A |
10 × Hifair® V Buffer |
1 mL |
5 mL |
50 mL |
产品应用
一步法RT-qPCR；基因克隆；荧光定量。
运输与保存方法
冰袋运输。-20℃保存，有效期3年。
使用方法
本品在逆转录反应体系中终浓度为1 × Hifair® V Buffer即可。
注意事项
1. 请保持实验区域洁净；操作时需穿戴干净的手套、口罩；实验所用耗材均需保证RNase free，以防止RNase污染；
2. 所有操作均应在冰上进行，防止RNA降解；
3. 为保证高效率逆转录，建议使用高质量的RNA样本；
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
逆转录实验案例
第一链cDNA合成操作步骤
1. RNA变性（此步为可选步骤，RNA变性有助于打开二级结构，可在很大程度上提高第一链cDNA的产量）
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组分 |
使用量 |
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RNase free ddH2O |
to 13 μL |
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Oligo (dT)18 (50 μM) |
1 μL |
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or Random Primers (50 μM) |
or 1 μL |
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or Gene Specific Primers (2 μM) |
or 1 μL |
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模板RNA |
Total RNA: 1 ng -5 μg或mRNA:1-500 ng |
65℃加热5 min，迅速置于冰上冷却2 min。简短离心收集反应液后，加入下表中的逆转录反应液，并轻轻吹打混匀。
2. 逆转录反应体系配制（20 μL体系）
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组分 |
使用量 |
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上一步的反应液 |
13 μL |
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10 × Hifair® V Buffer |
2 μL |
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dNTP Mix (10 mM) |
1 μL |
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Hifair® V Reverse Transcriptase (1000 U/μL) (Cat#14603) |
0.2 μL |
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RNase inhibitor (40 U/µL) |
1 μL |
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RNase free ddH2O |
to 20 μL |
3. 逆转录程序设置
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温度 |
时间 |
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25℃ |
5 min |
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42℃ |
15-30 min |
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85℃ |
5 min |
【注】1）当使用Random Primers时，需25℃，孵育5 min；若使用Oligo (dT)18或Gene Specific Primers，此步可省略。
2）逆转录温度：推荐使用42℃。对于高GC含量模板或者复杂二级结构的模板，可将逆转录温度提高至50-55℃。
3）85℃加热5 min，目的是使逆转录酶失活。
※ 逆转录产物可立即用于后续PCR或qPCR反应，也可-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。
※ 该逆转录酶也适用于一步法RT-qPCR，推荐每25 μL反应体系，添加10-20 U逆转录酶，也可根据实际情况逐步增加逆转录酶用量。
HB220614
暂无内容
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