缓冲液如何配制

1包被缓冲液,

(1)碳酸盐缓冲液(PH9.6 +0.2  0.05M) 《激素酶免疫测定技术》石老师编著

           Na2CO31.59g

      NaHCO3        2.93g

加蒸馏水至1000ml。

(2)tris缓冲液(0.05mol/L)50ml 0.1mol/L

(Tris)溶液与x ml 0.1mol/L 盐酸混匀后,加水稀释至100ml        《酶免疫测定技术》杨立国等编著

各种pH值的Tris缓冲液的配制 

所需pH值(25℃)

0.1mol/L HCl的体积

7.1

45.7

7.2

44.7

7.3

43.4

7.4

42.0

7.5

40.3

7.6

38.5

7.7

36.6

7.8

34.5

7.9

32.0

8.0

29.2

8. 1

26.2

8.2

22.9

8.3

19.9

8.4

17.2

8.5

14.7

8.6

12.4

8.7

10.3

8.8

8.5

8.9

7.0

某一特定pH值的0.05mol/L Tris缓冲液的配制:将50ml 0.1mol/L Tris碱溶液与上表所示相应体积(单位:ml)的0.1ml/L HCl混合,加水将体积调至100ml

0.1mol/L盐酸的配置:

   买来的浓盐酸是 12 mol/L的,以配制1L 0.1mol/L的盐酸为例:

先用量筒量取8.3 mL的浓盐酸倒入容量瓶,然后将溶液加蒸馏水稀释至体积为1 L,此时的溶液就是0.1mol/L的盐酸。

 

0.1mol/Ltris的配置:0.1 mol/L溶液为12.114 g/L

则 配制600mlTris缓冲液的方法:

         三羟甲基氨基甲烷: 3.6g

         浓盐酸:           2.09ml

 

 

3)0.02mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.4)

磷酸二氢钾        0.2g

磷酸氢二钠        2.90g

氯化钠            8g

加去离子水定容到1000ml。

2洗涤缓冲液(pH7.4   0.15mol/L)   《激素酶免疫测定技术》石老师编著

0.05%Tween-20       0.5ml

加在PBS缓冲液1000ml中。

PBS缓冲液:

      KH2PO4            0.2g

      Na2HPO4·12H2O    2.9g

      NaCl               8.0g

      KCl               0.2g

    加蒸馏水至1000ml。

3测定缓冲液(Ph7.0  含0.87﹪NaCl 和0.1﹪BSA的0.1M磷酸缓冲液)用于标准孕酮,孕酮酶标物及奶样的稀释。   《激素酶免疫测定技术》石老师编著

        Na2HPO4·12H2O    21.85g

         NaH2PO4·2H2O      6.08g

         NaCl               8.70g

BSA               1.00g

溶于1000mL蒸馏水中

4封闭缓冲液

牛血清白蛋白(BSA)   2%    2g

      (或5%脱脂奶粉)加洗涤缓冲液100 ml。

 

 

0.05mol/L碳酸盐缓冲液(pH9.6)+2.0%BSA

2.0gBSA加配好的0.05mol/L碳酸盐缓冲液溶解定量至100ml

5底物缓冲液(pH5.4)磷酸盐-柠檬酸缓冲液

     0.2M  Na2HPO4(无水28.4g/L,带12结晶水71.7g/L) 取25.7ml

   0.1M  柠檬酸(无水19.2g/L,带1结晶水21.01g/L)   取24.3ml

 加蒸馏水至100ml。

 

柠檬酸(C6H8O7·H2O)    0.47g

Na2HPO4·12H2O               2.00g

6(1) TMB(四甲基联苯胺)显色液(蓝色)

A液(3,3’,5,5’-四甲基联苯胺,TMB):称取TMB20mg溶于10ml无水乙醇中,*溶解后,加双蒸水至100ml。

B液(0.1mol/L柠檬酸-0.2mol/L磷酸氢二钠缓冲液,pH5.0-5.4):称取Na2HPO4·12H2O14.34g,柠檬酸1.87g溶于180ml双蒸水,加0.75%过氧化氢尿素1.28ml,定容至200ml,调pH至5.0-5.4。

将A液和B液按1:l混合后即成TMB-过氧化氢尿素应用液

TMB(2mg/ml水)          0.05ml

        底物缓冲液            0.95ml

        30%  H2O2           0.001ml

            总体积1ml。

(2)OPD(邻苯二胺)显色液(黄棕色)(现配避光)

  OPD(干粉)             0.004g

  底物缓冲液                10ml

  30%  H2O2                    0.015ml

 总体积10ml。

(3)TMBS底物液(用于显色)  《激素酶免疫测定技术》石老师编著

10mg四甲基联苯胺硫酸盐(TMBS)的二甲基亚砜溶液,用底物缓冲液配成0.2mg/ml的TMBS底物液。用前加H2O2溶液30﹪左右。

终止液  2mol/LH2SO4   用于终止反应

 在178.3ml水中,逐滴加入浓硫酸(18M,约98%)21.7ml,边加边摇。(浓H2SO4:蒸馏水=1:9)