血清是细胞培养中zui重要的元素之一。因此,我们特别整理了一些实验室里常会遇到的问题,供大家参考: |
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1. 保存血清的方法? |
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我们建议血清应保存在-5℃至-2O℃。然而,若存放于4℃时,请勿超过一个月。若您一次无法用完一瓶,建议您无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。 |
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2. 如何解冻血清才不会使产品质量受损? |
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我们建议您将血清从冷冻箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室温下使之全融。但必须注意的是,融解过程中必须规则地摇晃均匀。 |
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3. 血清解冻后发现有絮状沉淀物出现,该如何处理? |
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血清中沉淀物的出现有许多种原因,但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成,而血纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解冻后,也会存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。但这些絮状沉淀物,并不影响血清本身的质量。 |
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若您欲去除这些絮状沉淀物,可以将血清分装至无菌离心管内,以400g稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。我们不建议您以过滤的方法去除这些絮状沉淀物,因为它可能会阻塞您的过滤膜。 |
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4. 为什么要热灭活血清? |
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加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件,刺激平滑肌收缩,细胞和血小板释放组胺,激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究,培养ES细胞,昆虫细胞和平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清。 |
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5. 有必要做热灭活吗? |
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实验显示,经过正确处理的热灭活血清,对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进,或*没有任何作用,甚至通常因为高温处理影响了血清的质量,而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清,沉淀物的形成会显著的增多,这些沉淀物在倒置显微镜下观察,像是“小黑点”,常常会让研究者误以为是血清遭受污染,而把血清放在37℃环境中,又会使此沉淀物更增多,使研究者误认为是微生物的分裂扩增。 |
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因此我们建议您,若非必须,您可以不需要做热处理这一步。如此一来,不但节省您宝贵的时间,更确保血清的质量! |
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6. 为什么储存在冰箱中的胎牛血清会出现沉淀? |
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胎牛血清没有预老化,储存在2-8℃时,血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。这应该不会影响血清的质量。推荐在-20℃储存胎牛血清,避免反复冻融。 |
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7. 如何避免沉淀物的产生? |
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我们建议您在使用血清的时候,注意下列的操作:
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8. Qualified和 Certified 胎牛血清 有什么差别? |
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Certified 胎牛血清包括了Qualified胎牛血清执行的所有的标准检验程序,,除了这些标准检测,Certified胎牛血清还有一些附加的检测: |
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zui终内毒素含量的检测 |
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9. 如何评估ES细胞合格的胎牛血清? |
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使用D3 ES细胞。这是一个对于胎牛血清中生长促进、生长抑制和分化因子非常敏感的细胞系。 |
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相关生长效率分析: |
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当ES细胞以非常低的密度传入包含10%胎牛血清的生长培养基中,检测启动和支持ES细胞克隆的能力。 |
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细胞毒分析: |
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当以非常低的密度传入包含30%胎牛血清的生长培养基中,检测ES细胞和feeder细胞的生长能力。 |
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相关形态学和分化分析: |
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检测胎牛血清支持未分化ES细胞克隆的能力。通过碱性磷酸酶活性评估分化程度。未分化的ES细胞小颜色深红粉红,分化的细胞较大,丰满,颜色较浅。 |
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所有的分析在没有ESGRO的情况下进行,培养基中出现ESGRO会掩盖由胎牛血清所导致的问题。(ESGRO或LIF经常用来保持ES细胞处于未分化状态。) |
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培养发现大约8批血清中有1批可以用来培养ES细胞 |
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日研究人员发现与肥胖有关新基因
日本三重大学日前发表公报称,发现一种称为“MXD3”的基因与肥胖有关。研究小组认为,如果开发出遏制这种基因作用的药物,就有望缓解代谢综合征。
研究小组利用小型热带鱼——斑马鱼进行了实验。研究人员给斑马鱼喂食过量的食物,约8周后取出内脏脂肪组织进行研究,结果发现有91个基因的功能变得活跃起来,其中有9个基因,包括“MXD3”基因迄今尚未被报告过与肥胖有关。
研究小组通过基因技术,分别培育出能遏制这9个基因的9种斑马鱼,然后与未进行基因改造的斑马鱼进行比较。结果发现,同样投放过量食物,能遏制“MXD3”基因功能的斑马鱼在9周后的体重比后者要轻约五分之一,同时内脏脂肪的增加也不到后者一半,脂肪细胞体积也较小。
之 前有研究显示,斑马鱼在许多方面与人相似。它是一种脊椎动物(vertebrates),其体内超过80%的基因与人类相似。三重大学研究生院医学系教授 田中利男指出:“开发出相关药物还需要5至10年,但可以先开发出通过调查血液中的‘MXD3’基因来测量内脏脂肪含量的技术。”