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代码： PEL-4EBP1-T36-1

人/小鼠Phospho-4E-BP1（T36）ELISA

RayBio ®人/小鼠磷酸化4E-BP1（T36）ELISA试剂盒。该测定法半定量测量裂解物样品中的磷酸化4E-BP1（Thr36）。

抗原信息

入藏号：

• Q13541

基因ID：

• 1978年

基因符号：

• EIF4EBP1

蛋白质名称和同义词：

真核翻译起始因子4E结合蛋白1（4E-BP1）（eIF4E结合蛋白1）（由胰岛素1调节的磷酸化热和酸稳定蛋白）（PHAS-I）

分析格式

途径：

• AMPK信令
• PI3K-AKT信号
• 翻译

特异性：

该试剂盒中提供的抗体对识别在苏氨酸-36位点磷酸化的人和小鼠4E-BP1。

检测到的目标数量：

1

物种检测：

• 人的
• 老鼠

兼容的样品类型：

• 细胞裂解物
• 组织裂解液

设计原则：

• 三明治为主

检测方法：

比色

定量/半定量：

半定量

坚实的支持：

96孔微孔板

产品规格

尺寸：

1,2或5 x 96孔带微孔板套件

介绍

RayBio®Phospho-4E-BP1（Thr36）ELISA试剂盒是一种非常快速，方便和灵敏的检测试剂盒，可以监测人和小鼠细胞裂解液中重要生物途径的激活或功能。通过测定实验模型系统中的4E-BP1蛋白，您可以验证细胞裂解液中的途径激活。您可以同时测量多种不同的细胞裂解物，而无需花费太多时间和精力进行Western Blotting分析。

该夹心ELISA试剂盒是用于测量人和小鼠磷酸-4E-BP1的体外酶联免疫吸附测定法。将抗泛4E-BP1抗体包被在96孔板上。将样品移液到孔中，样品中存在的4E-BP1通过固定化抗体与孔结合。洗涤孔并用兔抗-4E-BP1（Thr36）抗体检测磷酸化的4E-BP1。洗去未结合的抗体后，将HRP-缀合的抗兔IgG移液到孔中。再次洗涤孔，将TMB底物溶液加入孔中，并且颜色与结合的4E-BP1（Thr36）的量成比例地发展。Stop Solution将颜色从蓝色变为黄色，并且在450nm处测量颜色的强度。

产品功能

• 快速测量裂解物中的磷酸化蛋白质
• 筛选多种不同的细胞裂解物，无需进行蛋白质印迹分析
• 小的动手时间，方便和非放射性材料

应用笔记

套件组件

• 预涂96孔带微孔板
• 洗涤缓冲液
• 抗磷酸抗体
• HRP-缀合的二抗
• Assay Diluent
• TMB一步法基质
• 停止解决方案
• 裂解缓冲液
• 阳性对照样品

需要其他材料

• 蒸馏水或去离子水
• 100毫升和1升量筒
• 管准备样品稀释液
• 蛋白酶和磷酸酶抑制剂
• 精密移液器可输送2μl至1 ml体积
• 可调节的1-25毫升移液器，用于试剂制备
• 台式摇杆或振动筛
• 微孔板读数器能够测量450nm处的吸光度

协议大纲

• 按照手册中的说明准备所有试剂和样品。
• 每孔加入100μl样品或阳性对照。
• 在室温下孵育2.5小时或在4°C下孵育O / N.
• 向每个孔中加入100μl制备的抗体。
• 在室温下孵育1小时。
• 向每个孔中加入100μl制备的1X HRP-链霉抗生物素蛋白。
• 在室温下孵育1小时。
• 每孔加入100μlTMB一步法底物试剂。
• 在室温下孵育30分钟。
• 每孔加入50μl终止液。
• 立即读取450 nm。

典型数据

积极控制

用FBS处理HeLa细胞。在Cell Lysate Buffer中以4 x 10 7个细胞/ ml 溶解细胞。在该ELISA中分析裂解物的系列稀释液。有关详细信息，请参见第VI部分试剂准备步骤3。

胰岛素刺激293细胞系

用胰岛素处理或未处理293细胞。使用该phosphoELISA和Western印迹分析细胞裂解物。

存储/稳定性

收到后，试剂盒应储存在-20°C。请在发货之日起6个月内使用。初次使用后，洗涤缓冲液浓缩液（项目B），分析稀释剂（项目E），TMB一步法底物试剂（项目H），终止溶液（项目I）和细胞裂解液缓冲液（项目J）应储存在4° C避免反复冻融循环。将未使用的孔返回含有干燥剂包的袋中，沿整个边缘重新密封，并储存在-20°C。项目D，在2-8°C下储存长达一个月（在-20°C下储存长达6个月，避免反复冻融循环）。重构的阳性对照（项目K）应储存在-70°C。

用法

本产品仅供实验室研究使用。
不用于诊断或治疗用途。